CN109306326A - 一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于植物保护技术领域，公开了一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，包括浸泡步骤：所述浸泡步骤包括将玉米用含有镰孢菌菌丝的培养液浸泡后进行接种的步骤。本发明通过采用使用菌丝浸泡的方式进行扩繁接种体，大大节约了培养时间与培养空间；从而本发明具有培养成本低、培养时间短、占用空间小的特点。

Description

一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法
技术领域
本发明属于植物保护技术领域，具体涉及一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法。
背景技术
目前，茎腐病镰孢菌扩繁采用的是将液体培养的镰孢菌接种于高温灭菌后玉米粒上，培养7-10d。每株玉米接种需要20-30g玉米粒，当接种1000份玉米材料(每份材料25株)，需要500公斤灭菌玉米粒，并恒温培养7-10d，试验室常规的灭菌锅1次仅能灭30公斤玉米粒，因此，现在方法要占用大量的时间、空间与人力。大大限制了人工接种鉴定的数量。
发明内容
为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法。
本发明所采用的技术方案为：
一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，包括浸泡步骤：所述浸泡步骤包括将玉米用含有镰孢菌菌丝的培养液浸泡后进行接种的步骤。
进一步的，所述浸泡步骤之前还包括含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤。
进一步的，所述含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤为：将镰孢菌活化后接种在灭菌的PD液体培养基中培养用摇床将菌丝打碎后得到含有镰孢菌菌丝的培养液。
进一步的，所述PD液体培养基灭菌的温度为115℃-130℃，镰孢菌在灭菌的PD液体培养基中培养的时间为60h-80h。
进一步的，所述浸泡步骤为：将玉米粒用水浸泡、煮沸后，得到浸泡玉米粒；加水没过浸泡玉米粒，按照比例浸泡玉米粒：含有镰孢菌菌丝的培养液＝100g：0.5mL-1.5mL向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡，得到镰孢菌茎腐病接种体。
进一步的，所述浸泡步骤中玉米粒用水浸泡的时间为8h-16h；煮沸的时间为0.8-1.5h。
进一步的，所述含有镰孢菌菌丝的培养液中每毫升含有的菌丝段为105个/mL—106个/mL。
进一步的，向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡的时间为8-15h。
本发明的有益效果为：本发明的一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，首次采用菌丝浸泡的方式进行扩繁接种体，大大节约了培养时间和培养空间；相比传统的制备镰孢菌茎腐病接种体的方法本发明占用时间、空间与人力均要小的多；相比传统的制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，本发明具有培养时间短、效率高的特点；因为本发明无需对玉米灭菌从而本发明节省了现有的对玉米粒灭菌的步骤，而该步骤往往需要耗费大量的人力物力，从而本发明具有显著的人力物力优势。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步阐释。
一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，包括浸泡步骤：所述浸泡步骤包括将玉米用含有镰孢菌菌丝的培养液浸泡后进行接种的步骤。
现有的制备镰孢菌茎腐病接种体的方法采用将液体培养的镰孢菌接种于高温灭菌后玉米粒上，培养7-10d。该方式一方面培养的时间较长；另一方面需要对大量的玉米粒进行灭菌操作，除了需要消耗大量的能源以外，也需要耗费大量的人力物力。从而大大限制了人工接种的数量。
本发明的快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，采用将玉米用含有镰孢菌菌丝的培养液浸泡后进行接种的方式，省去了对玉米粒的灭菌操作，通过采用液体培养基培养出镰孢菌菌丝最后得到含有镰孢菌菌丝的培养液，通过该营养液与玉米继续培养得到镰孢菌茎腐病接种体；该方式极大的缩短了培养得到镰孢菌茎腐病接种体的时间。一般来说，3-4d即可培养完成。从而本发明具有培养时间短，操作简化，效率高的特点。
进一步的，所述浸泡步骤之前还包括含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤。
进一步的，所述含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤为：将镰孢菌活化后接种在灭菌的PD液体培养基中培养用摇床将菌丝打碎后得到含有镰孢菌菌丝的培养液。
进一步的，所述PD液体培养基灭菌的温度为115℃-130℃，镰孢菌在灭菌的PD液体培养基中培养的时间为60h-80h。
进一步的，所述浸泡步骤为：将玉米粒用水浸泡、煮沸后，得到浸泡玉米粒；加水没过浸泡玉米粒，按照比例浸泡玉米粒：含有镰孢菌菌丝的培养液＝100g：0.5mL-1.5mL向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡，得到镰孢菌茎腐病接种体。
进一步的，所述浸泡步骤中玉米粒用水浸泡的时间为8h-16h；煮沸的时间为0.8-1.5h。
进一步的，所述含有镰孢菌菌丝的培养液中每毫升含有的菌丝段为105个/mL—106个/mL。
进一步的，向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡的时间为8-15h。
优选地，镰孢菌为禾谷镰孢菌。
实施例1
一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，包括浸泡步骤：所述浸泡步骤包括将玉米用含有镰孢菌菌丝的培养液浸泡后进行接种的步骤。
浸泡步骤之前还包括含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤。
含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤为：将镰孢菌活化后接种在灭菌的PD液体培养基中培养用摇床将菌丝打碎后得到含有镰孢菌菌丝的培养液。
所述PD液体培养基灭菌的温度为115℃，镰孢菌在灭菌的PD液体培养基中培养的时间为60h，所述摇床的温度为28℃。
所述浸泡步骤为：将玉米粒用水浸泡、煮沸后，得到浸泡玉米粒；加水没过浸泡玉米粒，按照比例浸泡玉米粒：含有镰孢菌菌丝的培养液＝100g：0.5mL向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡，得到镰孢菌茎腐病接种体。
所述浸泡步骤中玉米粒用水浸泡的时间为8h；煮沸的时间为0.8h。
所述含有镰孢菌菌丝的培养液中每毫升含有的菌丝段为105个/mL。
向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡的时间为8h。优选地，镰孢菌为禾谷镰孢菌。
实施例2
一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，包括浸泡步骤：所述浸泡步骤包括将玉米用含有镰孢菌菌丝的培养液浸泡后进行接种的步骤。
浸泡步骤之前还包括含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤。
含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤为：将镰孢菌活化后接种在灭菌的PD液体培养基中培养用摇床将菌丝打碎后得到含有镰孢菌菌丝的培养液。
所述PD液体培养基灭菌的温度为130℃，镰孢菌在灭菌的PD液体培养基中培养的时间为80h，所述摇床的温度为20℃。
所述浸泡步骤为：将玉米粒用水浸泡、煮沸后，得到浸泡玉米粒；加水没过浸泡玉米粒，按照比例浸泡玉米粒：含有镰孢菌菌丝的培养液＝100g：1.5mL向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡，得到镰孢菌茎腐病接种体。
所述浸泡步骤中玉米粒用水浸泡的时间为16h；煮沸的时间为1.5h。
所述含有镰孢菌菌丝的培养液中每毫升含有的菌丝段为106个/mL。
向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡的时间为15h。
实施例3
一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，包括浸泡步骤：所述浸泡步骤包括将玉米用含有镰孢菌菌丝的培养液浸泡后进行接种的步骤。
所述浸泡步骤之前还包括含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤。
所述含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤为：将镰孢菌活化后接种在灭菌的PD液体培养基中培养用摇床将菌丝打碎后得到含有镰孢菌菌丝的培养液。
所述PD液体培养基灭菌的温度为121℃，镰孢菌在灭菌的PD液体培养基中培养的时间为72h,所述摇床的温度为25℃。
所述浸泡步骤为：将玉米粒用水浸泡、煮沸后，得到浸泡玉米粒；加水没过浸泡玉米粒，按照比例浸泡玉米粒：含有镰孢菌菌丝的培养液＝100g：1mL向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡，得到镰孢菌茎腐病接种体。
所述浸泡步骤中玉米粒用水浸泡的时间为12h；煮沸的时间为1h。
所述含有镰孢菌菌丝的培养液中每毫升含有的菌丝段为106个/mL。
向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡的时间为12h。
实施例4
一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，包括浸泡步骤：所述浸泡步骤包括将玉米用含有镰孢菌菌丝的培养液浸泡后进行接种的步骤。
所述浸泡步骤之前还包括含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤。
所述含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤为：将镰孢菌活化后接种在灭菌的PD液体培养基中培养用摇床将菌丝打碎后得到含有镰孢菌菌丝的培养液。
所述PD液体培养基灭菌的温度为125℃，镰孢菌在灭菌的PD液体培养基中培养的时间为70h。
所述浸泡步骤为：将玉米粒用水浸泡、煮沸后，得到浸泡玉米粒；加水没过浸泡玉米粒，按照比例浸泡玉米粒：含有镰孢菌菌丝的培养液＝100g：0.8mL向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡，得到镰孢菌茎腐病接种体。
所述浸泡步骤中玉米粒用水浸泡的时间为14h；煮沸的时间为1.2h。
所述含有镰孢菌菌丝的培养液中每毫升含有的菌丝段为0.5*106个/mL。
向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡的时间为10h。
实施例5
一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，包括浸泡步骤：所述浸泡步骤包括将玉米用含有镰孢菌菌丝的培养液浸泡后进行接种的步骤。
所述浸泡步骤之前还包括含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤。
所述含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤为：将镰孢菌活化后接种在灭菌的PD液体培养基中培养用摇床将菌丝打碎后得到含有镰孢菌菌丝的培养液。
所述PD液体培养基灭菌的温度为118℃，镰孢菌在灭菌的PD液体培养基中培养的时间为75h。
所述浸泡步骤为：将玉米粒用水浸泡、煮沸后，得到浸泡玉米粒；加水没过浸泡玉米粒，按照比例浸泡玉米粒：含有镰孢菌菌丝的培养液＝100g：0.9mL向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡，得到镰孢菌茎腐病接种体。
所述浸泡步骤中玉米粒用水浸泡的时间为8h-16h；煮沸的时间为1.3h。
所述含有镰孢菌菌丝的培养液中每毫升含有的菌丝段为0.8*106个/mL。
向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡的时间为14h。
实施例6
一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，包括浸泡步骤：所述浸泡步骤包括将玉米用含有镰孢菌菌丝的培养液浸泡后进行接种的步骤。
所述浸泡步骤之前还包括含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤。
所述含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤为：将镰孢菌活化后接种在灭菌的PD液体培养基中培养用摇床将菌丝打碎后得到含有镰孢菌菌丝的培养液。
实施例7
一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，包括浸泡步骤：所述浸泡步骤包括将玉米用含有镰孢菌菌丝的培养液浸泡后进行接种的步骤。
所述浸泡步骤之前还包括含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤。
所述含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤为：将镰孢菌活化后接种在灭菌的PD液体培养基中培养用摇床将菌丝打碎后得到含有镰孢菌菌丝的培养液。
所述PD液体培养基灭菌的温度为126℃，镰孢菌在灭菌的PD液体培养基中培养的时间为78h。
所述浸泡步骤为：将玉米粒用水浸泡、煮沸后，得到浸泡玉米粒；加水没过浸泡玉米粒，按照比例浸泡玉米粒：含有镰孢菌菌丝的培养液＝100g：1.3mL向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡，得到镰孢菌茎腐病接种体。
所述浸泡步骤中玉米粒用水浸泡的时间为14h；煮沸的时间为1.3h。
所述含有镰孢菌菌丝的培养液中每毫升含有的菌丝段为0.6*106个/mL。
向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡的时间为14h。
实施例8
优选地，镰孢菌为禾谷镰孢菌。
一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，包括步骤镰孢菌活化后接种在经过121℃高压灭菌的PD液体培养基中，25℃下在摇床中培养72h后将菌丝打碎。玉米粒浸泡12h后煮沸1h后冷却至室温，加入自来水至没过玉米粒，按100公斤玉米：1L禾谷镰孢菌菌丝培养液(106个菌丝段/mL)进行浸泡，12h后即可用于接种。
本发明不局限于上述可选的实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品。上述具体实施方式不应理解成对本发明的保护范围的限制，本发明的保护范围应当以权利要求书中界定的为准，并且说明书可以用于解释权利要求书。

Claims (8)

1.一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，其特征在于：包括浸泡步骤：所述浸泡步骤包括将玉米用含有镰孢菌菌丝的培养液浸泡后进行接种的步骤。
2.根据权利要求1所述的一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，其特征在于：所述浸泡步骤之前还包括含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤。
3.根据权利要求2所述的一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，其特征在于：所述含有镰孢菌菌丝的培养液的制备步骤为：将镰孢菌活化后接种在灭菌的PD液体培养基中培养用摇床将菌丝打碎后得到含有镰孢菌菌丝的培养液。
4.根据权利要求3所述的一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，其特征在于：所述PD液体培养基灭菌的温度为115℃-130℃，镰孢菌在灭菌的PD液体培养基中培养的时间为60h-80h。
5.根据权利要求1所述的一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，其特征在于：所述浸泡步骤为：将玉米粒用水浸泡、煮沸后，得到浸泡玉米粒；加水没过浸泡玉米粒，按照比例浸泡玉米粒：含有镰孢菌菌丝的培养液＝100g：0.5mL-1.5mL向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡，得到镰孢菌茎腐病接种体。
6.根据权利要求5所述的一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，其特征在于：所述浸泡步骤中玉米粒用水浸泡的时间为8h-16h；煮沸的时间为0.8-1.5h。
7.根据权利要求6所述的一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，其特征在于：所述含有镰孢菌菌丝的培养液中每毫升含有的菌丝段为105个/mL—106个/mL。
8.根据权利要求7所述的一种快速制备镰孢菌茎腐病接种体的方法，其特征在于：向没过浸泡玉米粒的水中加入含有镰孢菌菌丝的培养液进行浸泡的时间为8-15h。
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