CN109182348B

CN109182348B - 白叶枯病抗性相关基因OsPRX30的应用

Info

Publication number: CN109182348B
Application number: CN201811061798.5A
Authority: CN
Inventors: 王加峰; 郭涛; 刘浩; 肖武名; 陈志强; 王慧
Original assignee: South China Agricultural University
Current assignee: South China Agricultural University
Priority date: 2018-09-12
Filing date: 2018-09-12
Publication date: 2020-07-31
Anticipated expiration: 2038-09-12
Also published as: CN109182348A

Abstract

本发明公开一种白叶枯病抗性相关基因OsPRX30的应用，属于植物基因工程技术领域。该OsPRX30基因受白叶枯病病菌诱导后表达量增加。该基因受水稻白叶枯菌的诱导后上调表达，敲除后能提高白叶枯病抗性。将OsPRX30编辑位点序列与U3启动子连接后共同克隆到基因编辑载体pYLCRISPR/Cas9P_ubi‑H上转化水稻，结果该基因可以负调控水稻白叶枯病抗性。可利用本发明构建的基因编辑载体，应用于水稻抗白叶枯病育种中。本发明有助于更好地了解OsPRX30的作用机制，OsPRX30的克隆为进一步了解水稻‑白叶枯病菌互作，抗病信号传导通路奠定基础，在育种中有较大的应用价值。

Description

白叶枯病抗性相关基因OsPRX30的应用

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，涉及一种水稻抗病相关基因的应用，具体涉及一种白叶枯病抗性相关基因OsPRX30的应用。

背景技术

水稻白叶枯病害是由细菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)引起，不断积累的遗传及分子数据显示水稻针对白叶枯的抗性分子机制与抵御其他病原菌所依赖的主效抗病基因(Major Resistance gene，MR)模式存在很大差别。水稻中主效抗病基因多为隐性调节白叶枯抗性，在37个报道的R基因中，有14个是在自然群体中隐性突变后拥有对白叶枯的抗性，但是由主效基因引发的针对真菌、线虫、病毒多是显性调控。目前，只有7个白叶枯主效MR基因被克隆，Xa1、Xa3/Xa26、xa5、xa13、Xa21、xa25和Xa27，这些基因编码蛋白类型多样且识别不同的效应蛋白。AvrXa27被OsXa27识别后激活ETI免疫反应。在内生免疫系统中，PTI与ETI并不是两个孤立的系统，而是彼此相互联系相互合作调节植株抗性。如Xa21编码LRR受体激酶蛋白联合ATPase XB24，专一识别Ax21调控的PTI会与ETI协同完成防卫反应。早期的PTI信号由膜蛋白OsFLS2识别细菌鞭毛蛋白flg22调节一系列基因表达并且诱导ROS爆发，ROS可作为抗菌物质存在于植物细胞内。NADPH氧化酶OsRBOH/CDPK复合体与小GTPaseOsRac1/OsSPL11复合体相互作用诱导ROS的产生。但是ETI反应中高浓度的ROS积累会促进细胞程序性死亡，因此细胞机体会利用过氧化物酶(POD)清除多余的ROS以保护细胞免于被自身释放的内源ROS损伤。

根据POD自身的功能POD家族基因能够被划分为多个三个亚家族：C I PRXs(ClassI peroxidases)包括细胞内的过氧化物酶、抗坏血酸过氧化物酶、细胞色素C氧化酶。C IIPRXs包括木质素氧化酶或锰氧化物酶。C III PRXs包括依据信号肽被分选到分泌途径的过氧化物酶。目前有关C III PRXs基因的功能并不十分清楚，但植物在受到胁迫刺激后PRXs家族基因表达会出现明显变化。PRXs基因常串联排布在染色体上，推测他们可能具有相似的功能及共同的转录调控模式。

鉴定抗病相关基因有助于深入揭示水稻的抗病机理及水稻与病原菌的具体互作机制，进一步的选育或者培育相关的抗病品种，可以更好的更好地控制和降低水稻白叶枯病对水稻的危害，增强植物的抗病性。这些研究对水稻基因功能研究及抗病水稻育种都具有重要的应用价值。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种白叶枯病抗性相关基因OsPRX30的应用。该基因属于C III PRXs家族，受白叶枯病病菌诱导后表达量增加。该基因缺失会提高水稻白叶枯病抗性。可以利用本发明接合CRISPR/Cas9基因编辑技术对OsPRX30基因进行定点编辑以提高水稻的白叶枯病抗性。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

本发明提供一种白叶枯病抗性相关基因OsPRX30在提高水稻对白叶枯病抗性中的应用。

本发明提供一种白叶枯病抗性相关基因OsPRX30在水稻抗白叶枯病育种中的应用。

本发明发现了一个可被白叶枯病菌显著诱导的基因OsPRX30，该基因编码蛋白含有15个保守的螺旋卷曲结构，二级结构含有2个heme-Fe结构和4个钙离子结合位点。

本发明涉及植物基因克隆以及功能分析，提供了一个负向调节水稻白叶枯病抗性的新基因OsPRX30，该基因位于2号染色体上，基因座位号为LOC_Os02g14430(MSU登录号)，其全长基因组序列为1434bp(SEQ ID NO:1)括5′非翻译区(5′UTR)、2个外显子、1个内含子和3′非翻译区(3′UTR)(图1)。其cDNA全长984bp(SEQ ID NO：2)，编码328个氨基酸。OsPRX30编码的蛋白质序列如SEQ ID NO：3所示。

本发明还提供了含有本发明基因编辑载体和宿主菌以及扩增该基因的任一片段的引物。

本发明白叶枯病抗性相关基因OsPRX30的应用，该基因受白叶枯病菌诱导后表达量增加。该基因受水稻白叶枯菌的诱导后上调表达，敲除后能提高白叶枯病抗性。

在OsPRX30第一外显子选定一含有PAM序列的20bp作为敲除靶点，与U3-gRNA表达盒连接后与Cas9构建成载体pYLCRISPR/Cas9P_ubi-OsPRX30，转化农杆菌后侵染水稻的愈伤组织。潮霉素筛选获得敲除植株，结果表明该基因缺失可以显著提高白叶枯病抗性。可以利用本发明基因编辑载体YLCRISPR/Cas9P_ubi-OsPRX30于水稻抗白叶枯病育种中。

本发明的机理是：

发明人在H4与中二软占的差异蛋白表达谱中发现OsPRX30的表达水平在受到稻瘟病菌侵染后的12h内显著升高，而且由Pik-H4激活的OsAAE3也调控过氧化物酶前体编码基因的表达。高抗水稻株系H4除对稻瘟病具有显著抗性，同时也对白叶枯病具有一定的抗性。另外，拟南芥中第3类过氧化物酶前体编码基因的表达曾被报道受细菌的诱导，从而促进PRX蛋白向非原生质间的区域分泌量增加。我们推测H4调控的真菌性病害有许多的通路与细菌性抗病反应是相互关联的，其中过氧化物酶调控的ROS途径就是最主要的信息交互调节的节点。同时，H4株系中的稻瘟病抗性基因Pik-H4可能利用ROS信号途径间接影响植株的细菌性白叶枯抗性。深入探究OsPRX30的分子机制及转录表达模式对了解PRXs蛋白具有重要的意义，亦可为解释H4株系真菌性与细菌性偶联抗性发生的分子机制研究奠定基础。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

本发明方法利用反转录PCR技术从水稻中克隆到了一个C III PRXs家族蛋白的基因OsPRX30，证实OsPRX30参与了水稻对白叶枯病菌的防御反应，是一种重要的参与水稻抗病性的负调控基因。本发明有助于更好地了解OsPRX30的作用机制，OsPRX30的克隆为进一步了解水稻-病原菌互作，抗病信号传导通路奠定基础，在育种中有较大的应用价值。

附图说明

图1是OsPRX30全长基因组结构示意图；其中，黑色区域为外显子。

图2是OsPRX30与其它PRXs家族蛋白氨基酸序列相似性比较。

图3是OsPRX30在抗病材料中的表达受到白叶枯病菌的诱导的结果图。

图4是YLCRISPR/Cas9P_ubi-OsPRX30基因编辑载体的构建；其中，泳道M为1kb DNAMarker，泳道1为基因编辑载体酶切(AscI)鉴定结果。

图5是osprx30缺失突变体的鉴定及靶位点测序。

图6是接种白叶枯病菌12d后osprx30缺失突变体病情调查；其中，WT为水稻H4株系(近等基因系H4)；osprx30-ko表示osprx30-ko1。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

本发明所使用的各种原料及各项设备均为常规市售产品，均能够通过市场购买直接获得，所用引物序列均由上海英俊生物技术有限公司合成。

所述的水稻高抗稻瘟病株系H4在文献“水稻抗稻瘟病蛋白Pik₂-H4基因的克隆及互作蛋白的筛选[J].广东农业科学,2014,(04):156-160.”中公开。

所述的白叶枯病IV型菌在文献“水稻抗白叶枯病近等基因系对华南菌系的抗性研究[J].植物病理学报,2006,36(2):177-180.”中公开。

所述的基因编辑载体pYLCRISPR/Cas9P_ubi-H在文献“A robust CRISPR/Cas9System for Convenient,High-efficiency Multiplex Genome Editing in Monocot andDicot plants.Mol Plant,2015,8(8):1274-84”中公开。

实施例1水稻OsPRX30基因的克隆以及序列分析

1)水稻总RNA的提取

取水稻H4(在文献“水稻抗稻瘟病蛋白Pik₂-H4基因的克隆及互作蛋白的筛选[J].广东农业科学,2014,(04):156-160.”中公开)3～4叶期水稻幼苗，液氮冷冻并研磨成粉状，转入1.5mL离心管，并按照每100mg材料加入1mL提取试剂的比例加入Trizol试剂(Invitrogen公司)，混合均匀；按照每100mg材料加入200μL氯仿的比例加入氯仿，混合均匀12000rpm，4℃离心15min，弃去中间层及下层有机相，收集上层水相转到新的离心管内；加入600μL异丙醇，混合均匀，室温静置20min，12000rpm，4℃离心15min，收集沉淀，待异丙醇挥发后溶于无RNA酶的超纯水中，-80℃冻存备用。

2)OsPRX30基因的克隆

A.第一链cDNA的合成

取水稻叶片总RNA，加入2μL的Oligo(dT)₁₆(10mM)，混匀后置于70℃中水浴5min；水浴5min后，在冰上向离心管中先后加入dNTP Mixture(10mM)2μL、5×RT Buffer 4μL、RNase抑制剂1μL(10U/μL)、RNase-free ddH₂O 8μL、ReverTraAce 1μL；将EP管置于PCR仪中，按30℃10min，42℃60min，99℃5min，40℃5min反应后，得到第一链的单链cDNA，于-20℃冰箱保存备用。

B.cDNA的扩增

设计两条引物OsPRX30-F和OsPRX30-R。PCR反应体系为：cDNA模板2μL、上下游引物(10μM)各1.5μL、dNTP(2mM)5μL、10×KOD PCR buffer 5μL、MgSO₄(25mM)2μL、KOD Plus 1μL，补ddH₂O至50μL。扩增条件为：94℃变性3min、55℃30s、68℃2min 35个循环、72℃延伸10min。将扩增的全长cDNA送往上海英俊公司进行测序分析。利用DNAMan对OsPRX30及其同源蛋白氨基酸序列多重比对显示OsPRX30与拟南芥及水稻中的过氧化物酶蛋白在多个位点具有保守的氨基酸序列(图2)。该结果表明OsPRX30可能在水稻中形式过氧化物酶体的功能。

OsPRX30-F：5'-GGTACCATGGCTTCGAGGAGTAGCTG-3'(SEQ ID NO:4)(下划线标记部分限制性内切酶BamHI酶切位点序列)；

OsPRX30-R：5'-GGATCCTCAGCTGCTGTTGACGGCCCT-3'(SEQ ID NO:5)(下划线标记部分限制性内切酶BamHI酶切位点序列)。

实施例2白叶枯病菌接种后不同水稻的OPRX30表达趋势分析

利用定量RT-PCR技术对OsPRX30基因接种白叶枯病菌后的表达模式进行了分析。在H4接种白叶枯病菌IV型菌(在文献“水稻抗白叶枯病近等基因系对华南菌系的抗性研究[J].植物病理学报,2006,36(2):177-180.”中公开)后不同的时间点(1d、2d、3d、4d、5d)采集叶片并提取其总RNA，利用反转录试剂盒ReverTraAce进行反转录cDNA第一条链的合成。然后按照SYBR Premix ExTaq试剂盒说明进行利用AB StepOne Plus荧光定量PCR检测仪分析OsPRX30的表达量，Actin作为内参基因。

所用引物及序列为：

OsPRX30-RT-F：5'-CACTTAGTTACTCATAGATAA-3'(SEQ ID NO:6)；

OsPRX30-RT-R：5'-GCGTCGCCGTCAGAATCTAT-3'(SEQ ID NO:7)；

Actin-RT-F：5'-GATCACTGCCTTGGCTCCTA-3'(SEQ ID NO:8)；

Actin-RT-R：5'-GTACTCAGCCTTGGCAATCC-3'(SEQ ID NO:9)；

结果如图3所示，表明在抗病品种H4中OsPRX30的表达量在接种后2d开始增加，在第4d达到峰值，随后表达量呈现缓慢降低的趋势。

实施例3水稻OsPRX30基因编辑载体的构建及osprx30-ko的获得

利用CRISPR/Cas9技术构建osprx30-ko植株，具体操作方法参考Ma et al.(2015)的方法。设计OsPRX30第1外显子内20bp DNA片段包含PAM(protospacer-adjacent motif)序列，所采用引物及序列为：

OsPRX30-U3-F：5'-ggcAACGTCGAGCTCCTCTGCCC-3'(SEQ ID NO:10)；

OsPRX30-U3-R：5'-aaacGGGCAGAGGAGCTCGACGT-3'(SEQ ID NO:11)。

将该序列与U6a-gRNA表达盒相融合，融合后的片段用BsaI酶切插入pYLCRISPR/Cas9P_ubi-H载体(图4)(在文献“A robust CRISPR/Cas9 System for Convenient,High-efficiency Multiplex Genome Editing in Monocot and Dicot plants.Mol Plant,2015,8(8):1274-84”中公开)，构建转化载体pYLCRISPR/Cas9P_ubi-OsPRX30。该质粒转化进土壤农杆菌EHA105侵染H4的愈伤组织。转基因植株再生通过利用50mg/L潮霉素培养基筛选2次愈伤组织，随后经过愈伤分化及生根获得阳性植株，记为osprx30-ko1、osprx30-ko2、osprx30-ko3。利用荧光定量PCR检测阳性植株及DNA测序验证敲除植株(图5)。

实施例4缺失突变体osprx30-ko白叶枯病抗性检测

鉴定正确的osprx30-ko1突变体在抽穗期接种白叶枯病菌IV型菌，在接种后12d观察叶片病斑的生长面积。结果表明(图6)，与野生型植株相比，osprx30-ko1的病斑长度相对较小，该结果表明OsPRX30负向调控水稻的白叶枯抗性。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 华南农业大学

<120> 白叶枯病抗性相关基因OsPRX30的应用

<160> 11

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1434

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> OsPRX30的全长基因组序列

<400> 1

tcgtgccagc cacacatcaa gtaagctaag ctactgagct aactcagctt agctaagctt 60

agctagagct caagtgatta agcaagaaca cttagttact catagataat taattaatta 120

agatttgtga gattaccatg gcttcgagga gtagctggca ttgctgcttg ctggccttct 180

tcctcctctc gtccgccgcc ggcgccgcct acgggcagca gctgtcgacg acgttctacg 240

cggcgagctg cccgacgctg caggtggtgg tgcgcgccac cgtgctcggc gcgctcctcg 300

ccgagcggcg gatgggcgcg tccctcgtca ggctcttctt ccacgactgc ttcgtccagg 360

gctgcgacgc ctccatcctc ctcgacgacg tgccggcgac gagcttcgtc ggcgagaaga 420

cggcgttccc caacgtcaac tccgtccgcg gctacgacgt catcgaccag atcaagcgca 480

acgtcgagct cctctgcccc ggcgtcgtct cctgcgccga catcgtcgcc ctcgccgccc 540

gcgacagcac cgccctggta cgcgccgccc accgacacac acaatgttcg aattgattcc 600

atagattctg acggcgacgc gcgtacgtgc agctcggcgg gccaagctgg gcggtgccgc 660

tggggcggcg ggactcgacg acggcgagcc tcagcgcggc gaacagcgac ctgccggcgc 720

cgtcgagcga cctcgccacg ctcatcgcgg ggttcggcaa caagggcctg agcccgcgcg 780

acatgacggc gctctccggc gcgcacacca tcggcttctc gcagtgcgcc aacttccgcg 840

accgcgtcta caacgacacc aacatcgacc cggcgttcgc cgcgctccgc cgccgcggct 900

gccccgccgc gccgggctcc ggcgactcca gcctggcgcc gctcgacgcg cagacgcaga 960

acgtgttcga caacgcctac taccgcaacc tgctcgccca gcgcggcctg ctccactccg1020

accaggagct cttcaacggc ggctcgcagg acgcgctggt gcagcagtac agctccaacc1080

cggcgctgtt cgccgccgac ttcgccgccg ccatgataaa gatggggaac atcaaaccgc1140

tcaccggagc cgccggccag atcaggcgca gctgcagggc cgtcaacagc agctgatgga1200

ttattgctta tataagtgta attaattaag gcattaaaca tgcttaatta atatgttcat1260

ggtgattcgc agctttgatg ttggttacaa aggtgaccaa cccatatata cacatgatat1320

acatggatga ataagtaagc tatggaaagt acacatatga ccttgggttg aaaagtgatg1380

gatcaaccaa gcaaggtcat tataaatggg aacatctgtt tatcatgtgc taca 1434

<210> 2

<211> 984

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> OsPRX30的cDNA全长序列

<400> 2

atggcttcga ggagtagctg gcattgctgc ttgctggcct tcttcctcct ctcgtccgcc 60

gccggcgccg cctacgggca gcagctgtcg acgacgttct acgcggcgag ctgcccgacg 120

ctgcaggtgg tggtgcgcgc caccgtgctc ggcgcgctcc tcgccgagcg gcggatgggc 180

gcgtccctcg tcaggctctt cttccacgac tgcttcgtcc agggctgcga cgcctccatc 240

ctcctcgacg acgtgccggc gacgagcttc gtcggcgaga agacggcgtt ccccaacgtc 300

aactccgtcc gcggctacga cgtcatcgac cagatcaagc gcaacgtcga gctcctctgc 360

cccggcgtcg tctcctgcgc cgacatcgtc gccctcgccg cccgcgacag caccgccctg 420

ctcggcgggc caagctgggc ggtgccgctg gggcggcggg actcgacgac ggcgagcctc 480

agcgcggcga acagcgacct gccggcgccg tcgagcgacc tcgccacgct catcgcgggg 540

ttcggcaaca agggcctgag cccgcgcgac atgacggcgc tctccggcgc gcacaccatc 600

ggcttctcgc agtgcgccaa cttccgcgac cgcgtctaca acgacaccaa catcgacccg 660

gcgttcgccg cgctccgccg ccgcggctgc cccgccgcgc cgggctccgg cgactccagc 720

ctggcgccgc tcgacgcgca gacgcagaac gtgttcgaca acgcctacta ccgcaacctg 780

ctcgcccagc gcggcctgct ccactccgac caggagctct tcaacggcgg ctcgcaggac 840

gcgctggtgc agcagtacag ctccaacccg gcgctgttcg ccgccgactt cgccgccgcc 900

atgataaaga tggggaacat caaaccgctc accggagccg ccggccagat caggcgcagc 960

tgcagggccg tcaacagcag ctga 984

<210> 3

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> OsPRX30编码的蛋白质序列

<400> 3

Met Ala Ser Arg Ser Ser Trp His Cys Cys Leu Leu Ala Phe Phe Leu

1 5 10 15

Leu Ser Ser Ala Ala Gly Ala Ala Tyr Gly Gln Gln Leu Ser Thr Thr

20 25 30

Phe Tyr Ala Ala Ser Cys Pro Thr Leu Gln Val Val Val Arg Ala Thr

35 40 45

Val Leu Gly Ala Leu Leu Ala Glu Arg Arg Met Gly Ala Ser Leu Val

50 55 60

Arg Leu Phe Phe His Asp Cys Phe Val Gln Gly Cys Asp Ala Ser Ile

65 70 75 80

Leu Leu Asp Asp Val Pro Ala Thr Ser Phe Val Gly Glu Lys Thr Ala

85 90 95

Phe Pro Asn Val Asn Ser Val Arg Gly Tyr Asp Val Ile Asp Gln Ile

100 105 110

Lys Arg Asn Val Glu Leu Leu Cys Pro Gly Val Val Ser Cys Ala Asp

115 120 125

Ile Val Ala Leu Ala Ala Arg Asp Ser Thr Ala Leu Leu Gly Gly Pro

130 135 140

Ser Trp Ala Val Pro Leu Gly Arg Arg Asp Ser Thr Thr Ala Ser Leu

145 150 155 160

Ser Ala Ala Asn Ser Asp Leu Pro Ala Pro Ser Ser Asp Leu Ala Thr

165 170 175

Leu Ile Ala Gly Phe Gly Asn Lys Gly Leu Ser Pro Arg Asp Met Thr

180 185 190

Ala Leu Ser Gly Ala His Thr Ile Gly Phe Ser Gln Cys Ala Asn Phe

195 200 205

Arg Asp Arg Val Tyr Asn Asp Thr Asn Ile Asp Pro Ala Phe Ala Ala

210 215 220

Leu Arg Arg Arg Gly Cys Pro Ala Ala Pro Gly Ser Gly Asp Ser Ser

225 230 235 240

Leu Ala Pro Leu Asp Ala Gln Thr Gln Asn Val Phe Asp Asn Ala Tyr

245 250 255

Tyr Arg Asn Leu Leu Ala Gln Arg Gly Leu Leu His Ser Asp Gln Glu

260 265 270

Leu Phe Asn Gly Gly Ser Gln Asp Ala Leu Val Gln Gln Tyr Ser Ser

275 280 285

Asn Pro Ala Leu Phe Ala Ala Asp Phe Ala Ala Ala Met Ile Lys Met

290 295 300

Gly Asn Ile Lys Pro Leu Thr Gly Ala Ala Gly Gln Ile Arg Arg Ser

305 310 315 320

Cys Arg Ala Val Asn Ser Ser

325

<210> 4

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> OsPRX30-F

<400> 4

ggtaccatgg cttcgaggag tagctg 26

<210> 5

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> OsPRX30-R

<400> 5

ggatcctcag ctgctgttga cggccct 27

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> OsPRX30-RT-F

<400> 6

cacttagtta ctcatagata a 21

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> OsPRX30-RT-R

<400> 7

gcgtcgccgt cagaatctat 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> Actin-RT-F

<400> 8

gatcactgcc ttggctccta 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> Actin-RT-R

<400> 9

gtactcagcc ttggcaatcc 20

<210> 10

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> OsPRX30-U3-F

<400> 10

ggcaacgtcg agctcctctg ccc 23

<210> 11

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> OsPRX30-U3-R

<400> 11

aaacgggcag aggagctcga cgt 23

Claims

1.白叶枯病抗性相关基因OsPRX30在提高水稻对白叶枯病抗性中的应用，其特征在于：所述白叶枯病抗性相关基因OsPRX30编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；其中，白叶枯病抗性相关基因OsPRX30缺失能显著提高水稻对白叶枯病抗性。

2.白叶枯病抗性相关基因OsPRX30在水稻抗白叶枯病育种中的应用，其特征在于：所述白叶枯病抗性相关基因OsPRX30编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；其中，白叶枯病抗性相关基因OsPRX30缺失能显著提高水稻对白叶枯病抗性。

3.根据权利要1所述的应用，其特征在于：

所述白叶枯病抗性相关基因OsPRX30的cDNA全长序列如SEQ ID NO：2所示。

4.根据权利要1所述的应用，其特征在于：

所述白叶枯病抗性相关基因OsPRX30的全长基因组序列如SEQ ID NO：1所示。

5.一种针对权利要求1、3或4中所述的OsPRX30基因的编辑载体在提高水稻对白叶枯病抗性中的应用，其特征在于：所述的编辑载体用于敲除OsPRX30基因。

6.一种含有权利要求5中所述的编辑载体的宿主菌在提高水稻对白叶枯病抗性中的应用。

7.根据权利要2所述的应用，其特征在于：

8.根据权利要2所述的应用，其特征在于：

9.一种针对权利要求2、7或8中所述的OsPRX30基因的编辑载体在水稻抗白叶枯病育种中的应用，其特征在于：所述的编辑载体用于敲除OsPRX30基因。

10.一种含有权利要求9中所述的编辑载体的宿主菌在水稻抗白叶枯病育种中的应用。