CN111484947A - 一种耐高温的解磷固氮芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种耐高温的解磷固氮芽孢杆菌及其应用，该菌株为所述的芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌FJAT‑14464，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC NO.16329。本发明的芽孢杆菌既能解磷又能固氮，可提高土壤肥力，为植物生长提供充足的营养，还可以明显地促进农作物的生长，使其根系发达，增强农作物的抗逆能力。另外，还具有耐高温的性能，有利于农业废弃物的堆肥处理。

Description

一种耐高温的解磷固氮芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株既耐高温又解磷固氮的芽孢杆菌菌株，及其在植物生长中的应用。
背景技术
土壤供磷水平的高低是影响植物生长的关键因素之一，土壤中95％的磷为无效形式，植物难以直接吸收与利用，导致了全国74％的耕地土壤存在缺磷的现象。
在作物-微生物互作体系中，植物根际促生细菌(Plant growth-promotingrhizobacteria，PGPR)定殖于作物的根际土壤，能有效分解土壤中难溶及被固定的元素(磷、钾等)，促进作物对肥料和土壤中元素的吸收，从而促进作物生长、增产以及抗病等。因此，筛选研制高效促生功能的微生物肥料并应用于农业生产，充分利用土壤潜在元素资源，对改善土壤磷钾等元素短缺、减少环境污染、促进农业可持续发展具有重要意义。
发明内容
为此，需要提供一种促生解磷固氮的菌株，解决土壤中磷钾等元素无法被植物吸收利用的问题。
为实现上述目的，发明人提供了如下技术方案：
一种耐高温的解磷固氮芽孢杆菌，其特征在于：所述的芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌FJAT-14464，学名为Bacillus subtilis subsp.inaquosorum FJAT-14464，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC NO.16329，保藏日期为2018年8月21日，保藏地址为中国北京市中国科学院微生物研究所。
芽孢杆菌FJAT-14464的菌落形态为：菌落为圆形，表面湿润半透明，有褶皱，颜色为浅白色。
其中，所述的芽孢杆菌的发酵方法为：将芽孢杆菌接种于LB液体培养基中，25-35℃振荡培养48-72h，获得种子液；然后将种子液接种于LB液体培养基中，在30℃-60℃条件下振荡培养48-72h。
进一步的，所述的耐高温的解磷固氮芽孢杆菌在降解难溶性磷酸盐中的应用。
进一步的，所述的耐高温的解磷固氮芽孢杆菌在促进植物种子萌发中的应用。具体方法为：将所述的芽孢杆菌发酵液配制成浓度为1×105-1.5×105cfu/mL的菌悬液，浸种2-3天，将其置于25-30℃，光照16-20h/天。
进一步的，所述的耐高温的解磷固氮芽孢杆菌在植物固氮中的应用。
进一步的，所述的耐高温的解磷固氮芽孢杆菌在制备解磷固氮复合菌剂中的应用。
一种植物促生菌剂，包括所述的芽孢杆菌。
本发明的有益效果是：
(1)本发明的芽孢杆菌能有效降解无机磷，促进难溶的磷酸盐释放出磷，提高土壤中可溶性磷的含量，从而可明显地促进农作物的生长，使其根系发达，增强农作物的抗逆能力。
(2)本发明的芽孢杆菌能提高植物种子的活力，促进种子生根发芽，可以有效缩短植物生长周期。
(3)本发明的芽孢杆菌能耐高温，有利于堆肥发酵。
附图说明
图1为具体实施方式所述的芽孢杆菌FJAT-14464的菌落形态。
图2为具体实施方式所述的芽孢杆菌FJAT-14464的16S rRNA序列鉴定结果的进化树。
图3为具体实施方式所述的芽孢杆菌FJAT-14464对番茄种子生长的影响。
图4为具体实施方式所述的芽孢杆菌FJAT-14464对番茄种子的促生效果。
具体实施方式
为详细说明技术方案的技术内容、所实现目的及效果，以下结合具体实施例并配合附图详予说明。
实施例1芽孢杆菌的解磷作用
1.试验材料
1.1试验菌株
供试菌株：芽孢杆菌FJAT-14464，分离自漳州南靖香蕉发病植株，-80℃甘油冷冻保存，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC NO.16329。
1.2培养基
活化培养基：(1)LB固体培养基(购自生工)配方：胰蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母粉5g，琼脂15g，水1000mL，pH 7.0。(2)LB液体培养基(购自生工)配方：胰蛋白胨10g，氯化钠10g，酵母粉5g，水1000mL，pH 7.0。
无机磷培养基(NBRIP培养基)：葡萄糖10g，Ca3(PO4)25g，MgCl2·6H2O 5g，KCl0.2g，MgSO4·7H2O 0.25g，(NH4)2SO40.1g，蒸馏水1000mL，自然pH。
有机磷生长培养基：葡萄糖10g，硫酸铵0.5g，酵母浸粉0.5g，氯化钠0.3g，氯化钾0.3g，硫酸镁0.3g，硫酸亚铁0.03g，硫酸锰0.03g，卵磷脂0.2g，碳酸钙1.0g，蒸馏水1000mL，琼脂15g，pH 7.0-7.5。
1.3试验试剂的配制
钼锑抗贮存溶液：量取153mL浓硫酸(分析纯，密度1.84g/mL)，缓缓加入到400mL蒸馏水中，不断搅拌，至冷却。另称取经磨细的钼酸铵10g倒入其中，搅拌溶解。再加入0.5％(5g/L)酒石酸锑钾溶液100mL，冷却后，加水稀释至1000mL，摇匀，贮于棕色试剂瓶中，此储备液含钼酸铵1％，硫酸2.75moL/L。
钼锑抗显色剂：称取1.50g抗坏血酸溶于100mL钼锑抗贮存溶液中，此溶液有效期不长，宜随配随用。
5mg/L磷标准溶液：0.4394g在50℃烘干的磷酸二氢钾(KH2PO4，分析纯)，100mL水，加5mL浓硫酸(防腐)，用水定容到1L，浓度为磷100mg/L，此溶液可长期保存。吸取上述溶液5mL于100mL容量瓶中，加水定容，此为浓度5mg/L磷标准溶液，此溶液不宜久存。
2.试验方法
2.1解磷能力测定
2.1.1试验菌株的活化
-80℃冰箱取出试验菌株，待其回温到室温，于超净台内划线于LB固体琼脂培养基平板中，倒置于生物培养箱30℃培养2d。2d后观察其菌落形态，挑取单菌落进行第二次划线培养，保证活化菌落形态单一。挑取适量单菌落于LB液体培养基中，170rpm，30℃摇床培养2d，获得种子液。
2.1.2液体摇瓶发酵
将种子液稀释2倍，酶标仪检测OD600nm，结合显微镜下细菌计数，进行适当稀释，将菌密度调节至108cfu/mL(稀释2倍后的菌液OD600nm在0.3-0.5之间)，分别接种200μL于含10mL有机磷和无机磷液体培养基的50mL离心管中，于230rpm，30℃摇床培养6d，以接200μL无菌水做对照，每个试验菌做两个重复。
2.1.3钼锑抗法检测上清液有效磷含量
a.上清液制备
将培养6d的发酵液1200rpm，离心30min，取上清液，弃沉淀。
b.标准曲线的绘制
分别准确吸取5mg/L磷标准溶液0、2、4、6、8、10mL于50mL容量瓶中，用水稀释至总体积约3/5处，加2滴2,6-二硝基苯酚作指示剂，50mL/L稀硫酸(或盐酸)和10％氢氧化钠调节至溶液刚呈微黄色，准确加入5mL钼锑抗显色剂，摇匀，加水定容，即得含磷量分别为0.0、0.2、0.4、0.8、1.0mg/L的标准溶液系列。摇匀，于室温15℃以上，放置30min。在波长700nm处，测定其吸光度，以吸光度为纵坐标，磷浓度(mg/L)为横坐标，绘制标准曲线。
c.上清液中有效磷含量测定
将适量上清液移至50mL容量瓶中，用水稀释至总体积约3/5处，加入二硝基酚指示剂1-2滴，准确加入5mL钼锑抗显色剂，摇匀，加水定容，室温15℃以上，放置30min。读取吸光度OD700nm，再从标准曲线上查得相应的含磷量。
d.上清液中有效溶磷含量计算
上清液有效磷含量p(mg/L)＝上清液浓度×比色体积×分取倍数/发酵液总体积
其中，上清液浓度：从标准曲线中查得磷的浓度mg/L；
比色体积：定容50mL；
分取倍数＝发酵液总体积/取样量体积。
有效溶磷量P(mg/L)＝菌株上清液有效磷含量-对照上清磷含量
2.2解磷菌形态和16s rRNA鉴定
解磷菌形态：将纯化后的芽胞杆菌划线接种至LB平板上，30℃恒温培养48h。待长出菌落后，观察菌落的大小、颜色、边缘整齐度、湿润度等特征。
分子学鉴定：将纯种菌株接种至LB液体培养基，置于30℃摇床，培养至对数期后，采用Tris-饱和酚法提取菌株FJAT-14464的基因组DNA，采用16S rRNA基因通用引物27F和1492R进行PCR扩增，PCR反应程序参照郑雪芳等的文献(郑雪芳,刘波,朱育菁,等.番茄青枯病生防芽孢杆菌的筛选与鉴定[J].中国生物防治学报,2016,32(5):657-665.)，PCR产物送至上海博尚生物技术有限公司进行Sanger测序，应用EZBioCloud完成序列同源性比对，通过MEGA 6.0.6软件分析序列和构建系统发育树。
2.3耐高温性能测定
制备种子液：挑取单菌落于LB培养基中，170rpm 30℃恒温培养48h，用灭菌过的超纯水稀释至OD600nm＝0.75～0.85(菌密度108cfu/mL左右)。
吸取200μL种子液接种于5mL LB液体培养基中，以空白培养基为对照，分别于30℃和60℃下170rpm培养48h，每株菌3个重复，于酶标仪检测OD600nm值。
3.试验结果
3.1解磷能力测定
芽孢杆菌FJAT-14464对有机磷和无机磷的解磷能力见表1。实验结果显示，芽孢杆菌FJAT-14464对无机磷有较明显的解磷效果，而对有机磷的解磷效果较差。
表1芽孢杆菌FJAT-14464的解磷能力
Figure BDA0001960399070000061
由此可见，芽孢杆菌FJAT-14464作为一种溶磷(降解无机磷)微生物能够促进磷灰石Ca3(PO4)2等难溶的磷酸盐释放出磷，提高土壤中可溶性磷的含量，从而可明显地促进农作物的生长，使其根系发达，有助于增强农作物的抗逆能力。
3.2菌株鉴定
3.2.1菌株形态
FJAT-14464的菌落形态为：菌落为圆形，表面湿润半透明，有褶皱，颜色为浅白色。菌落形态如图1所示。
3.2.2 16S rRNA基因的鉴定
菌株FJAT-14464的16S rRNA基因的核酸序列如下：
TGCAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTAGGAGCCAGCCGCCGAAG(SEQ ID NO:1)
将菌株FJAT-14464的16S rRNA基因序列SEQ ID NO:1与EZBioCloud基因数据库比对，菌株FJAT-14464与Bacillus subtilis subsp.inaquosorum亲缘关系最近，16S rRNA基因同源性为99.93％，所以菌株FJAT-14464应属于Bacillus subtilis subsp.inaquosorum枯草芽孢杆菌。将同源性较高菌株的16S rRNA基因序列下载进行对比分析，构建系统发育树，采用Neighbour-Joining方法，Bootstrap值为1000次时，形成的发育树如图2所示。构建的系统发育树中，菌株FJAT-14464与Bacillus subtilis subsp.inaquosorum聚在同一个分支。
3.3耐高温性能测试
芽孢杆菌FJAT-14464在60℃高温下测试结果见表2。实验结果显示，在高温60℃环境中培养48h后，FJAT-14464菌株的菌密度>5×107cfu/mL。说明芽孢杆菌FJAT-14464显示出较好的耐高温性能，特别有利于堆肥发酵。
表2菌株的耐高温性能测试结果
Figure BDA0001960399070000081
实施例2芽孢杆菌的促生作用
1.番茄促生试验方法
挑取试验菌株单菌落接种于含100mL LB液体培养的250mL锥形瓶中，30℃培养48h(显微镜下进行细菌计数，菌密度达108cfu/mL以上)。将试验菌发酵液稀释1000倍，并以清水作为对照(ck)。
挑选长势相对一致的番茄种子置于底部铺置2-3层滤纸的9cm的透明培养盒中，每培养盒15粒绿豆种子，将其置于27℃恒温人工气候箱，光照16h、黑暗8h。跟踪观察番茄发芽情况，记录发芽数，直到连续3d无新的发芽粒出现，测量番茄发芽胚根机胚芽长度，分析试验菌对番茄种子发芽的促进效果。
发芽率％＝(指定天数的发芽种子数/供试种子数)×100％
发芽指数＝∑(Gt/Dt)，其中Gt为第t d的发芽种子数，Dt为相应发芽天数。
活力指数＝发芽指数×胚根长(cm)
本次试验数据采用DPS软件，新复极差法(Duncan)进行各处理间数据差异显著性测验。
2.试验结果
试验组与ck组比较，见表3、图3、图4。实验结果显示，与ck对照组番茄种子生长效果比较，芽孢杆菌FJAT-14464稀释1000倍即菌浓约为1×105-1.5×105cfu/mL，其发芽率、发芽指数、根长、茎长、种子活力指数分别是ck对照的105.27％、87.73％、314.63％、133.21％、275.95％，五个指数与ck对照具有显著性差异，并且用菌液浸泡过的种子长出的根茎也比较粗壮。因此，用芽孢杆菌FJAT-14464发酵液浸泡番茄种子，可明显促进种子发芽和生长。
表3芽孢杆菌FJAT-14464对番茄种子的促生能力
Figure BDA0001960399070000091
注：上表中，ab表示显著性差异(P<0.05)
实施例3芽孢杆菌的固氮作用
1.固氮效能测定方法(国标NY411-2000)
在500mL三角瓶中加入100mL无氮培养基(配方：磷酸二氢钾0.2g，七水合硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，硫酸钙5g，甘露醇10g，二水合硫酸钙0.1g，水1000mL，pH 7.0)，121℃灭菌30min。无菌操作，每瓶接入两环待测菌株(或1mL培养3d的发酵液)，放置摇床上30℃振荡(120r/min)培养5-7d后，取出定糖测氮。采用蒽酮光电比色法定糖。采用微量光电比色法测氮。
1.1蒽酮光电比色法
1.1.1试验处理：取发酵培养的菌液1-4mL(取决于含糖量)，稀释至100mL，取此稀释液1.00mL于比色管中，加水至2mL，每管加入蒽酮试剂4mL，摇匀，煮沸加热15min，冷却后，于620nm处进行比色测定，记录吸光度，同时进行空白试验。
1.1.2标准曲线绘制：吸取1.000mg/mL葡萄糖标准溶液1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00、20.00mL于100mL容量瓶中，加水至刻度，该液分别含糖10、20、40、60、80、100、200μg/mL。吸取1.00mL放入比色管中，加水至2.00mL，按1.1.1方法测定，记录吸光度。用标准系类的含糖量定义横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
1.1.3分析结果的计算
100mL溶液中含糖量(X)按式(C1)计算：
Figure BDA0001960399070000101
式中：m1--标准曲线上查出的试验含糖量，μg/mL；
m2--标准曲线上查出的空白试验含糖量，μg/mL；
m-吸取发酵液体积，mL。
允许差：a)取平行测定的算术平均值为测定结果；
b)平行测定结果的允许差不大于0.005g/100mL。
1.2固氮菌液全氮比色测定法
1.2.1试样制备和测试：吸取固氮菌液1.00mL于30mL消化管中，加硫酸3mL，加0.1g催化剂和5滴双氧水消煮至清亮，若反应液久煮不清，可冷却后加1-2滴双氧水，继续煮至无色透明，取下冷却。加少许蒸馏水，摇匀，滴加40％(m/V)氢氧化钠溶液至出现氢氧化铜沉淀(约11-12mL)，加50％(m/V)酒石酸钾钠溶液20滴，以除去氢氧化物沉淀掩蔽钙镁，将试管液全部移至100mL容量瓶中，消化管洗涤液一并倒入容量瓶，稀释至刻度，摇匀。过滤，滤液10.00mL于比色管中，加2mol/L氢氧化钠1.00mL，加酒石酸钾钠1.00mL，加奈氏试剂(7.1g碘化钾，10g碘化汞溶于少量水中，另配16g氢氧化钠溶于70mL水中，冷却后将前一溶液缓缓倒入氢氧化钠溶液中，边加边搅拌，最后用水稀释至100mL，静置过夜，取清液贮于棕色瓶中)3mL，摇匀，显示2-3min后，即倒入比色杯中，于420nm处比色计测定。读取吸光度。
1.2.2标准曲线的绘制
准确称取在(105±5)℃烘1h直至恒重的优级试剂硫酸铵0.4716g，溶于水，稀释至100mL，该液含氮1mg/mL，取此液0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00mL放入100mL容量瓶，用水稀释至刻度，其含氮分别为0.50、1.00、2.50、5.00、10.00、20.00μg/mL，取标准液各1mL放入比色管中，加水至2mL，按1.2.1方法测定，记录吸光度。
用标准液的氮含量为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。
1.2.3分析结果的计算
氮(X)含量以g/100mL表示，按式(C2)计算：
Figure BDA0001960399070000111
式中：m1--标准曲线上查出的试验含氮量，μg/mL；
m2--标准曲线上查出的空白试验含氮量，μg/mL；
m-吸取发酵液体积，mL。
允许差：a)取平行测定的算术平均值为测定结果；
b)平行测定结果的允许差不大于0.005g。
1.3固氮效能计算
固氮菌每消耗1g碳水化合物(糖)从空气中摄取氮素的毫克数，固氮效能用mg氮/g糖表示。
2.试验结果
实验测得，芽孢杆菌FJAT-14464的糖耗量为168.28mg/L，固氮量为3.28mg/L，固氮效能为19.49mg/g。实验结果表明，芽孢杆菌FJAT-14464具有较好的固氮能力。
综上所述，一方面，芽孢杆菌FJAT-14464具有解磷和促生长的作用。在实际应用过程中，可以将发酵液稀释至少1000倍即菌浓1×105-1.5×105cfu/mL浸泡植物种子，来促进种子发芽生长。另一方面，芽孢杆菌FJAT-14464具有较好的解磷效果和固氮效能，可将菌悬液作为微生物有机肥直接施用，用以改善土壤肥力，更好地为植物生长提供营养；或者将菌液冻干制成固态微生物有机肥，以方便贮存和运输，加水溶解后使用；还可以将芽孢杆菌FJAT-14464与其他功能菌株混合制成复合菌剂，以进一步提高解磷固氮效果。再一方面，芽孢杆菌FJAT-14464可耐高温，作为微生物发酵菌剂应用于农业废弃物的堆肥处理，可生产生物有机肥。
需要说明的是，尽管在本文中已经对上述各实施例进行了描述，但并非因此限制本发明的专利保护范围。因此，基于本发明的创新理念，对本文所述实施例进行的变更和修改，或利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，直接或间接地将以上技术方案运用在其他相关的技术领域，均包括在本发明的专利保护范围之内。
序列表
<110> 福建省农业科学院农业生物资源研究所
<120> 一种耐高温的解磷固氮芽孢杆菌及其应用
<130> 14464
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1421
<212> DNA
<213> 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp. inaquosorum)
<400> 1
tgcagtcgag cggacagatg ggagcttgct ccctgatgtt agcggcggac gggtgagtaa 60
cacgtgggta acctgcctgt aagactggga taactccggg aaaccggggc taataccgga 120
tggttgtttg aaccgcatgg ttcaaacata aaaggtggct tcggctacca cttacagatg 180
gacccgcggc gcattagcta gttggtgagg taacggctca ccaaggcaac gatgcgtagc 240
cgacctgaga gggtgatcgg ccacactggg actgagacac ggcccagact cctacgggag 300
gcagcagtag ggaatcttcc gcaatggacg aaagtctgac ggagcaacgc cgcgtgagtg 360
atgaaggttt tcggatcgta aagctctgtt gttagggaag aacaagtacc gttcgaatag 420
ggcggtacct tgacggtacc taaccagaaa gccacggcta actacgtgcc agcagccgcg 480
gtaatacgta ggtggcaagc gttgtccgga attattgggc gtaaagggct cgcaggcggt 540
ttcttaagtc tgatgtgaaa gcccccggct caaccgggga gggtcattgg aaactgggga 600
acttgagtgc agaagaggag agtggaattc cacgtgtagc ggtgaaatgc gtagagatgt 660
ggaggaacac cagtggcgaa ggcgactctc tggtctgtaa ctgacgctga ggagcgaaag 720
cgtggggagc gaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgagtgctaa 780
gtgttagggg gtttccgccc cttagtgctg cagctaacgc attaagcact ccgcctgggg 840
agtacggtcg caagactgaa actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc 900
atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg tcttgacatc ctctgacaat 960
cctagagata ggacgtcccc ttcgggggca gagtgacagg tggtgcatgg ttgtcgtcag 1020
ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccttga tcttagttgc 1080
cagcattcag ttgggcactc taaggtgact gccggtgaca aaccggagga aggtggggat 1140
gacgtcaaat catcatgccc cttatgacct gggctacaca cgtgctacaa tggacagaac 1200
aaagggcagc gaaaccgcga ggttaagcca atcccacaaa tctgttctca gttcggatcg 1260
cagtctgcaa ctcgactgcg tgaagctgga atcgctagta atcgcggatc agcatgccgc 1320
ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac cgcccgtcac accacgagag tttgtaacac 1380
ccgaagtcgg tgaggtaacc tttaggagcc agccgccgaa g 1421

Claims (8)

1.一种耐高温的解磷固氮芽孢杆菌，其特征在于：所述的芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌FJAT-14464，学名为Bacillus subtilis subsp.inaquosorum FJAT-14464，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC NO.16329，保藏日期为2018年8月21日，保藏地址为中国北京市中国科学院微生物研究所。
2.根据权利要求1所述的耐高温的解磷固氮芽孢杆菌，其特征在于：所述的芽孢杆菌的发酵方法为：将芽孢杆菌接种于LB液体培养基中，25-35℃振荡培养48-72h，获得种子液；然后将种子液接种于LB液体培养基中，在30-60℃条件下振荡培养48-72h。
3.一种如权利要求1所述的耐高温的解磷固氮芽孢杆菌在降解难溶性磷酸盐中的应用。
4.一种如权利要求1所述的耐高温的解磷固氮芽孢杆菌在促进植物种子萌发中的应用。
5.根据权利要求4中所述的耐高温的解磷固氮芽孢杆菌在促进植物种子萌发中的应用，其特征在于：将所述的芽孢杆菌发酵液配制成浓度为1×105-1.5×105cfu/mL的菌悬液，浸种2-3天，将其置于25-30℃，光照16-20h/天。
6.一种如权利要求1所述的耐高温的解磷固氮芽孢杆菌在植物固氮中的应用。
7.一种如权利要求1所述的耐高温的解磷固氮芽孢杆菌在制备解磷固氮复合菌剂中的应用。
8.一种植物促生菌剂，其特征在于：所述的菌剂包括权利要求1所述的芽孢杆菌。
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