CN109136153A - 一株具备植物促生作用的耐盐芽孢杆菌 - Google Patents
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Abstract
本发明属于微生物应用领域，具体涉及一株具备植物促生作用的耐盐芽孢杆菌。具体的技术方案为：提供了一株盐生芽孢杆菌，于2018年7月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.16172。该菌不仅可以分泌ACC脱氨酶和吲哚乙酸，从而促进植物生长，而且还具有优异的解钾、解磷作用，更重要的是，该菌还具有较强地耐盐耐高pH能力，可以实际应用到盐碱地等环境恶劣处的土壤改良上。
Description
技术领域
本发明属于微生物应用领域，具体涉及一株具备植物促生作用的耐盐芽孢杆菌。
背景技术
土壤盐渍化是近年来阻碍农业发展的一大重要因素。盐碱地是指一个种类盐所聚合的一个地理区域，该地理区域的盐分含量较高，而这些盐分会影响并且抑制该区域的植物以及农作物的正常生长以及新陈代谢。因此，盐碱地的改良成为迫在眉睫的问题。
盐碱地改良的现行方法包括物理法、化学法以及生物法。生物改良法主要包括植物改良和微生物改良，其中微生物改良法因其成本低、操作简单以及可持续性，成为如今的研究热点。其中，植物促生菌的概念被频繁提及。植物根际促生菌(plant growthpromoting rhizobacteria， PGPR)是指能够促进植物对矿物质营养的吸收和利用，或者产生能够促进植物生长的代谢物，甚至抑制有害微生物的，能够直接或间接促进植物生长的根际有益细菌。通过筛选盐碱地原生植被根际土壤中的耐盐根际促生菌，将其利用于要改良的盐渍土中，可以有效的改良盐碱土，并且对该区域的植物以及农作物的生长以及新陈代谢起到促进的作用。
植物促生菌是通过直接以及间接的作用来达到植物促生的目的。其中直接的促生作用是指通过合成一些可供植物利用或者有利于植物从外界吸收的营养物质，包括合成植物生长激素(如吲哚乙酸)、溶解土壤中的难溶磷以及难溶钾、生物固氮以及合成一些植物生长过程中所需要的一些酶(如ACC脱氨酶)等；间接作用是指对植物生长过程中会起到抑制作用的病原微生物的生物防治作用，比如产生抗生素、分泌铁载体、竞争生态位以及诱导植物产生抗性等。
因此在盐碱地改良中，应用一些具备植物促生作用的耐盐菌，将其与有机质以及改性后呈酸性的生物炭相结合，可以在为土壤排盐的同时，起到调节以及促进植物生长的作用。
发明内容
本发明的目的是提供一株具备植物促生作用的耐盐芽孢杆菌。
为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一株盐生芽孢杆菌，于2018年7月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCCNo.16172。
相应的，一株盐生芽孢杆菌，其16Sr DNA序列如SEQ ID NO.1所示。
相应的，一种获得所述盐生芽孢杆菌的方法，包括如下步骤：
(1)制备根基土壤原液：无菌环境下，以水为介质，使用盐碱地原生植被根际表面附着的土壤制备悬液，即得根基土壤原液；
(2)将所述根基土壤原液涂布到牛肉膏蛋白胨培养基中，30℃恒温培养1～4天，即得所述盐生芽孢杆菌。
相应的，所述的盐生芽孢杆菌在促进植物生长中的应用。
优选的，所述应用中，所述盐生芽孢杆菌的菌浓度为104～ 105CFU/ml。
优选的，所述应用的温度为4～37℃，所述应用的pH为5.0～8.0。
优选的，所述应用的温度为28℃，所述应用的pH为8.0。
相应的，所述的盐生芽孢杆菌在改良盐碱地中的应用。
优选的，所述应用中盐碱地的可溶性总盐浓度为0～200g/L。
优选的，所述可溶性总盐浓度为70g/L。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种新的耐盐芽孢杆菌，该菌不仅可以分泌ACC脱氨酶和IAA，从而促进植物生长，而且还具有优异的解钾、解磷作用，更重要的是，该菌还具有较强地耐盐耐高pH能力，可以实际应用到盐碱地等环境恶劣处的土壤改良上。
附图说明
图1为菌株YZX8的电镜扫描示意图；
图2为菌株YZX8的菌落形态示意图；
图3为菌株YZX8生长曲线图；
图4为菌株YZX8的系统发育树示意图；
图5为α-丁酮酸标准曲线图；
图6为牛血清蛋白标准曲线图；
图7为IAA标准曲线图；
图8为磷标准曲线图；
图9为解磷效果展示中溶液的速效磷含量变化示意图；
图10为钾标准曲线图；
图11为不同pH对菌株YZX8生长情况影响示意图；
图12为不同NaCl浓度对菌株YZX8生长情况影响示意图；
图13为菌株YZX8的菌浓度为104个/ml时，培养三天后小黄白的平均的根长和茎长示意图；
图14为菌株YZX8的菌浓度为105个/ml时，培养三天后小黄白的平均的根长和茎长示意图；
图15为菌株YZX8的不同菌浓度对小黄白平均鲜重影响示意图；
图16为菌株YZX8的不同菌浓度对小黄白平均种子萌发率影响示意图；
图17为菌株YZX8菌浓度为104CFU/ml时小黄白萌芽示意图。
具体实施方式
本文涉及的培养基和试剂如下：
1、牛肉膏蛋白胨培养基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH＝7.0，121℃灭菌20min。
2、DF盐培养基：KH2PO4 4g，Na2HPO4 6g，MgSO4·7H2O 0.2g，(NH4)2SO4 2g，FeSO4·7H2O 1mg，硼酸10μg，ZnSO4 70μg，CuSO4 50μg，MoO3 10 μg，葡萄糖2g，葡萄糖酸2g，柠檬酸2g，去离子水1L，pH 7.2， 115℃，灭菌30min。
3、ADF盐培养基：把ACC溶于超纯水，用细菌过滤器过滤灭菌，加入到不含有(NH4)2SO4且预先灭菌的DF盐培养基中，pH＝7.2。ACC添加的终浓度为3.0mmol/L。
4、CCM液体培养基：MgSO4·7H2O 0.2g；KH2PO4 0.2g；甘露醇5.0g； K2HPO4 0.8g；CaCl2·2H2O 0.06g；蔗糖5.0g；NaMoO4·2H2O 2.5mg；酵母粉0.1g；乳酸0.5mL；NaCl 0.1g；1.64％乙二胺四乙酸钠铁(Na·Fe·EDTA) 4mL；总体积1000mL(蒸馏水补足)；pH＝7.0。
注：灭菌时将MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O和Na·Fe·EDTA分开灭菌，否则会产生沉淀。
5、解磷筛选培养基：葡萄糖10g，NaCl 0.3g，KCl 0.3g，(NH4)2SO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.3g，MnSO4·4H2O 0.03g，FeSO4·7H2O 0.03g，Ca3 (PO4)2 5g，去离子水1L，pH 7.0～7.2。
6、解钾筛选培养基：蔗糖5g，Na2HPO4 2g，(NH4)2SO4 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeCl30.005g，CaCO3 0.1g，钾长石粉5g，去离子水1L，pH 7.0～ 7.2。
7、钼锑抗贮存剂：
(1)A液：5g/L酒石酸氧锑钾溶液：取酒石酸氧锑钾(K(SbO) C4H4O6)0.5g,溶解于100ml水中。
(2)B液：钼酸铵-硫酸溶液：称取钼酸铵10g，溶于450ml水中，缓慢加入153ml浓硫酸，边加边搅拌。再将上述A溶液加入到B溶液中，最后加水至1L.充分摇匀，贮于棕色瓶中，即为钼锑抗贮存液。
8、钼锑抗混合显色剂(速效磷测定试剂)：称取1.50g抗坏血酸 (左旋，旋光度+12～+22，分析纯)溶于100ml钼锑抗贮存液中，混匀，此试剂有效期为24h，随配随用。
9、钾标准曲线制作试剂：1mol/L中性NH4OAc(pH＝7)溶液。称取化学纯CH3COONH477.09g加水稀释，用酸或NH4OH调至pH＝7.0，然后稀释至1L，即得。
10、Salkowski试剂：准确称取FeCl3 4.5g，溶于10.8M H2SO4中，冷却后定容至1L，即得。
实施例一：菌株的分离和鉴定
1、菌株分离：将从山东宁夏等地区采集的盐碱地原生植被(盐角草、芒草、玉米等)的根际进行处理：小心抖落根系表面土壤，将根际表面紧紧附着的土壤用灭过菌的软毛刷轻轻刷入无菌水中，得到根际土壤原液。使用一次性灭菌注射器吸取1ml所述根际土壤原液进行取样，血球计数板计数，分别稀释到103、104、105和106稀释度，再将各个稀释度分别涂布到分别含有1％、5％、10％NaCl(w/v)的牛肉膏蛋白胨培养基中。将各培养皿倒置30℃恒温培养1～4天，挑取不同类型的典型单菌落，经平板纯化后，4℃斜面保藏。
具体纯化方法为：在无菌操作环境下，用接种环挑取少量菌种，在含有10％NaCl的牛肉膏蛋白胨培养基中，使用平板划线法，划出3～4 条平行线后，再在与第一区垂直的区域，由第一区带到第二区再划出3～ 4条平行线，重复该步骤划至第四区。之后将平板30℃倒置培养2～3 天后，再用平板划线法进行纯化。用以上方法纯化3～4次后，用接种环挑取少量菌种，转接至含有10％NaCl的牛肉膏蛋白胨培养基(斜面) 中，4℃保藏。
其中，所述含10％NaCl的牛肉膏蛋白胨培养基是在牛肉膏蛋白胨培养基的基础上，根据所需NaCl的量，直接在牛肉膏蛋白胨培养基中额外再添加足量NaCl即可。下文中涉及到含某一质量分数NaCl的培养基，均采用相同方法制备得到。
经过菌株初步分离，发明人发现其中一株菌株具有良好的耐盐碱性能，命名为YZX8。
2、菌株菌落形态及生理生化特征鉴定
(1)如图1所示，通过观察发现，形态特征为：菌株为短棒状， 0.4～0.8nm×0.8～1.1nm，革兰氏染色为阳性，单极生鞭毛，生芽孢。如图2所示，其菌落特征为：在牛肉膏蛋白胨平板上培养48h后，菌落呈淡橙色，菌落为圆形，表面凸起，光滑，较粘稠，易挑取。
(2)生理生化特征为：生长pH值范围为5.0～8.0，最适生长pH 值为8，生长温度范围为4～37℃，最适生长温度为28℃，耐盐(NaCl， w/v)范围为0％～20％，最适盐浓度为7％(对应的可溶性总盐浓度为 70g/L)。如图3所示，菌株YZX8的生长曲线显示，菌株YZX8的延滞期为5h左右，对数期为25h左右，稳定期为7h左右。
3、分子鉴定
测定菌株的16SrDNA序列：
27F(正向引物)：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′；
1492R(反向引物)：5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′。
以分离菌株的总DNA为模板进行PCR扩增。
扩增反应体积25μl，反应条件为94℃预变性5min；94℃变性1min， 55℃退火1min，72℃延伸1.5min，循环30次；最后72℃延伸10min。取PCR产物4μL于1％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。PCR产物送至上海生工公司进行纯化和测序。测序结果如SEQ ID NO.1所示。
将测序结果提交GenBank数据库，用BLAST软件进行比对分析。将测序结果用BLAST软件与GenBank中得到的16SrDNA相关菌株的序列一起输入MEGA6.0进行DNA同源性比较和排列，构建系统发育谱系图，如图4所示，发现YZX8的16SrDNA序列与盐生杆菌Bacillusholotolerant 序列同源性为78％。
生理生化特征及分子鉴定，证明菌株YZX8为盐生杆菌(Bacillus halotolerans)，该菌已于2018年7月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为：CGMCC No.16172，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。
实施例二：菌株YZX8产ACC脱氨酶的能力展示
ACC是植物中乙烯的直接前体物质，而乙烯作为重要的植物激素，具有促进果实成熟、促进叶片衰老、诱导不定根和根毛发生、打破种子休眠状态等作用。在干旱等恶劣环境的胁迫下，植物根系的依稀代谢增强，加快叶片成熟、衰老和死亡，降低叶片光合作用，从而降低作物产量。
发明人发现，菌株YZX8可以分泌ACC脱氨酶，将ACC降解为α-丁酮酸和氨，降低ACC浓度，进而促进根系不断向外分泌ACC，从而降低植物内部的ACC和应激乙烯浓度，减轻恶劣环境对植物的伤害，促进植物的正常生长发育。通过测定生产的α-丁酮酸的量，可以计算出菌株 YZX8产ACC脱氨酶的能力。
1、合成α-丁酮酸
设置三个重复，将菌株YZX8按接种量为一接种环接种于5mL牛肉膏蛋白胨培养基(液体)中，30℃180r/min振荡培养24h,再12000r/min，离心10min收集菌体。用不含(NH4)2SO4的DF盐培养基离心(12000 r/min)、洗涤2次，将菌体重悬于含有10％NaCl(w/v)的ADF盐培养基中(30℃振荡培养24h)。
收集菌体，用0.1mol/L Tris-HCl缓冲液(pH＝7.6)12000r/min,离心5min、洗涤2次(-20℃储存)。重悬于1mL 0.1mol/L Tris-HCl缓冲液中(pH＝7.6)，12000r/min离心5min收集菌体，重悬于600μL 0.1mol/L Tris-HCl缓冲液(pH＝8.5)中，添加30μL甲苯迅速振荡30s 以破碎细胞，得细胞破碎液，取100μL细胞破碎液液4℃储存用于测定蛋白浓度。
另取细胞破碎液200μL并加入20μL 0.5mol/L ACC混匀进行水浴(30℃,15min)，以不添加ACC的空白作对照。同时加入1mL 0.56mol/L HCl终止反应，12000r/min离心5min。取上清液1mL加入800μL 0.56mol/L HCl和300μL 0.2％2,4-二硝基苯肼溶液，使其充分溶解，30℃恒温30min,再加入2mL 2mol/L NaOH混匀，540nm测吸光度值。
2、绘制标准曲线
(1)试剂制备：
1)2g NaOH，10gNa2CO3,用去离子水定容至500ml，作为A液。
2)1.9548g CuSO4·5H2O，用去离子水定容至100ml。
3)4.5886g KNaC4H4O6·4H2O(四水合邻苯二甲酸氢钾)，用去离子水定容至100ml。
4)将2)、3)制备的溶液各取1ml，加水至2.5ml混匀，作为B 液。
5)按体积比，A液：B液＝50:1，混匀即得C液。
(2)绘制标准曲线：
1)绘制α-丁酮酸标准曲线：利用0.1mol/LTris-HCl(pH＝8.5)缓冲液，配制100mmol/L的α-丁酮酸母液。将该浓度的母液稀释为 10mmol/L的α-丁酮酸溶液，将其加入试管中，用0.1mol/L Tris-HCl 缓冲液(pH＝8.5)补加至1ml,α-丁酮酸浓度范围为0.024～0.293μmol/ml。以吸光度值(OD540)为纵坐标，以α-丁酮酸的浓度(mmol/L) 为横坐标绘制标准曲线，如图5所示。
2)绘制牛血清蛋白标准曲线：将标准牛血清蛋白试剂配制为250 μg/ml，并再制备为0～25μg/ml的系列溶液，并据此绘制浓度为0～ 25μg/ml的牛血清蛋白标准曲线，如图6所示。
3、测定α-丁酮酸合成量
取所述细胞破碎液1ml，与所述的C液5ml混合均匀，放置10min 后，加入0.5ml 1M福林酚，放置30min，于750nm处比色。
ACC脱氨酶将ACC分解为α-丁酮酸和氨，通过测定合成的α-丁酮酸的浓度以及蛋白浓度，可以用来表示菌体每毫克蛋白每小时降解ACC 合成α-丁酮酸的能力。
4、菌株YZX8产ACC脱氨酶的能力为＝(α-丁酮酸(μmol)/对应蛋白质量(mg·Pr))/反应时间。菌株YZX8以ACC为唯一氮源培养一天后，菌株YZX8体内产生ACC脱氨酶。在30℃、以ACC为催化底物水浴15min 后，ACC脱氨酶将ACC分解为α-丁酮酸以及氨。测定细胞破碎液中α- 丁酮酸含量，测定结果分别为0.00100μmol，0.00098μmol，0.00101μmol。同时将细胞破碎液按照上述蛋白浓度测定方法进行蛋白总含量的测定，测定结果分别为0.018mg，0.016mg，0.020mg。ACC脱氨酶分解ACC的反应时间为15min，0.25h。
经计算得，菌株YZX8产ACC脱氨酶的能力为：0.22±0.02μmolα -KA/(mg·Pr·h)。
实施例三：菌株YZX8产IAA的能力展示
IAA又名吲哚乙酸，可以促进细胞生长和分化，进而促进植物的生长发育。发明人发现，菌株YZX8可以分泌IAA,进而促进植物生长。
1、将菌株YZX8接种于5mL牛肉膏蛋白胨培养基(液体)中，30℃， 180r/min培养20h，取1mL接种于50mL含10％NaCl(w/v)CCM液体培养基中。取1ml牛肉膏蛋白胨培养基接种于CCM液体培养基中，作为对照组。分别于28℃，180r/min培养3～4d后，取2mL CCM液体培养基中的菌悬液，12000r/min，4℃，离心5min，取上清液1mL与5mL Salkowsky 试剂混合，室温暗处比色30min，在530nm下测定其吸光度值。
2、IAA标准曲线的绘制：将3-IAA(3-吲哚乙酸)标准溶液配置为 250mg/L，分别稀释至2.5、5、10和25mg/L，并按体积比1:5与Salkowski 试剂混合，室温避光放置30min，分别测定各浓度标准液在波长为530nm 处的吸光值。以IAA浓度为横坐标，OD530值为纵坐标作图，即得到IAA 标准曲线，如图7所示。
3、菌株YZX8的三个重复样品的OD530分别为0.087、0.082、0.080，空白对照OD530分别为0.04、0.042、0.041，代入标准曲线 y＝0.0134x+0.0232，再根据稀释倍数，计算得菌株YZX8产IAA的能力为18.81±1.52mg/L。
实施例四：菌株YZX8解磷能力展示
1、速效磷标准曲线的制作：
准确称取分析纯KH2PO4 0.2195g，溶于400ml蒸馏水中。加浓硫酸 5ml，转入1000ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，此溶液为50mg/L 磷标准液，现配现用。
分别吸取50mg/L磷标准液0、1、2、3、4、5(ml)于50ml容量瓶中，加钼锑抗混合显色剂5ml，除尽气泡后定容，充分摇匀，即为0、 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/L的磷系列标准液。30min后在880nm处测定吸光度值，以吸光度值为纵坐标，以磷系列标准液浓度为横坐标，绘制磷标准曲线，如图8所示。
2、将菌株YZX8接种于5mL牛肉膏蛋白胨培养基中，30℃，180r/min 培养20h，取菌液2mL接种于80mL含有10％NaCl(w/v)解磷筛选培养基中。在相同条件的解磷筛选培养基中接入1ml未接菌的牛肉膏蛋白胨培养基，作为对照组。分别于30℃，180r/min培养，隔12h取样， 11000r/min离心5min，取上清液测定速效磷含量，同时测定上清液的 pH变化，结果如图9所示。
3、由图9可以看出，在培养的5d时，接种菌株YZX8的解磷筛选液体培养基中的速效磷含量可以达到2.22mg/L的水平，说明在高浓度盐胁迫环境(10％NaCl，w/v)下，菌株YZX8具备较佳的溶磷能力。在实际应用中，可以使用该菌将盐碱地中的难溶磷(如钙磷酸盐等)分解为能被植物利用的速效磷，促进植物增长。
实施例五：菌株YZX8解钾能力展示
钾标准曲线的制作：称取KCl(二级，110℃烘干2h)0.1907g溶于 1mol/L NH4OAc溶液中，定容至1L，即为含100mg/L K的NH4OAc溶液。同时分别准确吸取次100mg/L K标准液0.2、0.6、1、1.5、2ml放入100ml 容量瓶中，用1mol/L NH4OAc溶液定容，即得0、0.6、1、1.5、2mg/L K标准系列溶液；用火焰原子吸收光谱仪测定K标准系列溶液的吸光度值Abs。以K标准系列溶液浓度为横坐标，以吸光度值Abs为纵坐标，绘制钾标准曲线，如图10所示。
将菌株YZX8接种于5ml牛肉膏蛋白胨培养基中，30℃，180r/min 培养20h，取菌液2mL接种于50mL含有10％NaCl(w/v)解钾筛选培养基中。在相同的解钾培养基中接入2ml未接菌的牛肉膏蛋白胨培养基，作为对照组，分别30℃，180r/min培养，3～4d后，取上清液，使用火焰原子吸收光谱法，测定速效钾含量。具体方法为：取1ml上清液，过 0.45μm水系滤膜，取0.5ml滤液定容至5ml(稀释10倍)，用火焰原子吸收光谱仪测定速效钾含量，代入速效钾标准曲线： y＝0.0916x-0.0138中，得到稀释后的样品速效钾浓度，再乘以稀释倍数即得样品中的速效钾含量。
测得的YZX8的三个重复稀释10倍后的值分别为0.0967、0.0926、 0.1041，三个空白对照值分别为0.0584、0.0583、0.0531，计算得菌株 YZX8的解钾量为4.50±0.64mg/L。
实施例六：菌株YZX8的耐盐碱能力
1、碱性耐受实验：将菌株YZX8接种于5ml牛肉膏蛋白胨培养基中，培养20h后，按照1ml/30mL的接种量转接到pH分别为7、8、8.5、9、 9.5、10的牛肉膏蛋白胨培养基(2％NaCl，w/v)中，30℃，180r/min 摇床培养两天后，测定培养液OD600，以不接菌的牛肉膏蛋白胨培养基作为空白对照。结果如图11所示。
2、NaCl耐受实验：将菌株YZX8接种于5ml牛肉膏蛋白胨培养基中，培养20h后，按照1ml/30mL的接种量转接到分别含有有0、1％、2％、5％、 7％、10％、12％、15％、20％(w/v)NaCl的牛肉膏蛋白胨培养基(pH＝7.2)， 30℃，180r/min摇床培养两天后，测定培养液OD600，以不接菌的牛肉膏蛋白胨培养基作为空白对照。结果如图12所示。
由图11、12可以看出，菌株YZX8可以耐受较高的pH以及NaCl含量，可实际应用于盐碱地改良中。
实施例七：菌株YZX8的种子萌发能力展示
对小黄白种子(小白菜的一种)进行表面消毒：70％酒精浸泡五分钟，无菌水冲洗3次。
将菌株YZX8接种于5ml牛肉膏蛋白胨培养基中，30℃，180r/min 过夜培养。取菌液血球计数板计数，将菌液中的菌数稀释至104～105个 /ml得稀释菌液。准备高压灭菌烘干后的装有三层滤纸的培养皿，取5ml 稀释后的菌液，以同样稀释倍数的未接菌的牛肉膏蛋白胨培养基为空白对照，在无菌条件下，使用稀释菌液和未接菌培养基分别将滤纸充分均匀润湿。取已表面消毒的小黄白种子，将其均匀置于滤纸上，30℃培养，观察其生长情况。培养三天后，将培养皿取出，测定每皿种子萌发率、根茎长以及平均鲜重。结果分别如图13～16所示。
由图可知，菌株YZX8在小黄白种子萌发过程中，当CFU为104个/ml 时，与相同稀释倍数的营养牛肉膏蛋白胨培养基处理组相比，小黄白的根茎长度、平均鲜重以及萌发率分别提高了13.5％、14.1％、14.2％、0.7％。当CFU为105个/ml时，与相同稀释倍数的营养牛肉膏蛋白胨培养基处理组相比，小黄白的根茎长度、平均鲜重以及萌发率分别提高了15.4％、7.0％、3％、10.3％。
菌株YZX8在其它常见作物的种子萌芽试验中也展示出类似结果，说明菌株YZX8确实具有良好的促萌发、促生长作用。
序列表
<110> 中国科学院成都生物研究所
<120> 一株具备植物促生作用的耐盐芽孢杆菌
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1452
<212> DNA
<213> 盐生芽孢杆菌(Bacillus holotolerant)
<400> 1
cgcatggggg tgctataatg caagtcgagc ggacagatgg gagcttgctc cctgatgtta 60
gcggcggacg ggtgagtaac acgtgggtaa cctgcctgta agactgggat aactccggga 120
aaccggggct aataccggat gcttgtttga accgcatggt tcaaacataa aaggtggctt 180
cggctaccac ttacagatgg acccgcggcg cattagctag ttggtgaggt aacggctcac 240
caaggcaacg atgcgtagcc gacctgagag ggtgatcggc cacactggga ctgagacacg 300
gcccagactc ctacgggagg cagcagtagg gaatcttccg caatggacga aagtctgacg 360
gagcaacgcc gcgtgagtga tgaaggtttt cggatcgtaa agctctgttg ttagggaaga 420
acaagtaccg ttcgaatagg gcggtacctt gacggtacct aaccagaaag ccacggctaa 480
ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttgtccggaa ttattgggcg 540
taaagggctc gcaggcggtt tcttaagtct gatgtgaaag cccccggctc aaccggggag 600
ggtcattgga aactggggaa cttgagtgca gaagaggaga gtggaattcc acgtgtagcg 660
gtgaaatgcg tagagatgtg gaggaacacc agtggcgaag gcgactctct ggtctgtaac 720
tgacgctgag gagcgaaagc gtggggagcg aacaggatta gataccctgg tagtccacgc 780
cgtaaacgat gagtgctaag tgttaggggg tttccgcccc ttagtgctgc agctaacgca 840
ttaagcactc cgcctgggga gtacggtcgc aagactgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg 900
cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt 960
cttgacatcc tctgacaatc ctagagatag gacgtcccct tcgggggcag agtgacaggt 1020
ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc 1080
aacccttgat cttagttgcc agcattcagt tgggcactct aaggtgactg ccggtgacaa 1140
accggaggaa ggtggggatg acgtcaaatc atcatgcccc ttatgacctg ggctacacac 1200
gtgctacaat ggacagaaca aagggcagcg aaaccgcgag gttaagccaa tcccacaaat 1260
ctgttctcag ttcggatcgc agtctgcaac tcgactgcgt gaagctggaa tcgctagtaa 1320
tcgcggatca gcatgccgcg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcaca 1380
ccacgagagt ttgtaacacc cgaagtcggt gaggtaacct ttaggagcca gccgccgaag 1440
tgaacaagat ga 1452
Claims (10)
1.一株盐生芽孢杆菌，其特征在于：于2018年7月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.16172。
2.一株盐生芽孢杆菌，其特征在于：其16Sr DNA序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种获得权利要求1或2所述盐生芽孢杆菌的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)制备根基土壤原液：无菌环境下，以水为介质，使用盐碱地原生植被根际表面附着的土壤制备悬液，即得根基土壤原液；
(2)将所述根基土壤原液涂布到牛肉膏蛋白胨培养基中，30℃恒温培养1～4天，即得所述盐生芽孢杆菌。
4.权利要求1或2所述的盐生芽孢杆菌在促进植物生长中的应用。
5.根据权利要求4所述盐生芽孢杆菌在促进植物生长中的应用，其特征在于：所述应用中，所述盐生芽孢杆菌的菌浓度为104～105CFU/ml。
6.根据权利要求4所述盐生芽孢杆菌在促进植物生长中的应用，其特征在于：所述应用的温度为4～37℃，所述应用的pH为5.0～8.0。
7.根据权利要求6所述盐生芽孢杆菌在促进植物生长中的应用，其特征在于：所述应用的温度为28℃，所述应用的pH为8.0。
8.权利要求1或2所述的盐生芽孢杆菌在改良盐碱地土质中的应用。
9.根据权利要求8所述的盐生芽孢杆菌在改良盐碱地土质中的应用，其特征在于：所述应用中盐碱地的可溶性总盐浓度为0～200g/L。
10.根据权利要求9所述的盐生芽孢杆菌在改良盐碱地土质中的应用，其特征在于：所述可溶性总盐浓度为70g/L。
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