CN109200080A - 火龙果花萃取物、其制备方法、其用途及其组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一火龙果花萃取物,其系由下列步骤制得:提供一火龙果花、干燥火龙果花并将火龙果花裁切以得到一火龙果花碎片。进行一萃取工艺,萃取工艺包含混合步骤、加热步骤、冷却步骤、再加热步骤以及萃取步骤,其中混合步骤为将火龙果花碎片与醇类溶液混合成一混合物以进行后续步骤,并在完成萃取工艺后将混合物的固体成分与液体成分分离,所得的液体成分即包含火龙果花萃取物,此萃取物具有抗氧化活性及修复伤口的能力,而以火龙果花萃取物所制得的组合物则具有改善皮肤状态的能力。
Description
技术领域
本发明系关于一种植物萃取物及其制备方法,特别是关于一种火龙果花萃取物以及火龙果花萃取物的制备方法。
背景技术
火龙果(dragon fruit、pitaya)为多年生仙人掌科(Cactaceae)三角柱属(Hylocereus)或蛇鞭柱属(Selenicereus)植物的果实,其含有多种营养成分,并具有丰富的花青素以及水溶性膳食纤维,对人体的健康有绝佳的功效。在台湾地区,火龙果的盛产期约为每年的6月至10月,且果实生长期病虫害甚少,为少数可以不施农药并进行有机栽植的水果。
火龙果花与昙花同为仙人掌科的植物,在外形以及开花的生理周期上非常相似,火龙果花除了有宜人的香味,亦含有丰富的多糖体及具有抗氧化功能的类黄酮成分,兼具观赏与食用价值。火龙果约于每年的4至5月开始开花,在产季中会出现7至10批的火龙果花的花芽,而在一批花芽开花时,另一批花芽即会开始生成并依序开花。为了使火龙果果实在成长期间获得足够的营养,以维持火龙果的大小与品质,在产期间必须进行多次的疏花作业,留下少数的花苞进行后续的生长,以免结果过多造成植株负担过大,进而影响火龙果的品质。然而,在火龙果疏花作业中被摘除的火龙果花苞数量甚多,除少数被进一步利用于食品或其他用途之外,其余的火龙果花苞只能以农业废弃物的方式进行处理,不仅浪费珍贵的生物资源,亦增加农业废弃物的处理工序。
因此,如何进一步解决火龙果疏花作业时所产生的农业废弃物问题以及增加火龙果产业的附加经济效益,遂成为目前相关产业的发展方向。
发明内容
为了解决上述问题,本发明的一态样为提供一种火龙果花萃取物的制备方法,其特征在于,包含下列步骤:提供一火龙果花。干燥前述的火龙果花,并将干燥后的火龙果花裁切成细块,以获得一火龙果花碎片。进行一萃取工艺,萃取工艺包含一混合步骤、一加热步骤、一冷却步骤、一再加热步骤以及一萃取步骤。混合步骤系利用一醇类溶液与火龙果花碎片混合成一混合物后,以进行加热步骤。加热步骤系将混合物加热至一加热温度后并反应一加热时间。冷却步骤系将混合物冷却至一室内温度并静置一冷却时间。再加热步骤系将混合物加热至一再加热温度并反应一段再加热时间。接着进行萃取步骤,萃取步骤系将混合物冷却至前述的室内温度后并搅拌反应一萃取时间。最后,去除混合物中的固体成分以获得萃取液,萃取液包含火龙果花萃取物。
依据前述的火龙果花萃取物的制备方法,其中醇类溶液可为丙三醇溶液。
依据前述的火龙果花萃取物的制备方法,其中丙三醇溶液的体积百分浓度可为10%至50%,较佳地,所述的丙三醇溶液的体积百分浓度为15%至40%。
依据前述的火龙果花萃取物的制备方法,其中混合步骤中火龙果花碎片与醇类溶液可以重量比1∶1至1∶10的比例混合,较佳地,所述的火龙果花碎片与醇类溶液以重量比1∶2至1∶6的比例混合。
依据前述的火龙果花萃取物的制备方法,其中加热温度可为40℃至70℃,较佳地,所述的加热温度为50℃至60℃。
依据前述的火龙果花萃取物的制备方法,其中加热时间可为6小时至10小时,较佳地,所述的加热时间为8小时。
依据前述的火龙果花萃取物的制备方法,其中冷却时间可为20小时至28小时,较佳地,所述的冷却时间为24小时。
依据前述的火龙果花萃取物的制备方法,其中再加热温度可为40℃至70℃,较佳地,所述的再加热温度为50℃至60℃。
依据前述的火龙果花萃取物的制备方法,其中再加热时间可为6小时至10小时,较佳地,所述的再加热时间为8小时。
依据前述的火龙果花萃取物的制备方法,其中萃取时间可为5天至9天,较佳地,所述的萃取时间为7天。
依据前述的火龙果花萃取物的制备方法,其中固体成分可利用一离心方式、一过滤方式或上述方式的组合而去除。
藉此,本发明的火龙果花萃取物的制备方法可萃取火龙果花中的生物活性成分,以供后续的应用,并可解决火龙果在产季时因进行疏花作业所带来的生物资源浪费以及农业废弃物问题,以增加火龙果产业的附加价值。
本发明的另一态样为提供一种火龙果花萃取物的用途,其特征在于,其可应用于制备一抗氧化的药物,其中火龙果花萃取物系利用前述的火龙果花萃取物的制备方法制得。
依据前述的火龙果花萃取物的用途,其中抗氧化的药物可用于螯合亚铁离子。
依据前述的火龙果花萃取物的用途,其中抗氧化的药物可用于清除DPPH自由基。
藉此,本发明的火龙果花萃取物具有抗氧化活性,能螯合亚铁离子以及清除DPPH自由基,是以本发明的火龙果花萃取物可应用于需以抗氧化功能来达成其功效的医药、保健、美容等药物制备的用途之上,具有其相关市场的发展潜力。
本发明的又一态样为提供一种火龙果花萃取物的用途,其特征在于,其可应用于制备一促进伤口愈合的药物,其中火龙果花萃取物系利用前述的火龙果花萃取物的制备方法制得。
依据前述的火龙果花萃取物的用途,其中伤口愈合的药物可用以促进纤维母细胞增生和/或迁移。
藉此,本发明的火龙果花萃取物可促进纤维母细胞增生或促使其进行迁移,是以本发明的火龙果花萃取物可进一步应用于制备促进伤口愈合的药物,使具有其相关市场的发展潜力。
本发明的再一态样为提供一种改善皮肤状态的组合物,其特征在于,组合物中包含一有效剂量的一火龙果花萃取物,其中火龙果花萃取物可利用前述的火龙果花萃取物的制备方法制得。
依据前述的改善皮肤状态的组合物,其中改善皮肤状态的组合物可用以提高皮肤的保湿能力。
依据前述的改善皮肤状态的组合物,其中改善皮肤状态的组合物可用以降低皮肤的黑色素指数。
依据前述的改善皮肤状态的组合物,其中改善皮肤状态的组合物可用以提高皮肤的明亮度指数。
藉此,本发明的改善皮肤状态的组合物因具有提高皮肤的保湿能力、降低皮肤的黑色素指数的能力以及提高皮肤明亮度指数的能力,使本发明的火龙果花萃取物可应用于保养品、化妆品、医药品等其他的皮肤相关产品之上,以降低人工添加物的使用,进而达成高效、安全且环保的目标。
上述发明内容旨在提供本发明所公开的内容的简化摘要,以使阅读者对本发明所公开的内容具备基本的理解。上述发明内容并非本发明所公开的内容的完整概述,且其用意并非指出本发明的重要或关键元件,亦非用于限制或界定本发明的范围。
附图说明
为让本发明的上述和其他目的、特征、优点与实施例能更明显易懂,所附附图的说明如下:
图1示出本发明一实施方式的火龙果花萃取物的制备方法的步骤流程图;
图2示出本发明另一实施方式的一实施例的火龙果花丙三醇萃取液的螯合亚铁离子能力的分析折线图;
图3示出本发明另一实施方式的另一实施例的火龙果花丙三醇萃取液的DPPH自由基清除能力的分析折线图;
图4A示出本发明又一实施方式的一实施例的火龙果花丙三醇萃取液处理CCD-966SK纤维母细胞24小时后细胞增生率的分析柱状图;
图4B示出本发明又一实施方式的一实施例的火龙果花丙三醇萃取液处理CCD-966SK纤维母细胞48小时后细胞增生率的分析柱状图;
图5示出本发明又一实施方式的另一实施例的火龙果花丙三醇萃取液处理CCD-966SK纤维母细胞0小时、12小时与24小时后的体外伤口愈合实验的伤口宽度的分析柱状图;
图6A示出本发明再一实施方式的受试者使用火龙果花萃取液乳液四周后皮肤角质含水量提升率的分析柱状图;
图6B示出本发明再一实施方式的受试者使用火龙果花萃取液乳液四周后皮肤角质含水量改善状况的人数分析柱状图;
图6C示出本发明再一实施方式的受试者使用火龙果花萃取液乳液1.5小时后皮肤角质含水量提升率的分析柱状图;
图7示出本发明再另一实施方式的受试者使用火龙果花萃取液乳液4周后皮肤黑色素指数降低率的分析柱状图;以及
图8示出本发明再更一实施方式的受试者使用火龙果花萃取液乳液4周后皮肤明亮度提升率的分析柱状图。
其中,附图标记说明如下:
100:火龙果花萃取物的制备方法
110:提供一火龙果花
120:干燥火龙果花
130:进行萃取工艺
131:混合步骤
132:加热步骤
133:冷却步骤
134:再加热步骤
135:萃取步骤
140:去除混合物的固体成分
具体实施方式
<火龙果花萃取物的制备方法>
请参照图1,图1示出本发明一实施方式的火龙果花萃取物的制备方法100的步骤流程图,其中火龙果花萃取物的制备方法100中包含步骤110、步骤120、步骤130以及步骤140。
步骤110为提供一火龙果花,其中火龙果为多年生仙人掌科(Cactaceae)三角柱属(Hylocereus)或蛇鞭柱属(Selenicereus)的植物,其花朵含有丰富的多糖体及具有抗氧化功能的类黄酮成分。
步骤120为干燥火龙果花,并将干燥后的火龙果花裁切成细块后以获得一火龙果花碎片。干燥火龙果花可以去除火龙果花的水分,避免多余的水分在后续的制备过程中影响火龙果花萃取物的纯度以及降低火龙果花萃取液的有效成分浓度。
步骤130为进行萃取工艺,萃取工艺包含混合步骤131、加热步骤132、冷却步骤133、再加热步骤134以及萃取步骤135。混合步骤131为将火龙果花碎片与一醇类溶液和以重量比1∶1至1∶10的比例混合;较佳地,火龙果花碎片与醇类溶液可以重量比1∶2至1∶6的比例充分混合,以得到一醇类溶液与火龙果花碎片的混合物,其中醇类溶液可为体积百分浓度10%至50%的丙三醇溶液,较佳地为体积百分浓度为15%至40%的丙三醇溶液。加热步骤132为将混合物加热至一加热温度后并反应一段加热时间,其中加热温度可为40℃至70℃,较佳为50℃至60℃,而加热时间可为6小时至10小时,较佳为8小时。冷却步骤133为将混合物冷却至一室内温度并静置一冷却时间,其中冷却时间可为20小时至28小时;较佳地,所述的冷却时间为24小时。再加热步骤134为将混合物加热至一再加热温度并反应一段再加热时间,其中再加热温度可为40℃至70℃,较佳为50℃至60℃,而再加热时间可为6小时至10小时,较佳为8小时。萃取步骤135为将经过加热步骤134处理的混合物冷却至一室内温度后并搅拌反应一萃取时间,此萃取时间可为5天至9天,较佳为7天。
步骤140为去除混合物的固体成分以获得一萃取液,此萃取液包含火龙果花萃取物。经过步骤110、步骤120以及步骤130的处理后,火龙果花中的有效成分以及生物活性成分已进入醇类溶液之中。将混合物中的固体成分去除后,余下的液体成分即包含火龙果花萃取物。而固体成分则可利用离心方式、过滤方式或上述方式的组合而将其去除。
兹以下列具体试验例进一步示范说明本发明,以利于本领域普通技术人员,可在不需过度解读与实验的情形下完整利用并实践本发明。然而,阅读者应了解到,这些实务上的细节不应用以限制本发明,也就是说,在本发明部分试验例中,这些实务上的细节是非必要的,而是用以说明如何实施本发明的材料与方法。
<试验例>
一、制备火龙果花萃取物
在进行火龙果花萃取物的制备时,先将火龙果花以清水冲洗数次后,再以蒸馏水做最后冲洗并沥干,接着将沥干的火龙果花置于烘箱中,以低于50℃的温度烘干6小时,待火龙果花完全干燥后将其裁切成细块或用果汁机打碎,以制成火龙果花碎片。
以上述方式取得火龙果花碎片后即开始进行萃取工艺,首先将火龙果花碎片浸润于一醇类溶液中,并将火龙果花碎片与醇类溶液以重量比1∶2至1∶6的比例混合,其中醇类溶液可为乙醇、丁二醇或丙三醇,较佳地,醇类溶液为体积百分浓度15%至40%的丙三醇溶液,并将火龙果花碎片与醇类溶液充分混合后以得到一混合物。接着将此混合物以50℃至60℃的温度加热8小时后,于室温下进行冷却,并于24小时后将混合物以50℃至60℃的温度再加热8小时并再次进行冷却,以增加萃取的效率。接着将混合物于室温下浸泡、搅拌反应7天,以萃取火龙果花的有效成分与生物活性成分。
完成上述萃取工艺后,将混合物利用纱布过滤去除混合物中的固体成分,以获得包含火龙果花萃取物的一火龙果花醇类萃取液。
为了分析火龙果花醇类萃取液的生物活性与功效,本试验进一步对火龙果花醇类萃取液以及包含火龙果花醇类萃取液的改善皮肤状态的组合物进行功效性评估,以说明本发明的火龙果花醇类萃取液的功效。
二、火龙果花萃取物的抗氧化能力评估
身体组织必须仰赖氧化作用来进行新陈代谢以维持生物体的功能与活力,但在氧化作用的过程中约有2-3%的氧气会转变成活性氧物质(Reactive oxygen species,ROS)并产生许多自由基(Free Radicals),这些活性氧物质因存有未成对电子(non-pairedelectron)使其化学特性相当活泼,容易造成细胞的老化与死亡,进而对生物体带来重大的危害。
因此,本试验针对本发明的火龙果花丙三醇萃取液进行抗氧化能力的评估分析,其系进行螯合亚铁离子能力测定以及DPPH清除能力的测定。
1.火龙果花萃取物螯合亚铁离子的能力测定
在多种金属离子中,亚铁离子(Fe2+)系一具有高度的还原性的促氧化剂,在甲醇溶液中,Fe2+可与Ferrozine螯合而形成鲜红色的Ferrozine-Fe2+络合物,Ferrozine-Fe2+络合物于波长562nm处有强烈的吸光值,当试验样品中的成分与Fe2+结合时,将减少络合物的形成,造成562nm的吸光值降低,因此可通过562nm的吸光值降低程度来判断试验样品螯合亚铁离子的能力。故本试验例利用火龙果花丙三醇萃取液对于亚铁离子的螯合能力来进一步测定与评估本发明的火龙果花丙三醇萃取液的抗氧化能力,当所螯合的亚铁离子越多,代表其抗氧化的能力越强。
实验上先将火龙果花丙三醇萃取液制成一甲醇溶液,并取4.7mL的火龙果花丙三醇萃取液的甲醇溶液与0.1mL浓度2mM的FeCl2·4H2O溶液混合反应30秒后,接着加入0.2mL浓度5mM的Ferrozine溶液,于室温下避光静置反应30分钟,再以分光光度计测定样品于波长562nm下的吸光值。为了进一步评估火龙果花丙三醇萃取液的螯合亚铁离子的能力,本试验例以强效阳离子螯合剂EDTA为控制组,以比较本发明的火龙果花丙三醇萃取液的螯合亚铁离子能力。上述实验组进行三重复,并将三次实验所得的亚铁离子螯合能力值作图,以进行后续分析,螯合亚铁离子能力的计算公式I如下:
其中Sample 562nm为样品于波长562nm的吸光值,而control 562nm则为控制组于波长562nm的吸光值。
请参照图2,图2示出本试验例的火龙果花萃取液的螯合亚铁离子能力的分析折线图,由实验结果可得知,当火龙果花丙三醇萃取液的甲醇溶液浓度为100mg/mL时,相较于浓度为100mg/mL的EDTA的94%,火龙果花丙三醇萃取液的亚铁离子螯合能力可达76±6%,显示本发明的火龙果花丙三醇萃取液具有良好的抗氧化能力,使其在制备抗氧化的药物的用途上具有相当的潜力。
2.火龙果花萃取物清除DPPH自由基的能力测定
DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl)是一种相当稳定的自由基,其乙醇溶液为一蓝紫色的溶液,在波长517nm处有强烈的吸光值,当DPPH自由基被抗氧化物还原清除时,于波长517nm处的吸光值会下降,因此,当波长517nm的吸光值降低程度越大,即代表样品的抗氧化能力越强,故本试验利用火龙果花丙三醇萃取液对于DPPH自由基的清除能力来进一步测定与评估本发明的火龙果花丙三醇萃取液的抗氧化能力。
实验上将新鲜配制的250μL不同浓度的火龙果花丙三醇萃取液的乙醇溶液加入微量离心管中,再加入750μL浓度0.1mM的DPPH乙醇溶液,均匀混合后于室温避光静置反应30分钟,再以分光光度计测定样品于波长517nm下的吸光值。本试验中另以抗氧化剂BHT(Di-Butyl Hydroxy Toluene)做为标准品,以分析本发明火龙果花丙三醇萃取液的DPPH自由基清除能力。上述实验组进行三重复,并将三次实验所得的DPPH自由基清除能力作图,以进行后续分析,DPPH自由基清除能力的计算公式II如下:
其中Sample 517nm为样品于波长517nm的吸光值,而control 517nm则为控制组于波长517nm的吸光值。
请参照图3,图3示出本试验例的火龙果花丙三醇萃取液的DPPH自由基清除能力的分析折线图,由实验结果可得知,火龙果花丙三醇萃取液在浓度10μg/mL时具有30%的DPPH自由基清除率,而在浓度到达100μg/mL时,相较于相同浓度的BHT的DPPH自由基清除率为70%,火龙果花丙三醇萃取液可达60%以上的DPPH自由基清除率,而当火龙果花丙三醇萃取液在浓度500μg/mL时更可达到81%的DPPH自由基清除率,显示本发明的火龙果花萃取物具有良好的清除DPPH自由基的抗氧化能力,使其在制备抗氧化的药物的用途上具有相当的潜力。
在此需注意的是,前述的本发明的火龙果花丙三醇萃取液制备的抗氧化的药物除可以外用的方式进行施用之外,亦可为一口服药物,而口服药物则可为一口服用胶囊、悬浮液、粉末或药锭,且本发明并不以此为限。
三、火龙果花萃取液的促进伤口愈合的有效性评估
1.火龙果花萃取物促进纤维母细胞增生的能力测定
在测试本发明的火龙果花萃取液促进纤维母细胞增生的能力方面系以细胞存活率分析(Method of transcriptional and translational assay;MTT assay)来对纤维母细胞的增生率进行分析。本实验以CCD-966SK人类纤维母细胞株进行实验,CCD-966SK纤维母细胞株(购自BCRC生物资源保存及研究中心,编号为60153)为一取自患有导管癌的成人患者乳房皮肤的纤维母细胞株,以说本发明的火龙果花萃取液对于不同种类的纤维母细胞的促进增生效果。
在实验上先于96孔盘中分别注入每孔6x103个CCD-966SK纤维母细胞,于37℃、5%CO2的培养箱中培养24小时后更换新的培养基,并分别以不同浓度的火龙果花丙三醇萃取液处理CCD-966SK纤维母细胞,在本试验中分别以四种不同浓度的火龙果花丙三醇萃取液进行实验,其中实施例1为使用5mg/ml的火龙果花丙三醇萃取液处理CCD-966SK纤维母细胞,实施例2为使用2.5mg/ml的火龙果花丙三醇萃取液,实施例3为使用1.25mg/ml的火龙果花丙三醇萃取液,而实施例4则为使用0.5mg/ml的火龙果花丙三醇萃取液。此外,在本试验中同时利用未包含本发明的火龙果花萃取物的丙三醇溶液做为比较例,以观察CCD-966SK纤维母细胞在未受火龙果花萃取物处理下的细胞增生情形,其中比较例1为使用5mg/ml的丙三醇溶液处理CCD-966SK纤维母细胞,比较例2为使用2.5mg/ml的丙三醇溶液,比较例3为使用1.25mg/ml的丙三醇溶液,而比较例4则为使用0.5mg/ml的丙三醇溶液。在完成处理24小时与48小时后分别于每孔加入10μL的MTT试剂,于37℃的条件下孵育4小时,接着以分光光度计测试波长570nm的吸光值,并将实施例1至实施例4与比较例1至比较例3的吸光值数值与比较例4的吸光值数值进行标准化后,依照下列公式III以实施例1至实施例4处理后的纤维母细胞的吸光值与其所对应浓度的比较例1至比较例4的吸光值分别进行细胞相对增生率的计算,每个浓度进行二重复测试:
其中,X=12、24,Y=1、2、3、4(公式III)。
此外,在本试验中亦分别将经过实施例1至实施例4的本发明的火龙果花丙三醇萃取液处理后的纤维母细胞的细胞相对增生率数据、以及比较例1至比较例3处理后的纤维母细胞的细胞相对增生率数据与比较例4所得的纤维母细胞的相对增生率数据进行统计分析,若两者具有统计上的显着性(p<0.05),则在附图中以「*」符号进行标记,以比较与说明本发明的火龙果花丙三醇萃取液具有较佳的促进纤维母细胞增生的能力。
请参照图4A与图4B,图4A示出本发明又一实施方式的一实施例的火龙果花丙三醇萃取液处理CCD-966SK纤维母细胞24小时后细胞增生率的分析柱状图,而图4B则示出本发明又一实施方式的一实施例的火龙果花丙三醇萃取液处理CCD-966SK纤维母细胞48小时后细胞增生率的分析柱状图,其中图4A与图4B系将前述的公式III所计算而得的细胞相对增生率数值加上100%以作为纤维母细胞增生的基准,藉以说明本发明的火龙果花丙三醇萃取液对于CCD-966SK纤维母细胞在正常生长状态下的额外的促进增生效果,特此先叙明。如图4A与图4B所示,在使用未包含本发明的火龙果花萃取物的丙三醇溶液的比较例1至比较例3处理CCD-966SK纤维母细胞株24小时与48小时后,相较于比较例4的细胞增生率并无显着差异,显示未包含本发明的火龙果花萃取物的丙三醇溶液对于CCD-966SK纤维母细胞株的细胞增生率并无显着影响。在以实施例1至实施例4的不同浓度的本发明的火龙果花丙三醇萃取液处理CCD-966SK纤维母细胞株24小时与48小时后,可见实施例1至实施例4相较于对应浓度的比较例1至比较例4均表现较佳的细胞增生率,其中又以实施例3处理后的CCD-966SK纤维母细胞的细胞增生率为最佳,其细胞增生率相较于未加样本的比较例4于24小时和48小时分别增加14%以及32%。
由上述的结果可知,本发明的火龙果花丙三醇萃取液对于纤维母细胞具有优良的促进细胞增生的效果,对于促进伤口愈合而言具有优良的潜力。
2.火龙果花萃取物促进纤维母细胞迁移的能力测定
已有许多研究指出,纤维母细胞可在短时间内增生并迁移至伤口处,进而促进伤口的修复与愈合,是以本试验利用体外伤口愈合实验来测定本发明的火龙果花丙三醇萃取液对于CCD-966SK纤维母细胞的爬行能力促进效果,并以细胞在模拟伤口处的爬行距离作为判定CCD-966SK纤维母细胞株的迁移能力指标。
在实验上首先将5x104个CCD-966SK纤维母细胞分别注入已预先置放于24孔细胞培养盘的细胞分隔器的两个腔室中,于37℃、5%CO2的培养箱中培养24小时后移除细胞分隔器,使分别注入二腔室的CCD-966SK纤维母细胞之间形成宽度为500μm的间隙,以模拟生物体上的伤口,于此同时以包含前述的实施例1至实施例4的本发明的火龙果花丙三醇萃取液的培养基处理CCD-966SK纤维母细胞,并将此时的细胞分布情形做为0小时的伤口宽度(亦即,伤口发生的时间点),并拍摄于光学显微镜下的细胞分布状态,而在完成药物处理12小时与24小时后则进一步拍摄与测量以不同浓度的本发明的火龙果花丙三醇萃取液处理后的伤口的宽度,并依照下列公式IV计算伤口的修复率:
其中,X=12、24。此外,在本试验中亦包含前述的比较例1至比较例4以及一未使用火龙果花丙三醇萃取液或丙三醇溶液进行处理的对照组,藉以评估本发明的火龙果花丙三醇萃取液的促进纤维母细胞迁移的能力。
请参照图5其示出本发明又一实施方式的另一实施例的火龙果花丙三醇萃取液处理CCD-966SK纤维母细胞0小时、12小时与24小时后的体外伤口愈合实验的伤口宽度的分析柱状图。如图5所示,对照组经过12小时与24小时的生长后其伤口宽度分别为400μm与320μm,显示CCD-966SK纤维母细胞的自然伤口修复率在伤口发生后12小时约为20%,在伤口发生后24小时约为36%。而在不包含本发明的火龙果花丙三醇萃取液的各浓度的比较例1至比较例4的伤口修复率结果方面,于伤口发生后12小时后,比较例1至比较例4的伤口修复率同样约为20%,而于伤口发生后24小时后,比较例1至比较例4的伤口修复率同样约为36%。而在经过实施例1至实施例4的本发明的火龙果花丙三醇萃取液处理后的CCD-966SK纤维母细胞方面,在伤口发生后24小时其伤口修复率分别为实施例1的36%、实施例2的36%、实施例3的48%及实施例4的68%,相较于比较例1至比较例4及对照组均具有较佳的伤口修复率,显示本发明的火龙果花丙三醇萃取液的促进纤维母细胞株的迁移能力甚佳,使其在制备促进伤口愈合的药物的用途上具有相当的潜力。
在此需注意的是,前述的本发明的火龙果花丙三醇萃取液制备的促进伤口愈合的药物除可以外用的方式进行施用之外,亦可为一口服药物,而口服药物则可为一口服用胶囊、悬浮液、粉末或药锭,且本发明并不以此为限。
四、含有火龙果花萃取液的改善皮肤状态的组合物的有效性评估
本发明提供一种改善皮肤状态的组合物,包含一有效剂量的火龙果花萃取物,其中火龙果花萃取物系利用前述的火龙果花萃取物的制备方法制得。本试验例提供一种火龙果花萃取液乳液,其系由下表一的成分所组成:
表一
火龙果花萃取液乳液的调制步骤首先秤取B相中所有的原料并将其放入容器中并充分混合,再将B相原料加热至70℃至75℃,并搅拌至完全溶解,同时亦秤取A相中所有的原料并将其放入另一个容器中并充分混合,再将A相原料加热至70℃至75℃,并搅拌至完全溶解。接着将温度保持在70℃至75℃的A相原料倒入温度保持在70℃至75℃的B相原料中并快速搅拌5分钟,再以均质机处理A、B相原料的混合物3分钟后,以搅拌机搅拌直至混合物的温度降至室温,以获得本试验例的火龙果花萃取液乳液。
为了评估火龙果花萃取液乳液对于改善皮肤状态的效能,本试验例系分别针对火龙果花乙醇萃取液乳液、火龙果花丁二醇萃取液乳液、火龙果花丙三醇萃取液乳液、以及丙三醇乳液(未加火龙果花萃取液)对于受试者皮肤的长效性以及短效性的保湿能力测定、皮肤黑色素指数降低率的测定,以及皮肤明亮度提升率的测定。
1.火龙果花萃取液乳液的长效性保湿能力评估
皮肤角质含水量的程度可够通过皮肤所反应的电容大小来测试,故本试验例以非侵入性的皮肤电容测试仪CM 825(Courage-Khazaka Electronic,Cologne,Germany)来侦测浅层上皮至0.1mm的含水量。在实验方面,本试验例分成下列不同实验组来进行,分别是火龙果花乙醇萃取液乳液、火龙果花丁二醇萃取液乳液、火龙果花丙三醇萃取液乳液、丙三醇乳液以及安慰剂等5组,各组的受试者在未使用火龙果花萃取液乳液前先于化妆品有效性评估室进行使用前测试,其中化妆品有效性评估室的环境温度为22±1℃且相对湿度为60±5%,待受试者完成脸部清洁并等待30分钟后,以CM 825测定受试者使用火龙果花乳液前的右脸皮肤角质含水量,再请受试者于每日早晚清洁脸部之后使用火龙果花乳液4周后再回化妆品有效性评估室进行使用后测试,测试部位同样为右脸。上述实验组各进行三重复,并将三次实验所得的皮肤角质含水量的提升率作图,以进行后续分析。皮肤角质含水量的提升率的计算公式V如下:
请参照图6A与图6B,图6A示出本发明再一实施方式的受试者使用火龙果花萃取液乳液四周后皮肤角质含水量提升率的分析柱状图,而图6B则示出本发明再一实施方式的受试者使用火龙果花萃取液乳液四周后皮肤角质含水量改善状况的人数统计分析图,由实验结果可知,受试者使用本发明的火龙果花萃取液乳液四周后在皮肤角质的含水量方面,火龙果花乙醇萃取液乳液提升21.6%、火龙果花丁二醇萃取液乳液提升20.9%、火龙果花丙三醇萃取液乳液提升25.1%、丙三醇乳液提升16.5%,而安慰剂则提升13.0%,其中以火龙果花丙三醇萃取液乳液的角质含水量提升率效果最好。
上述各实验组的角质含水量提升率数值亦利用统计方法T-test进一步分析,如图6A所示,以火龙果花丙三醇萃取液乳液为比较组时,若其角质含水量提升率与其他实验组的角质含水量提升率相比具有统计上的显着性(p<0.05),则以「*」符号标记来表示,而由统计分析的结果可见,火龙果花丙三醇萃取液乳液的角质含水量提升率相较于火龙果花乙醇萃取液乳液、火龙果花丁二醇萃取液乳液、丙三醇乳液以及安慰剂的角质含水量提升率均具有显着的提升,显示火龙果花丙三醇萃取液乳液提升角质含水量的效果甚佳。各组间详细的角质含水量提升率比较的统计分析结果如下表二所示:
表二
*:组间具有显着性差异(P<0.05)。
从受试者皮肤角质含水量改善状况的人数统计结果来看,受试者使用火龙果花丙三醇萃取液乳液四周后皮肤角质含水量改善程度大于11%的人数与程度均比使用单纯的丙三醇乳液好,显示火龙果花丙三醇萃取液乳液可有效提升皮肤的长效保湿能力。
2.火龙果花萃取液乳液的短效性保湿能力评估
玻尿酸(Hyaluronan、hyaluronic acid)又称糖醛酸、透明质酸或琉璃糖碳基酸,因其具有高度的生物相容性以及保湿能力,在医学美容上常用以做为缓解皮肤干燥的用途。故本试验例以不同比例的玻尿酸、火龙果花丙三醇萃取液以及不同比例的玻尿酸与火龙果花丙三醇萃取液所制成的乳液来进行皮肤角质含水量的短效性测试。本试验例同样以非侵入性的皮肤电容测试仪CM 825来侦测浅层上皮至0.1mm的含水量。
在实验方面,本试验例分成9组不同实验组来进行,第1组为含有5%火龙果花丙三醇萃取液+1%玻尿酸的乳液、第2组为含有3%火龙果花丙三醇萃取液+1%玻尿酸的乳液、第3组为含有1%火龙果花丙三醇萃取液+1%玻尿酸的乳液、第4组为含有5%玻尿酸的乳液、第5组为含有3%玻尿酸的乳液、第6组为含有1%玻尿酸的乳液、第7组为含有5%火龙果花丙三醇萃取液的乳液、第8组含有3%火龙果花丙三醇萃取液的乳液,以及第9组为含有1%火龙果花丙三醇萃取液的乳液。各组的受试者在未使用上述乳液前先于化妆品有效性评估室进行使用前测试,待受试者完成脸部清洁并等待30分钟后,以CM825测定受试者使用上述乳液前右脸的皮肤角质含水量,待各组受试者使用上述乳液1.5小时后,再次测定使用后的右脸皮肤角质含水量。上述实验组各进行三重复,并将三次实验所得的皮肤角质含水量的提升率作图,以进行后续分析。皮肤角质含水量的提升率的计算公式VI如下:
请参照图6C,图6C示出本发明再一实施方式的受试者使用上述乳液1.5小时后皮肤角质含水量提升率的分析柱状图,由实验结果可得知,在使用含有不同浓度的火龙果花丙三醇萃取液的乳液或玻尿酸乳液的短效性测试中,第1组受试者的皮肤角质含水量提升率为19.9%、第2组为14.7%、第3组为13.1%、第4组为12.0%、第5组为10.6%、第6组为9.6%、第7组为13.2%、第8组为11.9%,以及第9组为12.4%,由此可知,火龙果花萃取液乳液的短效性保湿能力相当优异,在角质含水量提升率上与添加玻尿酸的乳液相当。
上述各实验组的角质含水量提升率数值亦利用统计方法T-test进一步分析,如图6C所示,以第1组的含有5%火龙果花丙三醇萃取液+1%玻尿酸的乳液为比较组时,若其角质含水量提升率与其他实验组的提升率具有统计上的显着性(p<0.05),则以「*」符号标记来表示。而经由统计分析的结果可见,第1组的受试者的皮肤角质含水量提升率相较于他组的皮肤角质含水量提升率具有显着的提升,显示5%火龙果花丙三醇萃取液+1%玻尿酸的乳液在提升皮肤角质含水量的效果上甚佳。各组间详细的角质含水量提升率比较的统计分析结果如下表三所示:
表三
乳液样品 | 第2组 | 第3组 | 第4组 | 第5组 | 第6组 | 第7组 | 第8组 | 第9组 |
第1组 | 0.001* | 0.001* | 0.001* | 0.001* | 0.001* | 0.001* | 0.001* | 0.001* |
第2组 | - | 0.014* | 0.003* | 0.001* | 0.001* | 0.001* | 0.0038 | 0.001* |
第3组 | - | - | 0.028* | 0.001* | 0.001* | 0.718 | 0.028* | 0.053 |
第4组 | - | - | - | 0.013* | 0.004* | 0.015* | 0.807 | 0.246 |
第5组 | - | - | - | - | 0.054 | 0.001* | 0.022* | 0.002* |
第6组 | - | - | - | - | - | 0.001* | 0.005* | 0.001* |
第7组 | - | - | - | - | - | - | 0.016* | 0.021* |
第8组 | - | - | - | - | - | - | - | 0.201 |
*:组间具有显着性差异(P<0.05)。
3.火龙果花萃取液乳液的皮肤黑色素指数降低率的功效评估
本试验例中皮肤的黑色素指数(E;Melanin Index)系由DSM II Skin ColorMeter(Cortex Technology,Hadsun,Denmark)来做测定。在实验方面,本试验例分成下列实验组来进行,分别是使用火龙果花乙醇萃取液乳液、使用火龙果花丁二醇萃取液乳液、使用火龙果花丙三醇萃取液乳液以及使用安慰剂等4组,各组的受试者在未使用火龙果花萃取液乳液前先于化妆品有效性评估室进行使用前测试,待受试者完成脸部清洁并等待30分钟后,以DSM IISkin ColorMeter测定受试者使用火龙果萃取液花乳液前的右脸的皮肤黑色素指数,再请受试者于每日早晚清洁脸部之后使用火龙果花萃取液乳液4周后,再回化妆品有效性评估室进行使用后测试,测试部位同样为右脸。上述实验组各进行三重复,并将三次实验所得的皮肤黑色素指数降低率作图,以进行后续分析。皮肤黑色素指数降低率的计算公式VII如下:
请参照图7,图7示出本发明再另一实施方式的受试者使用火龙果花萃取液乳液4周后皮肤黑色素指数降低率的分析柱状图,由实验结果可得知,受试者使用火龙果花萃取液乳液4周后皮肤的黑色素指数明显降低,相较于火龙果花乙醇萃取液乳液的3.9%、火龙果花丁二醇萃取液乳液的2.1%以及安慰剂的1.4%,使用火龙果花丙三醇萃取液乳液4周后的皮肤黑色素指数降低率可达5.8%。
上述各实验组的黑色素指数降低率数值同样利用统计方法T-test进一步分析,如图7所示,以火龙果花丙三醇萃取液乳液为比较组时,若其黑色素指数降低率与其他实验组的黑色素指数降低率具有统计上的显着性(p<0.05),则以「*」符号标记来表示。而由统计分析的结果显示,使用火龙果花丙三醇萃取液乳液4周后的皮肤黑色素指数降低率相较于其他组别的黑色素指数降低率均具有显着的降低,显示火龙果花丙三醇萃取液乳液降低皮肤黑色素的效果甚佳。各组间详细的皮肤黑色素指数降低率比较的统计分析结果如下表四所示:
表四
乳液样品 | 丁二醇萃取液乳液 | 丙三醇萃取液乳液 | 安慰剂 |
乙醇萃取液乳液 | 0.001* | 0.003* | 0.001* |
丁二醇萃取液乳液 | - | 0.001* | 0.019* |
丙三醇萃取液乳液 | - | - | 0.001* |
*:组间具有显着性差异(P<0.05)。
4.火龙果花乳液的皮肤明亮度提升率的功效评估
本试验例中皮肤的明亮度指数(L*)系由DSM II Skin ColorMeter来做测定。在实验方面,本试验例分成4组不同实验组来进行,分别是使用火龙果花乙醇萃取液乳液、使用火龙果花丁二醇萃取液乳液、使用火龙果花丙三醇萃取液乳液组以及使用安慰剂等组别,各组的受试者在未使用火龙果花萃取液乳液前先于化妆品有效性评估室进行使用前测试,待受试者完成脸部清洁并等待30分钟后,以DSM II Skin ColorMeter测定受试者使用火龙果花萃取液乳液前的右脸的皮肤明亮度指数,再请受试者于每日早晚清洁脸部之后使用火龙果花萃取液乳液4周后,再回化妆品有效性评估室进行使用后测试,测试部位同样为右脸。上述实验组各进行三重复,并将三次实验所得的明亮度指数提升率作图,以进行后续分析。皮肤明亮度指数提升率的计算公式VIII如下:
请参照图8,图8示出本发明再更一实施方式的受试者使用火龙果花萃取液乳液4周后皮肤明亮度指数提升率的分析柱状图,由实验结果可得知,受试者使用含火龙果花萃取液乳液4周后皮肤的皮肤明亮度指数明显提升,相较于火龙果花乙醇萃取液乳液的5.4%、火龙果花丁二醇萃取液乳液的6.2%以及安慰剂的3.8%,使用火龙果花丙三醇萃取液乳液4周后皮肤明亮度指数提升率可达6.9%。
上述各实验组的黑色素指数降低率数值同样利用统计方法T-test进一步分析,如图8所示,以火龙果花丙三醇萃取液乳液为比较组时,若其皮肤明亮度指数提升率与其他实验组的皮肤明亮度指数提升率具有统计上的显着性(p<0.05),则以「*」符号标记来表示,而由统计分析的结果显示,使用火龙果花丙三醇萃取液乳液4周后相较于他组的皮肤明亮度指数提升率均具有显着的提升,显示火龙果花丙三醇萃取液乳液提升皮肤明亮度的效果甚佳。各组间的皮肤明亮度指数提升率比较的统计分析结果如下表五所示:
表五
乳液样品 | 丁二醇萃取液乳液 | 丙三醇萃取液乳液 | 安慰剂 |
乙醇萃取液乳液 | 0.012* | 0.002* | 0.015* |
丁二醇萃取液乳液 | - | 0.019* | 0.003* |
丙三醇萃取液乳液 | - | - | 0.001* |
*:组间具有显着性差异(P<0.05)。
综上所述,本发明所公开的火龙果花萃取物的制备方法所制得的火龙果花萃取物具有螯合亚铁离子、清除DPPH自由基等抗氧化能力,并可促进纤维母细胞增生或促使其进行迁移,使其可进一步应用于制备促进伤口愈合的药物。而利用包含本发明的火龙果花萃取物的火龙果花萃取液所制得的火龙果花萃取液乳液能达成受试者皮肤长效性与短效性的保湿效果,并可降低皮肤的黑色素指数以及提升皮肤的明亮度,具有医学与美容上的发展潜力。
然本发明已以实施方式公开如上,然其并非用以限定本发明,任何本领域普通技术人员,在不脱离本发明的构思和范围内,当可作各种的更动与润饰,因此本发明的保护范围当视随附的权利要求书所界定者为准。
Claims (28)
1.一种火龙果花萃取物的制备方法,其特征在于,包含:
提供一火龙果花;
干燥该火龙果花,并将干燥后的该火龙果花裁切成细块,以获得一火龙果花碎片;
进行一萃取工艺,该萃取工艺包含:
一混合步骤,系利用一醇类溶液与该火龙果花碎片混合成一混合物;
一加热步骤,系将该混合物加热至一加热温度后并反应一加热时间;
一冷却步骤,系将该混合物冷却至一室内温度并静置一冷却时间;
一再加热步骤,系将该混合物加热至一再加热温度并反应一段再加热时间;及
一萃取步骤,将该混合物冷却至该室内温度后并搅拌反应一萃取时间;以及
去除该混合物的一固体成分以获得一萃取液,该萃取液包含该火龙果花萃取物。
2.如权利要求1所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该醇类溶液为一丙三醇溶液。
3.如权利要求2所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该丙三醇溶液的体积百分浓度为10%至50%。
4.如权利要求3所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该丙三醇溶液的体积百分浓度为15%至40%。
5.如权利要求1所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该混合步骤中该火龙果花碎片与该醇类溶液以重量比1:1至1:10的比例混合。
6.如权利要求5所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该火龙果花碎片与该醇类溶液以重量比1:2至1:6的比例混合。
7.如权利要求1所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该加热温度为40℃至70℃。
8.如权利要求7所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该加热温度为50℃至60℃。
9.如权利要求1所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该加热时间为6小时至10小时。
10.如权利要求9所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该加热时间为8小时。
11.如权利要求1所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该冷却时间为20小时至28小时。
12.如权利要求11所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该冷却时间为24小时。
13.如权利要求1所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该再加热温度为40℃至70℃。
14.如权利要求13所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该再加热温度为50℃至60℃。
15.如权利要求1所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该再加热时间为6小时至10小时。
16.如权利要求15所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该再加热时间为8小时。
17.如权利要求1所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该萃取时间为5天至9天。
18.如权利要求17所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该萃取时间为7天。
19.如权利要求1所述的火龙果花萃取物的制备方法,其中该固体成分系利用一离心方式、一过滤方式或上述方式的组合而去除。
20.一种火龙果花萃取物的用途,其特征在于,其系应用于制备一抗氧化的药物,其中该火龙果花萃取物系利用如权利要求1至19任一项的制备方法制得。
21.如权利要求20所述的火龙果花萃取物的用途,其中该抗氧化的药物系用以螯合亚铁离子。
22.如权利要求20所述的火龙果花萃取物的用途,其中该抗氧化的药物系用以清除DPPH自由基。
23.一种火龙果花萃取物的用途,其特征在于,其系应用于制备一促进伤口愈合的药物,其中该火龙果花萃取物系利用如权利要求1至19任一项的制备方法制得。
24.如权利要求23所述的火龙果花萃取物的用途,其中该伤口愈合的药物系用以促进纤维母细胞增生和/或迁移。
25.一种改善皮肤状态的组合物,其特征在于,该改善皮肤状态的组合物包含一有效剂量的一火龙果花萃取物,该火龙果花萃取物系利用如权利要求1至19任一项的制备方法制得。
26.如权利要求25所述的改善皮肤状态的组合物,其中该改善皮肤状态的组合物系用以提高皮肤的一保湿能力。
27.如权利要求25所述的改善皮肤状态的组合物,其中该改善皮肤状态的组合物系用以降低皮肤的一黑色素指数。
28.如权利要求25所述的改善皮肤状态的组合物,其中该改善皮肤状态的组合物系用以提高皮肤的一明亮度指数。
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2018
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Patent Citations (1)
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Title |
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