CN109320578B

CN109320578B - 一种三萜皂苷化合物及其提取方法

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Publication number: CN109320578B
Application number: CN201811179522.7A
Authority: CN
Inventors: 邹节明
Original assignee: Guilin Sanjin Pharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: Guilin Sanjin Pharmaceuticals Co Ltd
Priority date: 2018-10-10
Filing date: 2018-10-10
Publication date: 2020-06-16
Anticipated expiration: 2038-10-10
Also published as: CN109320578A

Abstract

本发明属于药物技术领域，具体地说，涉及一种三萜皂苷化合物及其制备方法，该三萜皂苷化合物具有如下化学结构式(Ⅰ)：

所述的三萜皂苷化合物由三金制剂药物粉末中提取获得。本发明从三金制剂药物粉末中分离纯化得到了一种结构新颖的三萜皂苷化合物，通过多种技术手段对该新的三萜皂苷化合物进行了结构鉴定，该三萜皂苷化合物具有清热利湿，抗菌消炎、抗肿瘤等作用。

Description

一种三萜皂苷化合物及其提取方法

技术领域

本发明属于化合物领域，具体地说，涉及一种三萜皂苷化合物及其提取方法。

背景技术

三金制剂是桂林三金药业股份有限公司生产的三金片系列产品，主要产品包括有三金片、三金胶囊和三金颗粒，其中三金片系《中国药典》2000年版一部收录的品种，是一种清热剂。三金片为糖衣片或薄膜衣片，具有清热解毒，利湿通淋，益肾功效。主治下焦湿热所致的热淋、小便短赤、淋沥涩痛、尿急频数；急慢性肾盂肾炎、膀胱炎、尿路感染见上述证候者；慢性非细菌性前列腺炎肾虚湿热下注证。

三金制剂由五味中药制成，分别为金樱根、菝葜、羊开口、金沙藤和积雪草。其中，菝葜祛风湿，利小便，消肿痛，羊开口清热利尿为君药；积雪草、金沙藤清热利湿为臣药；金樱根固精涩肠为佐使。全方配伍，共奏利尿通淋，清热解毒之效。

三金制剂为中药复方制剂，其药效与其中的物质成分密切相关，分离纯化和分析三金制剂当中具体化学成分，对于发现三金制剂中具体起效的物质，以及探索三金制剂的治病机理等有重要意义。

有鉴于此特提出本发明。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供了一种结构新颖的三萜皂苷化合物以及其提取方法，采用多种技术手段对该新的三萜皂苷化合物进行了结构鉴定。该结构新颖的三萜皂苷化合物是从三金制剂药物粉末中提取得到的，具有清热利湿，抗菌消炎、抗肿瘤等作用。

为解决上述技术问题，本发明采用技术方案的基本构思是：

本发明的第一目的是提供一种三萜皂苷化合物，该三萜皂苷化合物具有如下化学结构式(I)：

上述式(I)所示化合物的英文名称：3,15-dihydroxy-2-oxo-23-Noroleana-3,12-dien-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranoside，分子式为C₃₅H₅₂O₁₀，分子量为631.3080。

进一步的方案，所述的三萜皂苷化合物从三金制剂或者制备三金制剂的原料膏粉中提取获得。

本发明中的三金制剂可以包括任何剂型，以及可以制备三金制剂的原料膏状物或者粉末等。

优选的，三金制剂包括以下剂型中的一种或几种：片剂、胶囊剂、颗粒剂、凝胶剂、膜剂、浸膏剂、丸剂、粉针剂、栓剂。具体的，至少包括分散片、三金颗粒、三金胶囊等。

本申请人从三金制剂浸膏中分离提取纯化获得了一系列化合物，并得到一个含有烯醇醛内环的五环三萜成分，经Scifinder检索，为首次分离鉴定的新化合物。

本发明的第二目的在于提供一种如上所述的三萜皂苷化合物的提取方法，所述的提取方法包括如下步骤：

(1)将三金制剂药物粉末用乙醇进行提取，滤过，减压浓缩得浸膏；

(2)将浸膏用水溶解，水溶液用石油醚进行萃取，弃掉石油醚层，水层用正丁醇进行萃取，减压回收溶剂，得正丁醇萃取浸膏；

(3)取正丁醇萃取浸膏上硅胶层析柱，采用二氯甲烷-甲醇系统对萃取物进行梯度洗脱，以TLC和HPLC-UV分析检测，收集含目标化合物的流分；

(4)将所得含目标化合物的流分依次利用反相色谱柱层析、葡聚糖凝胶柱层析以及高效液相制备分离纯化得三萜皂苷化合物。

进一步的方案，步骤(3)中，采用二氯甲烷-甲醇系统对萃取物进行梯度洗脱，二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1-5:1；

优选的，采用的洗脱梯度中，分别依次以二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:1进行洗脱。

进一步的方案，步骤(4)中，采用反相色谱柱层析，层析柱为ODS-C₁₈，洗脱溶剂为甲醇的体积占洗脱液总体积的百分数为10％-90％的甲醇溶液，洗脱方式为梯度洗脱；洗脱溶剂的用量为2～10个柱体积；

优选的，洗脱剂用量为5个柱体积；

优选的，采用的洗脱梯度中，分别依次以甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱。

进一步的方案，步骤(4)中，进行葡聚糖凝胶柱层析时，层析柱采用Sephades LH-20，采用纯甲醇进行洗脱，洗脱溶剂的用量为2～10个柱体积；

优选的，洗脱剂用量为5个柱体积。

进一步的方案，步骤(4)中，步骤(4)中，高效液相制备的条件为：采用C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，按4％～80％甲醇梯度进行洗脱；

优选的，采用的洗脱梯度中，分别依次以甲醇的体积分数为80％、65％、50％、35％、20％、4％进行洗脱；

更优选的，洗脱条件为：0min-15min，甲醇的体积分数从80％到65％；

15min-25min，甲醇的体积分数从65％到50％；

25min-35min，甲醇的体积分数从50％到35％；

35min-90min，甲醇的体积分数从35％到20％；

90min-120min，甲醇的体积分数从20％到4％。

进一步的方案，步骤(2)中，用石油醚进行萃取时，所述水溶液与石油醚的体积比为1:1～1:3。

进一步的方案，步骤(2)中，将水层用正丁醇进行萃取时，水层与正丁醇的体积比为1:1～1:3。

进一步的方案，步骤(1)中，将三金制剂的粉末用70-95％乙醇浸泡超声提取；

优选的，采用95％乙醇浸泡三金制剂粉末进行超声提取。

本发明的第三目的在于提供上述所述的三萜皂苷化合物在制备抗炎药物中的应用。

采用上述技术方案后，本发明与现有技术相比具有以下有益效果：

三金制剂为中药复方制剂，其药效与其中的物质成分密切相关，本发明将三金制剂作为一个整体进行研究，从三金制剂的药物粉末中提取得到一种结构新颖的三萜皂苷化合物，还提供了该化合物的提取方法，并通过多种技术手段对该新的三萜皂苷化合物进行了结构鉴定。本发明对于发现三金制剂中具体起效的物质，建立和提高三金制剂的质量控制标准，以及探索三金制剂的治病机理等有重要意义。经初步试验，该新的三萜皂苷化合物具有清热利湿，抗菌消炎、抗肿瘤等作用。

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的描述。

附图说明

附图作为本发明的一部分，用来提供对本发明的进一步的理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，但不构成对本发明的不当限定。显然，下面描述中的附图仅仅是一些实施例，对于本领域普通技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他附图。在附图中：

图1是本发明新的三萜皂苷化合物的¹H-NMR谱图；

图2是本发明新的三萜皂苷化合物的¹³C-NMR谱图；

图3是本发明新的三萜皂苷化合物的MS谱图1；

图4是本发明新的三萜皂苷化合物的MS谱图2；

图5是本发明新的三萜皂苷化合物的HPLC纯度检查谱图；

图6是本发明新的三萜皂苷化合物的UV谱图；

图7是本发明新的三萜皂苷化合物的IR谱图。

需要说明的是，这些附图和文字描述并不旨在以任何方式限制本发明的构思范围，而是通过参考特定实施例为本领域技术人员说明本发明的概念。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实验材料与仪器

三金制剂的药物粉末由桂林三金药业股份有限公司提供。柱色谱硅胶(100～200目，200～300目)和薄层色谱硅胶GF₂₅₄(青岛海洋化工厂，中国)；ODS-C₁₈柱(20mm×250mm,5μm)(YMC，日本)；Sephadex LH-20(法玛西亚生物技术，瑞典)；Bruker AV-500M和AV-400M型核磁共振仪(Bruker公司，德国)；LC-20A制备液相色谱仪(日本岛津公司，日本)；所用试剂均为分析纯。

化合物结构鉴定核磁共振(氢谱、碳谱)、质谱，红外、紫外光谱均由广西师范大学药用资源化学与药物分子工程国家重点实验室负责测定。

实施例1

(1)将三金片干膏粉1.5kg用95％乙醇浸泡超声提取，滤过，减压浓缩得浸膏，获得浸膏提取物。

(2)将浸膏提取物用水溶解，滤过，水溶液用石油醚进行萃取，弃掉石油醚层，回收水层；水层用正丁醇进行萃取，减压回收溶剂，得正丁醇萃取浸膏；其中，溶液与石油醚的体积比为1:1；将水层用正丁醇进行萃取时，水层与正丁醇的体积比为1:1。

(3)取正丁醇萃取浸膏100g进行硅胶层析柱，采用二氯甲烷-甲醇系统对萃取物进行梯度洗脱，洗脱梯度中，分别依次以二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:1进行洗脱，分段收集样品，收集获得130组组分，采用TLC分析检测，根据TLC检测结果分为五大组粗洗脱部分，分别为组分37-51，组分20-36，组分6-9，组分66-95，组分118-130。

(4)组分66-95进行ODS-C₁₈层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为5个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得11份组分；采用TLC分析检测，根据TLC检测结果将4-7份组分合并回收；

然后，将合并的4-7组分进行葡聚糖凝胶柱层析，层析柱采用Sephades LH-20，采用纯甲醇进行洗脱，洗脱溶剂的用量为5个柱体积，依次收集获得5组洗脱收集液；

5组洗脱收集液分别进行高效液相制备，高效液相制备的条件为：采用C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，洗脱条件为：0min-15min，甲醇的体积分数从80％到65％；

15min-25min，甲醇的体积分数从65％到50％；

25min-35min，甲醇的体积分数从50％到35％；

35min-90min，甲醇的体积分数从35％到20％；

90min-120min，甲醇的体积分数从20％到4％。

从第3组洗脱收集液中分离得到三萜皂苷化合物

3,15-dihydroxy-2-oxo-23-Noroleana-3,12-dien-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranoside。

实施例2

(1)将三金片粉末1.5kg用70％乙醇浸泡超声提取，滤过，减压浓缩得浸膏，获得浸膏提取物。

(2)将浸膏提取物用水溶解，滤过，水溶液用石油醚进行萃取，弃掉石油醚层，回收水层；水层用正丁醇进行萃取，减压回收溶剂，得正丁醇萃取浸膏；其中，水溶液与石油醚的体积比为1:2；将水层用正丁醇进行萃取时，水层与正丁醇的体积比为1:3。

(3)取正丁醇萃取浸膏100g进行硅胶层析柱，采用二氯甲烷-甲醇系统对萃取物进行梯度洗脱，洗脱梯度中，分别依次以二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:1进行洗脱，分段收集样品，收集获得130种组分，采用TLC分析检测，根据TLC检测结果分为五大组粗洗脱部分，分别为组分37-51，组分20-36，组分6-9，组分66-95，组分118-130。

然后，将合并的4-7组分进行葡聚糖凝胶柱层析，层析柱采用Sephades LH-20，采用纯甲醇进行洗脱，洗脱溶剂的用量为2个柱体积，依次收集获得5组洗脱收集液；

15min-25min，甲醇的体积分数从65％到50％；

25min-35min，甲醇的体积分数从50％到35％；

35min-90min，甲醇的体积分数从35％到20％；

90min-120min，甲醇的体积分数从20％到4％。

从第3组洗脱收集液中分离得到三萜皂苷化合物

实施例3

(1)将三金片胶囊药物粉末1.5kg用80％乙醇浸泡超声提取，滤过，减压浓缩得浸膏，获得浸膏提取物。

(2)将浸膏提取物用水溶解，滤过，水溶液用石油醚进行萃取，弃掉石油醚层，回收水层；水层用正丁醇进行萃取，减压回收溶剂，得正丁醇萃取浸膏；其中，水溶液与石油醚的体积比为1:3；将水层用正丁醇进行萃取时，水层与正丁醇的体积比为1:2。

(4)组分66-95进行ODS-C₁₈层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为10个柱体积；分段收集样品，共依次收集获得11份组分；采用TLC分析检测，根据TLC检测结果将4-7份组分合并回收。

15min-25min，甲醇的体积分数从65％到50％；

25min-35min，甲醇的体积分数从50％到35％；

35min-90min，甲醇的体积分数从35％到20％；

90min-120min，甲醇的体积分数从20％到4％。

从第3组洗脱收集液中分离得到三萜皂苷化合物

实施例4

(1)将三金颗粒干膏粉1.5kg用95％乙醇浸泡超声提取，滤过，减压浓缩得浸膏，获得浸膏提取物。

(2)将浸膏提取物用水溶解，滤过，水溶液用石油醚进行萃取，弃掉石油醚层，回收水层；水层用正丁醇进行萃取，减压回收溶剂，得正丁醇萃取浸膏；其中，溶液与石油醚的体积比为1:3；将水层用正丁醇进行萃取时，水层与正丁醇的体积比为1:1。

(4)组分66-95进行ODS-C₁₈层析柱，依次利用甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱，洗脱溶剂的用量为8个柱体积；分段收集样品，依次收集获得11组组分；采用TLC分析检测，根据TLC检测结果将4-7份组分合并回收；

然后，将合并的4-7组分进行葡聚糖凝胶柱层析，层析柱采用Sephades LH-20，采用纯甲醇进行洗脱，洗脱溶剂的用量为10个柱体积，依次收集获得5组洗脱收集液；

5组洗脱收集液分别进行高效液相制备，高效液相制备的条件为：采用C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，0min-15min，甲醇的体积分数从80％到65％；

15min-25min，甲醇的体积分数从65％到50％；

25min-35min，甲醇的体积分数从50％到35％；

35min-90min，甲醇的体积分数从35％到20％；

90min-120min，甲醇的体积分数从20％到4％。

从第3组洗脱收集液中分离得到三萜皂苷化合物

试验例1

该试验例1对本发明实施例1所分离纯化的化合物的结构进行了鉴定：

实施例1分离获得的化合物为一种三萜皂苷化合物，英文名称：

3,15-dihydroxy-2-oxo-23-Noroleana-3,12-dien-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranoside；

化学式为：C₃₅H₅₂O₁₀。

化合物的HMBC相关分析如下所示：

该化合物的结构和关键HMBC(→)相关结构式

该化合物是白色无定型粉末，HRESIMS(图4)显示阴离子准分子离子峰为631.3080[M-H]-(calcd631.3482)，结合1H和13C NMR数据(表1)，确定其分子式为C₃₅H₅₂O₁₀，且经计算不饱和度为10。UV谱(图6)显示在241,281andnm处有吸收峰。IR谱(图7)显示羟基(2937cm-1)，羰基(1684cm-1)吸收峰。IR谱显示羟基(3430cm-1)，羰基(1720cm-1)吸收峰。

根据1H NMR(图1)数据显示该化合物在高场有六个单锋:δH0.68(s),0.81(s),0.85(s),0.86(s),1.35(s),1.6(s)，1个烯基：δH5.24。13C NMR和DEPT135数据显示27个信号峰，表明化合物1中应存在2个羰基：δC 193.4和δC 176.0，2个烯基：δC 143.9和δC130.6，δC 122.2和δC 143.6。以及碳谱中60-95的化学位移信息可以推测该化合物应是含有一个糖基团，两个双键的齐墩果烷型的五环三萜皂苷化合物。经过仔细对照参考文献，三萜皂苷化合物与2-oxo-3β,19α-dihydroxy-olean-12-en-28-oic acidβ-D-glucopyranosyl骨架基本一致。通过分析2D NMR中HMBC谱(图2)的δH 5.23(1H，H-30)到δC176.03(C-27)强烈的相关信号，这

证实了糖基团与C-27上O的连接。再从HMBC谱的信号H-1(δH 2.39,2.13)/C-3(δC143.9),C-4(δC 130.6)和酮羰基(δC 193.4),H-23(δH 1.75)/C-3(δC 143.9),C-4(δC130.6)这表明酮羰基位于C-2位。此外H-16(δH 3.12)与C-13，C-17和C-14，δH 3.12(δC80.2)与C-13，C-14，

C-16和C-17的相关性，说明C-15处存在一个羟基。综上所述化合物鉴定为3,15-dihydroxy-2-oxo-23-Noroleana-3,12-dien-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranoside，并判定化合物的化学结构式确定为式(I)：

该三萜皂苷化合物的¹H和¹³CNMR数据，如表1所示。

表1化合物SJP-10P ¹H和¹³CNMR

对实施例2-4分离纯化后获得的化合物的结构也进行了上述表征和鉴定，结果与上述结果相同。

试验例2

本试验例对化合物的抗炎活性进行了探索，具体方法及结果如下：

材料：

实施例1制备的三萜皂苷化合物，纯度在99％以上。

小鼠，雌雄各半，体重18～23g；Wistar大鼠，雌雄各半，130～150g。HBS-1096A酶标分析仪。

2方法

2.1急性炎症实验

取小鼠70只，随机分为7组，分别为模型组、阳性药对照组(地塞米松15mg/kg)、三萜皂苷化合物1mg/kg组、三萜皂苷化合物5mg/kg组、三萜皂苷化合物10mg/kg组、三萜皂苷化合物15mg/kg组以及、三萜皂苷化合物20mg/kg组。地塞米松用注射用生理盐水配成相应浓度，三萜皂苷化合物用0.8％羧甲基纤维素钠配成不同浓度的溶液，每日按体重对小鼠进行灌胃给药，给药体积0.3mL/10g。如此连续给药3d，末次给药后1h，每只小鼠尾静脉注射0.5％伊文斯蓝0.1mL/10g，并立即腹腔注射0.6％醋酸生理盐水溶液0.2mL/只，20min后脱颈椎处死，吸取生理盐水9mL，分3次，每次3mL，洗腹腔，轻揉腹部，吸取腹腔液，3次洗出的腹腔液合并后加生理盐水至10mL，1500r/min离心l5min，于590nm波长处测定吸光度(A)值。以A₅₉₀作为各组炎症程度的指标，以t检验进行组间比较。

2.2棉球肉芽肿实验

灭菌棉球(50±2)mg/个，加入氨苄青霉素100ul/个，50℃烘干。Wistar大鼠70只，用10％水合氯醛(350mg/kg)麻醉后，消毒腹部皮肤，于两侧腹股沟部皮下分别植入2个灭菌棉球，消毒并缝合伤口，常规饲养。在植入棉球第2天，根据大鼠的体重随机分为7组，每组70只，按表2灌胃给药，连续7d。各组末次给药24h后，脱颈处死大鼠，剥取棉球及肉芽组织，剔除脂肪，于烘箱内60℃、24h烘干至恒重，称量各棉球干重，减去棉球原重即为肉芽净重。采用t检验进行组间比较，结果以(x±s)表示。

3实验结果

3.1对炎症急性时腹腔毛细血管通透性升高的抑制作用

如表2中结果所示，三萜皂苷化合物1mg/kg基本没有抑制作用，三萜皂苷化合物5mg/kg可抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性升高，对炎症急性时相的血管通透性升高有一定的抑制作用；三萜皂苷化合物10mg/kg以及15mg/kg可明显抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性升高，对炎症急性时相的血管通透性升高有显著的抑制作用，但三萜皂苷化合物20mg/kg时，抑制作用出现了平缓趋势，再增大剂量则不会再提高抑制作用。

表2三萜皂苷化合物对小鼠腹腔毛细血管通透性升高的影响(n＝10.x±s)

与模型组比较：¹P<0.05，²P<0.01

3.2对大鼠棉球肉芽肿的影响

如表3中结果所示，三萜皂苷化合物1mg/kg基本没有抑制作用，三萜皂苷化合物5mg/kg可抑制肉芽肿的程度，10mg/kg以及15mg/kg抑制作用明显增强，表明三萜皂苷化合物对炎症的慢性增殖相具有明显的治疗作用。但三萜皂苷化合物20mg/kg时，抑制作用出现了平缓趋势，再增大剂量则不会再提高抑制作用。

表3三萜皂苷化合物对大鼠棉球肉芽肿的影响(n＝10.x±s)

与模型组比较：¹P<0.05，²P<0.01

综上可以看出，三萜皂苷化合物对炎症有明显的治疗作用，但并非剂量越高越好，在一定剂量范围内药效达到最佳。

以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。

Claims

1.一种三萜皂苷化合物，其特征在于，该三萜皂苷化合物具有如下化学结构式：

2.一种如权利要求1所述的三萜皂苷化合物的提取方法，其特征在于，所述的提取方法包括如下步骤：

(4)将所得含目标化合物的流分依次利用反相色谱柱层析、葡聚糖凝胶柱层析以及高效液相制备分离纯化获得三萜皂苷化合物。

3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中，采用二氯甲烷-甲醇系统对萃取物进行梯度洗脱，二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1-5:1。

4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，采用的洗脱梯度中，分别依次以二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:1进行洗脱。

5.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(4)中，采用反相色谱柱层析，层析柱为ODS-C₁₈，洗脱溶剂为体积分数为10％-90％的甲醇溶液，洗脱方式为梯度洗脱；洗脱溶剂的用量为2～10个柱体积。

6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，采用的洗脱梯度中，分别依次以甲醇的体积分数为10％、20％、50％、70％、90％的洗脱溶剂进行洗脱。

7.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(4)中，进行葡聚糖凝胶柱层析时，层析柱采用Sephades LH-20，采用纯甲醇进行洗脱，洗脱溶剂的用量为2～10个柱体积。

8.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(4)中，高效液相制备的条件为：采用C18色谱柱，以甲醇-水为流动相，按4％～80％甲醇梯度进行洗脱。

9.根据权利要求8所述的提取方法，其特征在于，采用的洗脱梯度中，分别依次以甲醇的体积分数为80％、65％、50％、35％、20％、4％进行洗脱。

10.根据权利要求9所述的提取方法，其特征在于，洗脱条件为：0min-15min，甲醇的体积分数从80％到65％；

15min-25min，甲醇的体积分数从65％到50％；

25min-35min，甲醇的体积分数从50％到35％；

35min-90min，甲醇的体积分数从35％到20％；

90min-120min，甲醇的体积分数从20％到4％。

11.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中，用石油醚进行萃取时，所述水溶液与石油醚的体积比为1:1～1:3。

12.根据权利要求11所述的提取方法，其特征在于，将水层用正丁醇进行萃取时，水层与正丁醇的体积比为1:1～1:3。

13.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，将三金制剂的粉末用70-95％乙醇浸泡超声提取。

14.根据权利要求13所述的提取方法，其特征在于，采用95％乙醇浸泡三金制剂粉末进行超声提取。

15.权利要求1所述的三萜皂苷化合物在制备抗炎药物中的应用。