CN105732835A - 茶树菇水溶性多糖的分离纯化工艺 - Google Patents
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Abstract
一种茶树菇水溶性多糖的分离纯化工艺，其工艺方法是：本研究为了对茶树菇保健食品的研究开发提供理论依据，研究了茶树菇中的功能因子—真菌水溶性多糖，研究中首次分离纯化得到五种茶树菇水溶性多糖，并进一步分析研究其中含量最大的多糖AP2的物理化学组成。结果表明，AP2分子量为122460，是由D-葡萄糖、D-甘露糖、D-木糖和半乳糖醛酸组成的酸性多糖，其中半乳糖醛酸含量为6.8%。
Description
技术领域
本发明涉及的是一种茶树菇水溶性多糖的分离纯化工艺。
背景技术
食用菌是一大类具有很高的营养和药用价值的食物资源。自从日本千原1970年报道了从香菇中分离出一种抗肿瘤多糖而轰动整个医药界之后，全世界掀起了一股将食用菌同多糖研究结合起来，从食用菌中寻找抗肿瘤新兴药物资源的热潮。研究表明食用菌中的水溶性多糖具有的免疫调节作用，主要通过激活免疫系统而起作用，抑瘤活性的高低多糖分子的空间结构有关，影响空间结构的因素如侧链、分子量大小等影响抑瘤。近年来国内外已对多种食用菌，如香菇，灵芝、金针菇、灯芯菇、黑木耳、羊肚菌、金耳等进行了水溶性多糖的提取纯化、分离鉴定及功能性方面的研究。茶树菇中主要功能成分之一的茶树菇水溶性多糖的鉴定的研究却未见详细报道。本研究从茶树菇水提液中分离得到了五个水溶性多糖组分，并进一步分析研究了茶树菇水溶性多糖AP2的化学组分，为研究茶树菇中水溶性多糖及其生理功能提供了理论依据。
发明内容
本发明的目的是提供一种茶树菇水溶性多糖的分离纯化工艺。
本发明的目的是这样实现的：a、茶树菇水溶性多糖的提取：将茶树菇原料粉碎成可过30目筛的细颗粒，乙醇回流，加入4倍量95%乙醇混匀，回流3h；浸提，基于前期工作基础，浸提条件选取浸提温度80℃，时间1.5h，固液比1：25；离心分离，3000r/min，离心15min；真空浓缩，浓缩至原体积的1/4；醇沉，4倍量95%乙醇沉淀；去蛋白，加入相当于多糖水溶液1/4体积的氯仿，再加入氯仿体积1/16的正丁醇，剧烈振摇10min，离心，去除水层和溶剂交界处的变性蛋白质；多次重复操作，直到无变性蛋白出现为止；透析，流水透析48h，蒸馏水透析24h；脱色，50℃水浴保温，滴加20%H2O2脱色；洗涤，醇沉沉淀,先后用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤；b、茶树菇粗多糖的纯化：取定量纤维素，用蒸馏水浸泡，再用0.5mol/LNaOH及0.5mol/LNaCl混合液处理30min,抽干后用蒸馏水洗至中性，0.5mol/LHC1溶液处理30min，抽干后用蒸馏水洗至中性；用pH6.0磷酸盐缓冲溶液处理后，脱气装柱（1.5×50cm）；准确吸取0.5%茶树菇粗多糖A0溶液2ml上样，5min后待多糖液渗入纤维素中后，以蒸馏水洗脱，流速为0.6ml/min，每5min收集1管，隔管用苯酚-硫酸法检测，直到无洗脱峰为止。
具体实施方式
实施例：a、茶树菇水溶性多糖的提取：将茶树菇原料粉碎成可过30目筛的细颗粒，乙醇回流，加入4倍量95%乙醇混匀，回流3h；浸提，基于前期工作基础，浸提条件选取浸提温度80℃，时间1.5h，固液比1：25；离心分离，3000r/min，离心15min；真空浓缩，浓缩至原体积的1/4；醇沉，4倍量95%乙醇沉淀；去蛋白，加入相当于多糖水溶液1/4体积的氯仿，再加入氯仿体积1/16的正丁醇，剧烈振摇10min，离心，去除水层和溶剂交界处的变性蛋白质；多次重复操作，直到无变性蛋白出现为止；透析，流水透析48h，蒸馏水透析24h；脱色，50℃水浴保温，滴加20%H2O2脱色；洗涤，醇沉沉淀,先后用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤；b、茶树菇粗多糖的纯化：取定量纤维素，用蒸馏水浸泡，再用0.5mol/LNaOH及0.5mol/LNaCl混合液处理30min,抽干后用蒸馏水洗至中性，0.5mol/LHC1溶液处理30min，抽干后用蒸馏水洗至中性；用pH6.0磷酸盐缓冲溶液处理后，脱气装柱（1.5×50cm）；准确吸取0.5%茶树菇粗多糖A0溶液2ml上样，5min后待多糖液渗入纤维素中后，以蒸馏水洗脱，流速为0.6ml/min，每5min收集1管，隔管用苯酚-硫酸法检测，直到无洗脱峰为止。
Claims (1)
1.一种茶树菇水溶性多糖的分离纯化工艺，其工艺方法如下：a、茶树菇水溶性多糖的提取：将茶树菇原料粉碎成可过30目筛的细颗粒，乙醇回流，加入4倍量95%乙醇混匀，回流3h；浸提，浸提条件选取浸提温度80℃，时间1.5h，固液比1：25；离心分离，3000r/min，离心15min；真空浓缩，浓缩至原体积的1/4；醇沉，4倍量95%乙醇沉淀；去蛋白，加入相当于多糖水溶液1/4体积的氯仿，再加入氯仿体积1/16的正丁醇，剧烈振摇10min，离心，去除水层和溶剂交界处的变性蛋白质；多次重复操作，直到无变性蛋白出现为止；透析，流水透析48h，蒸馏水透析24h；脱色，50℃水浴保温，滴加20%H2O2脱色；洗涤，醇沉沉淀,先后用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤；b、茶树菇粗多糖的纯化：取定量纤维素，用蒸馏水浸泡，再用0.5mol/LNaOH及0.5mol/LNaCl混合液处理30min,抽干后用蒸馏水洗至中性，0.5mol/LHC1溶液处理30min，抽干后用蒸馏水洗至中性；用pH6.0磷酸盐缓冲溶液处理后，脱气装柱（1.5×50cm）；准确吸取0.5%茶树菇粗多糖A0溶液2ml上样，5min后待多糖液渗入纤维素中后，以蒸馏水洗脱，流速为0.6ml/min，每5min收集1管，隔管用苯酚-硫酸法检测，直到无洗脱峰为止。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109180832A (zh) * | 2018-10-12 | 2019-01-11 | 绩溪县徽菜宝生物科技有限公司 | 一种高效茶树菇多糖提取方法 |
| CN112079940A (zh) * | 2020-09-15 | 2020-12-15 | 贵州省生物研究所 | 一种具有降血糖功能的茶树菇多糖的富集纯化方法和应用 |
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2014
- 2014-12-11 CN CN201410752286.9A patent/CN105732835A/zh active Pending
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| CN112079940A (zh) * | 2020-09-15 | 2020-12-15 | 贵州省生物研究所 | 一种具有降血糖功能的茶树菇多糖的富集纯化方法和应用 |
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