CN109180832A - 一种高效茶树菇多糖提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高效茶树菇多糖提取方法，包括如下步骤：茶树菇预处理、超低温冷冻粉碎、提取茶树菇多糖、微滤、超滤、第一次浓缩、去蛋白、第二次浓缩。本发明工艺简单、能源消耗少，成本低，多糖得率高；本发明通过采用串联微孔滤膜和超滤膜对提取液进行过滤，达到精制和纯化粗多糖的目的；采用真空低温干燥串联超低温冷冻粉碎，此时所得茶树菇粉相对于常温粉碎所得产品颜色明显变浅，超低温冷冻粉碎多糖损失率小于0.3％，相对于常温粉碎，多糖损失率降低15％以上。本发明通过在有压力的环境下进行浸泡茶树菇超微粉，配合常压超声浸泡，因此可以以较低的温度浸泡出较多的多糖，不但可以有效分离出多糖。
Description
技术领域
本发明涉及食用菌多糖提取技术领域，具体是一种高效茶树菇多糖提取方法。
背景技术
茶树菇，学名：agrocybe aegirit，原为江西黎川境内高山密林地区茶树蔸部生长的一种野生蕈菌。茶树菇含有人体所需的18种氨基酸，特别是含有人体所不能合成的8种氨基酸、葡聚糖、菌蛋白、碳水化合物等营养成分，其菇柄脆嫩爽口，味道清香。还有丰富的B族维生素和多种矿物质元素，如铁、钾、锌、硒等元素都高于其它菌类，中医认为该菇具有补肾、利尿、治腰酸痛、渗湿、健脾、止泻等功效，是高血压、心血管和肥胖症患者的理想食品。其味道鲜美，脆嫩可口，又具有较好的保健作用，是美味珍稀的食用菌之一。
茶树菇营养丰富，蛋白质含量高达19.55％。所含蛋白质中有18种氨基酸，其中含量最高的是蛋氨酸占2.49％，其次为谷氨酸、天门冬氨酸、异亮氨酸、甘氨酸和丙氨酸。总氨基酸含量为16.86％。人体必需的8种氨基酸含量齐全，并且有丰富的B族维生素和钾、钠、钙、镁、铁、锌等矿质元素。
茶树菇含大量抗癌多糖，有很好的抗癌作用，人们把它称做“中华神菇”、“保健食品”、“抗癌尖兵”现有的茶树菇多糖提取工艺主要包括：传统热水浸提法、稀酸(碱)浸提法、酶解提取、超声波辅助浸提法、酶法等。然而，这些方法都存在着周期长、提取率不高、有效成分损耗较大等缺点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效茶树菇多糖提取方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种高效茶树菇多糖提取方法，包括如下步骤：
(1)茶树菇预处理：将采集好的茶树菇原料进行挑选，去除霉烂茶树菇后，先用清洗两遍，再用去离子水清洗一遍，沥干水分后，采用真空低温干燥；
(2)超低温冷冻粉碎：预处理后的茶树菇-47℃冷冻粉碎过50目筛，得茶树菇超微粉；经过超低温冷冻粉碎的茶树菇多糖损失率小于0.3％(以葡萄糖计，下同)，相对于常温粉碎，多糖损失率降低15％以上；
(3)提取茶树菇多糖：将茶树菇超微粉先采用物理化学法进行细胞破壁处理，再按照固液比1:16-20加入水中，在1.5个大气压下浸泡1h，再常压超声浸泡30-40分钟，沸水提取1.5-2h，提取液过滤，滤液以10000r/min的离心速度离心12-16min，残渣重复上述操作再提取一次，合并两次上清液，得水溶性茶树菇多糖粗提取液；
(4)微滤、超滤：将茶树菇多糖粗提取液先通过微孔滤膜上进行微滤，孔径为1-2um，再通过超滤膜进行超滤，超滤膜孔径分别为0.005um-0.001um,超滤温度25-35℃、压力0.2-0.3MPa，超滤时间2-3h,得到滤液；
(5)第一次浓缩：将三部分截留液混合后，于5000-6000r/min条件下离心，取上清液浓缩至体积为上清液的1/4，得浓缩液1；
(6)去蛋白：将浓缩液1加入13倍体积的蒸馏水中，用碳酸钠调节PH至7.5-8.0，再加入浓缩液质量1/30的胰蛋白酶，58℃水解1.5-2小时，再用草酸调节PH为5.4-5.6，加入浓缩液质量1/25的木瓜蛋白酶，78℃下水解2-3小时，再用碳酸钠调节PH至7，加入Sevag试剂，并充分振荡混合，静置3-6小时，取上清液，离心，重复操作至不再出现蛋白沉淀；
(7)第二次浓缩：将去蛋白后的溶液进行第二次浓缩，并通过真空低温干燥的方式干燥至水分含量为2.0-3.2％。
步骤(5)中，第一次浓缩在旋转浓缩仪中进行，浓缩的浓缩条件为-0.1MPa和60℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明工艺简单、能源消耗少，成本低，多糖得率高；本发明通过采用串联微孔滤膜和超滤膜对提取液进行过滤，达到精制和纯化粗多糖的目的；采用真空低温干燥串联超低温冷冻粉碎，此时所得茶树菇粉相对于常温粉碎所得产品颜色明显变浅，超低温冷冻粉碎多糖损失率小于0.3％，相对于常温粉碎，多糖损失率降低15％以上。
本发明通过在有压力的环境下进行浸泡茶树菇超微粉，配合常压超声浸泡，因此可以以较低的温度浸泡出较多的多糖，不但可以有效分离出多糖，而且可以防止多糖在分离过程中由于温度过发生部分损坏，通过压力和超声浸泡，可以节省浸泡时间，有效降低了加工成本。
在去蛋白时，加入多种去蛋白酶，提高多糖的纯度，保证多糖的质量。
具体实施方式
实施例1
一种高效茶树菇多糖提取方法，包括如下步骤：
(1)茶树菇预处理：将采集好的茶树菇原料进行挑选，去除霉烂茶树菇后，先用清洗两遍，再用去离子水清洗一遍，沥干水分后，采用真空低温干燥；
(2)超低温冷冻粉碎：预处理后的茶树菇-47℃冷冻粉碎过50目筛，得茶树菇超微粉；经过超低温冷冻粉碎的茶树菇多糖损失率小于0.3％(以葡萄糖计，下同)，相对于常温粉碎，多糖损失率降低15％以上；
(3)提取茶树菇多糖：将茶树菇超微粉先采用物理化学法进行细胞破壁处理，再按照固液比1:16加入水中，在1.5个大气压下浸泡1h，再常压超声浸泡30分钟，沸水提取1.5，提取液过滤，滤液以10000r/min的离心速度离心12min，残渣重复上述操作再提取一次，合并两次上清液，得水溶性茶树菇多糖粗提取液；
(4)微滤、超滤：将茶树菇多糖粗提取液先通过微孔滤膜上进行微滤，孔径为1um，再通过超滤膜进行超滤，超滤膜孔径分别为0.005um,超滤温度25℃、压力0.2MPa，超滤时间2h,得到滤液；
(5)第一次浓缩：将三部分截留液混合后，于5000r/min条件下离心，取上清液浓缩至体积为上清液的1/4，得浓缩液1；
(6)去蛋白：将浓缩液1加入13倍体积的蒸馏水中，用碳酸钠调节PH至7.5-8.0，再加入浓缩液质量1/30的胰蛋白酶，58℃水解1.5小时，再用草酸调节PH为5.4，加入浓缩液质量1/25的木瓜蛋白酶，78℃下水解2小时，再用碳酸钠调节PH至7，加入Sevag试剂，并充分振荡混合，静置3小时，取上清液，离心，重复操作至不再出现蛋白沉淀；
(7)第二次浓缩：将去蛋白后的溶液进行第二次浓缩，并通过真空低温干燥的方式干燥至水分含量为2.0％。
步骤(5)中，第一次浓缩在旋转浓缩仪中进行，浓缩的浓缩条件为-0.1MPa和60℃。
实施例2
一种高效茶树菇多糖提取方法，包括如下步骤：
(1)茶树菇预处理：将采集好的茶树菇原料进行挑选，去除霉烂茶树菇后，先用清洗两遍，再用去离子水清洗一遍，沥干水分后，采用真空低温干燥；
(2)超低温冷冻粉碎：预处理后的茶树菇-47℃冷冻粉碎过50目筛，得茶树菇超微粉；经过超低温冷冻粉碎的茶树菇多糖损失率小于0.3％(以葡萄糖计，下同)，相对于常温粉碎，多糖损失率降低15％以上；
(3)提取茶树菇多糖：将茶树菇超微粉先采用物理化学法进行细胞破壁处理，再按照固液比1:20加入水中，在1.5个大气压下浸泡1h，再常压超声浸泡40分钟，沸水提取2h，提取液过滤，滤液以10000r/min的离心速度离心16min，残渣重复上述操作再提取一次，合并两次上清液，得水溶性茶树菇多糖粗提取液；
(4)微滤、超滤：将茶树菇多糖粗提取液先通过微孔滤膜上进行微滤，孔径为2um，再通过超滤膜进行超滤，超滤膜孔径分别为0.001um,超滤温度35℃、压力0.3MPa，超滤时间3h,得到滤液；
(5)第一次浓缩：将三部分截留液混合后，于5000r/min条件下离心，取上清液浓缩至体积为上清液的1/4，得浓缩液1；
(6)去蛋白：将浓缩液1加入13倍体积的蒸馏水中，用碳酸钠调节PH至8.0，再加入浓缩液质量1/30的胰蛋白酶，58℃水解2小时，再用草酸调节PH为5.6，加入浓缩液质量1/25的木瓜蛋白酶，78℃下水解3小时，再用碳酸钠调节PH至7，加入Sevag试剂，并充分振荡混合，静置3-6小时，取上清液，离心，重复操作至不再出现蛋白沉淀；
(7)第二次浓缩：将去蛋白后的溶液进行第二次浓缩，并通过真空低温干燥的方式干燥至水分含量为3.2％。
步骤(5)中，第一次浓缩在旋转浓缩仪中进行，浓缩的浓缩条件为-0.1MPa和60℃。
实施例3
一种高效茶树菇多糖提取方法，包括如下步骤：
(1)茶树菇预处理：将采集好的茶树菇原料进行挑选，去除霉烂茶树菇后，先用清洗两遍，再用去离子水清洗一遍，沥干水分后，采用真空低温干燥；
(2)超低温冷冻粉碎：预处理后的茶树菇-47℃冷冻粉碎过50目筛，得茶树菇超微粉；经过超低温冷冻粉碎的茶树菇多糖损失率小于0.3％(以葡萄糖计，下同)，相对于常温粉碎，多糖损失率降低15％以上；
(3)提取茶树菇多糖：将茶树菇超微粉先采用物理化学法进行细胞破壁处理，再按照固液比1:18加入水中，在1.5个大气压下浸泡1h，再常压超声浸泡35分钟，沸水提取1.5-2h，提取液过滤，滤液以10000r/min的离心速度离心14min，残渣重复上述操作再提取一次，合并两次上清液，得水溶性茶树菇多糖粗提取液；
(4)微滤、超滤：将茶树菇多糖粗提取液先通过微孔滤膜上进行微滤，孔径为1-2um，再通过超滤膜进行超滤，超滤膜孔径分别为0.008um,超滤温度30℃、压力0.2MPa，超滤时间2.5h,得到滤液；
(5)第一次浓缩：将三部分截留液混合后，于5500r/min条件下离心，取上清液浓缩至体积为上清液的1/4，得浓缩液1；
(6)去蛋白：将浓缩液1加入13倍体积的蒸馏水中，用碳酸钠调节PH至7.8，再加入浓缩液质量1/30的胰蛋白酶，58℃水解1.8小时，再用草酸调节PH为5.5，加入浓缩液质量1/25的木瓜蛋白酶，78℃下水解2.5小时，再用碳酸钠调节PH至7，加入Sevag试剂，并充分振荡混合，静置5小时，取上清液，离心，重复操作至不再出现蛋白沉淀；
(7)第二次浓缩：将去蛋白后的溶液进行第二次浓缩，并通过真空低温干燥的方式干燥至水分含量为2.8％。
步骤(5)中，第一次浓缩在旋转浓缩仪中进行，浓缩的浓缩条件为-0.1MPa和60℃。
Claims (2)
1.一种高效茶树菇多糖提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)茶树菇预处理：将采集好的茶树菇原料进行挑选，去除霉烂茶树菇后，先用清洗两遍，再用去离子水清洗一遍，沥干水分后，采用真空低温干燥；
(2)超低温冷冻粉碎：预处理后的茶树菇-47℃冷冻粉碎过50目筛，得茶树菇超微粉；
(3)提取茶树菇多糖：将茶树菇超微粉先采用物理化学法进行细胞破壁处理，再按照固液比1:16-20加入水中，在1.5个大气压下浸泡1h，再常压超声浸泡30-40分钟，沸水提取1.5-2h，提取液过滤，滤液以10000r/min的离心速度离心12-16min，残渣重复上述操作再提取一次，合并两次上清液，得水溶性茶树菇多糖粗提取液；
(4)微滤、超滤：将茶树菇多糖粗提取液先通过微孔滤膜上进行微滤，孔径为1-2um，再通过超滤膜进行超滤，超滤膜孔径分别为0.005um-0.001um,超滤温度25-35℃、压力0.2-0.3MPa，超滤时间2-3h,得到滤液；
(5)第一次浓缩：将三部分截留液混合后，于5000-6000r/min条件下离心，取上清液浓缩至体积为上清液的1/4，得浓缩液1；
(6)去蛋白：将浓缩液1加入13倍体积的蒸馏水中，用碳酸钠调节PH至7.5-8.0，再加入浓缩液质量1/30的胰蛋白酶，58℃水解1.5-2小时，再用草酸调节PH为5.4-5.6，加入浓缩液质量1/25的木瓜蛋白酶，78℃下水解2-3小时，再用碳酸钠调节PH至7，加入Sevag试剂，并充分振荡混合，静置3-6小时，取上清液，离心，重复操作至不再出现蛋白沉淀；
(7)第二次浓缩：将去蛋白后的溶液进行第二次浓缩，并通过真空低温干燥的方式干燥至水分含量为2.0-3.2％。
2.根据权利要求1所述的高效茶树菇多糖提取方法，其特征在于，步骤(5)中，第一次浓缩在旋转浓缩仪中进行，浓缩的浓缩条件为-0.1MPa和60℃。
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|---|---|
| CN (1) | CN109180832A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111171173A (zh) * | 2020-02-19 | 2020-05-19 | 杭州师范大学 | 一种快速、高效提取铁皮石斛多糖的方法 |
| CN112079940A (zh) * | 2020-09-15 | 2020-12-15 | 贵州省生物研究所 | 一种具有降血糖功能的茶树菇多糖的富集纯化方法和应用 |
| CN116622000A (zh) * | 2023-05-12 | 2023-08-22 | 南昌大学 | 一种利用茶树菇提取活性可溶性多糖的制备工艺 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102276744A (zh) * | 2011-06-17 | 2011-12-14 | 福建农林大学 | 一种茶树菇活性多糖及其制备方法 |
| CN103509130A (zh) * | 2013-09-25 | 2014-01-15 | 江苏神华药业有限公司 | 一种灵芝多糖绿色提取新工艺 |
| CN104262501A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-01-07 | 天津生机集团股份有限公司 | 双膜法提取灰树花发酵液多糖的方法 |
| CN104844721A (zh) * | 2015-04-20 | 2015-08-19 | 苏州经贸职业技术学院 | 一种茶树菇多糖的提取分离方法 |
| CN204933266U (zh) * | 2015-07-09 | 2016-01-06 | 浙江宇翔生物科技有限公司 | 一种香菇多糖分级纯化过滤系统 |
| CN105732835A (zh) * | 2014-12-11 | 2016-07-06 | 郑州国手生物科技有限公司 | 茶树菇水溶性多糖的分离纯化工艺 |
| CN108359022A (zh) * | 2018-02-28 | 2018-08-03 | 漯河中德双成功能食品研究院有限公司 | 一种香菇多糖的制备方法 |
-
2018
- 2018-10-12 CN CN201811190569.3A patent/CN109180832A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102276744A (zh) * | 2011-06-17 | 2011-12-14 | 福建农林大学 | 一种茶树菇活性多糖及其制备方法 |
| CN103509130A (zh) * | 2013-09-25 | 2014-01-15 | 江苏神华药业有限公司 | 一种灵芝多糖绿色提取新工艺 |
| CN104262501A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-01-07 | 天津生机集团股份有限公司 | 双膜法提取灰树花发酵液多糖的方法 |
| CN105732835A (zh) * | 2014-12-11 | 2016-07-06 | 郑州国手生物科技有限公司 | 茶树菇水溶性多糖的分离纯化工艺 |
| CN104844721A (zh) * | 2015-04-20 | 2015-08-19 | 苏州经贸职业技术学院 | 一种茶树菇多糖的提取分离方法 |
| CN204933266U (zh) * | 2015-07-09 | 2016-01-06 | 浙江宇翔生物科技有限公司 | 一种香菇多糖分级纯化过滤系统 |
| CN108359022A (zh) * | 2018-02-28 | 2018-08-03 | 漯河中德双成功能食品研究院有限公司 | 一种香菇多糖的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 林跃梅主编: "《制浆造纸现代节水与污水资源化技术》", 31 May 2009, 中国轻工业出版社 * |
| 郑建仙主编: "《功能性食品学（第二版）》", 30 June 2009, 中国轻工业出版社 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111171173A (zh) * | 2020-02-19 | 2020-05-19 | 杭州师范大学 | 一种快速、高效提取铁皮石斛多糖的方法 |
| CN112079940A (zh) * | 2020-09-15 | 2020-12-15 | 贵州省生物研究所 | 一种具有降血糖功能的茶树菇多糖的富集纯化方法和应用 |
| CN116622000A (zh) * | 2023-05-12 | 2023-08-22 | 南昌大学 | 一种利用茶树菇提取活性可溶性多糖的制备工艺 |
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