CN109369782A - 一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽 - Google Patents
一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109369782A CN109369782A CN201811014235.0A CN201811014235A CN109369782A CN 109369782 A CN109369782 A CN 109369782A CN 201811014235 A CN201811014235 A CN 201811014235A CN 109369782 A CN109369782 A CN 109369782A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- decapeptide
- dpp
- senile dementia
- arg
- leu
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 title claims abstract description 17
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 title claims abstract description 16
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 25
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 19
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 19
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 3
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 2
- 102000003779 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000194 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Proteins 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 16
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 8
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229960004034 sitagliptin Drugs 0.000 description 5
- MFFMDFFZMYYVKS-SECBINFHSA-N sitagliptin Chemical compound C([C@H](CC(=O)N1CC=2N(C(=NN=2)C(F)(F)F)CC1)N)C1=CC(F)=C(F)C=C1F MFFMDFFZMYYVKS-SECBINFHSA-N 0.000 description 5
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 4
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N Arginine Chemical compound OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 102000016622 Dipeptidyl Peptidase 4 Human genes 0.000 description 3
- 108010067722 Dipeptidyl Peptidase 4 Proteins 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 3
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 229940090124 dipeptidyl peptidase 4 (dpp-4) inhibitors for blood glucose lowering Drugs 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- -1 Arg amino acid Chemical class 0.000 description 1
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 1
- 101100098479 Caenorhabditis elegans glp-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000009429 Ginkgo biloba extract Substances 0.000 description 1
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010051975 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Proteins 0.000 description 1
- 102100038104 Glycogen synthase kinase-3 beta Human genes 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- LTXREWYXXSTFRX-QGZVFWFLSA-N Linagliptin Chemical compound N=1C=2N(C)C(=O)N(CC=3N=C4C=CC=CC4=C(C)N=3)C(=O)C=2N(CC#CC)C=1N1CCC[C@@H](N)C1 LTXREWYXXSTFRX-QGZVFWFLSA-N 0.000 description 1
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000030136 gastric emptying Effects 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000004155 insulin signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 229960002397 linagliptin Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 210000002682 neurofibrillary tangle Anatomy 0.000 description 1
- 230000007827 neuronopathy Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Neurology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽，所述合成多肽的氨基酸序列如下所示：Leu‑Arg‑Ser‑Glu‑Leu‑Ala‑Ala‑Trp‑Ser‑Arg，缩写为LRSELAAWSR，分子量1188.35Da，纯度为95.2%。本发明的多肽使用多肽合成仪，采用固相合成法合成。体外二肽基肽酶4(DPP‑4)抑制活性检测表明，本发明的多肽对DPP‑4有显著抑制作用，其对DPP‑4的50%抑制浓度（IC50）为167.3μg/mL。本发明提供一种具有体外DPP‑4抑制活性的合成多肽，可应用于改善糖尿病和老年性痴呆。
Description
技术领域
本发明属于生物制药领域，具体涉及一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽。
背景技术
糖尿病是一种慢性病，是由于体内胰岛素不足引起的蛋白质、脂肪、碳水化合物代谢紊乱，主要特点是慢性高血糖。研究发现有许多天然的抗糖尿病有效成分，譬如：银杏叶提取物、植物多糖等。生物活性多肽的降血糖方面的研究较少。已有的一些研究表明，生物活性肽能有效改善糖尿病的作用。例如，在王军波等的研究中，海洋胶原肽能够缓解高胰岛素血症大鼠的胰岛β细胞的结构损伤，增加颗粒的分泌，减少脂滴的形成，显著提高胰岛素的生物学活性；显著降低的空腹胰岛素水平，对空腹血糖和口服葡萄糖耐量也有一定的改善作用。在黄凤杰等的研究中，鲨鱼肝活性肽S-8300有抗氧化作用，通过清除自由基保护胰岛β细胞，调节糖脂代谢，延缓胰岛β细胞的衰竭，在一定程度上能够治疗糖尿病。
二肽基肽酶4(DPP-4)是一种由766个氨基酸组成跨膜蛋白/多肽酶，相对分子质量为110kDa，在人体中的作用是分解蛋白质/多肽。一种被DPP-4分解的多肽叫做胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)，它可以通过刺激胰岛素、抑制升糖素、抑制胃排空和让胰岛β细胞重生的方式来降低血糖。基于此，通过抑制DPP-4的活性，可以较好地达到治疗糖尿病。目前，研究DPP-4抑制剂是治疗糖尿病的主要方向之一。
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)又称老年性痴呆，是一种严重的、慢性神经退行性疾病，以记忆和认知功能的进行性减退为主要临床症状，最终导致痴呆和死亡。它严重影响老龄人群的健康和生存质量，也给患者的家庭和社会带来沉重的负担。AD的主要病理特征是β淀粉样蛋白(β-amyloid，Aβ)沉积形成的老年斑(senile plaque，SP)和神经细胞内神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFTs)。最近有研究发现DPP-4抑制剂(利格列汀)可以改善Aβ诱导的SK-N-MC细胞内神经毒性、氧化损伤和细胞凋亡，激活Akt，抑制GSK-3β的活性，从而提高胰岛素信号通路的活性，起到保护神经的作用。在动物模型中，DPP-4抑制剂(维达列汀和沙格列汀)可以提高外周与中枢血液中GLP-1的浓度，改善小鼠学习和记忆能力。因此，DPP-4抑制剂可通过提高GLP-1水平,改善脑内GLP-1信号通路和脑内糖代谢,提高AD小鼠学习记忆能力,改善神经退行性病变。
发明内容
本发明选取二肽基肽酶4(DPP-4)为研究对象，测定合成肽的体外抑制活性。本发明的目的是提供一种具有体外DPP-4抑制活性的改善糖尿病和老年性痴呆的十肽，可应用于改善糖尿病和保护阿尔茨海默病(AD)样神经退行性改变。
本发明所述的一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽，缩写为
LRSELAAWSR，分子量1188.35Da，纯度为95.2％，序列为：
Leu-Arg-Ser-Glu-Leu-Ala-Ala-Trp-Ser-Arg。其中，
Leu表示英文名称为Leucine，中文名称为亮氨酸的氨基酸的相应残基；
Arg表示英文名称为Arginine，中文名称为精氨酸的氨基酸的相应残基；
Ser表示英文名称为Serine，中文名称为丝氨酸的氨基酸的相应残基；
Glu表示英文名称为Glutamic acid，中文名称为谷氨酸的氨基酸的相应残基；
Leu表示英文名称为Leucine，中文名称为亮氨酸的氨基酸的相应残基；
Ala表示英文名称为Alanine，中文名称为丙氨酸的氨基酸的相应残基；
Ala表示英文名称为Alanine，中文名称为丙氨酸的氨基酸的相应残基；
Trp表示英文名称为Tryptophan，中文名称为色氨酸的氨基酸的相应残基；
Ser表示英文名称为Serine，中文名称为丝氨酸的氨基酸的相应残基；
Arg表示英文名称为Arginine，中文名称为精氨酸的氨基酸的相应残基。
进一步地，所述十肽在250-1000μg/mL浓度范围内，对DPP-4的抑制率是70％-111％。
进一步地，所述十肽对DPP-4的50％抑制浓度(IC50)为167.3μg/mL。
本发明所述的氨基酸序列采用标准Fmoc方案，通过树脂的筛选，合理的多肽合成方法。将目标多肽的C-端羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连，然后以这个氨基酸的氨基作为起点，与另一分子氨基酸的羧基作用形成肽键。不断重复这一过程，即可以得到目标多肽产物。合成反应完成后，去除保护基，将肽链与树脂分离，即得到目标产物。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序从C端向N端合成。
本发明通过研究合成肽对DPP-4的抑制作用来确定其对糖尿病和老年性痴呆的保护作用。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和技术效果：
本发明首次合成了该十肽，并且检测了该十肽对二肽基肽酶4(DPP-4)的抑制活性，所述合成多肽对糖尿病和老年性痴呆具有潜在的保护作用。
附图说明
图1a为合成多肽Leu-Arg-Ser-Glu-Leu-Ala-Ala-Trp-Ser-Arg的HPLC图。
图1b为合成多肽Leu-Arg-Ser-Glu-Leu-Ala-Ala-Trp-Ser-Arg的MS图。
图2a～图2c为不同浓度合成多肽Leu-Arg-Ser-Glu-Leu-Ala-Ala-Trp-Ser-Arg对DPP-4的抑制活性对比图。
具体实施方式
以下结合具体实例对本发明作进一步说明，但本发明的实施和保护范围不限于此，需指出的是，以下若有未特别详细说明之过程或参数，均是本领域技术人员可参照现有技术理解或实现的。
多肽固相合成
选用高分子树脂(中肽生化有限公司)，按照氨基酸序列Leu-Arg-Ser-Glu-Leu-Ala-Ala-Trp-Ser-Arg的特征，先将Leu的羧基以共价键的形式与一个树脂相连，然后Leu的氨基和Arg的羧基缩水反应，处理后，再添加Ser，Arg的氨基和Ser的羧基反应，依次从右到左添加氨基酸，加好最后一个Arg氨基酸后，再切除树脂即得到目标多肽。采用高效液相色谱进行纯化，色谱柱型号为Phenomenex C18，尺寸4.6*150mm，流动相A:含有0.1％(体积浓度)三氟乙酸(TFA)的水；流动相B:含有0.09％TFA(体积浓度)的溶液(80％乙腈+20％水)；20min内B相由14.0％上升到24.0％，流速1.0mL/min，检测波长220nm。液氮速冻，冷冻干燥，得到最后的产品，要求纯度达到95％以上，并经MS鉴定结构(如图1所示)。
合成多肽对DPP-4的体外抑制活性
用DPP-4试剂盒检测。
1试剂的配制
1)底物溶液：共200μL，用缓冲液稀释至2.5mL，分装使用。
2)酶液：共100μL，用缓冲液稀释至5mL，分装使用。
3)阳性抑制剂(西格列汀)：共50μL，用缓冲液稀释至0.5mL，分装使用。
4)样品溶液，用缓冲液配制成梯度浓度样品溶液。
2实验步骤
1)反应容器为黑色96孔板，孔板中加入25μL底物溶液和25μL样品溶液，对照组用缓冲液代替底物溶液，阳性对照组用阳性抑制剂代替样品溶液，37℃摇床反应10min。
2)加入25μL底物溶液，反应后的15～30min期间，每隔1min测量一次FLU。(FLU，λex＝360/λem＝460)。
斜率＝(FLU2–FLU1)/(T2–T1)＝FLU/minute
相对抑制率(％)＝(对照组斜率–实验组斜率)/对照组斜率×100％。
应用实施例1
黑色96孔板中加入25μL底物溶液和25μL十肽溶液(250μg/mL)，对照组用缓冲液(DPP-4溶液)代替底物溶液，阳性对照组用西格列汀溶液(200μg/mL)，37℃摇床反应10min。加入25μL底物溶液，反应后的15～30min期间，每隔1min测量一次FLU(FLU，λex＝360/λem＝460)，计算相对抑制率。由图2可知，十肽对DPP-4的抑制率是70％。
应用实施例2
黑色96孔板中加入25μL底物溶液和25μL十肽溶液(500μg/mL)，对照组用缓冲液(DPP-4溶液)代替底物溶液，阳性对照组用西格列汀溶液(500μg/mL)，37℃摇床反应10min。加入25μL底物溶液，反应后的15～30min期间，每隔1min测量一次FLU(FLU，λex＝360/λem＝460)，计算相对抑制率。由图2c可知，十肽对DPP-4的抑制率是98％。
应用实施例3
黑色96孔板中加入25μL底物溶液和25μL十肽溶液(1000μg/mL)，对照组用缓冲液(DPP-4溶液)代替底物溶液，阳性对照组用西格列汀溶液(1000μg/mL)，37℃摇床反应10min。加入25μL底物溶液，反应后的15～30min期间，每隔1min测量一次FLU(FLU，λex＝360/λem＝460)，计算相对抑制率。由图2c可知，十肽对DPP-4的抑制率是111％，高于同等条件下西格列汀的抑制率98％。
序列表
<110> 华南理工大学
<120> 一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> 十肽(LRSELAAWSR)
<400> 2
Leu Arg Ser Glu Leu Ala Ala Trp Ser Arg
1 5 10
Claims (4)
1.一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽，其特征是该十肽的氨基酸序列为Leu-Arg-Ser-Glu-Leu-Ala-Ala-Trp-Ser-Arg，缩写为LRSELAAWSR。
2. 如权利要求1 所述的一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽，其特征在于所述十肽对DPP-4的50%抑制浓度（IC50）为167.3μg/mL。
3. 如权利要求1 所述的一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽，其特征在于所述十肽分子量1188.35Da，纯度为95.2%。
4. 如权利要求1 所述的一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽，其特征在于在250-1000μg/mL浓度范围内，对DPP-4的抑制率是70%-111%。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811014235.0A CN109369782B (zh) | 2018-08-31 | 2018-08-31 | 一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811014235.0A CN109369782B (zh) | 2018-08-31 | 2018-08-31 | 一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109369782A true CN109369782A (zh) | 2019-02-22 |
| CN109369782B CN109369782B (zh) | 2021-09-21 |
Family
ID=65404166
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811014235.0A Active CN109369782B (zh) | 2018-08-31 | 2018-08-31 | 一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109369782B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109021075A (zh) * | 2018-08-31 | 2018-12-18 | 华南理工大学 | 一种降血糖十肽 |
| CN111592583A (zh) * | 2020-06-11 | 2020-08-28 | 湖南科技大学 | 一种生物活性多肽及其在制备二肽基肽酶4抑制剂中的应用 |
| CN111620930A (zh) * | 2020-06-11 | 2020-09-04 | 湖南科技大学 | 一种多肽及其在制备二肽基肽酶4抑制剂中的应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105524142A (zh) * | 2015-12-23 | 2016-04-27 | 华南理工大学 | 一种十六肽qtddnhsnvlwagfsr及其应用 |
| KR20180027924A (ko) * | 2016-09-07 | 2018-03-15 | (의료)길의료재단 | 글루카곤 유사 펩타이드-1(glp-1), glp-1 유래 펩타이드, 또는 glp-1 분해 억제제를 포함하는 근감소증 또는 근위축증 치료용 약학 조성물 |
| CN108017614A (zh) * | 2018-01-25 | 2018-05-11 | 中国科学院海洋研究所 | Dpp-4抑制剂及其在制备治疗2型糖尿病药物中的应用 |
| CN108175756A (zh) * | 2016-12-08 | 2018-06-19 | 北大方正集团有限公司 | 一种磷酸西格列汀片剂及其制备方法 |
| CN109021075A (zh) * | 2018-08-31 | 2018-12-18 | 华南理工大学 | 一种降血糖十肽 |
-
2018
- 2018-08-31 CN CN201811014235.0A patent/CN109369782B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105524142A (zh) * | 2015-12-23 | 2016-04-27 | 华南理工大学 | 一种十六肽qtddnhsnvlwagfsr及其应用 |
| KR20180027924A (ko) * | 2016-09-07 | 2018-03-15 | (의료)길의료재단 | 글루카곤 유사 펩타이드-1(glp-1), glp-1 유래 펩타이드, 또는 glp-1 분해 억제제를 포함하는 근감소증 또는 근위축증 치료용 약학 조성물 |
| CN108175756A (zh) * | 2016-12-08 | 2018-06-19 | 北大方正集团有限公司 | 一种磷酸西格列汀片剂及其制备方法 |
| CN108017614A (zh) * | 2018-01-25 | 2018-05-11 | 中国科学院海洋研究所 | Dpp-4抑制剂及其在制备治疗2型糖尿病药物中的应用 |
| CN109021075A (zh) * | 2018-08-31 | 2018-12-18 | 华南理工大学 | 一种降血糖十肽 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| SHUANGFEI HU: "Identification of anti-diabetes peptides from Spirulina platensis", 《JOURNAL OF FUNCTIONAL FOODS》 * |
| 胡双飞: "超声耦合亚临界水提取螺旋藻活性多肽及降血糖活性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库工程科技I辑》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109021075A (zh) * | 2018-08-31 | 2018-12-18 | 华南理工大学 | 一种降血糖十肽 |
| CN111592583A (zh) * | 2020-06-11 | 2020-08-28 | 湖南科技大学 | 一种生物活性多肽及其在制备二肽基肽酶4抑制剂中的应用 |
| CN111620930A (zh) * | 2020-06-11 | 2020-09-04 | 湖南科技大学 | 一种多肽及其在制备二肽基肽酶4抑制剂中的应用 |
| CN111620930B (zh) * | 2020-06-11 | 2022-09-06 | 湖南科技大学 | 一种多肽及其在制备二肽基肽酶4抑制剂中的应用 |
| CN111592583B (zh) * | 2020-06-11 | 2022-09-06 | 湖南科技大学 | 一种生物活性多肽及其在制备二肽基肽酶4抑制剂中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109369782B (zh) | 2021-09-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Aird et al. | Rattlesnake presynaptic neurotoxins: primary structure and evolutionary origin of the acidic subunit | |
| Asahina et al. | Chemical Synthesis of O‐Glycosylated Human Interleukin‐2 by the Reverse Polarity Protection Strategy | |
| CN109369782A (zh) | 一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽 | |
| US20110160431A1 (en) | Production of peptides containing poly-gly sequences using fmoc chemistry | |
| Matthew et al. | Pompanopeptins A and B, new cyclic peptides from the marine cyanobacterium Lyngbya confervoides | |
| CN108976291B (zh) | 一种改善糖尿病和老年性痴呆的十六肽 | |
| CN101747426B (zh) | 一种合成普兰林肽的方法 | |
| JP2014125427A (ja) | 環状ジペプチドの製造方法 | |
| Wang et al. | Identification and molecular cloning of a novel amphibian Bowman Birk-type trypsin inhibitor from the skin of the Hejiang Odorous Frog; Odorrana hejiangensis | |
| Bartelt et al. | The primary structure of the porcine pancreatic secretory trypsin inhibitor I: Amino acid sequence of the reduced S-aminoethylated protein | |
| CN109021075B (zh) | 一种降血糖十肽 | |
| He et al. | Novel Angiotensin-I converting enzyme inhibitory peptides isolated from rice wine lees: Purification, characterization, and structure-activity relationship | |
| CN110590905B (zh) | 一种降血糖六肽 | |
| Zhang et al. | Linear peptides containing D-leucine with neuroprotective activities from the Leech Whitmania pigra Whitman | |
| Chen et al. | A fish bradykinin (Arg0, Trp5, Leu8-bradykinin) from the defensive skin secretion of the European edible frog, Pelophylax kl. esculentus: structural characterization; molecular cloning of skin kininogen cDNA and pharmacological effects on mammalian smooth muscle | |
| CN109021074B (zh) | 一种改善糖尿病和老年性痴呆症症状的七肽 | |
| CN114292311A (zh) | 胰脂肪酶抑制肽及其应用 | |
| CN104356221A (zh) | 一种制备培西加南的方法 | |
| JP2016113481A (ja) | ピロール・イミダゾールからなるポリアミドの製造方法 | |
| JPH06510281A (ja) | ペプチドアミドの製造 | |
| Fietzek et al. | Comparative Sequence Studies on α2‐CB2 from Calf, Human, Rabbit and Pig‐Skin Collagen | |
| Okamoto et al. | An efficient solid‐phase synthesis of peptidyl‐N‐acetylguanidines for use in native chemical ligation | |
| CN110128503B (zh) | 一种抗Aβ1-42蛋白聚集的合成多肽及其合成方法、应用与编码该合成多肽的基因 | |
| JP2007161696A (ja) | 新規なヘプタペプチド及びプロリルエンドペプチダーゼ阻害剤 | |
| EP0665239A1 (en) | Peptide derivatives of bactenecin endowed with antibacterial activity |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |