CN109288831B - 一种多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物及其应用，所述多西他赛和榄香烯的质量比为20～1000。该组合物可应用于治疗乳腺癌、肺腺癌、结肠癌、胃癌、前列腺癌，尤其对于治疗紫杉烷类耐药乳腺癌、紫杉烷类耐药肺腺癌和紫杉烷类耐药结肠癌的疗效特别好；将该分子配伍药物组合物应用于制备治疗紫杉烷类耐药肿瘤药物中，具有显著的抗紫杉醇耐药作用，同时还可以显著降低毒性，极大的缓解了肿瘤患者的痛苦，本发明的药物组合物提供了耐药肿瘤治疗的新策略，对于耐药肿瘤治疗具有重要的意义和广泛的应用前景。

Description

一种多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物及其应用

技术领域

本发明涉及药物组合物领域，具体涉及一种多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物及其在耐药肿瘤中的应用。

背景技术

紫杉烷类如紫杉醇、多西他赛作为肿瘤化疗药物中的重要组成部分，已成为肿瘤化学治疗中的一线药物，然而，随着紫杉烷药物的广泛应用，肿瘤对多西他赛耐药的矛盾日益突出。

许多威胁生命的疾病如癌症的进程受多种机制的影响，由于这种复杂性，用单一药物治疗获得的成功是有限的，因此，常常使用药物组合来对抗癌症，增强疗效。如杨蕾等研究发现人参稀有皂苷组分-紫杉醇多组分体系，通过促进紫杉醇诱导细胞凋亡抑制肺癌A549细胞的增殖和生长，减少了紫杉醇的用量，达到降低紫杉醇的毒性，增强抗肺癌的效果(杨蕾等，人参稀有皂苷组分联合紫杉醇治疗A549肺癌的实验研究，中国中药杂志，2018，43(7)：1446-1452.)。

如Celator公司开发的vyxeos阿糖胞苷和柔红霉素的组合物脂质体可以显著增强疗效；如中国专利申请文献CN108096254A提供了一种药物组合物，将丹参酮IIA与紫杉醇在摩尔比为1～20:1～20的用量下联用，具有协同增效作用。

榄香烯是疗效较好、副作用小的抗癌天然活性成分，从温莪术中提取分离得到，榄香烯包括α、β、γ、δ等多种榄香烯异构体及不同比例异构体的混合物。榄香烯可以对多种癌细胞产生抑杀作用，诱导肿瘤细胞分化和凋亡，抑制肿瘤细胞的浸润和远处转移，抑制肿瘤血管生成，提高机体抗肿瘤免疫反应。

现有技术中公开了多西他赛和榄香烯均有一定的抗癌作用，但其分别单独作用于肿瘤上的疗效有限，还有一定的毒副作用，尤其是对于耐药肿瘤的效果很差，故其适用范围较小，在性能上还有待提高。

发明内容

本发明目的在于提供一种多西他赛和榄香烯的分子配伍药物组合物，该组合物作用于耐药肿瘤上，可以大大提高抗耐药效果和疗效，还可以减少多西他赛的用量从而显著降低毒副作用。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物，所述多西他赛和榄香烯的质量比为1：20～1000。

本发明组合物中的榄香烯可以抑制P-糖蛋白表达及转运增加药物的累积，这是由于P糖蛋白可以使细胞内药物泵出细胞外，降低细胞内的药物浓度使细胞产生耐药性；通过影响外分泌体介导RNAS进行细胞间信息传递进一步影响细胞的生物学通路；通过下调线粒体的膜电位，诱导肿瘤细胞的凋亡；诱导细胞渗透性的改变，增强药物在细胞内的富集。紫杉醇与P糖蛋白具有很强的亲和力，从而容易耐药，本发明组合物中的多西他赛与紫杉醇相比，副作用更小，在细胞内浓度比紫杉醇高，细胞内滞留时间长。

榄香烯和多西他赛两者联用，多靶点、多途径发挥协同作用，从而发挥联合增效和抗耐药作用，同时，在保证疗效的情况下，可以增大榄香烯用量同时减少多西他赛用量，由于榄香烯较安全而多西他赛毒性大，所以该药物组合物在显著增强疗效和抗耐药效果的同时可以显著降低毒性。

本发明将多西他赛与榄香烯根据分子配伍理论制备药物组合物，通过在浓度范围内，采用肿瘤细胞的IC₅₀值和联合指数评估多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物的疗效和抗耐药效果来确定药物的治疗有效比例，发现了所述组合物在特定比例下可以增强疗效，提高抗耐药作用。

本发明的药物组合物，与以相同的比例分别单独给予多西他赛和榄香烯的结果相比，给予受试者所述组合物后，可提供更好的抗肿瘤活性及病人的受益率；所述药物组合物对相关细胞或肿瘤细胞具有所需的细胞毒性、细胞停滞或生物效应。

所述榄香烯为α-榄香烯、β-榄香烯、γ-榄香烯、δ-榄香烯各种榄香烯异构体的任意一种或几种不同比例的混合物。

上述多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物在制备治疗紫杉烷类耐药肿瘤药物中的应用。

本发明通过大量实验证明了所述药物组合物对于治疗紫杉烷类耐药肿瘤有极好的疗效，这是由于榄香烯和多西他赛共同作用，可以多靶点、多途径协同，通过抑制P-糖蛋白表达及转运增加药物的累积，影响外分泌体、下调线粒体的膜电位，诱导肿瘤细胞凋亡，诱导细胞渗透性的改变，增强药物在细胞内的富集，降低与P糖蛋白的亲和力，增强通过屏障的能力，从而具有较好的抗紫杉醇耐药作用，可用于治疗耐药性肿瘤。

上述多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物在制备治疗紫杉烷类耐药乳腺癌药物中的应用，所述多西他赛和榄香烯的质量比为1：20～1000，优选为1：400～1000。

在优选质量比条件下，所得到的药物组合物对于抗耐药乳腺癌疗效与多西他赛相比增加倍数可达6.5倍，说明该药物组合物在此质量范围内具有显著的协同抗耐药乳腺癌作用；在保证疗效的情况下，可以增大榄香烯用量同时减少多西他赛用量，所以该药物组合物在显著增强抗耐药效果的同时可以显著降低毒性。

上述多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物在制备治疗紫杉烷类耐药肺腺癌药物中的应用，所述多西他赛和榄香烯的质量比为1：20～1000，优选质量比为1：700～1000。

在优选质量比条件下，所得到的药物组合物对于抗耐药肺腺癌疗效与多西他赛相比增加倍数可达5.6倍，说明该药物组合物在此质量范围内具有显著的协同抗耐药肺腺癌作用；在保证疗效的情况下，可以增大榄香烯用量同时减少多西他赛用量，所以该药物组合物在显著增强抗耐药效果的同时可以显著降低毒性。

上述多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物在制备治疗紫杉烷类耐药结肠癌药物中的应用，所述多西他赛和榄香烯的质量比为1：20～1000，优选质量比为1：500～1000。

在优选质量比条件下，抗耐药结肠癌细胞疗效增加倍数与多西他赛相比可达5.1倍，说明该药物组合物在此质量范围内具有显著的协同抗耐药结肠癌作用；在保证疗效的情况下，可以增大榄香烯用量同时减少多西他赛用量，所以该药物组合物在显著增强抗耐药效果的同时可以显著降低毒性。

本发明还公开了上述多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物在治疗乳腺癌、肺腺癌、结肠癌、胃癌、前列腺癌中的应用。

本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：

(1)本发明制得的多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物显著提高了对多种肿瘤的抗耐药效果和疗效，与多西他赛相比，提高疗效达5～7倍，尤其是对于抗耐药乳腺癌疗效增加倍数可达6.5倍，对于抗耐药肺腺癌细胞疗效增加倍数可达5.6倍，对于抗耐药结肠癌细胞疗效增加倍数可达5.1倍，这说明组合物具有明显的增强多西他赛疗效及抗耐药作用；

(2)本发明在保证疗效的情况下，通过增大榄香烯用量同时减少多西他赛用量，使该药物组合物在显著增强抗耐药效果的同时可以显著降低毒性，极大的缓解了肿瘤患者的痛苦，本发明的药物组合物提供了耐药肿瘤治疗的新策略，对于耐药肿瘤治疗具有重要的意义和广泛的应用前景。

附图说明

图1为多西他赛与榄香烯不同比例(IC₅₀对应浓度的比例)乳腺癌抑制率；

图2为多西他赛与榄香烯不同比例(IC₅₀对应浓度的比例)耐药乳腺癌抑制率；

图3为多西他赛与榄香烯不同比例(IC₅₀对应浓度的比例)肺腺癌抑制率；

图4为多西他赛与榄香烯不同比例(IC₅₀对应浓度的比例)耐药肺腺癌抑制率；

图5为多西他赛与榄香烯不同比例(IC₅₀对应浓度的比例)结肠癌抑制率；

图6为多西他赛与榄香烯不同比例(IC₅₀对应浓度的比例)耐药结肠癌抑制率；

图7为多西他赛与榄香烯不同比例(IC₅₀对应浓度的比例)胃癌抑制率；

图8为多西他赛与榄香烯不同比例(IC₅₀对应浓度的比例)前列腺癌抑制率。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1

(1)试验准备：

<1>试验细胞株的培养

将冻存细胞从液氮罐中取出复苏，将细胞消化、计数，用培养基稀释成悬液，置于37℃，5％CO₂培养箱中培养。

<2>药物母液的配制

分别取多西他赛原料药与榄香烯原料药，用DMSO溶解，再各自取适量体积用培养基稀释配成不同比例的混合物。

(2)试验过程

<1>将细胞消化、计数，配制肿瘤细胞悬液MCF-7，MCF-7/T(紫杉醇耐药MCF-7细胞)，A549，A549/T(紫杉醇耐药A549细胞)，HCT-8，HCT-8/T(紫杉醇耐药HCT-8细胞)，MGC-803，PC-3，在96孔细胞培养板中的每个孔中加入100μl细胞悬液；

<2>96孔细胞培养板置于37℃，5％CO₂培养箱中培养24小时；用培养基稀释药物至所需工作液浓度，每孔加入100μl相应的含药培养基，同时设立阴性对照组；96孔细胞培养板置于37℃，5％CO₂培养箱中培养72小时；

<3>将96孔板进行MTT染色，λ＝490nm，按下述步骤测定OD值：每孔加入20μl MTT(5mg/ml)，在培养箱继续培养4小时；弃上清，每孔加入150μl DMSO，摇床10分钟轻轻地混匀；λ＝490nm，酶标仪读出每孔的OD值，并按照以下公式计算细胞抑制率。

细胞抑制率(％)＝(阴性对照组OD值-实验组OD值)/阴性对照组OD值×100％

按照上述方法，分别计算多西他赛、榄香烯的IC₅₀值，结果如下：

表1多西他赛、榄香烯的IC₅₀与耐药指数

药物	MCF-7	MCF-7/T	A549	A549/T	HCT-8	HCT-8/T	MGC-803	PC-3
									紫杉醇IC<sub>50</sub>(nM)	37.297	1930.027	25.131	1121.433	26.190	1078.214	22.904	38.381
耐药指数	/	51.7	/	44.6	/	41.2	/	/
									多西他赛IC<sub>50</sub>(nM)	123.369	3186.528	96.079	1989.659	113.850	2494.820	224.389	210.468
耐药指数	/	25.8	/	20.7	/	21.9	/	/
									榄香烯IC<sub>50</sub>(μM)	834.769	1345.540	757.343	1384.027	927.306	1323.381	714.715	1127.370
耐药指数	/	1.6	/	1.8	/	1.4	/	/

从上表可以看出，耐紫杉醇的细胞株对于紫杉醇有严重耐药，耐药指数达40～50倍，耐紫杉醇的细胞株对于多西他赛有较严重耐药，耐药指数达20～26倍，而榄香烯对耐紫杉醇/多西他赛的细胞株基本不耐药。

实施例2

按实施例1方法，计算多西他赛和榄香烯药物组合物不同比例对于不同肿瘤细胞的IC₅₀值，结果如下：

表2多西他赛与榄香烯不同比例组合物的多西他赛IC₅₀比较

从上表可以看出，上述比例的多西他赛与榄香烯组合物，以0.25:1(IC₅₀对应浓度的比例)时多西他赛IC₅₀值最小。

表3多西他赛与榄香烯不同比例组合物的对应榄香烯IC₅₀比较

从上表可以看出，上述比例的多西他赛与榄香烯组合物，在0.25:1(IC₅₀对应浓度的比例)时榄香烯用量较大，说明榄香烯用量大时多西他赛用量可以减少。

实施例3

按实施例1方法，多西他赛和榄香烯组合物不同比例，对于不同肿瘤细胞，与多西他赛的疗效进行比较，结果如下：

表4不同比例多西他赛和榄香烯组合物的疗效比较

从上表可以看出，不同比例的多西他赛与榄香烯的组合物，对于不同肿瘤细胞，与多西他赛相比，疗效均有提高；当榄香烯的浓度大于等于IC₅₀浓度时，疗效明显提高。

对于三种耐药肿瘤细胞，比例在1:0.25(IC₅₀对应浓度的比例)时疗效增加最多，与多西他赛相比，对于耐药MCF-7乳腺癌细胞达1.6倍，对于耐药肺腺癌细胞达1.4倍，对于耐药结肠癌细胞达1.8倍，说明组合物具有明显的抗多西他赛耐药作用，多西他赛与榄香烯对应于MCF-7/T、A549/T、HCT-8/T的质量比分别为1：26，1：44，1：33。

对于三种耐药肿瘤细胞，比例在1:1(IC₅₀对应浓度的比例)时疗效增加最多，与多西他赛相比，对于耐药MCF-7乳腺癌细胞达2.4倍，对于耐药肺腺癌细胞达2.1倍，对于耐药结肠癌细胞达2.0倍，说明组合物具有明显的抗多西他赛耐药作用，多西他赛与榄香烯对应于MCF-7/T、A549/T、HCT-8/T的质量比分别为1：106，1：177，1：134。

对于三种耐药肿瘤细胞，比例在0.25:1(IC₅₀对应浓度的比例)时疗效增加最多，与多西他赛相比，对于耐药MCF-7乳腺癌细胞达6.5倍，对于耐药肺腺癌细胞达5.6倍，对于耐药结肠癌细胞达5.1倍，说明组合物具有明显的抗多西他赛耐药作用，多西他赛与榄香烯对应于MCF-7/T、A549/T、HCT-8/T的质量比分别为1：423，1：708，1：536。

图1～8分别为不同比例(IC₅₀对应浓度比)的卡巴他赛与榄香烯药物组合物对乳腺癌、耐药乳腺癌、肺腺癌、耐药肺腺癌、结肠癌、耐药结肠癌、胃癌、前列腺癌的抑制率曲线图，由图可以进一步说明，当榄香烯在IC₅₀浓度以上时，对于上述8种肿瘤细胞，有显著的增强多西他赛疗效及抗耐药作用，用量越大效果越好。

Claims (3)

1.一种多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物在制备治疗紫杉烷类耐药肿瘤药物中的应用，所述耐药肿瘤为耐药肺腺癌，所述多西他赛和榄香烯的质量比为1：700～1000。

2.一种多西他赛和榄香烯分子配伍药物组合物在制备治疗紫杉烷类耐药肿瘤药物中的应用，所述耐药肿瘤为耐药结肠癌，所述多西他赛和榄香烯的质量比为1：500～1000。

3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述榄香烯为α-榄香烯、β-榄香烯、γ-榄香烯、δ-榄香烯中的任意一种或几种不同比例的混合物。

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