CN109329648B - 一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂的应用 - Google Patents
一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109329648B CN109329648B CN201811051268.2A CN201811051268A CN109329648B CN 109329648 B CN109329648 B CN 109329648B CN 201811051268 A CN201811051268 A CN 201811051268A CN 109329648 B CN109329648 B CN 109329648B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- liquid
- fermentation
- prawn
- culture medium
- microbial inoculum
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 title claims abstract description 94
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 93
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 title claims abstract description 67
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 title claims abstract description 49
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 32
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 76
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims abstract description 76
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 claims abstract description 52
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 claims abstract description 52
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims abstract description 46
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims abstract description 46
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims abstract description 46
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 45
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 181
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 164
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 164
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 claims description 89
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 88
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 39
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 38
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 36
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 35
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 35
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 35
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 34
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 30
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 28
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 24
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 20
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 20
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 20
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims description 20
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 18
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 17
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 17
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 16
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 16
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 claims description 13
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 claims description 13
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 claims description 13
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 13
- 239000006260 foam Substances 0.000 claims description 12
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims description 10
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims description 10
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 9
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 8
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 8
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 claims description 6
- QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N (1-carboxy-2-sulfanylethyl)azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.SCC(N)C(O)=O QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 claims description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 5
- 241000927735 Penaeus Species 0.000 claims description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 5
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 claims description 5
- 229960001305 cysteine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 5
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 claims description 5
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Natural products OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 3
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 2
- -1 citric acid hydrogen diamine Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims 1
- 229940081969 saccharomyces cerevisiae Drugs 0.000 abstract description 40
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 30
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 27
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 27
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 22
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 21
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 21
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 18
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 15
- 206010047400 Vibrio infections Diseases 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 11
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
- KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N carbocromen Chemical compound CC1=C(CCN(CC)CC)C(=O)OC2=CC(OCC(=O)OCC)=CC=C21 KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 5
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 3
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 3
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 3
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 3
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 3
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 3
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 3
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 3
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 3
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 3
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 235000019730 animal feed additive Nutrition 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003640 drug residue Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
- C12N1/18—Baker's yeast; Brewer's yeast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
- Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
- Y02A40/818—Alternative feeds for fish, e.g. in aquacultures
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Birds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂的应用。本发明的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂，其包含植物乳杆菌、凝结芽孢杆菌、酿酒酵母，在对虾肠道内定植，有利于调控对虾肠道及水体微生物的菌群结构，拮抗致病弧菌，还能提高饲料消化利用率，提高对虾非特性免疫力，解决当前对虾养殖所面临的对虾弧菌病频发、养殖成活率低、养殖效益低等问题，满足对虾养殖可持续发展的迫切需要。
Description
技术领域：
本发明属于微生物领域，具体涉及一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂的应用。
背景技术：
对虾养殖业已经形成完整的产业体系，随着养殖密度和规模不断扩大，各种疾病频繁发生，由弧菌属引起的细菌性疾病，传播快、传染率高，给对虾养殖业造成了巨大的经济损失，目前已严重制约了我国乃至全世界对虾养殖的发展。养殖者通常大量使用抗生素药物，虽然短期内取得了成效，但随之导致病原微生物耐药性增强、微生物群落多样性下降、药物残留、养殖环境恶化等问题。研究开发安全高效对虾病害生态防治及养殖技术显得尤为重要。
发明内容：
本发明的目的是为了克服现有技术中的缺陷，提供一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂的应用。本发明的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂能拮抗致病弧菌，提高对虾养殖成活率和效益，解决当前对虾养殖所面临的病害高发、成活率低等问题，满足对虾养殖可持续发展的迫切需要，促进对虾养殖业的健康可持续发展。
本发明通过实验发现，添加拮抗弧菌的微生物制剂(凝结芽孢杆菌液体菌剂、植物乳杆菌液体菌剂、酿酒酵母液体菌剂、本发明的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂)可提高对虾成活率和非特异性免疫性，有效抑制对虾肠道内弧菌数量，且本发明的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂其效果优于单一菌剂效果。
因此，本发明提供拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂作为饲料添加剂的应用，所述的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂是通过以下方法制备的：将凝结芽孢杆菌液体菌剂、植物乳杆菌液体菌剂和酿酒酵母液体菌剂按体积比为4-6:2-3:1-3混合，得到拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂；所述的凝结芽孢杆菌液体菌剂的活菌数≥1.0×109cfu/mL，所述的植物乳杆菌液体菌剂的活菌数≥1.0×109cfu/mL，所述的酿酒酵母液体菌剂的活菌数≥5.0×109cfu/mL。
所述的饲料添加剂优选为提高对虾成活率和非特异性免疫性、有效抑制对虾肠道内弧菌数量的饲料添加剂。
优选，所述的凝结芽孢杆菌液体菌剂是通过以下方法制备的：
(1)将凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)GIM1.646活化后转接到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃培养16-20h，形成摇瓶液体菌种；
(2)将摇瓶液体菌种以3％-5％的接种量转接到含有一级发酵培养基的种子罐中，发酵温度37±1℃，搅拌速率200-300rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度不低于40％，发酵时间为16-20h，制成一级种子液；
(3)将一级种子液以2％-4％的接种量转接到含有二级发酵培养基的发酵罐中进行二级发酵，发酵温度37±1℃，搅拌速率150-200rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度不低于40％，发酵时间36-48h，当芽孢率大于80％时结束发酵，由此制备得到凝结芽孢杆菌液体菌剂；
所述的一级发酵培养基为：每升含有葡萄糖5g、酵母粉3g、蛋白胨5g、硫酸镁0.2g、磷酸氢二钾0.3g、牛肉膏3g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2；
所述的二级发酵培养基为：每升含有玉米淀粉10g、葡萄糖5g、豆粕粉15g、磷酸氢二钾5g、硫酸镁2g、硫酸锰0.5g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2。
优选，所述的植物乳杆菌液体菌剂是通过以下方法制备的：
(1)将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GIM1.140活化后转接到MRS液体培养基中，37℃静置培养20-30h，形成三角瓶液体菌种；
(2)将三角瓶液体菌种以3％-6％的接种量转接到含有一级发酵培养基的种子罐中，发酵温度37±1℃，密闭静置培养，发酵时间为16-20h，制成一级种子液；
(3)将一级种子液以8％的接种量转接到含有二级发酵培养基的发酵罐中进行二级发酵，发酵温度37±1℃，密闭静置培养，检测pH降低至4.0-4.5而且不再变化时，结束发酵，由此制备得到植物乳杆菌液体菌剂；
所述的一级发酵培养基为：每升含有蛋白胨10g、酵母粉5g、牛肉膏10g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二胺2g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、吐温80 1mL、碳酸钙10g，余量为水，pH6.8；
所述的二级发酵培养基为：每升含有糖蜜20g、硝酸铵5g、牛肉膏3g、酵母粉5g、乳糖5g和氯化钠5g，余量为水，pH6.8。
优选，所述的酿酒酵母液体菌剂是通过以下方法制备的：
(1)将酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)GIM2.198活化后转接到YEPD液体培养基中，28℃培养16-24h，形成摇瓶液体菌种；
(2)将摇瓶液体菌种以3％-5％的接种量转接到含有一级发酵培养基的种子罐中，发酵温度28±1℃，搅拌速率200-240rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度不低于40％，发酵时间为16-20h，制成一级种子液；
(3)将一级种子液以3％-5％的接种量转接到含有二级发酵培养基的发酵罐中进行二级发酵，发酵温度28±1℃，搅拌速率180-240rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度不低于40％，发酵时间24-28h，得到酿酒酵母液体菌剂；
所述的一级发酵培养基为：每升含有葡萄糖10g、酵母粉10g、蛋白胨15g、尿素5g、磷酸氢二钾5g和泡敌0.3mL，余量为水，pH自然；
所述的二级发酵培养基为：每升含有糖蜜20g、蔗糖10g、豆粕粉20g、酵母粉5g、磷酸氢二钾5g、氯化铵5g、半胱氨酸盐酸盐1g和泡敌0.3mL，余量为水，pH自然。
所述的饲料优选为对虾基础饲料。
本发明提出的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂，其包含植物乳杆菌、凝结芽孢杆菌、酿酒酵母，在对虾肠道内定植，有利于调控微生物的生物种类和数量，拮抗致病弧菌，还能提高饲料消化利用率，提高对虾非特性免疫力，解决当前对虾养殖所面临的对虾弧菌病频发、养殖成活率低、养殖效益低等问题，满足对虾养殖可持续发展的迫切需要。
与现有的技术相比，本发明具有以下优点：
(1)本发明发现，将植物乳杆菌、凝结芽孢杆菌、酿酒酵母复合使用，比单一菌剂效果要好，因植物乳杆菌、凝结芽孢杆菌、酿酒酵母发挥不同功效，起到了协同增效作用；
(2)相比使用抗生素等传统方法，使用拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂可降低对虾弧菌发病率、减少对虾及水体药物残留，改善对虾肠道微生物群落结构及水体养殖环境，从而提高对虾免疫力、减少病害发生，还能提高饲料转化效率和生长速度；
(3)本发明拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂属于绿色环保动物饲料添加剂。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。所用方法及技术，如无特别说明，均为常规方法和技术。
实施例1：
一拮抗弧菌的凝结芽孢杆菌液体菌剂的制备方法
1菌种活化
首先制菌种，取筛选的有拮抗弧菌功能的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)GIM1.646(保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏编号：GIM1.646，该菌种对外销售)菌种，划线接种到牛肉膏蛋白胨琼脂试管斜面，37℃培养24小时；然后转接到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃振荡培养16h，形成摇瓶液体菌种。牛肉膏蛋白胨液体培养基为：在1L的体系里面含有牛肉膏3g、蛋白胨10g和氯化钠5g，余量为水，pH7.0±0.2；若为固体培养基每升培养基再加入15-20g琼脂；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，121℃灭菌20min。
2扩大培养
2.1一级扩大培养
将摇瓶液体菌种以3％(体积比)的接种量转接到装有一级发酵培养基的30L种子罐中，种子罐装液量为70％，发酵温度37±1℃，搅拌速率200rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度70％～80％，发酵时间为16个小时，制成一级种子液。一级发酵培养基为：在1L的体系里面含有葡萄糖5g、酵母粉3g、蛋白胨5g、硫酸镁0.2g、磷酸氢二钾0.3g、牛肉膏3g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
2.2二级扩大培养
将一级种子液以2％(体积比)的接种量转接到装有二级发酵培养基的300L发酵罐中进行二级发酵，发酵罐装液量为70％，发酵温度37±1℃，搅拌速率200rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度70％～80％，发酵时间36h，使用显微镜观察芽孢生成情况，芽孢率大于80％时即可以结束发酵。由此制备得到拮抗弧菌的凝结芽孢杆菌液体菌剂(活菌数6.8×109cfu/mL)。二级发酵培养基为：在1L的体系里面含有玉米淀粉10g、葡萄糖5g、豆粕粉15g、磷酸氢二钾5g、硫酸镁2g、硫酸锰0.5g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
二拮抗弧菌的植物乳杆菌液体菌剂的制备方法
1菌种活化
首先制菌种，无菌开启冻干保藏菌种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GIM1.140(保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏编号：GIM1.140，该菌种对外销售)，划线接种到MRS琼脂试管斜面，37℃培养24小时；然后转接到MRS液体培养基中，37℃静置培养20h，形成三角瓶液体菌种。MRS液体培养基为：在1L的体系里面含有蛋白胨10g、酵母粉5g、牛肉膏10g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二胺2g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、吐温80 1mL、碳酸钙10g，余量为水，pH6.8；若为固体培养基每升培养基中再加入15-20g琼脂；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
2扩大培养
2.1一级扩大培养
将三角瓶液体菌种以3％(体积比)的接种量转接到装有一级发酵培养基的30L种子罐中，种子罐装液量为70％，发酵温度37±1℃，密闭静置培养，发酵时间为16个小时，制成一级种子液；一级发酵培养基为：在1L的体系里面含有蛋白胨10g、酵母粉5g、牛肉膏10g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二胺2g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、吐温80 1mL、碳酸钙10g，余量为水，pH6.8；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
2.2二级扩大培养
将一级种子液以8％(体积比)的接种量转接到装有二级发酵培养基的300L发酵罐中进行二级发酵，发酵罐装液量为70％，发酵温度37±1℃，密闭静置培养，发酵时间24h，检测pH降低至4.0-4.5而且不再变化时，即可以结束发酵。由此制备得到植物乳杆菌液体菌剂(活菌数3.2×109cfu/mL)。二级发酵培养基为：在1L的体系里面含有糖蜜20g、硝酸铵5g、牛肉膏3g、酵母粉5g、乳糖5g和氯化钠5g，余量为水，pH6.8；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
三拮抗弧菌的酿酒酵母液体菌剂的制备方法
1菌种活化
首先制菌种，无菌开启冻干保藏菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)GIM2.198(保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏编号：GIM2.198，该菌种对外销售)，划线接种到麦芽汁琼脂试管斜面，28℃培养20小时；然后转接到YEPD液体培养基中，28℃振荡培养16h，形成摇瓶液体菌种；麦芽汁琼脂培养基为：在1L的体系里面含有麦芽膏粉130g、琼脂15g和氯霉素0.1g，余量为水，pH自然；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，115℃灭菌30min。YEPD液体培养基为：在1L的体系里面含有酵母粉10g、蛋白胨20g和葡萄糖20g，余量为水，pH自然；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，115℃灭菌30min。
2扩大培养
2.1一级扩大培养
将摇瓶液体菌种以3％(体积比)的接种量转接到装有一级发酵培养基的30L种子罐中，种子罐装液量为70％，发酵温度28±1℃，搅拌速率200rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度70％～80％，发酵时间为16个小时，制成一级种子液；一级发酵培养基为：在1L的体系里面含有葡萄糖10g、酵母粉10g、蛋白胨15g、尿素5g、磷酸氢二钾5g和泡敌0.3mL，余量为水，pH自然；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，115℃灭菌30min。
2.2二级扩大培养
将一级种子液以3％(体积比)的接种量转接到装有二级发酵培养基的300L发酵罐中进行二级发酵，发酵罐装液量为70％，发酵温度28±1℃，搅拌速率180rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度70％-80％，发酵时间24h，即可以结束发酵，得到酿酒酵母液体菌剂(活菌数9.7×109cfu/mL)。二级发酵培养基为：在1L的体系里面含有糖蜜20g、蔗糖10g、豆粕粉20g、酵母粉5g、磷酸氢二钾5g、氯化铵5g、半胱氨酸盐酸盐1g和泡敌0.3mL，余量为水，pH自然；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，115℃灭菌30min。
实施例2：
一拮抗弧菌的凝结芽孢杆菌液体菌剂的制备方法
1菌种活化
首先制菌种，取筛选的有拮抗弧菌功能的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)GIM1.646(保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏编号：GIM1.646，该菌种对外销售)菌种，划线接种到牛肉膏蛋白胨琼脂试管斜面，37℃培养24小时；然后转接到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃振荡培养18h，形成摇瓶液体菌种。牛肉膏蛋白胨液体培养基为：在1L的体系里面含有牛肉膏3g、蛋白胨10g和氯化钠5g，余量为水，pH7.0±0.2；若为固体培养基每升培养基再加入15-20g琼脂；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，121℃灭菌20min。
2扩大培养
2.1一级扩大培养
将摇瓶液体菌种以4％(体积比)的接种量转接到装有一级发酵培养基的30L种子罐中，种子罐装液量为75％，发酵温度37±1℃，搅拌速率280rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度40％～50％，发酵时间为18个小时，制成一级种子液。一级发酵培养基为：在1L的体系里面含有葡萄糖5g、酵母粉3g、蛋白胨5g、硫酸镁0.2g、磷酸氢二钾0.3g、牛肉膏3g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
2.2二级扩大培养
将一级种子液以3％(体积比)的接种量转接到装有二级发酵培养基的300L发酵罐中进行二级发酵，发酵罐装液量为75％，发酵温度37±1℃，搅拌速率180rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度40％～50％，发酵时间40h，使用显微镜观察芽孢生成情况，芽孢率大于80％时即可以结束发酵。由此制备得到拮抗弧菌的凝结芽孢杆菌液体菌剂(活菌数7.2×109cfu/mL)。二级发酵培养基为：在1L的体系里面含有玉米淀粉10g、葡萄糖5g、豆粕粉15g、磷酸氢二钾5g、硫酸镁2g、硫酸锰0.5g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
二拮抗弧菌的植物乳杆菌液体菌剂的制备方法
1菌种活化
首先制菌种，无菌开启冻干保藏菌种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GIM1.140(保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏编号：GIM1.140，该菌种对外销售)，划线接种到MRS琼脂试管斜面，37℃培养26小时；然后转接到MRS液体培养基中，37℃静置培养25h，形成三角瓶液体菌种。MRS液体培养基为：在1L的体系里面含有蛋白胨10g、酵母粉5g、牛肉膏10g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二胺2g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、吐温80 1mL、碳酸钙10g，余量为水，pH6.8；若为固体培养基每升培养基中再加入15-20g琼脂；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
2扩大培养
2.1一级扩大培养
将三角瓶液体菌种以5％(体积比)的接种量转接到装有一级发酵培养基的30L种子罐中，种子罐装液量为75％，发酵温度37±1℃，密闭静置培养，发酵时间为18个小时，制成一级种子液；一级发酵培养基为：在1L的体系里面含有蛋白胨10g、酵母粉5g、牛肉膏10g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二胺2g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、吐温80 1mL、碳酸钙10g，余量为水，pH6.8；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
2.2二级扩大培养
将一级种子液以8％(体积比)的接种量转接到装有二级发酵培养基的300L发酵罐中进行二级发酵，发酵罐装液量为75％，发酵温度37±1℃，密闭静置培养，发酵时间24h，检测pH降低至4.0-4.5而且不再变化时，即可以结束发酵。由此制备得到植物乳杆菌液体菌剂(活菌数3.8×109cfu/mL)。二级发酵培养基为：在1L的体系里面含有糖蜜20g、硝酸铵5g、牛肉膏3g、酵母粉5g、乳糖5g和氯化钠5g，余量为水，pH6.8；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
三拮抗弧菌的酿酒酵母液体菌剂的制备方法
1菌种活化
首先制菌种，无菌开启冻干保藏菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)GIM2.198(保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏编号：GIM2.198，该菌种对外销售)，划线接种到麦芽汁琼脂试管斜面，28℃培养23小时；然后转接到YEPD液体培养基中，28℃振荡培养20h，形成摇瓶液体菌种；麦芽汁琼脂培养基为：在1L的体系里面含有麦芽膏粉130g、琼脂15g和氯霉素0.1g，余量为水，pH自然；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，115℃灭菌30min。YEPD液体培养基为：在1L的体系里面含有酵母粉10g、蛋白胨20g和葡萄糖20g，余量为水，pH自然；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，115℃灭菌30min。
2扩大培养
2.1一级扩大培养
将摇瓶液体菌种以4％(体积比)的接种量转接到装有一级发酵培养基的30L种子罐中，种子罐装液量为75％，发酵温度28±1℃，搅拌速率220rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度40％～50％，发酵时间为18个小时，制成一级种子液；一级发酵培养基为：在1L的体系里面含有葡萄糖10g、酵母粉10g、蛋白胨15g、尿素5g、磷酸氢二钾5g和泡敌0.3mL，余量为水，pH自然；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，115℃灭菌30min。
2.2二级扩大培养
将一级种子液以4％(体积比)的接种量转接到装有二级发酵培养基的300L发酵罐中进行二级发酵，发酵罐装液量为75％，发酵温度28±1℃，搅拌速率200rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度40％-50％，发酵时间25h，即可以结束发酵，得到酿酒酵母液体菌剂(活菌数9.2×109cfu/mL)。二级发酵培养基为：在1L的体系里面含有糖蜜20g、蔗糖10g、豆粕粉20g、酵母粉5g、磷酸氢二钾5g、氯化铵5g、半胱氨酸盐酸盐1g和泡敌0.3mL，余量为水，pH自然；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，115℃灭菌30min。
实施例3：
一拮抗弧菌的凝结芽孢杆菌液体菌剂的制备方法
1菌种活化
首先制菌种，取筛选的有拮抗弧菌功能的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)GIM1.646(保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏编号：GIM1.646，该菌种对外销售)菌种，划线接种到牛肉膏蛋白胨琼脂试管斜面，37℃培养24小时；然后转接到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃振荡培养20h，形成摇瓶液体菌种。牛肉膏蛋白胨液体培养基为：在1L的体系里面含有牛肉膏3g、蛋白胨10g和氯化钠5g，余量为水，pH7.0±0.2；若为固体培养基每升培养基再加入15-20g琼脂；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，121℃灭菌20min。
2扩大培养
2.1一级扩大培养
将摇瓶液体菌种以5％(体积比)的接种量转接到装有一级发酵培养基的30L种子罐中，种子罐装液量为80％，发酵温度37±1℃，搅拌速率300rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度60％～70％，发酵时间为20个小时，制成一级种子液。一级发酵培养基为：在1L的体系里面含有葡萄糖5g、酵母粉3g、蛋白胨5g、硫酸镁0.2g、磷酸氢二钾0.3g、牛肉膏3g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
2.2二级扩大培养
将一级种子液以4％(体积比)的接种量转接到装有二级发酵培养基的300L发酵罐中进行二级发酵，发酵罐装液量为80％，发酵温度37±1℃，搅拌速率150rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度60％-70％，发酵时间48h，使用显微镜观察芽孢生成情况，芽孢率大于80％时即可以结束发酵。由此制备得到拮抗弧菌的凝结芽孢杆菌液体菌剂(活菌数7.5×109cfu/mL)。二级发酵培养基为：在1L的体系里面含有玉米淀粉10g、葡萄糖5g、豆粕粉15g、磷酸氢二钾5g、硫酸镁2g、硫酸锰0.5g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
二拮抗弧菌的植物乳杆菌液体菌剂的制备方法
1菌种活化
首先制菌种，无菌开启冻干保藏菌种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GIM1.140(保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏编号：GIM1.140，该菌种对外销售)，划线接种到MRS琼脂试管斜面，37℃培养28小时；然后转接到MRS液体培养基中，37℃静置培养30h，形成三角瓶液体菌种。MRS液体培养基为：在1L的体系里面含有蛋白胨10g、酵母粉5g、牛肉膏10g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二胺2g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、吐温80 1mL、碳酸钙10g，余量为水，pH6.8；若为固体培养基每升培养基中再加入15-20g琼脂；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
2扩大培养
2.1一级扩大培养
将三角瓶液体菌种以6％(体积比)的接种量转接到装有一级发酵培养基的30L种子罐中，种子罐装液量为80％，发酵温度37±1℃，密闭静置培养，发酵时间为20个小时，制成一级种子液；一级发酵培养基为：在1L的体系里面含有蛋白胨10g、酵母粉5g、牛肉膏10g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二胺2g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、吐温80 1mL、碳酸钙10g，余量为水，pH6.8；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
2.2二级扩大培养
将一级种子液以8％(体积比)的接种量转接到装有二级发酵培养基的300L发酵罐中进行二级发酵，发酵罐装液量为80％，发酵温度37±1℃，密闭静置培养，发酵时间24h，检测pH降低至4.0-4.5而且不再变化时，即可以结束发酵。由此制备得到植物乳杆菌液体菌剂(活菌数3.5×109cfu/mL)。二级发酵培养基为：在1L的体系里面含有糖蜜20g、硝酸铵5g、牛肉膏3g、酵母粉5g、乳糖5g和氯化钠5g，余量为水，pH6.8；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，再调pH值，115℃灭菌30min。
三拮抗弧菌的酿酒酵母液体菌剂的制备方法
1菌种活化
首先制菌种，无菌开启冻干保藏菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)GIM2.198(保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏编号：GIM2.198，该菌种对外销售)，划线接种到麦芽汁琼脂试管斜面，28℃培养24小时；然后转接到YEPD液体培养基中，28℃振荡培养24h，形成摇瓶液体菌种；麦芽汁琼脂培养基为：在1L的体系里面含有麦芽膏粉130g、琼脂15g和氯霉素0.1g，余量为水，pH自然；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，115℃灭菌30min。YEPD液体培养基为：在1L的体系里面含有酵母粉10g、蛋白胨20g和葡萄糖20g，余量为水，pH自然；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，115℃灭菌30min。
2扩大培养
2.1一级扩大培养
将摇瓶液体菌种以5％(体积比)的接种量转接到装有一级发酵培养基的30L种子罐中，种子罐装液量为80％，发酵温度28±1℃，搅拌速率240rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度60％-70％，发酵时间为20个小时，制成一级种子液；一级发酵培养基为：在1L的体系里面含有葡萄糖10g、酵母粉10g、蛋白胨15g、尿素5g、磷酸氢二钾5g和泡敌0.3mL，余量为水，pH自然；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，115℃灭菌30min。
2.2二级扩大培养
将一级种子液以5％(体积比)的接种量转接到装有二级发酵培养基的300L发酵罐中进行二级发酵，发酵罐装液量为80％，发酵温度28±1℃，搅拌速率240rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度60％-70％，发酵时间28h，即可以结束发酵，得到酿酒酵母液体菌剂(活菌数9.6×109cfu/mL)。二级发酵培养基为：在1L的体系里面含有糖蜜20g、蔗糖10g、豆粕粉20g、酵母粉5g、磷酸氢二钾5g、氯化铵5g、半胱氨酸盐酸盐1g和泡敌0.3mL，余量为水，pH自然；配制方法是将所有成分按其含量混合均匀，115℃灭菌30min。
实施例4：
拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂制备方法如下：
将实施例1制备的凝结芽孢杆菌液体菌剂用无菌生理盐水稀释成1.0×109cfu/mL、1.8×109cfu/mL两个活菌数的凝结芽孢杆菌液体菌剂；将实施例1制备的植物乳杆菌液体菌剂用无菌生理盐水稀释成1.0×109cfu/mL、1.8×109cfu/mL两个活菌数的植物乳杆菌液体菌剂；将实施例1制备的酿酒酵母液体菌剂用无菌生理盐水稀释成1.8×109cfu/mL、5.0×109cfu/mL两个活菌数的酿酒酵母液体菌剂。
将600mL活菌数为1.0×109cfu/mL的凝结芽孢杆菌液体菌剂、200mL活菌数为1.0×109cfu/mL的植物乳杆菌液体菌剂和200mL活菌数为5.0×109cfu/mL的酿酒酵母液体菌剂混合均匀，即制得拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂，其总活菌数为1.8×109cfu/mL。
分别以1.8×109cfu/mL的凝结芽孢杆菌液体菌剂、1.8×109cfu/mL的植物乳杆菌液体菌剂和1.8×109cfu/mL酿酒酵母液体菌剂作为对照。
养殖试验：
分别将上述制备的1.8×109cfu/mL的凝结芽孢杆菌液体菌剂(Ⅰ)、1.8×109cfu/mL的植物乳杆菌液体菌剂(Ⅱ)和1.8×109cfu/mL的酿酒酵母液体菌剂(Ⅲ)及本实施例制备的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂按对虾基础饲料重量的0.1％均匀喷涂在对虾基础饲料(对虾基础饲料购自：江门市新会区大华饲料有限公司，产品名称：对虾配合饲料)上风干投喂，实验在容积为1m3的封闭养殖系统内进行，各组实验条件一致。
经56d养殖试验，结果显示：与Ctr0相比，试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ投喂添加微生物制剂的试验组对虾的成活率分别比Ctr0提高了21.23％、23.34％、19.73％和32.81％，特定生长率分别比Ctr0提高了12.33％、13.46％、9.92％和22.75％，血清溶菌酶活力分别比Ctr0提高了13.48％、12.66％、8.76％和29.87％，血清超氧化物歧化酶活力分别比Ctr0提高了7.33％、9.49％、8.92％和21.33％，肠道可培养弧菌数Ctr0、试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别为：3.9×106cfu/g、2.8×104cfu/g、3.4×104cfu/g、5.2×105cfu/g、1.1×103cfu/g。结果表明：添加拮抗弧菌的微生物制剂可提高对虾成活率和非特异性免疫性，有效抑制对虾肠道内弧菌数量，且本发明的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂其效果优于单一菌剂效果。
实施例5：
拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂制备方法如下：
将实施例1制备的凝结芽孢杆菌液体菌剂用无菌生理盐水稀释成1.0×109cfu/mL、2.2×109cfu/mL两个活菌数的凝结芽孢杆菌液体菌剂；将实施例1制备的植物乳杆菌液体菌剂用无菌生理盐水稀释成1.0×109cfu/mL、2.2×109cfu/mL两个活菌数的植物乳杆菌液体菌剂；将实施例1制备的酿酒酵母液体菌剂用无菌生理盐水稀释成2.2×109cfu/mL、5.0×109cfu/mL两个活菌数的酿酒酵母液体菌剂。
将400mL活菌数为1.0×109cfu/mL的凝结芽孢杆菌液体菌剂、300mL活菌数为1.0×109cfu/mL的植物乳杆菌液体菌剂和300mL活菌数为5.0×109cfu/mL的酿酒酵母液体菌剂混合均匀，即制得拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂，其总活菌数为2.2×109cfu/mL。
分别以2.2×109cfu/mL的凝结芽孢杆菌液体菌剂、2.2×109cfu/mL的植物乳杆菌液体菌剂和2.2×109cfu/mL酿酒酵母液体菌剂作为对照。
养殖试验：
分别将上述制备的2.2×109cfu/mL的凝结芽孢杆菌液体菌剂、2.2×109cfu/mL的植物乳杆菌液体菌剂和2.2×109cfu/mL的酿酒酵母液体菌剂及本实施例制备的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂按对虾基础饲料重量的0.1％均匀喷涂在对虾基础饲料(对虾基础饲料购自：江门市新会区大华饲料有限公司，产品名称：对虾配合饲料)上风干投喂，实验在容积为1m3的封闭养殖系统内进行，各组实验条件一致。
经56d养殖试验，结果显示：与Ctr0相比，试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ投喂添加微生物制剂的试验组对虾的成活率分别比Ctr0提高了24.32％、19.56％、21.89％和42.66％，特定生长率分别比Ctr0提高了10.98％、9.85％、11.33％和28.22％，血清溶菌酶活力分别比Ctr0提高了9.78％、11.77％、13.67％和32.44％，血清超氧化物歧化酶活力分别比Ctr0提高了8.45％、10.99％、13.69％和19.98％，肠道可培养弧菌数Ctr0、试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别为：4.5×106cfu/g、3.2×104cfu/g、2.1×104cfu/g、2.7×105cfu/g、4.1×103cfu/g。结果表明：添加拮抗弧菌的微生物制剂可提高对虾成活率和非特异性免疫性，有效抑制对虾肠道内弧菌数量，且本发明的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂其效果优于单一菌剂效果。
实施例6：
拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂制备方法如下：
将实施例1制备的凝结芽孢杆菌液体菌剂用无菌生理盐水稀释成1.0×109cfu/mL、1.4×109cfu/mL两个活菌数的凝结芽孢杆菌液体菌剂；将实施例1制备的植物乳杆菌液体菌剂用无菌生理盐水稀释成1.0×109cfu/mL、1.4×109cfu/mL两个活菌数的植物乳杆菌液体菌剂；将实施例1制备的酿酒酵母液体菌剂用无菌生理盐水稀释成1.4×109cfu/mL、5.0×109cfu/mL两个活菌数的酿酒酵母液体菌剂。
将600mL活菌数为1.0×109cfu/mL的凝结芽孢杆菌液体菌剂、300mL活菌数为1.0×109cfu/mL的植物乳杆菌液体菌剂和100mL活菌数为5.0×109cfu/mL的酿酒酵母液体菌剂混合均匀，即制得拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂，其总活菌数为1.4×109cfu/mL。
分别以1.4×109cfu/mL的凝结芽孢杆菌液体菌剂、1.4×109cfu/mL的植物乳杆菌液体菌剂和1.4×109cfu/mL酿酒酵母液体菌剂作为对照。
养殖试验：
分别将上述制备的1.4×109cfu/mL的凝结芽孢杆菌液体菌剂、1.4×109cfu/mL的植物乳杆菌液体菌剂和1.4×109cfu/mL酿酒酵母液体菌剂及本实施例制备的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂按对虾基础饲料重量的0.1％均匀喷涂在对虾基础饲料(对虾基础饲料购自：江门市新会区大华饲料有限公司，产品名称：对虾配合饲料)上风干投喂，实验在容积为1m3的封闭养殖系统内进行，各组实验条件一致。
经56d养殖试验，结果显示：与Ctr0相比，试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ投喂添加微生物制剂的试验组对虾的成活率分别比Ctr0提高了19.91％、17.34％、19.55％和30.98％，特定生长率分别比Ctr0提高了12.78％、10.87％、8.98％和19.15％，血清溶菌酶活力分别比Ctr0提高了14.22％、15.32％、9.89％和23.66％，血清超氧化物歧化酶活力分别比Ctr0提高了12.67％、13.98％、11.22％和22.56％，肠道可培养弧菌数Ctr0、试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别为：6.8×106cfu/g、3.9×104cfu/g、4.8×104cfu/g、7.2×105cfu/g、2.3×103cfu/g。结果表明：添加拮抗弧菌的微生物制剂可提高对虾成活率和非特异性免疫性，有效抑制对虾肠道内弧菌数量，且本发明的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂其效果优于单一菌剂效果。
实施例7：
拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂制备方法如下：
将实施例1制备的凝结芽孢杆菌液体菌剂用无菌生理盐水稀释成活菌数为3.0×109cfu/mL的凝结芽孢杆菌液体菌剂；将实施例1制备的植物乳杆菌液体菌剂用无菌生理盐水稀释成2.0×109cfu/mL、3.0×109cfu/mL两个活菌数的植物乳杆菌液体菌剂；将实施例1制备的酿酒酵母液体菌剂用无菌生理盐水稀释成3.0×109cfu/mL、6.0×109cfu/mL两个活菌数的酿酒酵母液体菌剂。
将600mL活菌数为3.0×109cfu/mL的凝结芽孢杆菌液体菌剂、300mL活菌数为2.0×109cfu/mL的植物乳杆菌液体菌剂和100mL活菌数为6.0×109cfu/mL的酿酒酵母液体菌剂混合均匀，即制得拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂，其总活菌数为3.0×109cfu/mL。
分别以3.0×109cfu/mL的凝结芽孢杆菌液体菌剂、3.0×109cfu/mL的植物乳杆菌液体菌剂和3.0×109cfu/mL酿酒酵母液体菌剂作为对照。
分别将上述制备的3.0×109cfu/mL的凝结芽孢杆菌液体菌剂、3.0×109cfu/mL的植物乳杆菌液体菌剂和3.0×109cfu/mL酿酒酵母液体菌剂及本实施例制备的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂按对虾基础饲料重量的0.1％均匀喷涂在对虾基础饲料(对虾基础饲料购自：江门市新会区大华饲料有限公司，产品名称：对虾配合饲料)上风干投喂，实验在容积为1m3的封闭养殖系统内进行，各组实验条件一致。
结果表明：添加拮抗弧菌的微生物制剂(凝结芽孢杆菌液体菌剂、植物乳杆菌液体菌剂和酿酒酵母液体菌剂及本实施例制备的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂)可提高对虾成活率和非特异性免疫性，有效抑制对虾肠道内弧菌数量，且本发明的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂其效果优于单一菌剂效果。
Claims (6)
1.拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂作为拮抗对虾弧菌的饲料添加剂的应用，所述的拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂是通过以下方法制备的：将凝结芽孢杆菌液体菌剂、植物乳杆菌液体菌剂和酿酒酵母液体菌剂按体积比为4-6:2-3:1-3混合，得到拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂；所述的凝结芽孢杆菌液体菌剂的活菌数≥1.0×109cfu/mL，所述的植物乳杆菌液体菌剂的活菌数≥1.0×109cfu/mL，所述的酿酒酵母液体菌剂的活菌数≥5.0×109cfu/mL。
2.根据权利要求1所述的应用，所述的饲料添加剂为提高对虾成活率和非特异性免疫性、有效抑制对虾肠道内弧菌数量的饲料添加剂。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的凝结芽孢杆菌液体菌剂是通过以下方法制备的：
(1)将凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)GIM1.646活化后转接到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，37℃培养16-20h，形成摇瓶液体菌种；
(2)将摇瓶液体菌种以3％-5％的接种量转接到含有一级发酵培养基的种子罐中，发酵温度37±1℃，搅拌速率200-300rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度不低于40％，发酵时间为16-20h，制成一级种子液；
(3)将一级种子液以2％-4％的接种量转接到含有二级发酵培养基的发酵罐中进行二级发酵，发酵温度37±1℃，搅拌速率150-200rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度不低于40％，发酵时间36-48h，当芽孢率大于80％时结束发酵，由此制备得到凝结芽孢杆菌液体菌剂；
所述的一级发酵培养基为：每升含有葡萄糖5g、酵母粉3g、蛋白胨5g、硫酸镁0.2g、磷酸氢二钾0.3g、牛肉膏3g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2；
所述的二级发酵培养基为：每升含有玉米淀粉10g、葡萄糖5g、豆粕粉15g、磷酸氢二钾5g、硫酸镁2g、硫酸锰0.5g和泡敌0.3mL，余量为水，pH7.0±0.2。
4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的植物乳杆菌液体菌剂是通过以下方法制备的：
(1)将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GIM1.140活化后转接到MRS液体培养基中，37℃静置培养20-30h，形成三角瓶液体菌种；
(2)将三角瓶液体菌种以3％-6％的接种量转接到含有一级发酵培养基的种子罐中，发酵温度37±1℃，密闭静置培养，发酵时间为16-20h，制成一级种子液；
(3)将一级种子液以8％的接种量转接到含有二级发酵培养基的发酵罐中进行二级发酵，发酵温度37±1℃，密闭静置培养，检测pH降低至4.0-4.5而且不再变化时，结束发酵，由此制备得到植物乳杆菌液体菌剂；
所述的一级发酵培养基为：每升含有蛋白胨10g、酵母粉5g、牛肉膏10g、乙酸钠5g、柠檬酸氢二胺2g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、吐温80 1mL、碳酸钙10g，余量为水，pH6.8；
所述的二级发酵培养基为：每升含有糖蜜20g、硝酸铵5g、牛肉膏3g、酵母粉5g、乳糖5g和氯化钠5g，余量为水，pH6.8。
5.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的酿酒酵母液体菌剂是通过以下方法制备的：
(1)将酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)GIM2.198活化后转接到YEPD液体培养基中，28℃培养16-24h，形成摇瓶液体菌种；
(2)将摇瓶液体菌种以3％-5％的接种量转接到含有一级发酵培养基的种子罐中，发酵温度28±1℃，搅拌速率200-240rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度不低于40％，发酵时间为16-20h，制成一级种子液；
(3)将一级种子液以3％-5％的接种量转接到含有二级发酵培养基的发酵罐中进行二级发酵，发酵温度28±1℃，搅拌速率180-240rpm，通气量0.8-0.9V/V·min，溶氧浓度不低于40％，发酵时间24-28h，得到酿酒酵母液体菌剂；
所述的一级发酵培养基为：每升含有葡萄糖10g、酵母粉10g、蛋白胨15g、尿素5g、磷酸氢二钾5g和泡敌0.3mL，余量为水，pH自然；
所述的二级发酵培养基为：每升含有糖蜜20g、蔗糖10g、豆粕粉20g、酵母粉5g、磷酸氢二钾5g、氯化铵5g、半胱氨酸盐酸盐1g和泡敌0.3mL，余量为水，pH自然。
6.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的饲料为对虾基础饲料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811051268.2A CN109329648B (zh) | 2018-09-10 | 2018-09-10 | 一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811051268.2A CN109329648B (zh) | 2018-09-10 | 2018-09-10 | 一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109329648A CN109329648A (zh) | 2019-02-15 |
| CN109329648B true CN109329648B (zh) | 2022-03-08 |
Family
ID=65304720
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811051268.2A Active CN109329648B (zh) | 2018-09-10 | 2018-09-10 | 一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109329648B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115044511A (zh) * | 2022-06-29 | 2022-09-13 | 苏州宏螯生物农业发展有限公司 | 一种乳酸菌复合制剂及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103173371B (zh) * | 2011-12-20 | 2014-07-02 | 辽宁威兰生物技术有限责任公司 | 酿酒酵母与嗜酸乳杆菌的饲料用复合微生物制剂的生产 |
| CN104017757B (zh) * | 2014-06-03 | 2016-05-18 | 江南大学 | 一株高效底改芽孢杆菌及其制成的复合底改菌剂和应用 |
| CN104472862A (zh) * | 2014-12-29 | 2015-04-01 | 江苏千药堂国医研究院有限公司 | 一种生物饲料添加剂及其制备方法 |
| CN104593352A (zh) * | 2015-01-08 | 2015-05-06 | 国家海洋局第三海洋研究所 | 促进水产动物肠道健康的复合微生物菌剂及其制备方法 |
| CN106834174A (zh) * | 2017-01-20 | 2017-06-13 | 国家海洋局第三海洋研究所 | 对凡纳滨对虾养殖中抑制弧菌的微生态制剂及制备与应用 |
-
2018
- 2018-09-10 CN CN201811051268.2A patent/CN109329648B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109329648A (zh) | 2019-02-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103820363B (zh) | 一种屎肠球菌菌粉的制备与应用 | |
| CN104371960B (zh) | 复合菌剂及所采用的复合微生物的连续发酵法 | |
| CN111500508B (zh) | 一种丁酸梭状芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌液体混合发酵方法 | |
| CN110151795B (zh) | 一种丁酸梭菌活菌制剂及其生产工艺 | |
| CN108641979B (zh) | 一种屎肠球菌、其高密度发酵培养方法及由其制备的微生态制剂 | |
| CN111172077A (zh) | 一种调节生猪肠道菌群的微生物制剂及制备方法 | |
| CN112608861B (zh) | 一种含有丁酸梭菌和乳酸片球菌的复合制剂及其制备方法和应用 | |
| CN111849857B (zh) | 促进凝结芽孢杆菌芽孢形成的方法及其微生态制剂与应用 | |
| CN115074290B (zh) | 一种联产苯乳酸和γ-氨基丁酸的干酪乳杆菌及其应用 | |
| CN112126599B (zh) | 一种瑞士乳杆菌的高密度培养方法、高活力菌粉的制备及其应用 | |
| CN111700157A (zh) | 一种提高水产动物免疫力的益生菌饲料添加剂 | |
| CN110804574A (zh) | 一种高浓度凝结芽孢杆菌液体发酵方法 | |
| CN112280707A (zh) | 一种饲料用益生菌的制备方法 | |
| CN110295126B (zh) | 一种混合益生菌制剂及其制备工艺 | |
| CN114107111B (zh) | 一种丁酸梭菌的发酵方法及其微生态制剂和应用 | |
| CN109329648B (zh) | 一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂的应用 | |
| CN102907575B (zh) | 一种生长猪预混料和配合料 | |
| CN108707569B (zh) | 屎肠球菌高效发酵培养基及其发酵培养方法 | |
| CN109329649A (zh) | 一种拮抗对虾弧菌的复合微生态制剂及其制备方法 | |
| CN113234632B (zh) | 一种通过发酵控制提高罗伊氏乳杆菌冻干存活率的方法 | |
| CN113699054B (zh) | 丁酸梭菌固体菌剂及其制备方法 | |
| CN114214263A (zh) | 一种促进丁酸梭菌形成芽孢的方法及其微生态制剂和应用 | |
| CN112175834B (zh) | 植物乳酸菌在枯草芽孢杆菌固体菌剂保存中的应用及延长枯草芽孢杆菌的保存期的方法 | |
| CN103960483B (zh) | 一种主产纤维素酶饲用益生菌制剂的液态发酵生产方法 | |
| CN112136966A (zh) | 一种水产全熟化发酵饲料的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |