CN116240231A - 一种纳米酶级联反应系统及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体为一种纳米酶级联生物反应系统及其制备方法和应用，本发明提供的一种纳米酶级联反应系统的制备方法，包括：构建功能性酶表达载体；将所述功能性酶表达载体转入趋磁微生物中，得到重组微生物；所述功能性酶包括葡萄糖氧化酶、谷胱甘肽氧化酶、氧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、乳酸氧化酶中的至少一种；本发明所述重组微生物利用基因工程技术在趋磁细菌胞内表达外源基因，降解葡萄糖为过氧化氢；利用其合成的磁小体纳米酶降解过氧化氢为活性氧自由基。本发明可以实现在肿瘤内的级联反应，抑制肿瘤生长。

Description

一种纳米酶级联反应系统及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体为一种纳米酶级联生物反应系统及其制备方法和应用。
背景技术
2007年，Fe3O4磁性纳米颗粒首次被证实具有类似于天然辣根过氧化物酶(HRP)的催化活性。因此有学者提出了“纳米酶”这一概念，即一类具有催化活性的人工模拟酶。到目前为止，已发现多种纳米材料都具有氧化还原酶活性，包括过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、氧化酶、谷胱甘肽氧化酶、葡萄糖氧化酶(GOD)等。基于广阔的催化活性，纳米酶在肿瘤催化治疗方面扮演着重要的角色。
研究已证实，过量的活性氧自由基(ROS)能诱导肿瘤细胞氧化应激，抑制肿瘤生长，达到对肿瘤治疗效应。Fe3O4磁性纳米颗粒在酸性条件下通过芬顿反应(Fenton反应)催化H2O2生成过量的活性氧自由基。然而，研究发现肿瘤微环境中内源性H2O2含量过低和弱酸性环境致使磁性纳米颗粒所依赖的Fenton/类Fenton反应不能被有效地触发。一种有效的解决途径即是提高肿瘤内部H2O2含量。研究证实肿瘤内部含有大量的葡萄糖，以支持肿瘤快速生长。基于这个事实，可以利用GOD催化葡萄糖分解产生大量的H2O2，为Fenton/类Fenton反应提供足够的反应底物，从而提高ROS产量，以达到更好的肿瘤抑制效果。基于上述研究成果或事实，需要将纳米酶和GOD同时引入到肿瘤组织内部。有学者提出将Fe3O4纳米酶和GOD联合使用构建级联反应系统。研究结果表明，将Fe3O4纳米酶与GOD或具有GOD活性的金纳米酶颗粒组装到介质材料中，构建双酶触发的级联反应平台；待靶向肿瘤微环境后，GOD催化肿瘤组织中过量葡萄糖分解为过量的H2O2，进一步被Fe3O4纳米酶降解为大量的ROS用于肿瘤治疗。
虽然级联反应表现出增强的抗肿瘤效应，但是天然GOD纯化效率低而且纯化后稳定性较差致使后续的表面修饰困难，或者在不影响酶活性的情况下纳米酶级联系统内各组件间的优化布置也是一个问题。此外，通过化学方法合成纳米酶也相对较为繁琐。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于提供一种纳米酶级联生物反应系统及其制备方法和应用。
为此，本发明提供了如下的技术方案：
一种纳米酶级联反应系统的制备方法，包括：
构建功能性酶表达载体；
将所述功能性酶表达载体转入趋磁微生物中，得到重组微生物；
所述功能性酶包括葡萄糖氧化酶、谷胱甘肽氧化酶、氧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、乳酸氧化酶中的至少一种。
可选的，所述功能性酶的基因中融合有磁小体膜蛋白的基因。
可选的，所述磁小体膜蛋白的基因为磁小体跨膜蛋白Mms6、Mms13、Mms16、Mms22、MamY、MamM和MamB基因中的任意一种。
可选的，所述磁小体膜蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
可选的，所述趋磁微生物为能够受到外加磁场的引导的微生物。
可选的，趋磁微生物为趋磁细菌。
趋磁细菌是一类革兰氏阴性原核生物，生长于淡水、湖泊或者海洋沉积物中，具有广泛的生态性；其种类和形态多样，有球状、杆状、弧菌状、螺旋状、多细胞样等；能合成成链状排列并具有磁偶极矩的磁性纳米颗粒——磁小体(Magnetosome)。趋磁细菌对氧浓度特别敏感，具有负趋氧特性，属于微好氧、厌氧或者兼性厌氧菌；同时其也能够借助于自身合成的磁小体(是一种生物膜包被的Fe3O4或Fe3S4晶体颗粒，大小均一(30-70nm)，处于稳定的单磁畴晶体范围)沿地磁场排列并依靠鞭毛在地磁场或外加磁场中沿磁力线定位并做定向运动，这种能力称为趋磁性。
可选的，趋磁微生物为AMB-1、MSR-1或MS-1。
可选的，还包括培养所述重组微生物，从重组微生物培养液中提取纳米酶级联反应系统的步骤。
本发明所述的纳米酶级联反应系统的制备方法制备得到的纳米酶级联反应系统。
本发明所述的纳米酶级联反应系统的制备方法制备得到的纳米酶级联反应系统具有如下的用途：
(1)、在制备抑制肿瘤的药物中的用途；
(2)、在制备降解过氧化氢的药物中的用途。
可选的，在制备抑制纤维神经瘤的药物中的用途。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的一种纳米酶级联反应系统的制备方法，能够通过构建功能性酶表达载体，将其转入趋磁微生物中，得到重组微生物；所述重组微生物能够在趋磁微生物胞内表达功能性酶的外源基因，生成磁小体纳米酶，进而降解葡萄糖为过氧化氢；然后利用上述合成的磁小体纳米酶降解过氧化氢为活性氧自由基，从而可以实现在肿瘤内的级联反应，抑制肿瘤生长。
相比较地，目前现有技术仅利用普通磁性纳米颗粒制作纳米酶系统，本发明制备得到的纳米酶级联反应系统更加系统地利用趋磁细菌的自主泳动性、趋磁性(或可控性)、基因可编辑性以及磁小体纳米酶活性，可在实际应用中发挥最大效能，施加稍高于地磁场强度的磁场即可引导趋磁细菌，利于靶向控制到达病灶部位。相较于通过化学方法或人工包被构建的纳米酶系统，本发明利用趋磁细菌这种活体生物自主合成纳米酶系统，能使纳米酶系统具有高均匀性、高稳定性、高酶活性、操作简单、避免反复操作(后续只需培养细菌即可)等优点。
2.本发明提供的一种纳米酶级联反应系统的制备方法，所述功能性酶通过趋磁微生物表达外源基因所得到，该酶能够表达于趋磁微生物所合成的磁小体膜上，也可表达于趋磁微生物胞质中。
进一步的，通过在所述功能性酶的基因中融合有磁小体膜蛋白的基因，可以将酶表达于趋磁微生物所合成的磁小体膜上。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1趋磁细菌AMB-1胞质中表达GOD的纳米酶级联反应系统；
图2趋磁细菌AMB-1磁小体膜上表达GOD的纳米酶级联反应系统。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
表达载体pBBR1MCS-2购自湖南科爱医疗器械有限公司旗下网站(优宝生物)。
趋磁细菌AMB-1为市购产品。
DAP购自西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司。
Mms13 DNA由如下方法制备：用细菌基因组DNA提取试剂盒(购自天根生化科技(北京)有限公司)提取趋磁细菌AMB-1基因组DNA，作为模板扩增Mms13基因序列。设计正向引物为：5’-atgcatatgccctttcaccttg-3’(如SEQ ID NO.6所示)，反向引物为：5’-ggccagttcgtcccg-3’(如SEQ IDNO.7所示)，该PCR扩增体系为：2×pfu Mix(购自天根生化科技(北京)有限公司)，25μl；正向引物(浓度为10μM)，1.25μl；反向引物(浓度为10μM)，1.25μl；双蒸水，21.25μl；抽取的AMB-1基因组DNA，1.25μl。反应条件为：预变性95℃保持5min；变性95℃保持30s，退火48℃保持45s，延伸72℃保持60s，30个循环；最终延伸72℃保持10min；4℃保存。得到的扩增产物即为Mms13基因(Mms13 DNA)。
实施例1趋磁细菌AMB-1胞质中表达GOD构建纳米酶级联反应系统
1、设计引物(包含HindⅢ和BamHⅠ两个酶切位点)，正向引物为：5’-cccaagcttatgcggtccgccagctac-3’(如SEQ ID NO.1所示)，反向引物为：5’-cgggatccctactgagaagcagcataatccgcc-3’(如SEQ ID NO.2所示)；(横线部分分别为HindⅢ和BamHⅠ两个酶切位点)。
2、克隆人葡糖糖氧化酶基因，该葡萄糖氧化酶基因为：5’-atgcggtccgccagctacct catcctccca tttgcaagcg cggcgcacgc cctgacctcc gcatcccaactcgacatccagccggacctc ctcagcaacc ccctcgatgt cgccaacaaa accttcgact acatcattgcaggcggcggcctgacaggcc taaccgtagc cgccaagctg accgagaacc caaacatctc cgtcctagtcattgagcgagggttctacga gtccaacgac ggacccatca tcgaagaccc aaccaagtac ggcgagatcttcggcacaagcgcagaccag aacttcctca ccgtcccact aatcaacaac cgcaccgagc tcatcaagtccggcaaaggccttggcggtt cgaccctcgt gaacggcaac tcgtggactc ggccggacaa ggtccagattgattcgtgggagagcgtatt cggaatggag gggtggaatt gggatggcgt gtttgagtat atgaatcagggcgagcgggctcgtgagccc actgaagccc agattgctgc tgggcactac tttgacccgt cttgccatgggttcaatggaacagtccatg ccgggtacag ggacaccggc gaagagtggt ccccgctcat gagggcgctaatgaacaccacgtctgacat gggcgttccg acccaggtgg acatgctatg cggccatccg cgcggtgtctccatgatccagaacaatctg ctagagaacc aggtccgcgc ggacgccgcg cgcgaatggc tcctccccacctaccagcgccgcaacctga aagtcctcac gggccaggac gtcggcaggg ttcttttcca ggactcgcagtctcagtcagccgatgccga gctcaaagcc atcggcgtca acttcggcac ccacaagtcc gtcaacttcaacgcctacgctacccacgag gtcctcctcg ccgctggctc cgccatctcc cccctgatcc tggagtactccggcatcgggctcaagtccg tcctcgacaa cgcaaacatc acccaactcc tcgacctccc cgtcggccagaacatgcaggaccaaaccac cacgaccgtg caggcccgca gcacgcgcgc tggctacggccaaggccaagccgtctactt cgccaacatc accgagacat tcggcgagga tgccccccgc gccattgagctcctaaacacgaagctggac cagtgggcgg aggagacagt ggcccatggt gggttccaca atgtcacggccctgaaagcccagtacgagc tctaccgcac ctggatccta gatgacgacg tcgccttcgc cgagctcttcatggacgcctcgggcgtcat gaaattcgac atctgggatc tcctcccctt cgcgcggggc tcgacgcacgtcctctcctcggacccgtac ctatggcaat tcgccaacga ccccaagttc tacttcaacg agctcgacgtcctcggccaagcggccgcca cgaaactcgc ccgtgagctc cagaataccg gcgcaatggc ccagtattttgacggcgaggtggtgcctgg cgagaacctt gcgtccgatg cggatttgga ccagtgggct gaatacgtccagcgcaacttccgcgcgaat taccatgctg ttgggacgtg ctcgatgatg gcgagggaga tgggtggtgttgttgatgctaaggctaggg tgtacgggac aaaggggctc cgggtggttg atgggtcgat tccgccgacgcagctttcgtcgcatgttat gactgtgttt tatgggatgg cgttgaagat tgcggatgct gtggtggcggattatgctgcttctcagtag-3’(如SEQ ID NO.3所示)。该PCR扩增体系为：2×pfu Mix(购自天根生化科技(北京)有限公司)，25μl；正向引物(SEQ ID NO.1，浓度为10μM)，1.25μl；反向引物(SEQ ID NO.2，浓度为10μM)，1.25μl；双蒸水，21.25μl；模板DNA质粒(含有葡萄糖氧化酶基因(SEQ ID NO.3)的质粒，购自优宝生物)，1.25μl。反应条件为：预变性95℃保持5min；变性95℃保持30s，退火55℃-65℃保持30s，延伸72℃保持60s或90s，40个循环；最终延伸72℃保持10min；4℃保存。
3、通过HindⅢ和BamHⅠ两个内切酶同时酶切GOD基因(上述步骤2中获得的PCR扩增产物)和表达载体pBBR1MCS-2，酶切的反应体系为：HindⅢ(酶活力：15U/μl)和BamHⅠ(酶活力：15U/μl)两个酶各2μl，10×酶切缓冲液(购自天根生化科技(北京)有限公司)5μl，待酶切目标物(步骤2中所获得GOD产物10μl或表达载体pBBR1MCS-2体积10μl)，双蒸水31μl。反应条件为16℃保持4h。酶切产物进行琼脂糖凝胶分离回收，分别获得酶切后分离的DNA与表达载体pBBR1MCS-2。
4、将3中酶切后分离的DNA与表达载体pBBR1MCS-2混合连接，连接体系为：10×T4DNA Ligase Buffer，2μl；表达载体pBBR1MCS-2，50ng；酶切后分离的DNA，50ng；T4DNALigase，1μl；加双蒸水至20μl。连接条件为16℃过夜。形成包含GOD基因的新表达载体pBBR1MCS-2-GOD；
5、将上述所构建的表达载体pBBR1MCS-2-GOD通过热击法转化进二氨基庚二酸(DAP)营养缺陷型大肠杆菌(E.coli)WM3064(市购)。具体为：将-70℃超低温冰柜保存的一管100μl二氨基庚二酸(DAP)营养缺陷型感受态大肠杆菌(E.coli)WM3064立即融化后置于冰上，冰浴10min，加入5μl新表达质粒pBBR1MCS-2-GOD，轻轻震荡后放置冰上30min后迅速插入42℃水浴中1.5min进行热休克，然后迅速放回冰中，静置2min。在超净工作台中向上述混合液中加入500μl含DAP(浓度为300μM)的LB培养基(不含抗菌素)轻轻混匀37℃震荡培养至OD600(在600nm波长下测得的OD值)达到0.5，得到重组的WM3064菌株。
6、将上述500μl OD600为0.5的重组的WM3064菌株用LB培养基洗涤2次后与20ml趋磁细菌AMB-1(OD600为0.08，约1×108个细胞)混匀离心至终体积为80μl进行表达质粒接合转移。
7、将步骤6中获得菌株利用涂布棒涂至含有50μg/mL卡那霉素(Kanamycin)的增强型趋磁螺菌生长培养基(EMSGM培养基，市售)平板30℃培养7-10天后筛选阳性克隆。
8、扩大培养后通过超声破碎获取葡萄糖氧化酶蛋白，经过蛋白质免疫印迹(Western Blot)方法进行鉴定。
9、通过大规模培养步骤7中的阳性克隆趋磁细菌即得趋磁细菌AMB-1胞质中表达GOD的纳米酶级联反应系统，其示意图如图1所示。
实施例2趋磁细菌磁小体膜上表达GOD构建纳米酶级联反应系统
1、克隆人葡糖糖氧化酶基因,该葡萄糖氧化酶基因与实施例1中的葡糖糖氧化酶基因(如SEQ ID NO.3所示)相同；
2、选取趋磁细菌AMB-1磁小体膜上跨膜蛋白Mms 13跨膜区作为锚定蛋白，Mms 13跨膜区基因序列为：5’-gccgacgg tttccttgcc ggtatcgatg gccgcttcgg tattggtgatgcgcttttcc ttcaggaggc ggacgttctt ggccaaggcg gcggcgccgc cgaccagggc gccgagaacgccgacgccg ggaacggatt tcgccagata gggggcaag gtgaaagggc at-3’(如SEQ ID NO.4所示),将其5’端与葡萄糖氧化酶基因的3’端连接形成融合基因，两端包含HindⅢ和BamHⅠ两个酶切位点，所使用的引物有：正向引物为5’-cccaagcttatgcggtccgccagctac-3’(横线部分为HindⅢ酶切位点，如SEQ ID NO.1所示)，反向引物为5’-cgggatccatgccctttcaccttgccccctatct-3’(横线部分为BamHⅠ酶切位点，如SEQ ID NO.8所示)，连接引物为5’-aggaaaccgtcggcctgagaagcagcataat-3’(如SEQ ID NO.5所示)。首先以正向引物和连接引物为引物，获得第一个PCR产物，反应体系为：2×pfu Mix，25μl；正向引物(SEQ ID NO.1，浓度为10μM)，体积为2.5μl；连接引物(SEQ ID NO.5，浓度为10μM)，2.5μl；双蒸水17.5μl；GODDNA质粒(含有葡萄糖氧化酶基因(SEQ ID NO.3)的质粒，购自优宝生物)，1.25μl；Mms13DNA，1.25μl；反应条件为：预变性95℃保持5min；变性95℃保持30s，退火55℃-65℃保持60s，延申72℃保持90s，30个循环；最终延伸72℃保持10min；4℃保存，得到第一个PCR产物。其次，以正向引物和反向引物为引物，以第一个PCR产物为模板获得GOD-Mms13融合基因，反应体系为：2×pfu Mix，25μl；正向引物(SEQ ID NO.1，浓度为10μM)，1.25μl；反向引物(SEQID NO.8，浓度为10μM)，1.25μl；双蒸水，21.25μl；第一个PCR产物，1.25μl；反应条件为：预变性95℃保持5min；变性95℃保持30s，退火55℃-65℃保持30s，延伸72℃保持60s或90s，40个循环；最终延伸72℃保持10min；4℃保存，得到GOD-Mms13融合基因。
3、通过HindⅢ和BamHⅠ两个内切酶分别酶切GOD-Mms13融合基因和表达载体pBBR1MCS-2，酶切的反应体系为：HindⅢ(酶活力：15U/μl)和BamHⅠ(酶活力：15U/μl)两种酶各2μl，10×酶切缓冲液5μl，步骤2中所获得GOD-Mms13融合基因产物或表达载体pBBR1MCS-2 10μl，双蒸水31μl。反应条件为16℃保持4h。酶切产物分别进行琼脂糖凝胶分离回收。
4、将3中酶切后回收的GOD-Mms13融合基因与表达载体pBBR1MCS-2混合连接，连接体系为：10×T4 DNALigase Buffer，2μl；酶酶切后的表达载体pBBR1MCS-2，50ng；酶切后的GOD-Mms13融合基因，50ng；T4 DNALigase，1μl；加双蒸水至20μl。连接条件为16℃过夜。形成包含融合基因的新表达载体pBBR1MCS-2-mGOD。
3、将上述所构建的表达载体pBBR1MCS-2-mGOD通过热击法转化进二氨基庚二酸(DAP)营养缺陷型大肠杆菌(E.coli)WM3064。具体为：将-70℃超低温冰柜保存的一管100μl二氨基庚二酸(DAP)营养缺陷型感受态大肠杆菌(E.coli)WM3064立即融化后置于冰上，冰浴10min，加入5μl新表达质粒pBBR1MCS-2-mGOD，轻轻震荡后放置冰上30min后迅速插入42℃水浴中1.5min进行热休克，然后迅速放回冰中，静置2min。在超净工作台中向上述混合液重分别加入500μl含DAP(浓度为300μM)的LB培养基(不含抗菌素)轻轻混匀37℃震荡培养至OD600达到0.5，得到重组的WM3064菌株。
4、将上述500μl OD600为0.5的WM3064菌株用LB培养基洗涤2次后与20ml趋磁细菌AMB-1(OD600为0.08，约1×108个细胞)混匀离心至终体积为80μl进行表达质粒接合转移。
5、利用涂布棒涂至含有50μg/mL卡那霉素(Kanamycin)的EMSGM平板30℃培养7-10天后筛选阳性克隆。
6、扩大培养后通过超声破碎获取磁小体后，通过膜蛋白提取试剂盒(NO.C500049)进一步获取其膜蛋白，经过Western Blot方法进行鉴定。
7、通过大规模培养步骤5中的阳性克隆趋磁细菌，然后于8000rpm离心10min获得趋磁细菌后施加超声进行破碎2次，每次超声条件为：功率180W、工作5s、暂停9s，重复99次；超声破碎完成后，用钕磁铁(NdFeB)磁铁进行富集，其示意图如图2所示(图2中为阳性克隆趋磁细菌超声破碎前)。
实验例
本实验例对本发明的纳米酶级联反应系统的考察
1、实验材料
供试品：实施例1制备的纳米酶级联反应系统；实施例2制备的纳米酶级联反应系统；
实验试剂和仪器：CCK8试剂盒，购自AbMole公司；
肿瘤细胞：小鼠成纤维神经瘤细胞Neuro2a，购自中国Infrastructure of CellLine Resources；
多功能酶标仪：购自BIO-RAD；
恒温培养箱：购自SANYO。
2、实验方法
取对数生长期的肿瘤细胞Neuro2a进行消化计数后，按照10000个/孔的数量接种于96孔板中，然后按照每孔10μL加入实施例1中的阳性克隆趋磁细菌(经扩大培养离心后的密度为107个/μL)或实施例2中的阳性克隆趋磁细菌(经扩大培养离心后的密度为107个/μL)，同时设置空白对照组(生理盐水)，于培养箱中37℃，5％ CO2条件下分别孵育12、24、48小时，待孵育结束，向每孔中加入CCK-8溶液10μL/孔，孵育4小时后，然后采用多功能酶标仪在450nm波长下测定吸光度，计算细胞存活率。
细胞存活率的计算公式为：
细胞存活率(％)＝实验组吸光度/空白对照组吸光度×100％。
上述实验进行三次平行实验，记录数据，采用SPSS软件进行数据处理。
3、实验结果
实验结果见下表。
表1、细胞存活率
12小时(％) 24小时(％) 48小时(％)
实施例1 95-100 79-86 59-68
实施例2 97-100 73-82 53-64
由上表可以看出，随着孵育的时间增加，细胞存活率明显降低，细胞活力明显下降，说明本发明的纳米酶级联反应系统能够明显抑制肿瘤细胞的活性。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种纳米酶级联反应系统的制备方法，其特征在于，包括：
构建功能性酶表达载体；
将所述功能性酶表达载体转入趋磁微生物中，得到重组微生物；
所述功能性酶包括葡萄糖氧化酶、谷胱甘肽氧化酶、氧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、乳酸氧化酶中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的纳米酶级联反应系统的制备方法，其特征在于，所述功能性酶的基因中融合有磁小体膜蛋白的基因。
3.根据权利要求2所述的纳米酶级联反应系统的制备方法，其特征在于，所述磁小体膜蛋白的基因为磁小体跨膜蛋白Mms6、Mms13、Mms16、Mms22、MamY、MamM和MamB基因中的任意一种。
4.根据权利要求2或3所述的纳米酶级联反应系统的制备方法，其特征在于，所述磁小体膜蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
5.根据权利要求1-4任一项所述的纳米酶级联反应系统的制备方法，其特征在于，所述趋磁微生物为能够受到外加磁场引导的微生物。
6.根据权利要求1-5任一项所述的纳米酶级联反应系统的制备方法，其特征在于，趋磁微生物为趋磁细菌。
7.根据权利要求1-6任一项所述的纳米酶级联反应系统的制备方法，其特征在于，趋磁微生物为AMB-1、MSR-1或MS-1。
8.根据权利要求1-7任一项所述的纳米酶级联反应系统的制备方法，其特征在于，还包括培养所述重组微生物，从重组微生物培养液中提取纳米酶级联反应系统的步骤。
9.如权利要求1-8任一项所述的纳米酶级联反应系统的制备方法制备得到的纳米酶级联反应系统。
10.权利要求1-8任一项所述的纳米酶级联反应系统的制备方法制备得到的纳米酶级联反应系统具有如下的用途：
(1)、在制备抑制肿瘤的药物中的用途；
(2)、在制备降解过氧化氢的药物中的用途；
可选的，在制备抑制纤维神经瘤的药物中的用途。
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