CN109321476A - 一株防控马铃薯和向日葵黄萎病的棘孢木霉pt-29及其应用 - Google Patents

一株防控马铃薯和向日葵黄萎病的棘孢木霉pt-29及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种用于防治马铃薯黄萎病向日葵黄萎病的棘孢木霉(Trichoderma asperellum)PT‑29，属于微生物农药技术领域。本发明涉及的菌株PT‑29，已于2018年01月11日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.15261。平板对峙试验表明，该菌株对马铃薯黄萎病菌和向日葵黄萎病菌均具有较好的拮抗活性。室内盆栽及田间试验表明，一定浓度的PT‑29菌剂对马铃薯黄萎病和向日葵黄萎病均具有较高的防效，同时该菌株还具有理想的增产效果。

Description

一株防控马铃薯和向日葵黄萎病的棘孢木霉PT-29及其应用
技术领域：
本发明属于微生物农药技术领域，具体涉及一株防控马铃薯和向日葵黄萎病的棘孢木霉PT-29及应用。
背景技术：
黄萎病(Verticillium wilt)主要是由轮枝菌(Verticillium spp.)引起的土传维管束病害。近年来，该病害在我国马铃薯和向日葵主要种植区发生严重，威胁着相关产业的发展，对地方经济产生了十分不利的影响，目前对于该病害尚缺乏有效的防治技术。相关研究表明，木霉菌作为一种较为广谱的生防真菌，对多种植物病害具有较好的防治效果，尤其是对一些土传病害防效显著，具有较强的环境适应性和环境友好性，因而备受国内外的关注。但目前应用于防控黄萎病的木霉菌剂研究较少，特别是针对马铃薯和向日葵生产尚缺乏高效的拮抗菌株及其应用方法。
发明内容：
本发明主要针对马铃薯黄萎病和向日葵黄萎病，从生物防治角度出发，筛选拮抗木霉菌株，并通过室内和田间试验对其生防效果进行测定，从而为病害防控提供新的生防因子。
本发明筛选获得的一株木霉菌菌株是棘孢木霉(Trichoderma asperellum)PT-29，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏日期：2018年01月11日；保藏登记入册的编号：CGMCC No.15261。
本发明的棘孢木霉(Trichoderma asperellum)PT-29在平板拮抗试验中显示对马铃薯黄萎病菌和向日葵黄萎病均具有较好的抑制作用，温室和田间试验表明该菌株对马铃薯黄萎病和向日葵黄萎病有显著的防治效果。
本发明的棘孢木霉(Trichoderma asperellum)PT-29在田间试验中还表现出对马铃薯和向日葵具有较好的增产作用。
本发明的棘孢木霉(Trichoderma asperellum)PT-29菌剂可以在向日葵和马铃薯播种时拌种处理。
附图说明
图1棘孢木霉PT-29的菌落特征
图2棘孢木霉PT-29对马铃薯黄萎病菌NK的平板对峙结果
图3棘孢木霉PT-29对向日葵黄萎病菌V33的平板对峙结果
图4棘孢木霉PT-29对马铃薯黄萎病的室内防效图
图5棘孢木霉PT-29对向日葵黄萎病的室内防效图
图6棘孢木霉PT-29对马铃薯黄萎病的田间防效图
图7棘孢木霉PT-29对向日葵黄萎病的田间防效图
具体实施方式：
为了更详细地进一步阐明而不是为了限制本发明，给出了下列实施例。
实施例1：棘孢木霉(Trichoderma asperellum)PT-29的培养
首先将棘孢木霉PT-29菌株进行平板培养。培养基配方为马铃薯葡萄糖培养基(PDA)：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18g，蒸馏水1000mL。菌株接种于PDA平板上，培养5d。
然后，进行固体发酵培养。固体发酵培养基配方为：麦麸500g，蒸馏水200mL。将平板培养5d的菌株打菌饼移入经灭菌的固体发酵培养基，黑暗条件下培养15d。
实施例2：棘孢木霉(Trichoderma asperellum)PT-29菌株孢子悬浮液的制备
向固体发酵物中加入无菌水，使用纱布过滤麦麸培养物获得孢子悬浮液，加入浓度为0.001mol/L的Tween20，调节孢子浓度为107个孢子/mL。
实施例3：棘孢木霉(Trichoderma asperellum)PT-29的平板拮抗试验
1.供试菌株
拮抗菌棘孢木霉PT-29；
马铃薯黄萎病病菌NK从马铃薯黄萎病发病植株茎秆分离获得；
向日葵黄萎病病菌V33从向日葵黄萎病发病植株茎秆分离获得；
供试菌株均保存于内蒙古农业大学植物病理教研室。
2.试验用种子
马铃薯种薯：品种费乌瑞它，原原种，由内蒙古中加农业有限公司提供。
向日葵种子：品种LD5009，由内蒙古三瑞农业科技有限公司提供。
3.试验方法
采用平板对峙培养法，分别将棘孢木霉PT-29菌株接到已生长6d的马铃薯黄萎病菌NK和向日葵黄萎病菌V33的平板中。在超净工作台，用直径为5mm的打孔器打取棘孢木霉PT-29菌株的菌丝块，放置在与黄萎病菌NK或V33菌丝块距离5cm处进行对峙培养；对照处理只接黄萎病菌NK或V33菌丝块，重复3次。3d后，逐日观察生长情况，当棘孢木霉PT-29与黄萎病菌菌丝接触相交后，分别记录其对黄萎病菌NK或V33的抑制和包围情况，并于接种后第10d调查抑制率，对其拮抗级别进行评价。
抑制率计算公式：抑制率(％)＝[(对照菌落直径-处理菌落直径)/对照菌落直径]×100％
拮抗级别共分5个等级：1级：木霉菌丝长满培养基，且全部覆盖靶标菌；2级：木霉菌丝覆盖培养基2/3以上；3级：木霉菌占培养基面积的1/3～2/3；4级：木霉菌丝覆盖培养基1/3以下；5级：靶标菌丝全部覆盖培养基。
4.试验结果
结果表明，棘孢木霉PT-29对马铃薯黄萎病菌NK和向日葵黄萎病菌V33的菌丝生长均具有显著的拮抗活性。其中，棘孢木霉PT-29对马铃薯黄萎病菌NK的抑制率为57.69％，拮抗级别为2级，PT-29菌丝覆盖培养基2/3以上；对向日葵黄萎病菌V33的抑制率为76.13％，拮抗级别为1级，PT-29菌丝长满培养基，且全部覆盖靶标菌。
表1 棘孢木霉PT-29对马铃薯黄萎病菌NK菌丝生长的抑制作用
表2 棘孢木霉PT-29对向日葵黄萎病菌V33菌丝生长的抑制作用
实施例4：棘孢木霉(Trichoderma asperellum)PT-29的室内防效试验
1.制备试验用制剂
按前述方法制备棘孢木霉PT-29的孢子悬浮液，待备用；
马铃薯黄萎病菌NK和向日葵黄萎病菌V33固体发酵后分别制备孢子悬浮液，调节孢子浓度至107个孢子/mL。
2.试验用种子
马铃薯种薯：费乌瑞它原原种，由内蒙古中加农业有限公司提供。
向日葵种子：LD5009，由内蒙古三瑞农业科技有限公司提供。
3.黄萎病病情分级标准及病情指数的计算
黄萎病病情指数分级标准参照表3；
病情指数＝[∑(各级病株数×相对级代表数值)/(调查总株数×4)]×100。
表3 黄萎病病情分级标准*
注：*为黄萎病病害分级标准(A.O.Latunde-Dada 1982)
4.试验方法
将马铃薯种薯或向日葵种子种于装好灭菌营养土的花盆中，其中无菌土与灭菌蛭石比例为1∶1，每个处理5盆，每盆种植5株，3次重复。当植株幼苗长到3-5叶期时，采用灌根接种法将已经配好的棘孢木霉PT-29的孢子悬液接种于植株根部，每株10mL；设不接PT-29为对照(CK)。2d后，再接种黄萎病菌处理液，每株10mL；接菌后，每3d浇一次水。20d后采用黄萎病分级标准进行病情调查，并记录病级，计算病情指数和防治效果。
5.试验结果
5.1马铃薯黄萎病室内防效测定
室内防效测定结果表明，棘孢木霉PT-29对马铃薯黄萎病具有显著的防治效果，防效达到68.20％。
表4 棘孢木霉PT-29对马铃薯黄萎病的室内防治效果
5.2向日葵黄萎病室内防效测定
室内防效测定结果表明，棘孢木霉PT-29对向日葵黄萎病具有显著的防治效果，防效达到73.12％。
表5 棘孢木霉PT-29对向日葵黄萎病的室内防治效果
实施例5：棘孢木霉(Trichoderma asperellum)PT-29的田间防效试验
1.制备试验用制剂
按前述方法制备棘孢木霉PT-29的孢子悬浮液，待备用。
2.试验用种薯
马铃薯种薯：费乌瑞它原原种，由内蒙古中加农业有限公司提供。
向日葵种子：LD5009，由内蒙古三瑞农业科技有限公司提供。
3.试验方法
3.1马铃薯黄萎病田间防效试验
田间试验地块设置在内蒙古锡林郭勒盟正蓝旗菜园子村和多伦县四合村王家营子。地块为自然病圃，连年种植马铃薯且黄萎病发病较重。试验设计为随机区组设计，共设置3个处理，分别木霉菌株PT-29处理，设置无处理空白对照CK1和一个化学药剂(茄病泰诺)处理对照CK2，每个处理3次重复，共9个小区，小区宽2m，长7m单行种植，行距90cm，株距25cm，田间常规管理。
播种前，将制备好的棘孢木霉PT-29菌悬液以种子量的2％与马铃薯种子进行拌种处理，加入少量滑石粉。化学药剂按照马铃薯种子量的2％拌种处理。马铃薯收获期对病薯率及商品薯产量进行调查。
3.2向日葵黄萎病田间防效试验
试验地块设在内蒙古巴彦淖尔市五原县，地块为连作且发病较重地块。试验设计为小区试验，共设3个处理，分别PT-29菌剂处理，设置空白对照CK1和一个化学药剂(氟硅唑)处理对照CK2，每个处理3次重复，共9个小区，小区随机排列，常规管理。试验前按试验方案分好小区并设置保护行和隔离区。
播种前，将制备好的木霉菌悬液以种子量的20％与向日葵种子进行拌种，并加入少量粘着剂。化学药剂按照向日葵种子量的20％拌种处理。在向日葵开花盛期调查并记录发病情况计算防效。
4.试验结果
4.1马铃薯黄萎病田间防效试验
田间试验结果表明，棘孢木霉PT-29对马铃薯黄萎病具有显著的防治效果，且具有增加马铃薯产量的效果。在正蓝旗试验点，与空白对照(CK1)相比，棘孢木霉PT-29防效达到61.73％，显著高于化学药剂处理(44.34％)；且表现出较好的增产效果，增产23.57％。在多伦试验点，与空白对照(CK1)相比，棘孢木霉PT-29防效达到63.42％，显著高于化学药剂处理(43.53％)；且表现出较好的增产效果，增产20.87％。
表6 棘孢木霉PT-29对马铃薯黄萎病的田间防治效果(正蓝旗)
表7 棘孢木霉PT-29对马铃薯黄萎病的田间防治效果(多伦)
4.2向日葵黄萎病田间防效试验
田间试验结果表明，棘孢木霉PT-29对向日葵黄萎病具有显著的防效，且具有增加向日葵产量的效果。在五原试验点，与空白对照(CK1)相比，棘孢木霉PT-29对向日葵黄萎病的防效达到78.58％，显著高于化学药剂处理(61.50％)；且表现出较好的增产效果，增产20.50％。
表8 棘孢木霉PT-29对向日葵黄萎病的田间防治效果(五原)

Claims (5)

1.一种防治马铃薯黄萎病和向日葵黄萎病的生防菌株PT-29，其特征在于：该菌株为棘孢木霉(Trichoderma asperellum)，已于2018年01月11日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.15261。
2.权利要求1所述的生防菌株制备的生防菌剂。
3.权利要求2中所述的生防菌剂的制备方法：1)将棘孢木霉(Trichodermaasperellum)PT-29菌株接种于PDA平板上，培养5d后打取菌饼放入经灭菌的固体发酵培养基，黑暗条件下培养15d。PDA培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18g，蒸馏水1000mL；固体发酵培养基配方为：麦麸500g，蒸馏水200mL。2)向固体发酵物中加入无菌水，使用纱布过滤麦麸培养物获得孢子悬浮液，加入浓度为0.001mol/L的Tween20，调节孢子浓度为107个孢子/mL。
4.权利要求2所述的生防菌剂在防治马铃薯黄萎病中的应用。
5.权利要求2所述的生防菌剂在防治向日葵黄萎病中的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113061639A (zh) * 2021-03-22 2021-07-02 内蒙古农业大学 一种马铃薯黄萎病病原菌致病性测定方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103013838A (zh) * 2012-12-14 2013-04-03 江苏耕耘化学有限公司 草莓黄萎病的膏状生防制剂、制备方法、应用及其专用菌株

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103013838A (zh) * 2012-12-14 2013-04-03 江苏耕耘化学有限公司 草莓黄萎病的膏状生防制剂、制备方法、应用及其专用菌株

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
QIONG WU等: "Identification of a novel fungus, Trichoderma asperellum GDFS1009, and comprehensive evaluation of its biocontrol efficacy", 《PLOS ONE》 *
温晨阳: "马铃薯黄萎病生防木霉菌的筛选及防治技术研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113061639A (zh) * 2021-03-22 2021-07-02 内蒙古农业大学 一种马铃薯黄萎病病原菌致病性测定方法
CN113061639B (zh) * 2021-03-22 2023-08-22 内蒙古农业大学 一种马铃薯黄萎病病原菌致病性测定方法

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