CN109324167A - 一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法 - Google Patents

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Abstract

一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，它属于虹鳟鱼环境释放检测技术领域。本发明要解决的是渔用疫苗的后续实验研究不足的问题。本发明环境释放养殖试验前，将用于注射核酸疫苗后环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统正常运行25～30天，检测系统运行参数、水体指标，检测合格后选取规格为4～6g/尾的虹鳟鱼，禁食2日后，进行核酸疫苗背鳍基部肌肉注射免疫，免疫时将虹鳟鱼随机分为空白组和免疫组，注射后将虹鳟鱼放到用于注射核酸疫苗后环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统中的养殖池内养殖，间隔一定时间对进行环境释放检测。本发明能够保证注射疫苗后，养殖环境适合。

Description

一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法
技术领域
本发明属于虹鳟鱼环境释放检测技术领域；具体涉及一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法。
背景技术
在过去的30年里，水产疾病发病的速度增快和出现一些未知的疾病对水产养殖业造成危害。为了防止这些传染病的传播，水产养殖大量使用抗生素预防治疗鱼病，产生很多严重的后遗症，一是鱼体药物残留，二是抗生素污染环境。而且抗生素的反复使用，产生了大量的耐药菌株，只好不断加大抗生素的投药量，恶性循环，产生更多的耐药菌株。所以为了减少水产疾病的发病率，近年来，水产养殖业也开始倡导健康养殖管理的实施，并开发相应的技术和措施。在不同养殖方式对水域生态的影响及研究如何进行可持续发展，也一直在进行深入的调查和考证。但总的来说，养殖健康管理理念还相对落后，表现在严重的水体自身污染和病害疾病频发。在育种生物学，生态学理论研究基础薄弱，对生产环境的治理手段落后，一味追求高的产量。因此，推广和普及健康养殖理念的形势十分紧迫。
免疫防治目前是水产疾病防治的热点，因其疗效可靠，对水域环境的污染破坏小，在病害的防控中具有重要的地位，主要包括疫苗，免疫调节剂，以及益生菌的使用等。其中渔用疫苗接种已成为世界范围内公认的、经证实且具有成本效益的控制水产养殖某些传染病的方法。渔用疫苗可以显著减少特定疾病相关的损失，从而减少抗生素的使用。而且它们是天然的生物材料，不会在产品或环境中留下任何残留物，因此不会引起疾病机体的耐药菌株，最终可以使整体养殖成本的降低和进行可预测性的生产。
目前对于渔用疫苗的研究存在以下不足：首先对鱼类免疫的基础研究较为薄弱，免疫系统的免疫应答规律和保护机制等研究不够深入；其次很多重大疾病的病原菌尚未分离到，无法制备全菌灭活苗；一些已经分离到的病原菌因对其后续试验的研究不足，限制了基因工程苗或核酸疫苗等的发展。
发明内容
本发明目的是提供了一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法。
本发明通过以下技术方案实现：
一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，包括如下步骤：
步骤1、环境释放养殖试验前，将用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统正常运行25～30天，检测系统运行参数、水体指标，检测合格后待用；
步骤2、选取规格为4～6g/尾的虹鳟鱼，禁食2日后，进行核酸疫苗背鳍基部肌肉注射免疫，免疫时将虹鳟鱼随机分为空白组和免疫组，注射后将虹鳟鱼放到用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统的养殖池内；
步骤3、用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统总水量为10m3，循环养殖每天换水量为总量的10～20wt％，每天投饲量标准为虹鳟鱼体重的2％，分2～4次投喂,养殖密度为200～220尾/m3，养殖水温为11～16℃；
步骤4、免疫注射后，间隔一定时间对虹鳟粪便、水体分别进行采集，进行环境释放试验相关内容检测。
本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤1中用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统具有生物过滤装置，所述的生物过滤装置为不锈钢外壳，其从上到下分为生物过滤层、陶瓷填料层、立体弹性滤料层、活性碳生物填料层，所述的生物过滤层为高为30-50cm的EPS生物球，所述的陶瓷颗粒厚度40～60cm，陶瓷颗粒的粒径为4～6mm，所述的立体弹性滤料层的厚度为30cm，所述的立体弹性滤料层为聚乙烯材质，弹性滤料单元直径80mm，比表面积300m2/m3，孔隙率大于99％，填料双侧用不锈钢网固定防止填料飘动，所述的活性碳生物填料层的厚度为30cm，粒径为2～4mm,所述的生物过滤装置的高度为1.5m。
本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤1中水体指标为悬浮物颗粒<2mg/l，水体pH为6.7～7.0。
本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤2中免疫组注射核酸疫苗的剂量为0.05ml/尾，空白对照组注射PBS缓冲溶液的剂量0.05ml/尾。
本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，核酸疫苗中质粒的浓度在2～50μg/μL。
本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤3中投入的饲料为维生素0.1～0.15份，氯化胆碱0.05～0.1份，虾粉20～25份，豆粕35～40份，鱼粉25～30份，鱼油5～8份，紫苏叶提取物0.001～0.005份，艾叶提取物0.0001～0.0005份，菊花提取物0.0001～0.0005份。
本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤3中的维生素包括维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素E中的一种或几种的混合物。
本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，免疫注射后虹鳟粪便、水体分别进行采集，每间隔5～7天采集一次。
本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，环境释放检测包括虹鳟粪便的检测及水体的检测，虹鳟粪便的检测采用将湿重0.1g的粪便在无菌500μL磷酸缓冲盐溶液中进行充分搅拌,并在4℃放置30min,利用尼龙布过滤掉残渣，吸取过滤液涂布含有氨苄青霉素的LB平板,2个重复,分别在37℃和18℃下倒置培养8～12h；水体的检测为将水体离心60～120s后，取底部浓缩液，涂布在含有氨苄青霉素的LB平板，在20～30℃下倒置培养8～12h。
本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤2中的核酸疫苗为核酸疫苗pIHNch-G。
本发明的有益效果如下：
本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，能够满足检测核酸疫苗在虹鳟鱼养殖过程中是否对养殖水体释放影响因子，养殖水体排放是否对环境产生影响，根据养殖虹鳟鱼的现场实际条件，养殖鱼、水体、温度、环境等及养殖技术要求，针对环境释放试验的要求，对养殖环境及养殖系统进行设计，建立独立的养殖环境及养殖方法。
本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，环境释放检测的养殖过程在人工控制条件下进行，隔离了环境释放试验养殖水体与外界流水环境水体间的接触，避免环境释放试验水体在没有处理、检测及确认为安全的前提下，进入自然环境中，对自然环境造成不确定的危害。
本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖处理方法，能够保证养殖池中的水质指标稳定，悬浮颗粒物浓度低于2mg/L，氨氮含量低于0.2mg/L，亚硝酸盐含量低于0.1mg/L,溶解氧含量不低于8mg/L，pH在6.8～7.3之间。
附图说明
图1为本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统的俯视图；
图2为本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统的主视图；
图3为本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统的A区域局部放大图；
图4为本发明所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统的B区域局部放大图。
具体实施方式
具体实施方式一：
一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，包括如下步骤：
步骤1、环境释放养殖试验前，将用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统正常运行25～30天，检测系统运行参数、水体指标，检测合格后待用；
步骤2、选取规格为4～6g/尾的虹鳟鱼，禁食2日后，进行核酸疫苗背鳍基部肌肉注射免疫，免疫时将虹鳟鱼随机分为空白组和免疫组，注射后将虹鳟鱼放到用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统的养殖池内；
步骤3、用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统总水量为10m3，循环养殖每天换水量为总量的10～20wt％，每天投饲量标准为虹鳟鱼体重的2％，分2～4次投喂，养殖密度为200～220尾/m3，养殖水温为11～16℃；
步骤4、免疫注射后，间隔一定时间对用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统的虹鳟粪便、水体分别进行采集，进行环境释放试验内容检测。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤1中用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统具有生物过滤装置，所述的生物过滤装置为不锈钢外壳，其从上到下分为生物过滤层、陶瓷填料层、立体弹性滤料层、活性碳生物填料层，所述的生物过滤层为高为30-50cm的EPS生物球，所述的陶瓷颗粒厚度40～60cm，陶瓷颗粒的粒径为4～6mm，所述的立体弹性滤料层的厚度为30cm，所述的立体弹性滤料层为聚乙烯材质，弹性滤料单元直径80mm，比表面积300m2/m3，孔隙率大于99％，填料双侧用不锈钢网固定防止填料飘动，所述的活性碳生物填料层的厚度为30cm，粒径为2～4mm，所述的生物过滤装置的高度为1.5m。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤1中水体指标为悬浮物颗粒<2mg/l，水体pH为6.7～7.0。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤2中免疫组注射核酸疫苗的剂量为0.05ml/尾，空白对照组注射PBS缓冲溶液的剂量0.05ml/尾。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，核酸疫苗中质粒的浓度在2～50μg/μL。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤3中投入的饲料为维生素0.1～0.15份，氯化胆碱0.05～0.1份，虾粉20～25份，豆粕35～40份，鱼粉25～30份，鱼油5～8份，紫苏叶提取物0.001～0.005份，艾叶提取物0.0001～0.0005份，菊花提取物0.0001～0.0005份。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤3中的维生素包括维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素E中的一种或几种的混合物。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，免疫注射后虹鳟粪便、水体分别进行采集，每间隔5～7天采集一次。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，环境释放检测包括虹鳟粪便的检测及水体的检测，虹鳟粪便的检测采用将湿重0.1g的粪便在无菌500μL磷酸缓冲盐溶液中进行充分搅拌，并在4℃放置30min，利用尼龙布过滤掉残渣，吸取过滤液涂布含有氨苄青霉素的LB平板，在20～30℃下倒置培养8～12h；水体的检测为将水体离心60～120s后，取底部浓缩液，涂布在含有氨苄青霉素的LB平板，在20～30℃下倒置培养8～12h。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤2中的核酸疫苗为核酸疫苗pIHNch-G，
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，能够保证养殖池中的水质指标稳定，悬浮颗粒物浓度低于2mg/L，氨氮含量低于0.2mg/L，亚硝酸盐含量低于0.1mg/L,溶解氧含量不低于8mg/L，pH在6.8～7.3之间。
具体实施方式二：
一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，包括如下步骤：
步骤1、环境释放养殖试验前，将用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统正常运行25～30天，检测系统运行参数、水体指标，检测合格后待用；
步骤2、选取规格为4～6g/尾的虹鳟鱼，禁食2日后，进行核酸疫苗背鳍基部肌肉注射免疫，免疫时将虹鳟鱼随机分为空白组和免疫组，注射后将虹鳟鱼放到用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统的养殖池内；
步骤3、用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统总水量为10m3，循环养殖每天换水量为总量的10～20wt％，每天投饲量标准为虹鳟鱼体重的2％，分两次投喂,养殖密度为200～220尾/m3，养殖水温为11～16℃；
步骤4、免疫注射后，间隔一定时间对用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统的虹鳟粪便、水体分别进行采集，进行环境释放检测。
具体实施方式三：
根据具体实施方式二所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤1中所述的生物过滤装置为不锈钢外壳，其从上到下分为生物过滤层、陶瓷填料层、立体弹性滤料层、活性碳生物填料层，所述的生物过滤层为高为30-50cm的EPS生物球，所述的陶瓷颗粒厚度40～60cm，陶瓷颗粒的粒径为4～6mm，所述的立体弹性滤料层的厚度为30cm，所述的立体弹性滤料层为聚乙烯材质，弹性滤料单元直径80mm，比表面积300m2/m3，孔隙率大于99％，填料双侧用不锈钢网固定防止填料飘动，所述的活性碳生物填料层的厚度为30cm，粒径为2～4mm,所述的生物过滤装置的高度为1.5m。
具体实施方式四：
根据具体实施方式二所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤1中水体指标为悬浮物颗粒<2mg/l，水体pH为6.7～7.0。
具体实施方式五：
根据具体实施方式二所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤2中免疫组注射核酸疫苗的剂量为0.05ml/尾，空白对照组注射PBS缓冲溶液的剂量0.05ml/尾。
具体实施方式六：
根据具体实施方式二所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，核酸疫苗中质粒的浓度在2～50μg/μL。
具体实施方式七：
根据具体实施方式二所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤3中投入的饲料为维生素0.1～0.15份，氯化胆碱0.05～0.1份，虾粉20～25份，豆粕35～40份，鱼粉25～30份，鱼油5～8份，紫苏叶提取物0.001～0.005份，艾叶提取物0.0001～0.0005份，菊花提取物0.0001～0.0005份。
具体实施方式八：
根据具体实施方式二所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，步骤3中的维生素包括维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素E中的一种或几种的混合物。
具体实施方式九：
根据具体实施方式二所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，免疫注射后虹鳟粪便、水体分别进行采集，每间隔5～7天采集一次。
具体实施方式十：
根据具体实施方式二所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，环境释放检测包括虹鳟粪便的检测及水体的检测，虹鳟粪便的检测采用将湿重0.1g的粪便在无菌500μL磷酸缓冲盐溶液中进行充分搅拌，并在4℃放置30min，利用尼龙布过滤掉残渣，吸取过滤液涂布含有氨苄青霉素的LB平板，在20～30℃下倒置培养8～12h；水体的检测为将水体离心60～120s后，取底部浓缩液，涂布在含有氨苄青霉素的LB平板，在20～30℃下倒置培养8～12h。
具体实施方式十一：
根据具体实施方式一所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，包括第一水泥池6，第二水泥池13，所述的第一水泥池第二水泥池并列设置，且两者之间形成人行通道12，所述的第一水泥池中设置有多个养殖池1、循环回水蓄水池14，所述的第二水泥池中设置处理池；所述的第二水泥池上方设置有生物过滤装置5，所述的生物过滤装置的出水管26连通紫外线消毒装置4，所述的紫外线消毒装置通过管路与养殖池连通，所述的生物过滤装置通过循环水管19与循环回水蓄水池连通，所述的生物过滤装置的污水排放到污水处理池3中，所述的第一水泥池与第二水泥池上方架设有钢架结构9，钢架结构上覆盖透明塑料薄膜及遮阳网；所述的第一水泥池与第二水泥池外围设置有不锈钢网围墙10，围墙上设置有安全门8。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，钢架结构上安装有多个紫外线空气消毒灯2。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，每个养殖池顶部均设置有进水口1-1、底部均设置溢流出水管1-3，循环回水蓄水池内设置有水位控制管14-6，进水口通过进水支管16与进水总管18连通，进水总管与紫外线消毒装置出口连接；溢流出水管、水位控制管连接出水管道17，且溢流出水管上设置有过滤网1-2。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，所述的循环回水蓄水池内设置有隔板，隔板经循环回水蓄水池分隔为沉淀空池部分14-1、沉淀介质池部分14-2和增氧进水池部分14-3；所述的增氧补水池部分内部安装有循环泵14-5、反冲泵14-4，所述的循环泵与所述的生物过滤装置的循环水管19连通，所述的反冲泵与所述的生物过滤装置的反冲管20连通。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，所述的第一水泥池的左右两侧设置有水位控制板7。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，所述的第一水泥池与第二水泥池为流水养殖水泥池。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，所述的增氧补水池上连接有补水管路，补水管路外端置于第一水泥池外部，并与补水泵11连接。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，所述的第一水泥池与所述的第二水泥池的内壁覆PE材质内胆。
具体实施方式十二：
根据具体实施方式十一所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，养殖池的个数为5个，所述的5个养殖池分布于所述的循环回水蓄水池的左侧、右侧和前侧，所述的生物过滤装置位于所述的循环回水蓄水池的后侧上方位置。
具体实施方式十三：
根据具体实施方式十一所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，所述的养殖池上方设置有方钢15，所述的方钢两端固定于所述的第一水泥池的内侧。
具体实施方式十四：
根据具体实施方式十一所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，所述的生物过滤装置右侧底部安装有第一排污管21、第二排污管22，所述的第一排污管与所述的第二排污管垂直连通，所述的第一排污管的两端分别安装有第一排污阀21-1、第二排污阀21-2，所述的第二排污管为竖直弯管，所述的第二排污管的竖直部分安装有第三排污阀22-1。
具体实施方式十五：
根据具体实施方式十一所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，所述的反冲管的两端分别安装有第一反冲阀20-2、第二单向阀20-1，所述的循环泵与所述的生物过滤装置的循环水管间设置有第一进水阀19-1、第一单向阀19-2，所述的进水总管上设置有第二进水阀18-1。
具体实施方式十六：
根据具体实施方式十一所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，所述的养殖池左侧槽体底部安装的第一进水口外侧设置有第三进水阀1-4。
具体实施方式十七：
根据具体实施方式十一所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，第一水泥池与第二水泥池的规格为：30m(L)*3.8m(W)*1.2m(H)，第一水泥池与第二水泥池的内壁覆PE材质内胆；5个养殖池为不锈钢材质，5个养殖池为同一规格，规格为：2m(L)*1m(W)*0.95m(H)；循环回水蓄水池为不锈钢材质，循环回水蓄水池规格为：2m(L)*1.5m(W)*0.95m(H)。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖处理系统，养殖水体为基地的流水养殖用泉水，温度为11-16度。养殖水体经补水泵加入增氧进水池部分中，水体经过出水管道进入5个养殖池中，池中水体加注到循环养殖用水位为止，系统总水量为10m3。养殖水由循环泵、生物过滤装置、紫外线消毒装置、养殖池、循环回水蓄水池的沉淀空池部分、沉淀介质池部分、增氧进水池部分，再次进入水泵形成封闭环境释放循环养殖系统。系统内循环水体与水泥池中的水体相互不接触，采用不锈钢池壁，目的是金属利于水温传导，利用水泥池内流动养殖水体对养殖池及循环回水蓄水池的水体进行降温，来保证封闭循环养殖池内的水温，从而形成保持养殖水温、与外界水体隔绝、独立的、全封闭虹鳟鱼环境释放养殖系统。
具体实施方式十八：
根据具体实施方式十一所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，所述的紫外线消毒装置为管道式中流量紫外线消毒器，流量8～60m3/h，功率为150W～675W，型号为LCW-II-U(S)-8。
具体实施方式十九：
根据具体实施方式十一所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法用养殖处理系统，所述的循环回水蓄水池中沉淀介质池部分底部设置有波纹板，用于阻隔水的流动，促进沉淀物质落入池底；所述的增氧进水池部分池内放置有纳米气盘石，用于增氧，或者使用纯氧源向系统供氧，处理量103/h，在水温为11～16℃条件下，出水溶解氧浓度能够达到14mg/L，氧利用率70％。
具体实施方式二十：
根据具体实施方式一所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖处理系统，用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼的养殖过程中，7～15天对生物过滤装置进行一次反冲洗。
具体实施方式二十一：
根据具体实施方式一所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖处理系统的污水通过污水处理装置排放，所述的污水处理装置，包括6个污水处理池，所述的6个污水处理池平行分布于第二水泥池中，污水处理池规格为：5m(L)*3.8m(W)*1.2m(H),所述的生物过滤装置的第一排污管位于第二污水处理池上方，所述的生物过滤装置的第二排污管位于第一污水处理池上方。
本实施方式所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖处理系统的污水通过污水处理装置排放，6个污水处理池分为三级处理池,第一、三、五个污水处理池为一组，第二、四、六个污水处理池为一组，每级水处理时间设定为7天；根据循环水养殖每天换水的特点，可实现在第一污水处理池处理污水的同时第二污水处理池进水，第二污水处理池处理污水的同时第一污水处理池进水，交替工作。
养殖系统每天排水量为10m3*15％＝1.5m3，所以7天排入第一污水处理池内水量为10m3*15％*7天＝10.5m3。第8天系统向第二污水处理池中进行排水，同时，利用生石灰对第一污水处理池进行水体消毒，水体消毒处理7天后，收集水样，利用LB培养基平板进行活菌检测。若氨苄青霉素抗性LB平板上无菌落长出，则第一污水处理池中水体可直接排出或将第一污水处理池中水体排入第三污水处理池中静置，检测后，安全排出，无需经过二次消毒处理。若LB平板上长出菌落，则将第一污水处理池中水体排放到第三污水处理池中进行再一次处理，使用高于第一污水处理池的生石灰浓度或臭氧消毒处理7天后，检测无活菌则直接排出，检测有活菌落，第三污水处理池水体则排放到第五污水处理池中消毒处理，直至无活菌检出，然后将水体排放到自然环境。第15天，系统开始重新向第一污水处理池中进行排水，同时，利用生石灰对第二污水处理池中的14m3水体进行消毒处理，重复第一污水处理池的处理方法，直至无活菌检出，然后将水体排放到自然环境。

Claims (9)

1.一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1、环境释放养殖试验前，将用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统正常运行25～30天，检测系统运行参数、水体指标，检测合格后待用；
步骤2、选取规格为4～6g/尾的虹鳟鱼，禁食2日后，进行核酸疫苗背鳍基部肌肉注射免疫，免疫时将虹鳟鱼随机分为空白组和免疫组，注射后将虹鳟鱼放到用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统中的养殖池内；
步骤3、用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统总水量为10m3，循环养殖每天换水量为总量的10～20wt％，每天投饲量标准为虹鳟鱼体重的2％，分2～4次投喂，养殖密度为200～220尾/m3，养殖水温为11～16℃；
步骤4、免疫注射后，间隔一定时间对虹鳟粪便、水体分别进行采集，进行环境释放试验内容检测。
2.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：步骤1中用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖系统中具有生物过滤装置，所述的生物过滤装置为不锈钢外壳，其从上到下分为生物过滤层、陶瓷填料层、立体弹性滤料层、活性碳生物填料层，所述的生物过滤层为高为30-50cm的EPS生物球，所述的陶瓷颗粒厚度40～60cm，陶瓷颗粒的粒径为4～6mm，所述的立体弹性滤料层的厚度为30cm，所述的立体弹性滤料层为聚乙烯材质，弹性滤料单元直径80mm，比表面积300m2/m3，孔隙率大于99％，填料双侧用不锈钢网固定防止填料飘动，所述的活性碳生物填料层的厚度为30cm，粒径为2～4mm,所述的生物过滤装置的高度为1.5m。
3.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：步骤1中水体指标为悬浮物颗粒<2mg/l，水体pH为6.7～7.0。
4.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：步骤2中免疫组注射核酸疫苗的剂量为0.05ml/尾，空白对照组注射PBS缓冲溶液的剂量0.05ml/尾。
5.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：核酸疫苗中质粒的浓度在2～50μg/μL。
6.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：步骤3中投入的饲料为维生素0.1～0.15份，氯化胆碱0.05～0.1份，虾粉20～25份，豆粕35～40份，鱼粉25～30份，鱼油5～8份，紫苏叶提取物0.001～0.005份，艾叶提取物0.0001～0.0005份，菊花提取物0.0001～0.0005份。
7.根据权利要求7所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：步骤3中的维生素包括维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素E中的一种或几种的混合物。
8.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：免疫注射后虹鳟粪便、水体分别进行采集，每间隔5～7天采集一次。
9.根据权利要求1所述的一种用于核酸疫苗环境释放检测的虹鳟鱼养殖方法，其特征在于：环境释放检测包括虹鳟粪便的检测及水体的检测，虹鳟粪便的检测采用将湿重0.1g的粪便在无菌500μL磷酸缓冲盐溶液中进行充分搅拌，并在4℃放置30min，利用尼龙布过滤掉残渣，吸取过滤液涂布含有氨苄青霉素的LB平板，在20～30℃下倒置培养8～12h；水体的检测为将水体离心60～120s后，取底部浓缩液，涂布在含有氨苄青霉素的LB平板，在20～30℃下倒置培养8～12h。
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