CN109182300A - 一种抑制dna酶切的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种抑制DNA酶切的方法，属于分子生物学领域；本发明通过在酶切反应体系中加入二硫化钼纳米材料，控制反应的技术参数，达到抑制DNA酶切的目的，本发明利用酶切实验和纳米材料交叉结合，抑制酶切有望应用到细胞信号通路中，阻止相关酶的活性，致使某些信号不能顺利转达，为生物医学提供了新的研究方向和相关的理论参考基础，此外本发明中MoS2纳米材料性质稳定且易于制备，产量高，防酸防碱，制备成本较低，有一定的应用发展前景。
Description
技术领域
本发明提供一种抑制DNA酶切的方法，属于分子生物学领域。
背景技术
酶切技术一般指的是定向酶切技术，定向酶切技术具体是指用限制性内切酶去切割DNA片断，由于酶具有专一性，即一种酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列，所以可以用特定的这种酶去切割相应的DNA片断，进而达到定向切割的目的。定向酶切技术一般使用单酶切和双酶切方法，尤其是双酶切是生物实验普遍常用的方法。酶切实验存在于生物、化学、医学等各个领域，是不可缺少的实验环节。在酶切实验过程中往往以成功导入目的基因片段的质粒DNA作为实验切割对象（也包括RNA)，各种型号的酶可以作为切割工具破坏质粒DNA对应酶切位点的分子结构，经过合适的酶切时间和条件，将目的基因片段从载体质粒DNA上切割下来，之后进行跑胶电泳查看有无目的条带来验证酶切实验是否成功。
酶切反应在生物化学实验中占据很重要的位置，譬如分子克隆中限制性内切酶能否成功切割开DNA，关系到后面是否能成功导入目的片段；在进行PCR（聚合酶链式反应）扩增时，在引物两端设计好酶切位点，当复制好DNA后DNA聚合酶具有校对作用，对引物上多余的部分序列进行酶切切除，此时，DNA聚合酶实现的是外切酶的作用。然而生物化学中有些需要酶切反应，而有些也需要抑制酶切来实现其作用，如PCR终止反应，需要抑制DNA聚合酶；分裂中卵母细胞成熟抑制因子单独决定HAX-1的酶切；发酵中需要抑制促进杂菌生长的酶反应活动。目前一般采用以下方法抑制DNA限制酶切，包括加入EDTA、高温、加入SDS或尿素、用等体积酚抽提酶解产物等。但有些酶在高温下也具有酶活动，温度不好控制，有的也并不能完全抑制酶切。
二硫化钼（MoS2)是一种新型的二维纳米材料，其结构具有多层状，每一层由共价键合的S-Mo-S六面体准二维网络组成，而层与层之间靠范德华力相互支撑。由于该范德华力作用较薄弱，MoS2单层可以从MoS2晶体中被剥离。这种单层体系具有足够高的载流子迁移率且在水溶液中的稳定性明显强于多层体系，所以易制备也是这种材料的一大突出亮点。MoS2对单链DNA具有一定的物理吸附作用，其许多特性与氧化石墨烯类似，因其含有过渡金属，电子迁移率明显优于石墨烯，且其制作成本低，制作面积宽，应用范围广，成为生物领域很多反应或应用中优选选择的材料。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的技术缺陷，而提供一种抑制DNA酶切的方法。
为达到上述技术目的，本发明采用如下技术手段：
（1）二硫化钼的制备：将二硫化钼粉末放置于超纯水中，借助超声仪超声2到3小时，萃取浮在超纯水表面的薄层或单层纳米材料即为二硫化钼纳米材料，获得的该纳米材料平均直径为150nm到几微米。
（2）含有目的质粒DNA的大肠杆菌的培养：将含有单酶切质粒和双酶切质粒的细菌菌液放置于LB培养基中，之后分别将培养基放于37℃摇床中过夜培养。
其中，所述细菌优选为大肠杆菌。
所述单酶切质粒优选为pET-30a+，双酶切质粒优选PB2GW7.0质粒。
上述LB培养基中含有卡那霉素Kan或盐酸大观霉素Spec，以保证含有单酶切质粒和双酶切质粒的细菌正常生长。
（3）目的质粒DNA的提取：采用质粒试剂盒提取细菌内的质粒DNA，之后测量所提质粒DNA的浓度，便于计算酶切反应所需的酶量。
优选的，按照1U酶切割1μg的质粒, 酶的量不要超过酶切体系的1/10。
（4）酶切反应：配制酶切反应体系，向反应体系加入MoS2材料，之后将混合后的反应体系放置于37℃水浴锅里进行酶切过夜。
本发明所述MoS2材料制备为溶液形式，优选浓度范围为1-5μg/mL，更优选的MoS2溶液浓度为2mg/mL。
本发明具有以下优点：
（1）本发明原理简单，省时省力，操作方便，利用酶切实验和纳米材料交叉结合，目的是反映出二硫化钼纳米材料对生物、医学及更广领域的影响作用。本发明抑制酶切有望应用到细胞信号通路中，阻止相关酶的活性，致使某些信号不能顺利转达，如：受体酪氨酸蛋白激酶(RTPK)信号转导途径可能被阻碍，而该途径与细胞增殖肥大和肿瘤的发生关系密切，为肿瘤医学开拓了一个新的研究方向，奠定了相关的理论参考基础，此外MoS2纳米材料无毒性，对实验及细胞、机体伤害较小。
（2）本发明中采用MoS2纳米材料，该纳米材料性质稳定且易于制备，产量高，防酸防碱，最重要的是该材料无毒性，价格低廉。发明中设定现存的MoS2浓度范围在1-5 mg/mL（数值范围偏小），一方面是方便计算其参与实验的体积便于进行实验操作，另一方面是为了节约成本。
（3）本发明中所用的质粒DNA和限制性内切酶是常用的实验用品，易于获得，成本合理。
附图说明
图1为二硫化钼的分子结构示意图。
图2为单酶切质粒-pET-30a+电泳结果图；图中泳道M是Marker，泳道1是未加MoS2的
对照组，泳道2、3、4的是加入终浓度为100μg/mL，200μg/mL，300μg/mL 的MoS2的实验组。
图3为双酶切质粒- PB2GW7.0电泳结果图；图中泳道M是Marker，泳道1未加
MoS2 的对照组，泳道2、3、4、5、6是加入MoS2终浓度分别为100μg/mL，200μg/mL， 300μg/mL，400μg/mL，500μg/mL的MoS2的实验组。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步说明，实施例是用于说明本发明，而不是用于限制本发明的范围。
实施例1：
（1）制备单层或多层MoS2具体步骤如下所示：
本实施例配制2mg/mL的MoS2，称取10mg的初始二硫化钼晶体，溶于盛有5mL超纯水的玻璃瓶中，超声≥2h，其中原始的二硫化钼晶体通过机械剥离法获得，即将具有层状结构的该材料与其他较硬的物质进行物理表面摩擦，从而获得薄层或单层材料，该纳米材料平均直径维持在176nm。
图1为二硫化钼的分子结构示意图。该材料的单层结构由共价键合的S-Mo-S六面体准二维网络组成。
（2）含有目的质粒的大肠杆菌的制备：
a．制备感受态细胞：从-70℃冰箱中取出冻存的大肠杆菌DH5α菌株，解冻后用无菌接种环蘸取菌种划平板，而菌种要迅速放回冰箱中。平板做好标记后于37℃培养箱中培养16小时。之后用灭菌后的枪头挑取单个菌落接种入装有5mL LB培养液的试管中，盖紧胶塞于37℃恒温摇床培养12小时。再将得到的细菌悬液转接于100mL LB培养液中，继续在37℃培养箱中震荡扩大培养3h, 测量细菌OD600，值为0.376（0.3-0.4较好）。将扩大培养后的培养物在冰上冷却10min,转入50mL离心管，4℃4000rpm离心10min，去上清液，加入10mL预冷的0.1mol/L的CaCl2溶液，轻轻吸打悬浮细胞，冰浴30min。然后4℃4000rpm离心10min，去上清，加入2mL预冷的15%甘油的0.1mol/L的CaCl2溶液再次悬浮细胞即制成感受态细胞，-70℃保存。
b．转化：将感受态细胞从-70℃冰箱中拿出，放冰块上解冻，在超净工作台中，取pET-30a+质粒1μL加超纯水9μL稀释，之后加入到100μL感受态细胞中，冰上放置30min，42℃热激（水浴）60s，再迅速放于冰上3min。加入不含卡那霉素（Kan）的LB培养液890μL，37℃摇床震荡1h，使细菌恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗性基因Kan。之后取出100μL培养液于含有Kan的LB平板上涂布均匀，在超净工作台中室温放置20min，37℃培养箱中倒置培养16h。取出平板挑取单个菌落，接种于加有Kan抗生素的5mL LB培养液中，37℃震荡培养16h（培养液中加入的抗生素与培养液总体积比为1:1000；该步骤使用的锥形瓶、培养基、试管等都要进行高压蒸汽灭菌121℃下灭菌30min）。其中pET-30a+质粒来自YouBia 优宝生物有限公司。
（3）提取目的质粒DNA：使用质粒试剂盒（TIANprep Mini Plasmid Kit质粒小提试剂盒，来自TIANGEN公司）提取培养液中大肠杆菌内的质粒DNA，之后测量所提质粒DNA的浓度为305.33ng/μL。
（4）设计单酶切反应体系：
1U酶切割1μg的质粒，酶的量不要超过酶切体系的1/10，酶切体系为20μL，根据步骤（3）中得到的质粒DNA的浓度计算出该酶切实验中所使用的酶量约为7U。单酶切所用质粒pET-30a+在本实验中采用的酶是EcoR.I，该酶在说明书中提及的单位为15U/μL，为方便操作，确定EcoR.I酶所加入的体积为1μL。
单酶切总反应体系为20μL，酶加1μL（EcoR.I酶），质粒加10μL，10×buffer加2μL，而剩余的7μL，由ddH2O 和 步骤（1）中所制备的MoS2混合组成。
（5）二硫化钼加入到酶切体系中：浓度为2mg/mL的MoS2 以1μL、2μL、3μL分别加入到步骤（4）中的酶切反应体系中，具体体积如下表所示：
表1. 单酶切反应体系中ddH2O和MoS2的用量
之后将20μL的酶切反应体系放置于37℃水浴锅中过夜，水浴时间不超过16小时。
（6）琼脂糖凝胶电泳：及时取出水浴锅中的酶切反应样品，进行电泳，琼脂糖凝胶配制1%的凝胶。上样量为10μL，其中包括1μL10×loading buffer, 8μL酶切反应后的样品，1μL的染料（溴化乙锭EB或SYBR Green Ⅰ)。上样，第一列加入10000bp的marker，依次几列逐步加入酶切后的上样样品，最后在100V，100mA下进行电泳30-40min。
（7）查看电泳条带结果：取出电泳后的凝胶，在凝胶成像系统下观察条带。
MoS2纳米材料对单链DNA具有较强的物理吸附作用，对双链DNA具有较弱的物理吸附作用，MoS2与酶上的-COOH等基团产生化学反应形成化学键，其对酶的活性产生了影响，导致了不完全酶切，所以无论单酶切还是双酶切，加了MoS2的结果是会产生多条带，且因为MoS2对DNA的吸附作用，条带相对较暗。
本实施例结果如图2所示：图中泳道1是未加MoS2 的样品，已经完全酶切，单酶切图像显示只有一条带，其大小为5422bp，而泳道2、3、4呈现的是加入MoS2的酶切电泳条带，其中MoS2终浓度分别对应为100μg/mL，200μg/mL， 300μg/mL，发现2、3、4泳道都存在多条条带，且最亮的条带不与标准完全酶切的亮条带对应，说明加入的MoS2对该单酶切实验具有阻碍作用，且泳道从左往右随着加入MoS2浓度的梯度增加，阻碍酶切愈加明显，条带愈加混乱，亮度越来越暗。
实施例2：
（1）本实施例配制1mg/mL的MoS2，称取10mg的初始二硫化钼晶体，溶于盛有10mL超纯水的玻璃瓶中，超声3h，其中原始的二硫化钼晶体通过机械剥离法获得，即将具有层状结构的该材料与其他较硬的物质进行物理表面摩擦，从而获得薄层或单层材料，该纳米材料平均直径维持在214nm。
（2）含有目的质粒的大肠杆菌的制备：
a.制备感受态细胞：步骤同实施例1（2）中a。
b.转化：将感受态细胞从-70℃冰箱中拿出，放冰块上解冻，在超净工作
台中，取PB2GW7.0质粒1μL加超纯水9μL稀释，之后加入到100μL感受态细胞中，冰上放置30min，42℃热激（水浴）60s，再迅速放于冰上3min。加入不含盐酸大观霉素（Spec）的LB培养液890μL，37℃摇床震荡1h，使细菌恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗性基因Spec。之后取出100μL培养液于含有Spec的LB平板上涂布均匀，在超净工作台中室温放置20min，37℃培养箱中倒置培养16h。取出平板挑取单个菌落，接种于加有Spec抗生素的5mL LB培养液中，37℃震荡培养16h（培养液中加入的抗生素与培养液总体积比为1:1000）（该步骤使用的锥形瓶、培养基、试管等都要进行高压蒸汽灭菌121℃下灭菌30min。）其中PB2GW7.0质粒由BioVector中国质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心-NTCC国家典型培养物保藏中心提供。
（3）提取目的质粒DNA: 使用质粒试剂盒（TIANprep Mini Plasmid Kit质粒小提试剂盒，来自TIANGEN公司）提取培养液中大肠杆菌内的质粒DNA，之后测量所提质粒DNA的浓度为327.56ng/μL。
（4）设计双酶切反应体系:
1U酶切割1μg的质粒，酶的量不要超过酶切体系的1/10，酶切体系为20μL，根据（3）中得到的质粒DNA的浓度计算出该酶切实验中所使用的酶量约为7U。双酶切所用质粒在本实验中采用的酶是EcoR.I和Hind.Ⅲ，EcoR.I酶和Hind.Ⅲ酶在说明书中提及的单位都为15U/μL, 为方便操作，确定EcoR.I酶所加入的体积为1μL, Hind.Ⅲ酶所加入的体积为1μL。
（5）二硫化钼加入到酶切体系中：浓度为2mg/mL的MoS2 以1μL、2μL、3μL、4μL，5μL分别加入到步骤（4）中的酶切反应体系中，具体体积如下表所示：
双酶切总反应体系为20μL, 两种酶各加1μL，质粒加10μL，10×buffer加2μL，而剩余的6μL，由ddH2O 和 （1）中所制备的MoS2混合组成。
表2. 双酶切反应体系中ddH2O和MoS2的用量
之后将20μL的酶切反应体系放置于37℃水浴锅中过夜，水浴时间不超过16小时。
（6）琼脂糖凝胶电泳：步骤同实施例1中（6）。
（7）查看电泳条带结果：取出电泳后的凝胶，在凝胶成像系统下观察条带，结果如图3所示： 图3为双酶切质粒- PB2GW7.0电泳后的条带图；图中泳道1是未加MoS2 的样品对照组，已经完全酶切，双酶切图像显示了两条带, 大小分别为9366bp和1516bp，而泳道2、3、4、5、6是加入MoS2后的酶切电泳条带，其中MoS2终浓度分别为100μg/mL，200μg/mL， 300μg/mL，400μg/mL，500μg/mL发现每一泳道都存在多条条带，且最亮的条带不与标准完全酶切的亮条带对应，说明加入的MoS2对该双酶切实验具有阻碍抑制作用，且泳道从左往右随着加入MoS2浓度的梯度增加，阻碍酶切愈加明显，条带愈加混乱，亮度越来越暗。
Claims (9)
1.一种抑制DNA酶切的方法，其特征在于，所述抑制DNA酶切的材料为二硫化钼。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体的，包括如下步骤：
（1）二硫化钼的制备：制备薄层或单层二硫化钼纳米材料；
（2）含有目的质粒DNA的大肠杆菌的培养：将含有酶切质粒的细菌菌液放置于LB培养基中，之后将培养基放于摇床中过夜培养；
（3）目的质粒DNA的提取：提取步骤（2）所述含有酶切质粒细菌内的质粒DNA，之后测量所提质粒DNA的浓度，计算酶切反应所需的酶量；
（4）酶切反应：配制酶切反应体系，向反应体系加入MoS2材料，之后将混合后的反应体系放置于水浴锅里进行酶切过夜。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的细菌为大肠杆菌。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述酶切质粒为单酶切质粒或双酶切质粒。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述单酶切质粒为pET-30a+；所述双酶切质粒为PB2GW7.0质粒。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述LB培养基中含有卡那霉素Kan或盐酸大观霉素Spec，以保证含有单酶切质粒和双酶切质粒的细菌正常生长。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中所述酶切反应所需的酶量按照1U酶切割1μg的质粒，酶的用量不超过酶切体系的1/10。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中所述MoS2材料制备为溶液形式，浓度为1-5μg/mL。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤（4）中所述MoS2溶液浓度为2mg/mL。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110079522A (zh) * | 2019-05-14 | 2019-08-02 | 南方科技大学 | 一种单层二硫化钼的使用方法和dna的切割方法 |
| CN117363607A (zh) * | 2023-10-07 | 2024-01-09 | 清华大学深圳国际研究生院 | 一种低维纳米材料在dna特异性位点的识别剪切上的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106754310A (zh) * | 2016-12-28 | 2017-05-31 | 苏州旷世骏弛生物科技有限公司 | 一种dna聚合酶试剂盒 |
| CN106854676A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-06-16 | 江苏大学 | 一种基于酶切检测snp的方法 |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106854676A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-06-16 | 江苏大学 | 一种基于酶切检测snp的方法 |
| CN106754310A (zh) * | 2016-12-28 | 2017-05-31 | 苏州旷世骏弛生物科技有限公司 | 一种dna聚合酶试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 方爱心: ""二硫化钼与DNA、酶结合作用的研究"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库工程科技Ⅰ辑》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110079522A (zh) * | 2019-05-14 | 2019-08-02 | 南方科技大学 | 一种单层二硫化钼的使用方法和dna的切割方法 |
| CN117363607A (zh) * | 2023-10-07 | 2024-01-09 | 清华大学深圳国际研究生院 | 一种低维纳米材料在dna特异性位点的识别剪切上的应用 |
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