CN109187511A - 一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及文物检测领域，公开了一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法，本发明先制备了硒化镉/硫化锌量子点珠，标记在修饰了铂的氧化石墨烯上，继而再吸附上丝素蛋白抗体形成探针，后与修饰在工作电极的文物样孵育一段时间下，可根据电化学扫描下得到的荧光信号判断文物样的种属，本发明在对古代丝织品检测时，具有样品用量少、直观、准确和灵敏度高的特点。
Description
技术领域
本发明涉及文物检测领域，尤其涉及一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法。
背景技术
中国自古以来就是纺织品大国，生产的纺织品种类丰富，工艺精美，舒适透气。其中最负盛名的纺织品就是中国的丝绸，故中国又被称为“丝绸之国”。丝绸的主要成分是桑蚕丝，桑蚕丝主要由丝素蛋白和丝胶两部分组成，丝素蛋白是蚕丝的主要组成部分，约占总重量的70%。并且桑蚕丝作为一种有机高分子材料，易受光、热、酸碱、微生物等的影响发生降解，从而造成结晶度、分子量等结构及性能的变化，所以常规的检测方法灵敏度低，受杂质干扰影响大，不适合对文物进行检测，因此需要开发一种灵敏度好，特异性强的检测丝织品的方法。
电化学发光分析法具有灵敏度高、仪器设备简单、操作方便、易于实现自动化等特点，广泛地应用于生物、医学、药学、临床、环境、食品、免疫和核酸杂交分析和工业分析等领域。在21世纪中必将继续为解决人类面临的各种重大问题发挥更加显著的作用。但是，由于本发明所要检测的为丝纺织品文物，与常规的检测样不同，因此有必要专门针对丝织品文物这一特殊对象来对电化学发光法进行改进。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法。本发明首创性地将电化学发光技术应用于文物检测，并且本发明针对丝织品文物样这一特殊的检测对象，对工艺进行了诸多改进。利用本发明方法对古代丝织品进行检测，具有直观、准确、灵敏度高的特点。
本发明的具体技术方案为：一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法，以µg、mg、g和µl、mL计，包括以下步骤：
A)称取18-22mg硒化镉/硫化锌量子点，118-122mg聚甲基丙烯酸甲酯，78-82mg聚马来酸酐-十八烯共聚物，加入至1.8-2.2ml的氯仿中，与4.5-5.5ml浓度为的3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液混合，用超声均化，再将氯仿蒸发，将所得水溶性量子点珠离心纯化，用去离子水清洗2-4次。
本发明制备的水溶性量子点珠包含多个硒化镉/硫化锌量子点，发光强度是单个硒化镉/硫化锌量子点的几千倍，在检测过程中起到荧光信号放大的作用，增大检测的灵敏度。
B)称取步骤A）所得水溶性量子点珠0.1-0.14mg，加入18-22µl的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，N-羟基琥珀酰亚胺，反应1.5-2.5h。
C)将氧化石墨烯溶液与六氯合铂酸钾溶液混合，在冰水浴中反应，然后在剧烈搅拌下，加入硼氢化钠反应后，离心，用去离子水洗涤，烘干，得到含铂氧化石墨烯。
D)取0.3-0.5mg步骤C）所得的含铂氧化石墨烯，加入0.3-0.5ml二甲基甲酰胺，超声处理1-3h，然后加入0.04-0.06g丙二胺以及0.008-0.012g二环己基碳二亚胺，超声15-25min，在55-65℃反应4-8h，加入0.15-0.25ml乙醇静置过夜，用去离子水清洗2-4次，烘干。
E)往步骤B）所得的溶液中加入8-12µl 2mg/ml的步骤D）处理后的产物，反应1.5-2.5h后，离心除去上清液，加入8-12µl稀释至1000倍的桑蚕丝素蛋白抗体，在1-5℃环境下孵育过夜，加入8-12µl的1wt%牛血清蛋白孵育1-3h后，将溶液离心浓缩至5µl。
本发明将具有优秀的催化性能的铂修饰于氧化石墨烯表面，更可以催化量子点珠的发光，放大电化学发光信号。本发明制备所得的石墨烯具有良好的生物相容性，较大的比表面积和良好的吸附性能，是一种理想的固定量子点珠和抗体的载体，可以放大电化学发光信号，提高检测的灵敏度。
F)称取4-6g桑蚕丝置于180-220mL含0.018-0.022M的碳酸钠溶液中，水浴55-65min，水浴温度为75-85℃，取出用去离子水清洗三次以上，干燥，得到丝素。
G)取1.8-2.2g烘干的丝素，2.3-2.7g硝酸钙，加入甲酸48-52mL，搅拌80-100min，过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性，透析冷冻干燥后，将得到的丝素蛋白研磨成粉备用。
本发明使用硝酸钙、甲酸体系溶解丝素，既能增加对丝素的溶解度，又能减小对丝素分子链的破坏，而且该体系在常温下即可完成对丝素的溶解，无需加热。
H)取10µl浓度为2-3g/ml的壳聚糖溶液滴在抛光好的玻碳电极1和2上，晾干后滴加10µl 1.8-2.2µl的2%戊二酮，室温孵育1-3h，在电极1上滴加20ul用CB9.6缓冲液稀释的100µg/ml丝素蛋白作为对照，在电极2上滴加20ul经处理后的文物样，在1-5℃冰箱里包被过夜，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3-5遍，电极1，2上滴加28-32ul的1wt%牛血清蛋白，室温孵育1-3h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3-5遍。
本发明中使用的壳聚糖具有良好的生物相容性，是一种很好的抗原载体。
I)将步骤E）所得的5µl浓缩液分别滴加至经步骤H)中处理的电极1，2上，在室温下孵育0.5-1.5h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3-5遍，晾干。
J)将步骤I） 中处理的电极置于含有0.1M过硫酸钾和0.1M氯化钾的PBS 7.4缓冲液中进行电化学扫描，得到电化学发光信号；若两电极均有发光信号，则判定文物样中有桑蚕丝，若只有电极1有发光信号，则判定文物样中无桑蚕丝。
本发明先制备了硒化镉/硫化锌量子点珠，标记在修饰 了铂的氧化石墨烯上，继而再吸附上丝素蛋白抗体形成探针，后与修饰在工作电极的文物样孵育一段时间下，可根据电化学扫描下得到的荧光信号判断文物样的种属，本发明在对古代丝织品检测时，具有样品用量少、直观、准确和灵敏度高的特点。
作为优选，步骤A）中，离心速率为8000-12000rpm，离心时间为8-12min。
作为优选，步骤C）具体为：取4ml的0.2-0.3 mg/ml 氧化石墨烯溶液与180µl-220µl的1mM六氯合铂酸钾溶液混合，在冰水浴中反应，然后在剧烈搅拌下，加入0.8-1.2mg的硼氢化钠反应1h后，离心，使用去离子水洗涤沉淀2-4次，烘干。
作为优选，步骤E）中，桑蚕丝素蛋白抗体用1wt%牛血清蛋白进行稀释。
作为优选，步骤G）中，所得溶液用截留分子量为8000-10000的纤维素透析袋在去离子水中透析2-3天，并每隔5-7h换一次水，将丝素蛋白溶液真空冷冻干燥2-3天。
作为优选，步骤H）中，文物样的处理方法为：取0.02-0.2g文物样溶解于100mlCB9.6缓冲液，混合搅拌均匀，静置，取上清液。
与现有技术对比，本发明的有益效果是：
(1)本发明中制备的量子点珠包含很多个硒化镉/硫化锌量子点，发光强度是单个硒化镉/硫化锌量子点的几千倍，在检测过程中起到荧光信号放大的作用，增大检测的灵敏度。
(2)本发明制备的石墨烯具有良好的生物相容性，较大的比表面积和良好的吸附性能，是一种理想的固定量子点珠和抗体的载体，可以放大电化学发光信号，提高检测的灵敏度。铂有优秀的催化性能，将其修饰与氧化石墨烯表面，更可以催化量子点珠的发光，放大电化学发光信号。
(3)本发明使用硝酸钙、甲酸体系溶解丝素，既能增加对丝素的溶解度，又能减小对丝素分子链的破坏，而且该体系在常温下即可完成对丝素的溶解，无需加热。
(4)本发明具有良好的生物相容性，是一种很好的抗原载体。
(5)本发明样品用量少，可以直观、准确、高灵敏性地检测出丝素蛋白，尤其是腐坏的古代丝织品。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
实施例1：
A)称取20mg硒化镉/硫化锌量子点，118g聚甲基丙烯酸甲酯，78mg的聚马来酸酐-十八烯共聚物，加入1.8ml的氯仿中，与4.5ml的3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液混合后用超声波均化器处理，之后再将氯仿蒸发。然后将所得水溶性量子点珠离心纯化，用去离子水清洗2次；
B)称取步骤A）中量子点珠0.1mg，加入20µl的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，N-羟基琥珀酰亚胺，反应2h；
C)取4ml的0.2mg/ml 氧化石墨烯溶液与180µl l的1mM六氯合铂酸钾溶液混合，在冰水浴中反应，然后在剧烈搅拌下，加入0.8mg的硼氢化钠反应1h后，离心，使用去离子水洗涤2次，烘干。
D)取0.3-0.5mg步骤C）中的含铂氧化石墨烯，加入0.3ml二甲基甲酰胺，超声处理2h，然后加入0.04g丙二胺以及0.008g二环己基碳二亚胺，超声20min，在60℃反应4h，加入0.2ml乙醇静置过夜，用去离子水清洗2次，烘干；
E)往步骤B）中的混合溶液中加入8µl 2mg/ml的步骤D）处理后的产物，反应2h后，离心除去上清液，加入8µl1wt%牛血清蛋白稀释到1000倍的桑蚕丝素蛋白抗体，在4℃环境下孵育过夜，加入8µl的1wt%牛血清蛋白孵育2h后，将混合溶液离心浓缩至5µl；
F)称取5g桑蚕丝置于180mL含0.018M的碳酸钠溶液中，水浴55min，水浴温度为80℃，取出用去离子水清洗三次以上，放入烘箱干燥；
G)取2g烘干的丝素，2.3g硝酸钙，加入甲酸48mL，用磁力搅拌80min，过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性，用截留分子量为8000的纤维素透析袋在去离子水中透析2天，并每隔5h换一次水，将丝素蛋白溶液在真空冷冻干燥机中冷冻干燥2天。
H)取10µl 2g/ml的壳聚糖滴在抛光好的玻碳电极上1，2晾干后滴加 1.8µl的2%戊二酮，室温孵育两小时，在电极1上滴加20ul用CB9.6缓冲液稀释的100µg/ml丝素蛋白作为对照，在电极2上滴加20ul 0.02g文物样溶解于100mlCB 9.6缓冲液，混合搅拌均匀，静置后的上清液。，在4℃冰箱里包被过夜，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3遍，电极1，2上滴加28ul的1wt%牛血清蛋白，室温孵育2h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3遍；
I)将步骤E）中的5µl浓缩液分别滴加至经步骤H)中处理的电极1，2后在室温下孵育1h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3遍，晾干；
J)将步骤I） 中处理的电极置于含有0.1M过硫酸钾和0.1M氯化钾的PBS 7.4缓冲液中进行电化学扫描，得到电化学发光信号。如果两电极都有发光信号说明，文物样中有桑蚕丝，如果只有电极1有发光信号说明文物样中无桑蚕丝。
其中PBS 7.4缓冲液的配制：称取0.2 g 氯化钾，0.27 g磷酸二氢钾，8 g氯化钠和1.42 g磷酸氢二钠加入到800 mL 去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000 mL，调节溶液的pH至7.4。
CB 9.6缓冲液配制：称取1.5 g碳酸钠和2.9 g碳酸氢钠 加入到800 mL 去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000 mL，调节溶液的pH至9.6。
实施例2：
A)称取20mg硒化镉/硫化锌量子点，120mg聚甲基丙烯酸甲酯， 80mg的聚马来酸酐-十八烯共聚物，加入2ml的氯仿中，与5ml的3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液混合后用超声波均化器处理，之后再将氯仿蒸发。然后将所得水溶性量子点珠离心纯化，用去离子水清洗3次；
B)称取步骤A）中量子点珠0.12mg，加入20µl的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，N-羟基琥珀酰亚胺，反应2h；
C)取4ml的0.25 mg/ml 氧化石墨烯溶液与200µl的1mM六氯合铂酸钾溶液混合，在冰水浴中反应，然后在剧烈搅拌下，加入1mg的硼氢化钠反应1h后，离心，使用去离子水洗涤3次，烘干。
D)取0.4mg步骤C)中的含铂氧化石墨烯，加入0.4ml二甲基甲酰胺，超声处理2h，然后加入0.05g丙二胺以及0.01g二环己基碳二亚胺，超声20min，在60℃反应6h，加入0.2ml乙醇静置过夜，用去离子水清洗3次，烘干；
E)往步骤B）中的混合溶液中加入10µl 2mg/ml的步骤D）处理后的产物，反应2h后，离心除去上清液，加入10µl1wt%牛血清蛋白稀释到1000倍的桑蚕丝素蛋白抗体，在4℃环境下孵育过夜，加入10µl的1wt%牛血清蛋白孵育2h后，将混合溶液离心浓缩至5µl；
F)称取5g桑蚕丝置于200mL含0.02M的碳酸钠溶液中，水浴60min，水浴温度为80℃，取出用去离子水清洗三次以上，放入烘箱干燥；
G)取2g烘干的丝素，2.5g硝酸钙，加入甲酸50mL，用磁力搅拌90min，过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性，用截留分子量为9000的纤维素透析袋在去离子水中透析2.5天隔5-7h换一次水，将丝素蛋白溶液在真空冷冻干燥机中冷冻干燥2.5天。
H)取10µl 2.3g/ml的壳聚糖滴在抛光好的玻碳电极上1，2晾干后滴加2µl的2%戊二酮，室温孵育两小时，在电极1上滴加20ul用CB9.6缓冲液稀释的100µg/ml丝素蛋白作为对照，在电极2上滴加20ul 0.11g文物样溶解于100mlCB 9.6缓冲液，混合搅拌均匀，静置后的上清液。在4℃冰箱里包被过夜，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗4遍，电极1，2上滴加30ul的1wt%牛血清蛋白，室温孵育2h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗4遍；
I)将步骤E）中的5µl浓缩液分别滴加至经步骤H)中处理的电极1，2后在室温下孵育1h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗4遍，晾干；
J)将步骤I） 中处理的电极置于含有0.1M过硫酸钾和0.1M氯化钾的PBS 7.4缓冲液中进行电化学扫描，得到电化学发光信号。如果两电极都有发光信号说明，文物样中有桑蚕丝，如果只有电极1有发光信号说明文物样中无桑蚕丝。
其中PBS 7.4缓冲液的配制：称取0.2 g 氯化钾，0.27 g磷酸二氢钾，8 g氯化钠和1.42 g磷酸氢二钠加入到800 mL 去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000 mL，调节溶液的pH至7.4。
CB 9.6缓冲液配制：称取1.5 g碳酸钠和2.9 g碳酸氢钠 加入到800 mL 去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000 mL，调节溶液的pH至9.6。
实施例3：
A)称取20mg硒化镉/硫化锌量子点，122mg聚甲基丙烯酸甲酯， 82mg的聚马来酸酐-十八烯共聚物，加入2.2ml的氯仿中，与5.5ml的3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液混合后用超声波均化器处理，之后再将氯仿蒸发。然后将所得水溶性量子点珠离心纯化，用去离子水清洗4次；
B)称取步骤A）中量子点珠0.14mg，加入20µl的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，N-羟基琥珀酰亚胺，反应2h；
C)取4ml的0.3 mg/ml 氧化石墨烯溶液与220µl的1mM六氯合铂酸钾溶液混合，在冰水浴中反应，然后在剧烈搅拌下，加入1.2mg的硼氢化钠反应1h后，离心，使用去离子水洗涤4次，烘干。
D)取0.3-0.5mg步骤C）中的含铂氧化石墨烯，加入0.5ml二甲基甲酰胺，超声处理2h，然后加入0.06g丙二胺以及0.012g二环己基碳二亚胺，超声20min，在60℃反应8h，加入0.2ml乙醇静置过夜，用去离子水清洗4次，烘干；
E)往步骤B）中的混合溶液中加入12µl 2mg/ml的步骤D）处理后的产物，反应2h后，离心除去上清液，加入12µl1wt%牛血清蛋白稀释到1000倍的桑蚕丝素蛋白抗体，在4℃环境下孵育过夜，加入12µl的1wt%牛血清蛋白孵育2h后，将混合溶液离心浓缩至5µl；
F)称取5g桑蚕丝置于220mL含0.022M的碳酸钠溶液中，水浴65min，水浴温度为80℃，取出用去离子水清洗三次以上，放入烘箱干燥；
G)取2g烘干的丝素， 2.7g硝酸钙，加入甲酸52mL，用磁力搅拌100min，过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性，用截留分子量为10000的纤维素透析袋在去离子水中透析3天，并每隔7h换一次水，将丝素蛋白溶液在真空冷冻干燥机中冷冻干燥3天。
H)取10µl 3g/ml的壳聚糖滴在抛光好的玻碳电极上1，2晾干后滴加10µl 2.2µl的2%戊二酮，室温孵育两小时，在电极1上滴加20ul用CB9.6缓冲液稀释的100µg/ml丝素蛋白作为对照，在电极2上滴加20ul 0.2g文物样溶解于100mlCB 9.6缓冲液，混合搅拌均匀，静置后的上清液。，在4℃冰箱里包被过夜，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3-5遍，电极1，2上滴加32ul的1wt%牛血清蛋白，室温孵育2h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗5遍；
I)将步骤E）中的5µl浓缩液分别滴加至经步骤H)中处理的电极1，2后在室温下孵育1h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗5遍，晾干；
J)将步骤I） 中处理的电极置于含有0.1M过硫酸钾和0.1M氯化钾的PBS 7.4缓冲液中进行电化学扫描，得到电化学发光信号。如果两电极都有发光信号说明，文物样中有桑蚕丝，如果只有电极1有发光信号说明文物样中无桑蚕丝。
其中PBS 7.4缓冲液的配制：称取0.2 g 氯化钾，0.27 g磷酸二氢钾，8 g氯化钠和1.42 g磷酸氢二钠加入到800 mL 去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000 mL，调节溶液的pH至7.4。
CB 9.6缓冲液配制：称取1.5 g碳酸钠和2.9 g碳酸氢钠 加入到800 mL 去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000 mL，调节溶液的pH至9.6。
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (6)
1.一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法，其特征在于，以µg、mg、g和µl、mL计，包括以下步骤：
A)称取18-22mg硒化镉/硫化锌量子点，118-122mg聚甲基丙烯酸甲酯，78-82mg聚马来酸酐-十八烯共聚物，加入至1.8-2.2ml的氯仿中，与4.5-5.5ml浓度为的3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液混合，用超声均化，再将氯仿蒸发，将所得水溶性量子点珠离心纯化，用去离子水清洗2-4次；
B)称取步骤A）所得水溶性量子点珠0.1-0.14mg，加入18-22µl的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，N-羟基琥珀酰亚胺，反应1.5-2.5h；
C)将氧化石墨烯溶液与六氯合铂酸钾溶液混合，在冰水浴中反应，然后在剧烈搅拌下，加入硼氢化钠反应后，离心，用去离子水洗涤，烘干，得到含铂氧化石墨烯；
D)取0.3-0.5mg步骤C）所得的含铂氧化石墨烯，加入0.3-0.5ml二甲基甲酰胺，超声处理1-3h，然后加入0.04-0.06g丙二胺以及0.008-0.012g二环己基碳二亚胺，超声15-25min，在55-65℃反应4-8h，加入0.15-0.25ml乙醇静置过夜，用去离子水清洗2-4次，烘干；
E)往步骤B）所得的溶液中加入8-12µl 2mg/ml的步骤D）处理后的产物，反应1.5-2.5h后，离心除去上清液，加入8-12µl稀释至1000倍的桑蚕丝素蛋白抗体，在1-5℃环境下孵育过夜，加入8-12µl的1wt%牛血清蛋白孵育1-3h后，将溶液离心浓缩至5µl；
F)称取4-6g桑蚕丝置于180-220mL含0.018-0.022M的碳酸钠溶液中，水浴55-65min，水浴温度为75-85℃，取出用去离子水清洗三次以上，干燥，得到丝素；
G)取1.8-2.2g烘干的丝素，2.3-2.7g硝酸钙，加入甲酸48-52mL，搅拌80-100min，过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性，透析冷冻干燥后，将得到的丝素蛋白研磨成粉备用；
H)取10µl浓度为2-3g/ml的壳聚糖溶液滴在抛光好的玻碳电极1和2上，晾干后滴加10µl 1.8-2.2µl的2%戊二酮，室温孵育1-3h，在电极1上滴加20ul用CB9.6缓冲液稀释的100µg/ml丝素蛋白作为对照，在电极2上滴加20ul经处理后的文物样，在1-5℃冰箱里包被过夜，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3-5遍，电极1，2上滴加28-32ul的1wt%牛血清蛋白，室温孵育1-3h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3-5遍；
I)将步骤E）所得的5µl浓缩液分别滴加至经步骤H)中处理的电极1，2上，在室温下孵育0.5-1.5h，干燥后用PBS 7.4缓冲液缓慢冲洗3-5遍，晾干；
J)将步骤I） 中处理的电极置于含有0.1M过硫酸钾和0.1M氯化钾的PBS 7.4缓冲液中进行电化学扫描，得到电化学发光信号；若两电极均有发光信号，则判定文物样中有桑蚕丝，若只有电极1有发光信号，则判定文物样中无桑蚕丝。
2.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法，其特征在于，步骤A）中，离心速率为8000-12000rpm，离心时间为8-12min。
3.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法，其特征在于，步骤C）具体为：取4ml的0.2-0.3 mg/ml 氧化石墨烯溶液与180µl-220µl的1mM六氯合铂酸钾溶液混合，在冰水浴中反应，然后在剧烈搅拌下，加入0.8-1.2mg的硼氢化钠反应1h后，离心，使用去离子水洗涤沉淀2-4次，烘干。
4.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法，其特征在于，步骤E）中，桑蚕丝素蛋白抗体用1wt%牛血清蛋白进行稀释。
5.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法，其特征在于，步骤G）中，所得溶液用截留分子量为8000-10000的纤维素透析袋在去离子水中透析2-3天，并每隔5-7h换一次水，将丝素蛋白溶液真空冷冻干燥2-3天。
6.如权利要求1所述的一种基于电化学发光法检测古代丝织品的方法，其特征在于，步骤H）中，文物样的处理方法为：取0.02-0.2g文物样溶解于100mlCB 9.6缓冲液，混合搅拌均匀，静置，取上清液。
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Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101865874A (zh) * | 2010-06-11 | 2010-10-20 | 东华大学 | 一种高灵敏度生物传感器及其制备方法 |
| US20140080122A1 (en) * | 2009-08-21 | 2014-03-20 | Massachusetts Institute Of Technology | Optical Nanosensors Comprising Photoluminescent Nanostructures |
| KR20150018920A (ko) * | 2013-08-09 | 2015-02-25 | 한국과학기술원 | 페리틴을 이용한 나노 촉매를 포함하는 다공성 금속산화물 반도체 나노 구조체를 이용한 가스 센서용 부재, 가스 센서 및 그 제조 방법 |
| CN104447989A (zh) * | 2014-12-31 | 2015-03-25 | 浙江理工大学 | 一种家蚕丝素蛋白抗体的制备方法 |
| CN105842214A (zh) * | 2016-04-29 | 2016-08-10 | 北京工商大学 | 一种羧甲基赖氨酸荧光印迹材料及其制备方法和应用 |
| CN106769297A (zh) * | 2016-12-12 | 2017-05-31 | 浙江理工大学 | 一种基于蛋白质组学测定古代丝织品的方法 |
| CN107266569A (zh) * | 2017-07-28 | 2017-10-20 | 浙江理工大学 | 一种柞蚕丝素蛋白单克隆抗体的制备方法 |
| CN107389949A (zh) * | 2017-09-06 | 2017-11-24 | 重庆医科大学 | 一种用于pcsk9蛋白检测的电化学免疫传感器制备方法 |
| CN107383193A (zh) * | 2017-07-28 | 2017-11-24 | 浙江理工大学 | 一种桑蚕丝素蛋白单克隆抗体的制备方法 |
| CN107543809A (zh) * | 2017-07-28 | 2018-01-05 | 郑州大学 | 一种谷胱甘肽分子检测用试纸条及检测方法 |
| WO2018085895A1 (en) * | 2016-11-14 | 2018-05-17 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Protease sensor molecules |
-
2018
- 2018-09-10 CN CN201811047606.5A patent/CN109187511B/zh active Active
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20140080122A1 (en) * | 2009-08-21 | 2014-03-20 | Massachusetts Institute Of Technology | Optical Nanosensors Comprising Photoluminescent Nanostructures |
| CN101865874A (zh) * | 2010-06-11 | 2010-10-20 | 东华大学 | 一种高灵敏度生物传感器及其制备方法 |
| KR20150018920A (ko) * | 2013-08-09 | 2015-02-25 | 한국과학기술원 | 페리틴을 이용한 나노 촉매를 포함하는 다공성 금속산화물 반도체 나노 구조체를 이용한 가스 센서용 부재, 가스 센서 및 그 제조 방법 |
| CN104447989A (zh) * | 2014-12-31 | 2015-03-25 | 浙江理工大学 | 一种家蚕丝素蛋白抗体的制备方法 |
| CN105842214A (zh) * | 2016-04-29 | 2016-08-10 | 北京工商大学 | 一种羧甲基赖氨酸荧光印迹材料及其制备方法和应用 |
| WO2018085895A1 (en) * | 2016-11-14 | 2018-05-17 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Protease sensor molecules |
| CN106769297A (zh) * | 2016-12-12 | 2017-05-31 | 浙江理工大学 | 一种基于蛋白质组学测定古代丝织品的方法 |
| CN107266569A (zh) * | 2017-07-28 | 2017-10-20 | 浙江理工大学 | 一种柞蚕丝素蛋白单克隆抗体的制备方法 |
| CN107383193A (zh) * | 2017-07-28 | 2017-11-24 | 浙江理工大学 | 一种桑蚕丝素蛋白单克隆抗体的制备方法 |
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| CN107389949A (zh) * | 2017-09-06 | 2017-11-24 | 重庆医科大学 | 一种用于pcsk9蛋白检测的电化学免疫传感器制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| MING LI等: "Detection of lead(II) with a "turn-on" fluorescent biosensor based on energy transfer from CdSe/ZnS quantum dots to graphene oxide", 《BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS》 * |
| SHU-QUAN CHANG等: "γ -Radiation Synthesis of Silk Fibroin Coated CdSe Quantum Dots and Their Biocompatibility and Photostability in Living Cells", 《JOURNAL OF NANOSCIENCE AND NANOTECHNOLOGY》 * |
| 赵鹏等: "基于dGMP特异性猝灭CdTe/ZnS量子点电化学发光传感器用于分析多种蛋白-核酸相互作用", 《第八届全国化学生物学术会议论文摘要集》 * |
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