CN109336947B

CN109336947B - 一种从大麻药中分离纯化大麻药苷a的方法

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Publication number: CN109336947B
Application number: CN201811431754.7A
Authority: CN
Inventors: 林亲雄; 陈旅翼; 邓旭坤
Original assignee: South Central University for Nationalities
Current assignee: South Central Minzu University
Priority date: 2018-11-27
Filing date: 2018-11-27
Publication date: 2020-08-28
Anticipated expiration: 2038-11-27
Also published as: CN109336947A

Abstract

一种从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法，涉及中药提取领域。本发明实施例的从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法是将大麻药用乙醇溶液提取，得到醇提液；将醇提液减压浓缩，加水析出沉淀，沉淀经干燥，得到大麻药苷A粗提物；将大麻药苷A粗提物用甲醇加热饱和溶解，过滤得滤液，滤液加水析出大麻药苷A沉淀；将大麻药苷A析出沉淀用甲醇加热饱和溶解，调节pH至弱酸性，降温静置结晶，晶体经洗涤、干燥。该方法采用醇提结晶法从大麻药中提取制备高纯度大麻药苷A，该方法工艺流程简单、生产成本低，有机溶剂可回收利用，制得的产品纯度高、质量好。

Description

一种从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法

技术领域

本发明涉及中药提取领域，且特别涉及一种从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法。

背景技术

大麻药为豆科植物镰扁豆(Dolichos trilobus Linnaeus)、丽江镰扁豆(Dolichos appendiculatus Hand.～Mazz.)的干燥根，在我国云南、四川、甘肃等地均有分布，尤其在云南有着丰富的植物资源。大麻药具有祛风活血、止血止痛的作用，用于骨折、跌打损伤、风湿疼痛；外用治外伤出血。大麻药在云南白药各种制剂及云南红药胶囊(又名云南七龙散胶囊)等著名中药中广泛应用。

大麻药主要含有三萜皂苷、黄酮等成分，大麻药总皂苷具有显著的抗炎、降脂与抗肿瘤等活性。大麻药总皂苷中主要成分为大麻药苷A，为萜类成分，含有羟基、羧基等，理化性质较稳定，可溶于甲醇、乙醇，难溶于水、丙酮等溶剂。大麻药苷A的分子结构如下：

由于大麻药苷A为三萜皂苷类化合物，需要特定的结晶条件与方法，目前尚未报道通过结晶法从大麻药中大量制备高纯度大麻药苷A的技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法，采用醇提结晶法从大麻药中提取制备高纯度大麻药苷A，该方法工艺流程简单、生产成本低，有机溶剂可回收利用，制得的产品纯度高、质量好。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

本发明提出一种从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法，其包括以下步骤：

将大麻药用乙醇溶液提取，得到醇提液；将醇提液减压浓缩，加水静置，析出沉淀，沉淀经干燥，得到大麻药苷A粗提物；

将大麻药苷A粗提物用甲醇加热饱和溶解，过滤得滤液；将滤液加水静置，析出沉淀；

将沉淀用甲醇加热饱和溶解，调节pH至弱酸性，降温静置结晶，晶体经洗涤、干燥。

进一步地，在本发明较佳实施例中，大麻药为大麻药根粉末，粒度为40～60目。

进一步地，在本发明较佳实施例中，乙醇溶液的质量浓度为60％～90％；醇提时，大麻药和乙醇溶液的用量比为1kg：6～10L；醇提工艺是：于70～90℃搅拌回流提取2～3次，每次0.5～1.5h。

进一步地，在本发明较佳实施例中，浓缩工艺是：于60～80℃减压浓缩至无明显醇味。

进一步地，在本发明较佳实施例中，醇提液减压浓缩所得的浓缩液按体积比1：0.5～2加水，冷却到室温静置1～2h。

进一步地，在本发明较佳实施例中，干燥工艺是：于80～100℃真空干燥。

进一步地，在本发明较佳实施例中，加热的温度是60～90℃。

进一步地，在本发明较佳实施例中，滤液按照体积比1：1～2加水，边搅拌边加水，搅拌冷却到室温静置1～2h。

进一步地，在本发明较佳实施例中，降温静置结晶工艺是：搅拌自然冷却到室温，5～15℃静置结晶10～16h。

进一步地，在本发明较佳实施例中，洗涤工艺是：用丙酮洗涤2～3次。

本发明实施例的从大麻药中分离纯化大麻药苷A方法的有益效果是：本发明实施例的从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法是将大麻药用乙醇溶液提取，得到醇提液；将醇提液减压浓缩，加水静置，析出沉淀，沉淀经干燥，得到大麻药粗提物；将大麻药粗提物用甲醇加热饱和溶解，过滤得滤液；将滤液加水静置，析出沉淀；将沉淀用甲醇加热饱和溶解，调节pH至弱酸性，降温静置结晶，晶体经洗涤、干燥，该方法采用醇提结晶法从大麻药中提取制备高纯度大麻药苷A，该方法工艺流程简单、生产成本低，有机溶剂可回收利用，制得的产品纯度高、质量好。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实施例1提供的一种大麻药苷A纯品的显微形态图；

图2为本发明实施例1提供的一种大麻药苷A纯品的HPLC图谱；

图3为大麻药苷A标准品的HPLC图谱。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法进行具体说明。

本发明实施例提供一种从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法，其包括以下步骤：

S1、制备大麻药总苷提取物：

S101、将大麻药用乙醇溶液提取，过滤或离心得到醇提液。本实施例采用的大麻药优选为大麻药根粉末，粒度为40～60目，便于提取出其中的大麻药总苷；采用的乙醇溶液的质量浓度为60％～90％；醇提时，大麻药和乙醇溶液的用量比为1kg：6～10L(W/V)；醇提工艺是：于70～90℃搅拌回流提取2～3次，每次0.5～1.5h。

S102、将醇提液减压浓缩，浓缩工艺具体是：于60～80℃减压浓缩至无明显醇味，醇提液减压浓缩所得的浓缩液加水静置，具体是按体积比1：0.5～2在浓缩液中加水，冷却到室温静置1～2h析出沉淀，本实施例中的室温指20-30℃，离心得沉淀，沉淀经干燥，干燥工艺一般是：于80～100℃真空干燥，得到大麻药总苷。

本实施例中，大麻药总苷先用60％～90％乙醇热回流溶出，再加水析出的提取方法，大麻药总苷提取充分，收率高。

S2、制备大麻药苷A提取物：

S201、将大麻药总苷用甲醇加热饱和溶解，加热的温度一般是60～90℃，趁热过滤得滤液。

S202、将滤液加水静置，具体是按照体积比1：1～2在滤液中加水，边搅拌边加水，自然冷却到室温静置1～2h，析出大麻药苷A沉淀，离心得大麻药苷A沉淀，即为大麻药苷A提取物。

本实施例中，大麻药总苷提取物中主要含大麻药苷A，但也有较多的杂质成分，直接结晶困难，而且直接结晶也难以制备高纯度的大麻药苷A晶体。本实施例利用大麻药苷A可溶于甲醇，难溶于水的特性，使大麻药总苷提取物在加热条件下饱和溶于甲醇，通过往甲醇中加水至一定的含量，使大麻药苷A从溶液中析出，而水溶性和醇溶性杂质保留在母液中，实现大麻药苷A的有效纯化，为大麻药苷A下一步的结晶纯化创造了良好的条件。该纯化方法操作简单高效，样品处理量大，甲醇可回收循环使用，成本低，适合生产上大量制备大麻药苷A。

S3、制备大麻药苷A纯品：将大麻药苷A沉淀用甲醇加热饱和溶解，加热的温度一般是60～90℃，调节pH至弱酸性，即pH＝2.0～4.0，降温静置结晶，降温静置结晶工艺一般是：缓慢搅拌自然冷却到室温，于5～15℃静置结晶10～16h，离心或过滤得晶体，晶体经洗涤、干燥，洗涤工艺一般是：用丙酮洗涤2～3次，干燥工艺一般是：于80～100℃真空干燥，得到大麻药苷A纯品。

本实施例中，大麻药苷A提取物经过纯化后在适宜的结晶条件下，可从甲醇溶剂中形成晶体析出。本申请通过控制大麻药苷A的结晶条件，可在一定程度上实现结晶过程与晶体形态的调控，可使大麻药苷A充分结晶析出，获得高收率的大麻药苷A纯品。

因此，本实施例的从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法综合采用大麻药苷A乙醇提取、甲醇溶解、加水析出的纯化方法，以及以甲醇为溶剂的结晶纯化方法，这些技术方法科学合理，思路较新颖。本实施例的制备方法不使用有毒的化学试剂，环境相容性相好，甲醇、乙醇溶剂易回收，可循环使用，能耗少，结晶效率高，生产成本低，工艺流程简单，适合连续化规模化生产的需要。单次结晶可制备纯度在98％以上的大麻药苷A晶体，外观呈白色晶性粉末，且大麻药苷A的收率可达60％以上，产品可达到医药级的质量要求。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供一种大麻药苷A纯品，其按照以下制备方法制得：

将过50目筛的大麻药根粉末用质量浓度为80％的乙醇溶液按照1kg：6L(W/V)于80℃搅拌回流提取2次，每次1h，过滤或离心得到醇提液。

将醇提液于80℃减压浓缩至无明显醇味，按体积比1：1(V/V)在浓缩液中加水，冷却到室温静置2h析出沉淀，离心得沉淀，沉淀于90℃真空干燥，得到大麻药总苷提取物。

将大麻药总苷提物用甲醇80℃加热饱和溶解，趁热过滤得滤液。

按照体积比1：1(V/V)趁热在滤液中加水，边搅拌边加水，搅拌冷却到室温静置2h，析出大麻药苷A，离心得沉淀。

将沉淀用甲醇70℃加热饱和溶解，调节pH至弱酸性，慢搅自然冷却到室温，于10℃静置结晶12h，离心或过滤得晶体，晶体用丙酮洗涤3次，于90℃真空干燥，得到大麻药苷A纯品。

一、用显微镜观察大麻药苷A晶体的形态，如图1所示。

在图1中可以看出，大麻药苷A晶体的显微形态呈细长的针状。

二、采用HPLC测定方法对大麻药苷A纯品的纯度进行检测，测定方法如下：

1、供试品溶液的制备

将大麻药苷A标准品与大麻药苷A纯品于100℃烘箱中干燥1h，分别精密称取约20mg用适量甲醇溶解，定容至100ml，用0.45um滤膜过滤，即为待测溶液。

2、HPLC测定色谱条件

LC-300分析型高效液相色谱仪(武汉赛尔夫科技有限公司)；色谱柱：Thermo C₁₈(250×4.6mm,5μm)；柱温：30℃；流速：1mL/min；检测波长：212nm；进样量：20μL；流动相：A：乙腈、B：0.5％乙酸；梯度洗脱：0～15min，A：10％～50％；15～25min，A：50％～35％。

测定结果如下：

图2为大麻药苷A纯品的HPLC图谱(HPLC纯度≥99.5％)。

图3为大麻药苷A标准品的HPLC图谱(HPLC纯度≥98％)。

大麻药苷A纯品的HPLC纯度>98％，因此，本发明实施例的制备方法适合生产制备医药级的大麻药苷A纯品。

实施例2

将过40目筛的大麻药根粉末用质量浓度为60％的乙醇溶液按照1kg：8L(W/V)于70℃搅拌回流提取2次，每次1.5h，过滤或离心得到醇提液。

将醇提液于60℃减压浓缩至无明显醇味，按体积比1：0.5(V/V)在浓缩液中加水，冷却到室温静置2h析出沉淀，离心得沉淀，沉淀于80℃真空干燥，得到大麻药总苷提取物。

将大麻药总苷提物用甲醇75℃加热饱和溶解，趁热过滤得滤液。

将沉淀用甲醇70℃加热饱和溶解，调节pH至弱酸性，慢搅自然冷却到室温，于5℃静置结晶10h，离心或过滤得晶体，晶体用丙酮洗涤3次，于80℃真空干燥，得到大麻药苷A纯品。

采用实施例1中的HPLC测定方法对本实施例的大麻药苷A纯品的纯度进行检测，HPLC纯度≥99.2％。

实施例3

将过60目筛的大麻药根粉末用质量浓度为90％的乙醇溶液按照1kg：10L(W/V)于70℃搅拌回流提取2次，每次1.5h，过滤或离心得到醇提液。

将醇提液于80℃减压浓缩至无明显醇味，按体积比1：2(V/V)在浓缩液中加水，冷却到室温静置1h析出沉淀，离心得沉淀，沉淀于100℃真空干燥，得到大麻药总苷提取物。

将大麻药总苷提取物用甲醇70℃加热饱和溶解，趁热过滤得滤液。

按照体积比1：1(V/V)趁热在滤液中加水，边搅拌边加水，搅拌冷却到室温静置1h，析出大麻药苷A，离心得沉淀。

将沉淀用甲醇70℃加热饱和溶解，调节pH至弱酸性，慢搅自然冷却到室温，于15℃静置结晶15h，离心或过滤得晶体，晶体用丙酮洗涤2次，于100℃真空干燥，得到大麻药苷A纯品。

采用实施例1中的HPLC测定方法对本实施例制备的大麻药苷A纯品的纯度进行检测，HPLC纯度≥98.6％。

对比例1

本对比例提供一种大麻药苷A，其按照以下制备方法制得：

取将过60目筛的大麻药根粉末250g，置于5L的圆底烧瓶中，加入大麻药药材颗粒10倍重量的体积浓度为60％的乙醇，浸泡2小时后，水浴回流提取，共提取三次，提取时间分别为2、1.5、1小时，合并滤液。滤液减压回收乙醇至无醇味后，配置成含0.05g生药材/mL的药液(即每毫升药液含有从0.05g大麻药中提取出来的提取物)；药液用盐酸调pH为5，氯化钠调盐浓度为0.8mol/L；将配好的药液上已处理好的HPD400型大孔吸附树脂柱，柱的径高比为1:6，上样量以药材量计与树脂重量比为1:2(上样药液的量以其对应的大麻药药材颗粒的重量限定，即为从与树脂重量比为1:2的大麻药药材颗粒得到药液)，上样流速为1BV/h。上样后，用8倍柱体积的浓度为30％乙醇或甲醇冲洗除杂，流速为2.5BV/h，再用7倍柱体积的浓度为60％乙醇或甲醇洗脱，流速为2BV/h，收集浓度为60％洗脱液，浓缩、干燥，即得大麻药苷A。

HPLC法测定大麻药苷A样品中大麻药苷A的纯度为93.8％。

综上所述，本发明实施例的从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法采用醇提结晶法从大麻药中提取制备高纯度大麻药苷A，该方法工艺流程简单、生产成本低，有机溶剂可回收利用，制得的产品纯度高、质量好。

以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

Claims

1.一种从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

将大麻药用乙醇溶液提取，得到醇提液；将所述醇提液减压浓缩，加水静置，析出沉淀，沉淀经干燥，得到大麻药苷A粗提物；

将所述大麻药苷A粗提物用甲醇加热饱和溶解，过滤得滤液；将所述滤液加水静置，析出沉淀；

将沉淀用甲醇加热饱和溶解，调节pH＝2.0～4.0，降温静置结晶，降温静置结晶工艺是：搅拌自然冷却到室温，5～15℃静置结晶10～16h，晶体经洗涤、干燥。

2.根据权利要求1所述的从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法，其特征在于，所述大麻药为大麻药根粉末，粒度为40～60目。

3.根据权利要求1所述的从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法，其特征在于，乙醇溶液的质量浓度为60％～90％；醇提时，大麻药和乙醇溶液的用量比为1kg：6～10L；醇提工艺是：于70～90℃搅拌回流提取2～3次，每次0.5～1.5h。

4.根据权利要求1所述的从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法，其特征在于，浓缩工艺是：于60～80℃减压浓缩至无明显醇味。

5.根据权利要求1所述的从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法，其特征在于，所述醇提液减压浓缩所得的浓缩液按体积比1：0.5～2加水，冷却到室温静置1～2h。

6.根据权利要求1所述的从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法，其特征在于，干燥工艺是：于80～100℃真空干燥。

7.根据权利要求1所述的从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法，其特征在于，加热的温度是60～90℃。

8.根据权利要求1所述的从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法，其特征在于，所述滤液按照体积比1：1～2加水，边搅拌边加水，搅拌冷却到室温静置1～2h。

9.根据权利要求1所述的从大麻药中分离纯化大麻药苷A的方法，其特征在于，洗涤工艺是：用丙酮洗涤2～3次。