CN109179666A

CN109179666A - 一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法

Info

Publication number: CN109179666A
Application number: CN201811093619.6A
Authority: CN
Inventors: 孙弋博
Original assignee: Pujiang Unitary Aquatic Science And Technology Co Ltd
Current assignee: Pujiang Unitary Aquatic Science And Technology Co Ltd
Priority date: 2018-09-19
Filing date: 2018-09-19
Publication date: 2019-01-11

Abstract

本发明公开了一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法，包括微生物菌剂发酵、小球藻培养以及负载，微生物菌剂发酵步骤为：将光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌分别置于马铃薯糖琼脂培养基上进行斜面培养；将得到经斜面培养后的光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌接种于光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌种子瓶培养基进行扩繁，然后接种发酵瓶混合培养得到光合细菌‑酵母菌‑枯草芽孢杆菌混合发酵菌液，并加入保护剂；保护剂为脱脂乳、黄原胶、海藻糖、山梨醇和茶多酚的组合。有益效果为：本发明制备的调水剂具有微生物菌种与微藻固定效果好、在水体中保存时间久，抗菌效果好，能够增强小龙虾免疫力，降低饲料系数提高饲料的消化吸收率等优点。

Description

一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法

技术领域

本发明涉及淡水小龙虾养殖技术领域，尤其是涉及一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法。

背景技术

小龙虾也称克氏原螯虾、红螯虾和淡水小龙虾。形似虾而甲壳坚硬。成体长约5.6-11.9厘米，暗红色，甲壳部分近黑色，腹部背面有一楔形条纹。幼虾体为均匀的灰色，有时具黑色波纹。螯狭长。甲壳中部不被网眼状空隙分隔，甲壳上明显具颗粒。额剑具侧棘或额剑端部具刻痕，是淡水经济虾类，因肉味鲜美广受人们欢迎。

养殖业的日益发展提高了人们的生活水平。然而，目前在水产养殖业中普遍存在着养殖水体的水质污染问题。这些污染大部分来自于投放的养殖饲料，由于鱼、虾、蟹等饲料中含有一些不能被利用的硝酸、亚硝酸和氨盐成分，积累以后容易引起鱼、虾、蟹的一些疾病爆发，而使产量无法增加，甚至出现大批量的死亡，因此急需一些有针对性的处理。

现有技术如授权公告号为CN 103641229 B的中国发明专利，公开了一种南美白对虾养殖池塘水质调控的方法，包括如下步骤：在南美白对虾养殖中后期阶段，以池塘溶氧值在8～12mg/L为水质正常；在池塘溶氧值连续4天低于8mg/L时，将水质调控剂与池塘水按1：10～15的比例混合后进行全池泼洒，即完成水质调控；所述水质调控剂由乳酸菌、光合细菌、糖蜜、磷酸二氢钙和水组成；该发明采用自制的水质调控剂进行干预措施，充分发挥益生菌功能，维持良好养殖环境，减少病害的发生，降低养殖风险。然而，该发明中使用的水质调控剂成分单一，对水产养殖环境的改善效率低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法，本制备方法简单易行，采用微生物菌种与微藻共同负载制得的调水剂可进一步提高养殖水体净化处理的综合效果，具有微生物菌种与微藻固定效果好、在水体中保存时间久，抗菌效果好，能够增强小龙虾免疫力，降低饲料系数，提高饲料的消化吸收率等优点。

本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：

一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法，包括微生物菌剂发酵、小球藻培养以及负载；微生物菌剂发酵步骤为：将光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌分别置于马铃薯糖琼脂培养基上进行斜面培养；将得到经斜面培养后的光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌接种培养基进行扩繁，光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌种子瓶菌液按照体积比2:1-3:2-4，以5-7％接种量接种发酵瓶混合培养得到混合发酵菌液，并加入保护剂；光合细菌能降解水体中沉积的鱼类粪便、残饵、鱼药残留物等腐败后产生的氨态氮、硫化氢和一些有害物质，净化水质；还能够与水体中的病原微生物争夺营养、空间，使其无法进行大量生长繁殖，有利于维护水体微生态平衡，同时促进小龙虾消化吸收，刺激生长发育，提高免疫功能，抑制各种病菌浸入；酵母菌可有氧或无氧生活，酵母菌能分解葡萄糖等水体中的多余有机物；枯草芽孢杆菌能改善小龙虾肠道微生态环境，促进免疫系统发育，激活非特异性免疫系统，提高机体免疫功能；还能够降解饲料中的抗营养分子，降低肠道内食糜粘度，减少肠道内有毒有害腐败物质的产生，减少对肠壁的损伤及环境的污染，提高营养物质的消化利用率。

作为优选，微生物菌剂发酵中加入的保护剂为按照质量百分比脱脂乳8-10％、黄原胶5-6％、海藻糖2-4％、山梨醇0.6-1.2％和茶多酚0.001-0.003％；山梨醇和茶多酚的特殊存在之一能够抑制有害细菌侵染，为微生物菌剂发酵创造良好的环境，促进发酵菌种的生长和繁殖，延长其对数生长周期，有利于促进微生物菌种分泌各种活性酶，这些酶具有抑制炎症和抵抗病原体感染，能够增强小龙虾机体清除有害细菌的免疫调理活性，可提高小龙虾的免疫力，降低其发病率，降低饲养成本；之二有利于增强微生物菌剂的稳定性，延缓其发生变质的时间，提高其酶活保留率。

作为优选，小球藻培养时通入二氧化碳气体和空气的混合气体，二氧化碳气体占4-6％，混合气体的通气量为40-60ml/min，培养温度为室温，初始pH为5-7，光照为普通温室大棚内日光，培养时间为10-12小时；小球藻富含维生素，具有较高的营养价值和药用价值；拥有自然界中最高质量的叶绿素和DNA、RNA；含有丰富的矿物质和重要的脂肪酸；它可以作为优良的饲料添加剂和环境改良剂，在富营养水环境下，能吸收多余氮、磷营养，保持水体洁净。

作为优选，载体采用经高温膨化至纳米级的蟹壳粉，蟹壳粉作为一种生物炭，是一种新型环境功能材料，具有发达的孔隙结构和巨大的比表面积，不仅可以吸附废水中的重金属和有机污染物，而且还可以作为微生物载体；具有纳米尺寸的蟹壳粉更是一种优良的载体。

进一步地，负载过程为：取80-120ml已稀释至20-40％的微生物菌液以及50-70ml生长在对数生长期的小球藻培养液，加入质量分数3-7％的蟹壳粉、0.3-0.6g海藻酸钠以及1-3ml甘油混合搅拌，再加入微生物菌剂固形物重量0.001-0.003％的(Z)-3-己烯醇、0.002-0.003％的4-羟基苯乙醇；将混合物置于发酵槽中好氧发酵，控制发酵温度为38-40℃，发酵20-24小时即得淡水小龙虾养殖营养调水剂；(Z)-3-己烯醇和4-羟基苯乙醇具有协同作用，能够降低蟹壳粉表面势能，从而提高蟹壳粉表面孔道对菌剂及微藻的吸附，有利于蟹壳粉纳米球对菌剂及微藻进行包裹固定，提高了固定化菌剂及微藻的稳定性，有效降低其在水体处理过程中造成流失，提高了水体调控的效率；同时能够调控微生物菌种的代谢机制，使复合菌群通过增殖作用和协同作用代谢出更多的多糖、氨基酸等营养成分，有利于降低饲料系数、提高饲料的消化吸收率，而微生物的代谢水平提高则有利于提高发酵效率，加快了调水剂的制备速率。

与现有技术相比，本发明的优点在于：1)本发明调水剂中微生物混合菌可降解水体中沉积的鱼类粪便、残饵、鱼药残留物等腐败后产生的氨态氮、硫化氢和一些有害物质，净化水质；能够与水体中的病原微生物争夺营养、空间，使其无法进行大量生长繁殖，有利于维护水体微生态平衡，同时促进小龙虾消化吸收，刺激生长发育，提高免疫功能，抑制各种病菌浸入；2)调水剂中的小球藻能够维持水质，调节水体pH值至中性，在富营养水环境下，能吸收多余氮、磷营养，保持水体洁净；3)有利于降低饲料系数提高饲料的消化吸收率，增加小龙虾采食量，促进营养物质转化吸收，促进小龙虾生长，并改善肉质和风味；4)本发明采用蟹壳粉纳米球对菌剂及微藻进行包裹固定，提高了固定化菌剂及微藻的稳定性，有效降低其在水体处理过程中造成流失，提高了水体调控的效率。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：

实施例1：

一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法，包括微生物菌剂发酵、小球藻培养以及负载，具体步骤如下：

微生物菌剂发酵：将光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌分别置于马铃薯糖琼脂培养基上进行斜面培养；将得到经斜面培养后的光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌接种于光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌种子瓶培养基进行扩繁，光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌种子瓶菌液按照体积比2:1:2，以5％接种量接种发酵瓶混合培养得到光合细菌-酵母菌-枯草芽孢杆菌混合发酵菌液，并加入保护剂；光合细菌能降解水体中沉积的鱼类粪便、残饵、鱼药残留物等腐败后产生的氨态氮、硫化氢和一些有害物质，净化水质；还能够与水体中的病原微生物争夺营养、空间，使其无法进行大量生长繁殖，有利于维护水体微生态平衡，同时促进小龙虾消化吸收，刺激生长发育，提高免疫功能，抑制各种病菌浸入；酵母菌可有氧或无氧生活，酵母菌能分解葡萄糖等水体中的多余有机物；枯草芽孢杆菌能改善小龙虾肠道微生态环境，促进免疫系统发育，激活非特异性免疫系统，提高机体免疫功能；还能够降解饲料中的抗营养分子，降低肠道内食糜粘度，减少肠道内有毒有害腐败物质的产生，减少对肠壁的损伤及环境的污染，提高营养物质的消化利用率；

上述微生物菌剂发酵中加入的保护剂为按照质量百分比脱脂乳8％、黄原胶5％、海藻糖2％、山梨醇0.6％和茶多酚0.001％；山梨醇和茶多酚的特殊存在之一能够抑制有害细菌侵染，为微生物菌剂发酵创造良好的环境，促进发酵菌种的生长和繁殖，延长其对数生长周期，有利于促进微生物菌种分泌各种活性酶，这些酶具有抑制炎症和抵抗病原体感染，能够增强小龙虾机体清除有害细菌的免疫调理活性，可提高小龙虾的免疫力，降低其发病率，降低饲养成本；之二有利于增强微生物菌剂的稳定性，延缓其发生变质的时间，提高其酶活保留率；

小球藻培养时通入二氧化碳气体和空气的混合气体，二氧化碳气体占4％，混合气体的通气量为40ml/min，培养温度为室温，初始pH为5，光照为普通温室大棚内日光，培养时间为10小时；小球藻富含维生素，具有较高的营养价值和药用价值；拥有自然界中最高质量的叶绿素和DNA、RNA；含有丰富的矿物质和重要的脂肪酸；它可以作为优良的饲料添加剂和环境改良剂，在富营养水环境下，能吸收多余氮、磷营养，保持水体洁净；

载体采用经高温膨化至纳米级的蟹壳粉，蟹壳粉作为一种生物炭，是一种新型环境功能材料，具有发达的孔隙结构和巨大的比表面积，不仅可以吸附废水中的重金属和有机污染物，而且还可以作为微生物载体；具有纳米尺寸的蟹壳粉更是一种优良的载体；

负载：取80ml已稀释至20％的微生物菌液以及50ml生长在对数生长期的小球藻培养液，加入质量分数3％的蟹壳粉、0.3g海藻酸钠以及1ml甘油混合搅拌，再加入微生物菌剂固形物重量0.001％的(Z)-3-己烯醇、0.002％的4-羟基苯乙醇；将混合物置于发酵槽中好氧发酵，控制发酵温度为38℃，发酵20小时即得淡水小龙虾养殖营养调水剂；(Z)-3-己烯醇和4-羟基苯乙醇具有协同作用，能够降低蟹壳粉表面势能，从而提高蟹壳粉表面孔道对菌剂及微藻的吸附，有利于蟹壳粉纳米球对菌剂及微藻进行包裹固定，提高了固定化菌剂及微藻的稳定性，有效降低其在水体处理过程中造成流失，提高了水体调控的效率；同时能够调控微生物菌种的代谢机制，使复合菌群通过增殖作用和协同作用代谢出更多的多糖、氨基酸等营养成分，有利于降低饲料系数提高饲料的消化吸收率，而微生物的代谢水平提高则有利于提高发酵效率，加快了调水剂的制备速率。

实施例2：

微生物菌剂发酵：将光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌分别置于马铃薯糖琼脂培养基上进行斜面培养；将得到经斜面培养后的光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌接种于光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌种子瓶培养基进行扩繁，光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌种子瓶菌液按照体积比2:2:3，以6％接种量接种发酵瓶混合培养得到光合细菌-酵母菌-枯草芽孢杆菌混合发酵菌液，并加入保护剂；

上述微生物菌剂发酵中加入的保护剂为按照质量百分比脱脂乳9％、黄原胶5％、海藻糖3％、山梨醇1.1％和茶多酚0.002％；

小球藻培养时通入二氧化碳气体和空气的混合气体，二氧化碳气体占5％，混合气体的通气量为50ml/min，培养温度为室温，初始pH为6，光照为普通温室大棚内日光，培养时间为11小时；

负载：取100ml已稀释至30％的微生物菌液以及60ml生长在对数生长期的小球藻培养液，加入质量分数5％的蟹壳粉、0.5g海藻酸钠以及2ml甘油混合搅拌，再加入微生物菌剂固形物重量0.002％的(Z)-3-己烯醇、0.002％的4-羟基苯乙醇；将混合物置于发酵槽中好氧发酵，控制发酵温度为39℃，发酵22小时即得淡水小龙虾养殖营养调水剂。

实施例3：

微生物菌剂发酵：将光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌分别置于马铃薯糖琼脂培养基上进行斜面培养；将得到经斜面培养后的光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌接种于光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌种子瓶培养基进行扩繁，光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌种子瓶菌液按照体积比2:3:4，以7％接种量接种发酵瓶混合培养得到光合细菌-酵母菌-枯草芽孢杆菌混合发酵菌液，并加入保护剂；

上述微生物菌剂发酵中加入的保护剂为按照质量百分比脱脂乳10％、黄原胶6％、海藻糖4％、山梨醇1.2％和茶多酚0.003％；

小球藻培养时通入二氧化碳气体和空气的混合气体，二氧化碳气体占6％，混合气体的通气量为60ml/min，培养温度为室温，初始pH为7，光照为普通温室大棚内日光，培养时间为12小时；

负载：取120ml已稀释至40％的微生物菌液以及70ml生长在对数生长期的小球藻培养液，加入质量分数7％的蟹壳粉、0.6g海藻酸钠以及3ml甘油混合搅拌，再加入微生物菌剂固形物重量0.003％的(Z)-3-己烯醇、0.003％的4-羟基苯乙醇；将混合物置于发酵槽中好氧发酵，控制发酵温度为40℃，发酵24小时即得淡水小龙虾养殖营养调水剂。

对比例1：

微生物菌剂发酵中加入的保护剂不含山梨醇和茶多酚，其余部分和实施例2完全一致。

对比例2：

负载过程中不添加(Z)-3-己烯醇和4-羟基苯乙醇，其余部分和实施例2完全一致。

实施例4：

在小龙虾养殖基地进行实验，实验设置为6个处理组，分别为对照组、实施例1-3、对比例1-2；将来源相同、活泼无外伤的小龙虾，利用过筛法将规格相近的放在同一个网箱中饲养，分为6个网箱放于池塘内，每个网箱中30只小龙虾；每天投饵料2次，投饵量以使小龙虾达到饱足为准；对照组池塘中未投放本发明营养调水剂，实施例1-3和对比例1-2池塘中分别投放对应实施例或对比例制备的营养调水剂，投加量为0.5g/L；实验周期为15天，实验结束后，测定小龙虾的生长情况及免疫情况，如表1所示；其中，试验期间，对小龙虾进行注射A.hydrop hila活菌液攻毒，计算各组的死亡率以及免疫保护率，免疫保护率依下式计算：

免疫保护率＝[1-(免疫组死亡率/对照组死亡率)]*100％；

表1.小龙虾饲养指标

	增重率/％	死亡率/％	免疫保护率/％
				对照组	19.3	73.3	-
实施例1	29.1	36.0	50.9
				实施例2	37.8	26.7	63.6
实施例3	31.2	33.1	54.8
				对比例1	27.9	48.6	33.7
对比例2	23.2	39.7	45.8

由表1数据可知，在小龙虾养殖水体中添加本发明调水剂，既有利于降低饲料系数，提高小龙虾对饲料的消化吸收率，还能够增强小龙虾免疫力；由表1中实施例2和对比例1的免疫保护率数据对比可知，山梨醇和茶多酚的特殊存在有利于促进微生物菌种分泌各种活性酶，这些酶具有抑制炎症和抵抗病原体感染，能够增强小龙虾机体清除有害细菌的免疫调理活性，可提高小龙虾的免疫力；而对比例2中小龙虾增重率明显低于实施例2，表明(Z)-3-己烯醇和4-羟基苯乙醇具有协同作用，有利于降低饲料系数提高饲料的消化吸收率，增加小龙虾采食量，促进营养物质转化吸收，促进小龙虾生长。

本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。

以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法，包括微生物菌剂发酵、小球藻培养以及负载，其特征在于：所述微生物菌剂发酵步骤为：将光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌分别置于马铃薯糖琼脂培养基上进行斜面培养；将得到经斜面培养后的光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌接种培养基进行扩繁，然后接种发酵瓶混合培养得到混合发酵菌液，并加入保护剂。

2.根据权利要求1所述的一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法，其特征在于：所述保护剂含有质量百分比为0.6-1.2%的山梨醇和0.001-0.003%的茶多酚。

3.根据权利要求1所述的一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法，其特征在于：所述保护剂还含有质量百分比为8-10％的脱脂乳、5-6％的黄原胶和2-4％的海藻糖。

4.根据权利要求1所述的一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法，其特征在于：所述光合细菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌种子瓶菌液按照体积比2:1-3∶2-4，以5-7％接种量接种发酵瓶混合培养得发酵菌液。

5.根据权利要求1所述的一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法，其特征在于：所述小球藻培养时通入二氧化碳气体和空气的混合气体，二氧化碳气体占4-6％，混合气体的通气量为40-60ml/min，培养温度为室温，初始pH为5-7，光照为普通温室大棚内日光，培养时间为10-12小时。

6.根据权利要求1所述的一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法，其特征在于：所述负载过程为：取80-120ml已稀释至20-40%的微生物菌液以及50-70ml生长在对数生长期的小球藻培养液，加入质量分数3-7％的蟹壳粉、0.3-0.6g海藻酸钠以及1-3ml甘油混合搅拌，再加入（Z）-3-己烯醇、4-羟基苯乙醇；将混合物好氧发酵得淡水小龙虾养殖营养调水剂。

7.根据权利要求6所述的一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法，其特征在于：所述（Z）-3-己烯醇、4-羟基苯乙醇的加入量分别为微生物菌剂固形物重量的0.001-0.003%和0.002-0.003%。

8.根据权利要求6所述的一种淡水小龙虾养殖营养调水剂的制备方法，其特征在于：所述发酵温度为38-40℃，发酵20-24小时。