CN109182215A - 一株地衣芽孢杆菌菌株及其在抑制细菌性病原菌中的应用 - Google Patents

一株地衣芽孢杆菌菌株及其在抑制细菌性病原菌中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株地衣芽孢杆菌菌株，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，命名为地衣芽孢杆菌MR‑1(Bacillus licheniformis MR‑1)，其在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为GDMCC No：60393，保藏时间为2018年6月25日。该菌株具有一定的益生性，对于细菌性病原菌有一定的抑制性，可用于抑制细菌性病原菌。本发明还公开一种地衣芽孢杆菌MR‑1在抑制细菌性病原菌中的应用，有力的解决了使用抗生素带来的细菌抗药性及药物残留对人体健康的损害问题，甚至可以制作成益生菌饲料添加剂，有助于推进油茶枯饼在饲料中的应用，增加资源利用率。

Description

一株地衣芽孢杆菌菌株及其在抑制细菌性病原菌中的应用
技术领域
本发明属于微生物工程技术领域，尤其涉及一株地衣芽孢杆菌菌株及其在抑制细菌性病原菌中的应用。
背景技术
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)是芽孢杆菌中较具应用潜力的菌种之一。近年来，国内外对于地衣芽孢杆菌各方面应用的报道日益增多。在医药、饲料加工、农药等行业，取得了较好的研究成果。地衣芽孢杆菌具有调节动物微生态平衡，促进肠道有益菌生长，降低病原菌的数量，增加动物机体的抗病力，提高机体的免疫功能的作用。
目前，使用抗生素带来的细菌抗药性及药物残留对人体健康的损害问题日益严重，急需要寻找一种无毒，无副作用，并对如肠沙门氏菌肠亚种(Salmonella entericasubsp.Enterica)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等细菌性病原菌具有抑制作用的天然生长促进剂，来代替抗生素以减少抗生素的使用量。这对医药、饲料加工、农药领域来说具有十分重要的现实意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一株地衣芽孢杆菌菌株及其在抑制细菌性病原菌中的应用。
为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为提供一株地衣芽孢杆菌菌株，该地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其命名为地衣芽孢杆菌MR-1(Bacillus licheniformis MR-1)，其在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为GDMCC No：60393，保藏时间为2018年6月25日，保藏单位的地址位于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所。
上述的地衣芽孢杆菌MR-1(Bacillus licheniformis MR-1)是从新鲜幼猪猪粪中分离纯化获得，在NA平板上，30℃培养一段时间后，菌落形态呈白色，扁平状，透明性差。显微镜观察呈现细胞呈杆状，革兰氏染色为阳性。
上述的地衣芽孢杆菌MR-1(Bacillus licheniformis MR-1)的DNA基因序列，见SEQ ID NO.1所示。
上述的地衣芽孢杆菌MR-1(Bacillus licheniformis MR-1)，其16SrDNA序列在Genbank数据库中用BLAST进行同源性分析，得到相似性较高的序列，运用MEGA6.06软件构建系统发育树；测得该菌与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)(KY433888.1)相似性达到98％，证明该菌株属于地衣芽孢杆菌属，结合形态学鉴定为地衣芽孢杆菌MR-1(Bacillus licheniformis MR-1)。
基于一个总的技术构思，本发明还相应提供一种上述的地衣芽孢杆菌菌株在抑制细菌性病原菌中的应用。
上述的应用，优选的，所述应用的方法具体包括如下步骤：挑取活化后的地衣芽孢杆菌MR-1的单菌落菌丝，于液体NA培养基中进行扩繁培养，将得到的种子液接种到液体发酵培养基中进行发酵培养，得到地衣芽孢杆菌MR-1发酵菌液，将所述地衣芽孢杆菌MR-1发酵菌液与细菌性病原菌进行接触，即实现对细菌性病原菌的抑制。
优选的，所述地衣芽孢杆菌MR-1的活化方法包括以下步骤：在无菌环境下，取一株产蛋白酶短小的地衣芽孢杆菌MR-1挑取一环在固体NA培养基上划线，在28-35℃条件下倒置培养18-24h后，得到活化的地衣芽孢杆菌MR-1。
更优选的，所述固体NA培养基的组分包括牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂和去离子水，所述牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂和去离子水的质量比为(3-4):(8.9-10.2):(3.5-5):(19-21):1000，所述固体NA培养基的pH为6.8-7.2。
优选的，所述液体NA培养基的组分包括牛肉膏、蛋白胨、氯化钠和去离子水，所述牛肉膏、蛋白胨、氯化钠和去离子水的质量比为(3-4):(8.9-10.2):(3.5-5):1000，所述液体NA培养基的pH为6.8-7.2。
优选的，所述液体发酵培养基的组分包括干酪素、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠和去离子水，所述干酪素、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠和去离子水的质量比为(3-4):(2.5-3.5):(8.9-10.2):(3.5-5):1000，所述液体发酵培养基的pH值为7.2-7.4。
优选的，所述扩繁培养的温度为28-35℃，扩繁培养的时间为18-24h，扩繁培养时摇床震荡的转速为160-180r/min。
优选的，所述发酵培养的接种量为5-15％，发酵培养的温度为25-30℃，发酵培养的时间为2-4d，发酵培养时摇床震荡的转速为160-180r/min，液体发酵培养基在接种前先经过20-30min的121℃灭菌处理。
优选的，所述细菌性病原菌包括肠沙门氏菌肠亚种(Salmonella entericasubsp.Enterica)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的一种或多种。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的地衣芽孢杆菌MR-1，具有一定的益生性，对于肠沙门氏菌肠亚种(Salmonella enterica subsp.Enterica)，产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，大肠杆菌(Escherichia coli)，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等细菌性病原菌有一定的抑制性，可用于抑制细菌性病原菌，有力的解决了使用抗生素带来的细菌抗药性及药物残留对人体健康的损害问题，甚至可以制作成益生菌饲料添加剂，有助于推进油茶枯饼在饲料中的应用，增加资源利用率。
一株地衣芽孢杆菌菌株，其命名为地衣芽孢杆菌MR-1(BacilluslicheniformisMR-1)，保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称GDMCC)，其在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为GDMCC No：60393，保藏时间为2018年6月25日，保藏单位的地址位于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是实施例中地衣芽孢杆菌MR-1的菌落形态图。
图2是实施例中地衣芽孢杆菌MR-1的革兰氏染色图。
图3是实施例中地衣芽孢杆菌MR-1的16S rDNA序列构建的系统发育树图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本发明做更全面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体实施例。
除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
实施例：
本发明提供的一株地衣芽孢杆菌菌株，其命名为地衣芽孢杆菌MR-1(Bacilluslicheniformis MR-1)，保藏于广东省微生物菌种保藏中心(简称GDMCC)，其在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为GDMCC No：60393，保藏时间为2018年6月25日，保藏单位的地址位于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所。
1、菌株的筛选
1)取新鲜幼猪猪粪1g，加入到99ml无菌水中并在90℃水中震荡20min，梯度稀释，取10-8、10-9、10-10梯度涂布到NA培养基上，30℃培养24h，挑取形态大小不一的菌落进行保存；
2)对上述获得的菌株接种至酪蛋白培养基上，选取透明圈直径较大的菌落进行保存，即为地衣芽孢杆菌MR-1(Bacillus licheniformis MR-1)。
2、菌株的鉴定
本发明对实施例提供的菌株进行了鉴定，该鉴定包括以下内容：
1)形态学鉴定
将菌株接种到NA平板上，30℃培养24h，观察记录平板上菌落的生长情况。如图1所示，菌株的菌落特征大体上如下：菌落形态呈白色，扁平状，透明性差。如图2所示，显微镜观察呈现细胞呈杆状，革兰氏染色为阳性。
2)生理生化鉴定
接触酶实验：直接滴加3％的过氧化氢于菌株的液体培养物(24h)中，立即观察，有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性。菌株立即产生大量气泡，实验结果为阳性。
淀粉水解实验：菌种点接至淀粉培养基上，30℃培养48h，滴加少量碘液于平板，轻轻旋转，使碘液均匀分布于平板，观察。菌落周围出现无色透明圈表明有水解淀粉的能力，反之，没有。菌株菌落周围无透明圈产生，不能水解淀粉，为阴性。
甲基红MR实验：挑取新的待试纯培养物少许，接种于通用培养基，培养于30℃，3～5天，取培养液1ml，加甲基红指示剂1～2滴，阳性呈红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。菌液变为红色，为阳性。
VP实验：挑取新纯培养物少许，接种于通用培养基，于30℃培养2d、培养液2.5ml先加入a萘酚纯酒精溶液0.6ml，再加40％氢氧化钾水溶液0.2ml，摇动2～5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或30℃恒温箱，如2h内仍不显现红色，可判定为阴性。菌液未变色，为阴性。
明胶液化实验：取新纯培养物，穿刺接种于明胶高层约2/3深度，另有两支未接种的空白对照。20℃下培养3～5d。每天观察结果，若细菌生长且明胶部分或全部变为可流动的液体，则为试验阳性，否则为阴性。明胶不被液化，为阴性。
硝酸盐还原实验：将培养物接种于硝酸盐肉汤培养基，28℃摇床培养3d，取5mL培养液，按试剂盒(海博生物技术有限公司硝酸盐还原试剂盒)说明加入显色剂，变黄为阳性，不变色为阴性。菌液变色，为阳性。
产硫化氢实验：将待检菌穿刺接种于醋酸铅培养基，于35℃培养24～48h观察结果。培养基变黑为阳性，不变为阴性。培养基未变色，为阴性。
纤维素分解实验：将待测菌株划线接种于添加0.8％纤维素粉的琼脂基础培养基上，以不接种的培养基作为空白对照，30℃培养1～2周，菌株能在培养基上生长，实验结果为阳性；反之为阴性。菌株不生长，为阴性。
综上，生理生化鉴定结果如表1。
表1本菌株的生理生化鉴定结果
表性特征 反应特征
接触酶测定 +
淀粉水解测定 -
甲基红MR测定 +
VP实验 -
明胶液化测定 -
硝酸盐还原测定 +
产硫化氢测定 -
纤维素分解 -
其中，+表示为本菌株有反应或可以利用，-表示为本菌株没有反应或不可以利用。
3)菌株的16SrDNA序列测定
本发明实施例利用细菌DNA提取试剂盒提取候选菌株DNA，采用细菌扩增通用引物16SF和16SR扩增细菌的16SrRNA；PCR反应体系(50μL)为10×PCRbuffer 5μL，DNA模板1μL，dNTP(2.5mmol/L)4μL，MgCl2(25mmol/L)3μL，引物(1mmol/L)各1μL，Taq DNA聚合酶0.5μL，加ddH2O至50μL；反应条件为94℃5min，94℃30s，53℃30s，72℃1min，共35个循环，4℃保存。扩增产物由上海生工生物工程有限公司进行测序，测序结果如序列表SEQ ID NO.1所示。所得序列通过比对分析，运用MEGA6.06软件构建系统发育树(如图3所示)。
在Genbank比对的结果显示为上述菌株与Bacillus licheniformis(KY433888.1)相似性达到98％，结合形态学鉴定和生理生化鉴定，将其鉴定为地衣芽孢杆菌MR-1(Bacillus licheniformis MR-1)。
3.地衣芽孢杆菌MR-1在抑制细菌性病原菌中的应用
1)培养基
固体NA培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂20g，去离子水1000mL，pH7.0-7.2；
液体NA培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，去离子水1000mL，pH7.0-7.2；
液体发酵培养基：干酪素3.5g，牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，去离子水1000mL。
2)制备发酵菌液
在无菌环境下，取一株产蛋白酶短小的地衣芽孢杆菌MR-1挑取一环在固体NA培养基上划线，放于35℃培养24h，得到活化后的地衣芽孢杆菌MR-1。
制备液体NA培养基，分装灭菌，冷却后接种活化后的地衣芽孢杆菌MR-1，放置于35℃恒温摇床中进行扩繁培养，恒温摇床震荡的转速为160r/min，扩繁培养时间为24h。之后以10％的接种量接种至液体发酵培养基中，在25-30℃进行发酵培养，摇床震荡2-4天，摇床震荡的转速为180r/min，得到地衣芽孢杆菌MR-1发酵菌液；液体发酵培养基在制备时的pH值为7.2～7.4，并经过20min的灭菌处理，且灭菌时的温度为121℃。
3)制备病原菌菌液
在无菌环境下，分别取肠沙门氏菌肠亚种(Salmonella entericasubsp.Enterica，CICC-10982)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes，CICC-10293)、大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的病原菌斜面试管，挑取一环分别在不同的固体NA培养基上划线，放于35℃培养24h，得到活化后的四种病原菌。
制备液体NA培养基，分装灭菌，冷却后接种活化后的病原菌，放置于35℃恒温摇床中进行扩繁培养，恒温摇床震荡的转速为160r/min，扩繁培养时间为18-24h，即得到肠沙门氏菌肠亚种(Salmonella enterica subsp.Enterica，CICC-10982)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes，CICC-10293)、大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的病原菌菌液。
4)地衣芽孢杆菌MR-1的抑菌性能
利用牛津杯法来检测菌液的抑菌性能。将100L病原菌菌液均匀涂满固体NA培养基表面，在培养基的表面垂直摆放牛津杯，轻轻加压，使其与培养基表面紧密接触。在牛津杯中加入本发明的地衣芽孢杆菌MR-1发酵菌液，35℃环境下培养18-24h，观察并记录结果。
本发明实施例提供了地衣芽孢杆菌MR-1(Bacillus licheniformis MR-1)拮抗病原菌的抑菌圈数据表，请参考表2。从表1中能够看出，地衣芽孢杆菌菌株MR-1对于肠沙门氏菌肠亚种(Salmonella enterica subsp.Enterica，CICC-10982)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes，CICC-10293)、大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)都有一定的抑菌效果。其中对于金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好，达到了27.11mm。由抑菌圈的出现能够说明本发明实施例提供的地衣芽孢杆菌MR-1对细菌性病原菌菌具有明显的抑制作用，因而能够很好的应用于防治细菌病害。
表2地衣芽孢杆菌菌株MR-1对于不同病原细菌的抑菌圈大小
病原菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 产气肠杆菌 肠沙门氏菌肠亚种
Mr-1抑菌圈/mm 37.11 25.33 26.39 18.89
以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例，而并非本发明可行实施的穷举。对于本领域一般技术人员而言，在不背离本发明原理和精神的前提下对其所作出的任何显而易见的改动，都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。
序列表
<110> 湖南省林业科学院，中南林业科技大学
<120> 一株地衣芽孢杆菌菌株及其在抑制细菌性病原菌中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1450
<212> DNA
<213> 地衣芽孢杆菌MR-1(Bacillus licheniformis MR-1)
<400> 1
gcagtgcggc gtgctataca tgcagtcgag cggacagatg ggagcttgct ccctgatgtt 60
agcggcggac gggtgagtaa cacgtgggta acctgcctgt aagactggga taactccggg 120
aaaccggggc taataccgga tgcttgattg aaccgcatgg ttcaattata aaaggtggct 180
tttagctacc acttacagat ggacccgcgg cgcattagct agttggtgag gtaacggctc 240
accaaggcaa cgatgcgtag ccgacctgag agggtgatcg gccacactgg gactgagaca 300
cggcccagac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cgcaatggac gaaagtctga 360
cggagcaacg ccgcgtgagt gatgaaggtt ttcggatcgt aaaactctgt tgttagggaa 420
gaacaagtac cgttcgaata gggcggtacc ttgacggtac ctaaccagaa agccacggct 480
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cgtaaagcgc gcgcaggcgg tttcttaagt ctgatgtgaa agcccccggc tcaaccgggg 600
agggtcattg gaaactgggg aacttgagtg cagaagagga gagtggaatt ccacgtgtag 660
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ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag 960
gtcttgacat cctctgacaa ccctagagat agggcttccc cttcgggggc agagtgacag 1020
gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc 1080
gcaacccttg atcttagttg ccagcattca gttgggcact ctaaggtgac tgccggtgac 1140
aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaaa tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac 1200
acgtgctaca atgggcagaa caaagggcag cgaagccgcg aggctaagcc aatcccacaa 1260
atctgttctc agttcggatc gcagtctgca actcgactgc gtgaagctgg aatcgctagt 1320
aatcgcggat cagcatgccg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca 1380
caccacgaga gtttgtaaca cccgaagtcg gtgaggtaac ctttggagcc agccgccgaa 1440
gtgacaagtt 1450

Claims (10)

1.一株地衣芽孢杆菌菌株，其特征在于，该地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)菌株保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其命名为地衣芽孢杆菌MR-1(BacilluslicheniformisMR-1)，其在广东省微生物菌种保藏中心的保藏编号为GDMCC No：60393，保藏时间为2018年6月25日。
2.一种根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌菌株在抑制细菌性病原菌中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用的方法具体包括如下步骤：挑取活化后的地衣芽孢杆菌MR-1的单菌落菌丝，于液体NA培养基中进行扩繁培养，将得到的种子液接种到液体发酵培养基中进行发酵培养，得到地衣芽孢杆菌MR-1发酵菌液，将所述地衣芽孢杆菌MR-1发酵菌液与细菌性病原菌进行接触，即实现对细菌性病原菌的抑制。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌MR-1的活化方法包括以下步骤：在无菌环境下，取一株产蛋白酶短小的地衣芽孢杆菌MR-1挑取一环在固体NA培养基上划线，在28-35℃条件下倒置培养18-24h后，得到活化的地衣芽孢杆菌MR-1。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述固体NA培养基的组分包括牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂和去离子水，所述牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂和去离子水的质量比为(3-4):(8.9-10.2):(3.5-5):(19-21):1000，所述固体NA培养基的pH为6.8-7.2。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述液体NA培养基的组分包括牛肉膏、蛋白胨、氯化钠和去离子水，所述牛肉膏、蛋白胨、氯化钠和去离子水的质量比为(3-4):(8.9-10.2):(3.5-5):1000，所述液体NA培养基的pH为6.8-7.2。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述液体发酵培养基的组分包括干酪素、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠和去离子水，所述干酪素、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠和去离子水的质量比为(3-4):(2.5-3.5):(8.9-10.2):(3.5-5):1000，所述液体发酵培养基的pH值为7.2-7.4。
8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述扩繁培养的温度为28-35℃，扩繁培养的时间为18-24h，扩繁培养时摇床震荡的转速为160-180r/min。
9.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述发酵培养的接种量为5-15％，发酵培养的温度为25-30℃，发酵培养的时间为2-4d，发酵培养时摇床震荡的转速为160-180r/min，液体发酵培养基在接种前先经过20-30min的121℃灭菌处理。
10.根据权利要求2-9中任一项所述的应用，其特征在于，所述细菌性病原菌包括肠沙门氏菌肠亚种(Salmonella enterica subsp.Enterica)、产气肠杆菌(Enterobacteraerogenes)、大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中的一种或多种。
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Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110577915A (zh) * 2019-09-29 2019-12-17 中南民族大学 地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis CZ186菌株及其应用
CN110643550A (zh) * 2019-11-14 2020-01-03 河北农业大学 一种产脲酶抑制剂的枯草芽孢杆菌j530菌株及其应用
CN110699299A (zh) * 2019-11-14 2020-01-17 乌拉特前旗荣生大地生物科技饲料有限责任公司 一种产脲酶抑制剂的地衣芽孢杆菌x173菌株及其应用
CN110923175A (zh) * 2019-12-26 2020-03-27 江苏大道生物环境科技有限公司 芽孢杆菌及其餐厨垃圾减量化资源化生产有机肥中的应用
CN111172079A (zh) * 2020-02-18 2020-05-19 北京工商大学 任清芽孢杆菌新菌种及其应用
CN114181850A (zh) * 2021-11-18 2022-03-15 新疆农业科学院微生物应用研究所(中国新疆—亚美尼亚生物工程研究开发中心) 一株耐uv辐射芽孢杆菌及其应用
CN114395511A (zh) * 2022-02-18 2022-04-26 安徽科技学院 一株地衣芽孢杆菌fy1及其应用
CN114574386A (zh) * 2022-03-01 2022-06-03 广东石油化工学院 一株地衣芽孢杆菌及其应用
CN114874950A (zh) * 2022-06-07 2022-08-09 江南大学 一种提高地衣芽孢杆菌产杆菌肽的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1793331A (zh) * 2005-11-14 2006-06-28 浙江大学 一种地衣芽孢杆菌菌株及其所产生的细菌素的用途
CN103382462A (zh) * 2013-05-09 2013-11-06 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种地衣芽孢杆菌溶菌酶及其生产方法和应用
CN103667128A (zh) * 2013-11-27 2014-03-26 北京昕大洋科技发展有限公司 一种地衣芽孢杆菌及其用途
CN104013649A (zh) * 2014-05-29 2014-09-03 东北制药集团沈阳第一制药有限公司 地衣芽孢杆菌合生元组合物及其制剂
CN105820987A (zh) * 2016-05-31 2016-08-03 四川大工汇能纵横环境技术有限责任公司 一种地衣芽孢杆菌菌株及微生态制剂

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1793331A (zh) * 2005-11-14 2006-06-28 浙江大学 一种地衣芽孢杆菌菌株及其所产生的细菌素的用途
CN103382462A (zh) * 2013-05-09 2013-11-06 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种地衣芽孢杆菌溶菌酶及其生产方法和应用
CN103667128A (zh) * 2013-11-27 2014-03-26 北京昕大洋科技发展有限公司 一种地衣芽孢杆菌及其用途
CN104013649A (zh) * 2014-05-29 2014-09-03 东北制药集团沈阳第一制药有限公司 地衣芽孢杆菌合生元组合物及其制剂
CN105820987A (zh) * 2016-05-31 2016-08-03 四川大工汇能纵横环境技术有限责任公司 一种地衣芽孢杆菌菌株及微生态制剂

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PRABHA DEVI ET AL.: "The Sponge-associated Bacterium Bacillus licheniformis SAB1: A Source of Antimicrobial Compounds", 《MAR DRUGS》 *
彭玲 等: "诱变处理增强地衣芽孢杆菌01101107抑菌性的研究", 《化学与生物工程》 *

Cited By (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110577915A (zh) * 2019-09-29 2019-12-17 中南民族大学 地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis CZ186菌株及其应用
CN110643550A (zh) * 2019-11-14 2020-01-03 河北农业大学 一种产脲酶抑制剂的枯草芽孢杆菌j530菌株及其应用
CN110699299A (zh) * 2019-11-14 2020-01-17 乌拉特前旗荣生大地生物科技饲料有限责任公司 一种产脲酶抑制剂的地衣芽孢杆菌x173菌株及其应用
CN110643550B (zh) * 2019-11-14 2022-12-06 河北农业大学 一种产脲酶抑制剂的枯草芽孢杆菌j530菌株及其应用
CN110923175A (zh) * 2019-12-26 2020-03-27 江苏大道生物环境科技有限公司 芽孢杆菌及其餐厨垃圾减量化资源化生产有机肥中的应用
CN110923175B (zh) * 2019-12-26 2021-05-07 江苏大道生物环境科技有限公司 芽孢杆菌及其餐厨垃圾减量化资源化生产有机肥中的应用
CN111172079B (zh) * 2020-02-18 2021-07-30 北京工商大学 任清芽孢杆菌新菌种及其应用
CN111172079A (zh) * 2020-02-18 2020-05-19 北京工商大学 任清芽孢杆菌新菌种及其应用
CN114181850A (zh) * 2021-11-18 2022-03-15 新疆农业科学院微生物应用研究所(中国新疆—亚美尼亚生物工程研究开发中心) 一株耐uv辐射芽孢杆菌及其应用
CN114181850B (zh) * 2021-11-18 2023-01-31 新疆农业科学院微生物应用研究所(中国新疆—亚美尼亚生物工程研究开发中心) 一株耐uv辐射芽孢杆菌及其应用
CN114395511A (zh) * 2022-02-18 2022-04-26 安徽科技学院 一株地衣芽孢杆菌fy1及其应用
CN114574386A (zh) * 2022-03-01 2022-06-03 广东石油化工学院 一株地衣芽孢杆菌及其应用
CN114574386B (zh) * 2022-03-01 2023-08-11 广东石油化工学院 一株地衣芽孢杆菌及其应用
CN114874950A (zh) * 2022-06-07 2022-08-09 江南大学 一种提高地衣芽孢杆菌产杆菌肽的方法
CN114874950B (zh) * 2022-06-07 2023-08-25 江南大学 一种提高地衣芽孢杆菌产杆菌肽的方法

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