CN109266715A - 一种料酒中产气菌的培养基和检测方法 - Google Patents

一种料酒中产气菌的培养基和检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种料酒中产气菌的培养基和检测方法，包括步骤：将待测料酒样品稀释，然后接种入含有培养基的发酵管中，在30℃±1℃条件下培养48±2h后，根据发酵管的产气与否来检测产气菌；培养基由以下重量份的原料组成：蔗糖10～30份，酵母膏3～6份，蛋白胨4～10份，氯化钠3～10份，黄酒2～8份，吐温‑80 1～2份，巯基乙酸钠0.05～1份，七水硫酸镁0.2～0.6份，甲硫氨酸0.01～0.1份，半胱氨酸0.01～0.2份，蒸馏水1000份。使用本发明的检测方法，能检测出难于在常规培养基上生长的料酒变质菌，该检测方法的检测结果与食品变质产气存在良好的相关性，为改善生产工艺、控制产品品质和提高产品质量提供了依据；该方法具有检测高效、简单、成本低、易推广等优点，适合生产工业化应用。

Description

一种料酒中产气菌的培养基和检测方法
技术领域
本发明涉及食品技术领域，尤其是一种料酒中产气菌的培养基和检测方法。
背景技术
袋装或灌装食品在储存、销售过程中常常发生涨袋、涨罐、溢汁等不良现象，缩短产品的有效保质期，降低产品市场竞争力，给企业和消费者造成较大困扰和食品安全问题。目前研究表明，大部分食品涨袋、涨罐问题都是由于污染产气微生物导致，产气微生物种类较多，如兼性厌氧菌酵母菌、乳酸菌、厌氧产气杆菌、梭状芽孢杆菌等。该种类产气微生物能够通过常规培养基培养检测出来，进而在产品包装前通过加热灭菌等方法杀灭微生物，保证产品货架期质量。然而在涨袋食品中，存在部分微生物难于通过常规培养基培养(如乳酸杆菌)，常规方法无法检测，不能提前有效地杀灭微生物，货架期过程中出现浑浊、产气，并且具有难闻的气味，严重影响产品质量。本发明专利在前期深入研究的基础上，发现一种料酒中产气菌，其难于在常规培养基上生长，通过优化选择性培养基方法能够快速鉴定其存在与否，给产品产气微生物污染带来一种新的检测方法。
在中国专利CN201510507662.2中提供了一种酱油中变质微生物的检测方法，其通过常规培养基培养微生物，然后加入显色剂来鉴别微生物，该方法不能用于检测难于在常规培养基上生长的微生物；中国专利CN200810210886.7中提供了酱油等调味品中产气菌-芽孢杆菌质的检测方法，而非在料酒产品中；在中国专利CN201510929508.4中，提供了食醋中耐高温产气嗜酸菌的检测方法，其方法主要是将微生物通过常规培养基培养后，进行染色并用显微镜观察的方法确定是否染菌，该方法不能检测出难于在普通培养基上生长的产气菌。
上述专利资料，报道了通过显色剂检测酱油变质微生物的方法，报道了酱油中产气菌-芽孢杆菌的检测方法，还报道了通过常规培养基培养微生物进行显微镜观察检测食醋污染菌的方法，但是以上资料，缺乏在常规培养基上难于生长的一种导致料酒变质的产气菌(如乳酸杆菌)的快速鉴定方法。
发明内容
基于上述问题，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种导致料酒变质的产气菌(如乳酸杆菌)的快速鉴定方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案包括：一种料酒中产气菌的检测方法，包括如下步骤：
将待测料酒样品稀释，然后接种入含有培养基的发酵管中，在30℃±1℃条件下培养48±2h后，根据发酵管的产气与否来检测产气菌；
所述培养基由以下重量份的原料组成：蔗糖10～30份，酵母膏3～6份，蛋白胨4～10份，氯化钠3～10份，黄酒2～8份，吐温-80 1～2份，巯基乙酸钠0.05～1份，七水硫酸镁0.2～0.6份，甲硫氨酸0.01～0.1份，半胱氨酸0.01～0.2份，蒸馏水1000份。
优选地，所述含有培养基的发酵管是在一硬质大试管中倒置一支杜氏小管，然后加入所述培养基，并湿热灭菌。
优选地，选择待测料酒样品进行10-1、10-2、10-3三个稀释度进行稀释，每个稀释度接种3支发酵管，在30℃±1℃条件下培养48±2h后，所述杜氏小管无气泡时，则表示待测样品中不存在产气菌；所述杜氏小管含有气泡时，则表示待测样品中存在产气菌。
优选地，所述稀释采用以下步骤：
以无菌操作将待测料酒样品加入稀释液中，做成1：10的均匀稀释液；
用灭菌吸管吸取1：10稀释液，注入含有稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液；
用灭菌吸管吸取1：100稀释液，注入含有稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：1000的稀释液。由此，需要更大的稀释梯度时，例如104或105，则另取灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支灭菌吸管即可。
优选地，所述稀释液为质量百分含量0.85％的生理盐水、5～10％的胰蛋白胨溶液或2～5％的酵母抽提物溶液。
作为本发明的另一个方面，本发明还提供了一种用于料酒中产气菌检测的培养基，由以下重量份的原料组成：蔗糖10～30份，酵母膏3～6份，蛋白胨4～10份，氯化钠3～10份，黄酒2～8份，吐温-80 1～2份，巯基乙酸钠0.05～1份，七水硫酸镁0.2～0.6份，甲硫氨酸0.01～0.1份，半胱氨酸0.01～0.2份，蒸馏水1000份。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：
使用本发明的检测方法，能够检测出难于在常规培养基上生长的料酒变质菌(如乳酸杆菌)，该检测方法检测结果与食品变质产气存在良好的相关性，为改善生产工艺、控制产品品质和提高产品质量提供了依据；该方法具有检测高效、简单、成本低、易推广等优点，适合生产工业化应用。
具体实施方式
本发明涉及食品领域，具体涉及一种用于检测引起料酒产气的微生物培养基及检测方法；本发明针对料酒变质菌建立特异性检测方法，为检测产品中是否存在该类导致变质的产气菌提供了方法，为食品产品品质提供防控基础。本发明提供了一种难于在常规培养基上生长的料酒变质微生物培养基及检测方法，通过优化导致料酒变质的产气菌生长的选择性培养基，构建适合料酒变质菌-乳酸杆菌的快速检验方法，为快速准确判断料酒等调味品中是否存在污染菌提供了检测新方法，确保产品质量。
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本发明中用于料酒中产气菌检测的培养基的一种实施例，由以下重量份的原料组成：蔗糖10份，酵母膏6份，蛋白胨7份，氯化钠3份，黄酒8份，吐温-80 1份，巯基乙酸钠0.05份，七水硫酸镁0.6份，甲硫氨酸0.04份，半胱氨酸0.2份，蒸馏水1000份。
实施例2
本发明中用于料酒中产气菌检测的培养基的一种实施例，由以下重量份的原料组成：蔗糖21份，酵母膏4份，蛋白胨4份，氯化钠6份，黄酒5份，吐温-80 2份，巯基乙酸钠0.6份，七水硫酸镁0.4份，甲硫氨酸0.01份，半胱氨酸0.01份，蒸馏水1000份。
实施例3
本发明中用于料酒中产气菌检测的培养基的一种实施例，由以下重量份的原料组成：蔗糖30份，酵母膏3份，蛋白胨10份，氯化钠10份，黄酒2份，吐温-80 1份，巯基乙酸钠1份，七水硫酸镁0.2份，甲硫氨酸0.1份，半胱氨酸0.1份，蒸馏水1000份。
本发明的料酒中产气菌的检测方法的一种实施例，用于检测引起料酒变质的产气菌，包含以下步骤：
将待测料酒样品采用稀释液稀释，然后接种入含有上述培养基的发酵管中，在30℃条件下培养48h后，根据杜氏小管的产气特征检测产气乳酸杆菌。
其中，稀释液为0.85％(W/W)生理盐水。
进行产气菌检测时，选择待测样品(姜葱料酒)进行10-1、10-2、10-3三个稀释度进行稀释，每个稀释度接种3支发酵管，在30±1℃条件下培养48±2h后，当杜氏小管无气泡时，则表示待测样品不存在产气菌；当杜氏小管内部含有气泡时，则表示待测样品中含有产气菌。
稀释采用以下步骤：
以无菌操作将待测样品(姜葱料酒)放于灭菌后的上述稀释液中，做成1:10的均匀稀释液。
用灭菌吸管吸取1:10稀释液，加入含有灭菌后的上述稀释液中，振荡试管，做成1:100的稀释液。
用灭菌吸管吸取1:100稀释液，加入含有灭菌后的上述稀释液中，振荡试管，做成1:1000的稀释液。
实施例4
本发明中用于料酒中产气菌检测的培养基的一种实施例，由以下重量份的原料组成：蔗糖20g，酵母膏5g，蛋白胨3.5g，氯化钠4.5g，黄酒2.5mL，吐温-80 1.5mL，巯基乙酸钠0.62g，七水硫酸镁0.48g，甲硫氨酸0.08g，半胱氨酸0.12g，蒸馏水1000mL。
本发明的料酒中产气菌的检测方法的一种实施例，包括如下步骤：
1、培养基组成成分：蔗糖20g，酵母膏5g，蛋白胨3.5g，氯化钠4.5g，黄酒2.5mL，吐温-80 1.5mL，巯基乙酸钠0.62g，七水硫酸镁0.48g，甲硫氨酸0.08g，半胱氨酸0.12g，蒸馏水1000mL；
2、发酵管制备方法：将上述培养基成分溶入蒸馏水中，加热溶解，分装每管15mL，放入一个倒置的杜氏小管，121℃灭菌20min，冷却备用。
3、待测样稀释：以无菌操作将检样(古道料酒)1mL放于含有9mL生理盐水，配成1:10的均匀稀释液，按上述操作依次做成10倍递增稀释液。
4、接种培养：选择三个稀释度10-1、10-2、10-3接种培养，每个稀释度接种3支发酵管，在31℃条件下培养46h后，当杜氏小管无气泡时，则表示待测样品(古道料酒)不存在产气菌；当杜氏小管内部含有气泡时，则表示待测样品(古道料酒)中含有产气菌。
实施例5
本发明中用于料酒中产气菌检测的培养基的一种实施例，由以下重量份的原料组成：蔗糖20g，酵母膏5g，蛋白胨3.5g，氯化钠4.5g，黄酒2.5mL，吐温-80 1.5mL，巯基乙酸钠0.62g，七水硫酸镁0.48g，甲硫氨酸0.08g，半胱氨酸0.12g，蒸馏水1000mL。
本发明的料酒中产气菌检测方法的一种实施例，用于料酒中变质产气菌的检测，包括如下步骤：
1、培养基组成成分：蔗糖20g，酵母膏5g，蛋白胨3.5g，氯化钠4.5g，黄酒2.5mL，吐温-80 1.5mL，巯基乙酸钠0.62g，七水硫酸镁0.48g，甲硫氨酸0.08g，半胱氨酸0.12g，蒸馏水1000mL；
2、发酵管制备方法：将上述培养基成分溶入蒸馏水中，加热溶解，分装每管15mL，放入一个倒置的杜氏小管，121℃灭菌20min，冷却备用；
3、待测样品稀释：以无菌操作将待检样(姜蒜料酒)1mL放于含有9mL胰蛋白胨稀释液，配成1:10的均匀稀释液，按上述操作依次做成10倍递增稀释液；
4、接种培养：选择三个稀释度10-2、10-3、10-4接种培养，每个稀释度接种3支发酵管，在29℃条件下培养50h后，当杜氏小管无气泡时，则表示待测样品(姜蒜料酒)不存在产气菌；当杜氏小管内部含有气泡时，则表示待测样品(姜蒜料酒)中含有产气菌。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (6)

1.一种料酒中产气菌的培养基和检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
将待测料酒样品稀释，然后接种入含有培养基的发酵管中，在30℃±1℃条件下培养48±2h后，根据发酵管的产气与否检测产气菌；
所述培养基由以下重量份的原料组成：蔗糖10～30份，酵母膏3～6份，蛋白胨4～10份，氯化钠3～10份，黄酒2～8份，吐温-80 1～2份，巯基乙酸钠0.05～1份，七水硫酸镁0.2～0.6份，甲硫氨酸0.01～0.1份，半胱氨酸0.01～0.2份，蒸馏水1000份。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含有培养基的发酵管是在一硬质大试管中倒置一支杜氏小管，然后加入所述培养基，并湿热灭菌。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，选择待测料酒原液进行10-1、10-2、10-3三个稀释度进行稀释，每个稀释度接种3支发酵管，在30℃±1℃条件下培养48±2h后，所述杜氏小管无气泡时，则表示待测样品不存在产气菌；所述杜氏小管含有气泡时，则表示待测样品中存在产气菌。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述稀释采用以下步骤：
以无菌操作将待测料酒样品加入稀释液中，做成1：10的均匀稀释液；
用灭菌吸管吸取1：10稀释液，注入含有稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液；
用灭菌吸管吸取1：100稀释液，注入含有稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：1000的稀释液。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述稀释液为质量百分含量0.85％的生理盐水、5～10％的胰蛋白胨溶液或2～5％的酵母抽提物溶液。
6.一种用于料酒中产气菌检测的培养基，其特征在于，由以下重量份的原料组成：蔗糖10～30份，酵母膏3～6份，蛋白胨4～10份，氯化钠3～10份，黄酒2～8份，吐温-80 1～2份，巯基乙酸钠0.05～1份，七水硫酸镁0.2～0.6份，甲硫氨酸0.01～0.1份，半胱氨酸0.01～0.2份，蒸馏水1000份。
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