CN109122310A - 一种牛耳枫两步成苗的方法 - Google Patents

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陈京鸿
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Abstract

本发明属于植物组织培养技术领域，尤其是一种牛耳枫两步成苗的方法。一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，包括以下步骤：(1)取新萌发牛耳枫的嫩叶作为外植体按常规的进行消毒后，置于超净工作台内，用解剖刀切叶片边缘，剪切成1cm见方的小块，置于改良WPM培养基中培养35天，得到无菌试管苗；(2)生根培养；(3)炼苗移栽。采用本发明所述的培养方法得到的牛耳枫丛生芽繁殖系数达到30‑40倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达90％以上。

Description

一种牛耳枫两步成苗的方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，尤其是一种牛耳枫两步成苗的方法。
背景技术
牛耳枫(Daphniphyllum calycinum Benth.)别称：铃猪肚、猪肚果、猪肚木、猪肚子、猪洛木、猪络木、猪仔木、珠碌子、山羊屎、羊屎子、老虎耳、土鸦胆子、大耳梳、南岭虎楠、南岭虎皮楠及岭南虎皮楠。为虎皮楠科虎皮楠属植物。
牛耳枫的果实枝叶和根均可入药，枝叶：祛风止痛；解毒消肿。主风湿骨痛；疮疡肿毒；跌打骨折；毒蛇咬伤。根：清热解毒；活血化瘀；消肿止痛。主外感发热；咳嗽；咽喉肿痛；胁下痞块；风湿骨痛；跌打损伤，其种子油含有毒性的生物碱，加热后毒性下降，可供作润滑油及肥皂。具有很高的药用价值和开发前景。
迄今为止，未见牛耳枫组织培养相关报道。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良牛耳枫种苗、满足生产需要。
本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，包括以下步骤：
(1)取新萌发牛耳枫的嫩叶作为外植体按常规的进行消毒后，置于超净工作台内，用解剖刀切叶片边缘，剪切成1cm见方的小块，置于改良WPM培养基中培养35天，得到无菌试管苗；
(2)生根培养：将步骤(1)中得到的健壮植株置于改良1/2MS生根培养基中培养30天，得到完整带根苗；
(3)炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温为25℃的室内打开瓶盖，瓶内加入3-10mL无菌水，炼苗4-7天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到按质量比为蛭石：泥炭土＝1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田，每天早晚各喷雾一次。
作为优选，所述的改良WPM培养基中含0.5-2.0mg/L的芸苔素内脂、0.1-0.5mg/L的吲哚丁酸、0.1-0.5mg/L的激动素、0.5-2.0mg/L的赤霉素、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
作为优选，步骤(1)中培养条件为：温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天。
作为优选，所述的改良1/2MS生根培养基中添加0.5-2.0mg/L萘乙酸、50g/L的土豆泥、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
作为优选，步骤(2)中培养条件为：温度为23-27℃，光照强度3000lux，光照时间为8-10小时/天。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明采用生物技术对牛耳枫进行组织培养快速繁殖，通过牛耳枫叶片丛生芽的繁殖，在短时间内可培育出大量适合栽培种植的牛耳枫幼苗，保障牛耳枫种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
(2)采用本发明所述的培养方法得到的牛耳枫丛生芽繁殖系数达到30-40倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达90％以上。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
实施例1
一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，包括以下步骤：
(1)取新萌发牛耳枫的嫩叶作为外植体按常规的进行消毒后，置于超净工作台内，用解剖刀切叶片边缘，剪切成1cm见方的小块，置于WPM培养基中，在培养温度为23℃，光照强度1500lux，光照时间为8h/天的条件下培养35天得到无菌试管苗；其中WPM培养基中含1.0mg/L的芸苔素内脂、0.2mg/L的吲哚丁酸、0.2mg/L的激动素、1.0mg/L的赤霉素、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(2)生根培养：将步骤(1)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中在培养温度23℃，光照强度3000lux，光照时间为8小时/天的条件下培养30天得到完整带根苗，其中1/2MS生根培养基中添加1.0mg/L萘乙酸、50g/L的土豆泥、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(3)炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温为25℃的室内打开瓶盖，瓶内加入3mL无菌水，炼苗4天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到按质量比为蛭石：泥炭土＝1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田。每天早晚各喷雾一次。
实施例2
一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，包括以下步骤：
(1)取新萌发牛耳枫的嫩叶作为外植体按常规的进行消毒后，置于超净工作台内，用解剖刀切叶片边缘，剪切成1cm见方的小块，置于WPM培养基中，在培养温度为27℃，光照强度1500lux，光照时间为10小时/天的条件下培养35天得到无菌试管苗；其中WPM培养基中含1.5mg/L的芸苔素内脂、0.2mg/L的吲哚丁酸、0.2mg/L的激动素、0.5mg/L的赤霉素、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(2)生根培养：将步骤(1)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中在培养温度27℃，光照强度3000lux，光照时间为10小时/天的条件下培养30天得到完整带根苗，其中1/2MS生根培养基中添加1.0mg/L萘乙酸、50g/L的土豆泥、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
(3)炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温为25℃的室内打开瓶盖，瓶内加入10mL无菌水，炼苗7天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到按质量比为蛭石：泥炭土＝1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田。每天早晚各喷雾一次。
实施例3
一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，包括以下步骤：
(1)取新萌发牛耳枫的嫩叶作为外植体按常规的进行消毒后，置于超净工作台内，用解剖刀切叶片边缘，剪切成1cm见方的小块，置于WPM培养基中，在培养温度为25℃，光照强度1500lux，光照时间为9小时/天的条件下培养35天得到无菌试管苗；其中WPM培养基中含2.0mg/L的芸苔素内脂、0.2mg/L的吲哚丁酸、0.5mg/L的激动素、0.5mg/L的赤霉素、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(2)生根培养：将步骤(1)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中在培养温度25℃，光照强度3000lux，光照时间为9小时/天的条件下培养30天得到完整带根苗，其中1/2MS生根培养基中添加1.5mg/L萘乙酸、50g/L的土豆泥、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
(3)炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温为25℃的室内打开瓶盖，瓶内加入5mL无菌水，炼苗6天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到按质量比为蛭石：泥炭土＝1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田。每天早晚各喷雾一次。
实施例4
一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，包括以下步骤：
(1)取新萌发牛耳枫的嫩叶作为外植体按常规的进行消毒后，置于超净工作台内，用解剖刀切叶片边缘，剪切成1cm见方的小块，置于WPM培养基中，在培养温度为26℃，光照强度1500lux，光照时间为10小时/天的条件下培养35天，得到无菌试管苗；其中WPM培养基中含1.5mg/L的芸苔素内脂、0.2mg/L的吲哚丁酸、0.2mg/L的激动素、0.5mg/L的赤霉素、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(2)生根培养：将步骤(1)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中在培养温度26℃，光照强度3000lux，光照时间为10小时/天的条件下培养30天得到完整带根苗，其中1/2MS生根培养基中添加1.5mg/L萘乙酸、50g/L的土豆泥、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
(3)炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温为25℃的室内打开瓶盖，瓶内加入8mL无菌水，炼苗5天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到按质量比为蛭石：泥炭土＝1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田。每天早晚各喷雾一次。
实施例5
一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，包括以下步骤：
(1)取新萌发牛耳枫的嫩叶作为外植体按常规的进行消毒后，置于超净工作台内，用解剖刀切叶片边缘，剪切成1cm见方的小块，置于WPM培养基中，在培养温度为26℃，光照强度1500lux，光照时间为8小时/天的条件下培养35天，得到无菌试管苗；其中WPM培养基中含2.0mg/L的芸苔素内脂、0.2mg/L的吲哚丁酸、1.0mg/L的激动素、0.5mg/L的赤霉素、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(2)生根培养：将步骤(1)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中在培养温度26℃，光照强度3000lux，光照时间为8小时/天的条件下培养30天得到完整带根苗，其中1/2MS生根培养基中添加1.0mg/L萘乙酸、50g/L的土豆泥、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
(3)炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温为25℃的室内打开瓶盖，瓶内加入6mL无菌水，炼苗6天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到按质量比为蛭石：泥炭土＝1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田。每天早晚各喷雾一次。
对比例1
一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，包括以下步骤：
其中，步骤(1)中取新萌发牛耳枫的嫩叶作为外植体按常规的进行消毒后，置于超净工作台内，用解剖刀切叶片边缘，剪切成1cm见方的小块，置于WPM培养基中，其余步骤、参数与实例5中的完全相同。
对比例2
一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，包括以下步骤：
其中，步骤(2)生根培养：将步骤(1)中得到的健壮植株置于1/2MS生根培养基中在培养温度26℃，光照强度1500lux，光照时间为8小时/天的条件下培养30天得到完整带根苗，其余步骤、参数与实例5中的完全相同。
按照实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、对比例1和对比例2中的方案分别对牛耳枫进行组织培养，统计无菌试管苗的繁殖系数。
然后，将一块大田分为7块区域，将实施例1-5及对比例1和对比例2的牛耳枫丛生芽分别移栽生根培养基中，并统计生根率。
表1丛生芽繁殖系数和成苗率测定
处理 繁殖系数 生根率(％)
实施例1 32.8 80.6
实施例2 35.2 83.8
实施例3 37.8 85.5
实施例4 36.4 90.2
实施例5 40.9 94.7
对比例1 12.8 14.5
对比例2 13.6 13.8
从表1可知，按照实施例1-5及对比例1和对比例2中的技术方案进行组织培养，与对比例1-2相比，本发明的实施例1-5中方法的丛生芽增殖系数和成苗率均有较大的提高。
另外，实施例5中由于步骤(1)中使用添加其它激素的改良WPM培养基和步骤(2)中改良1/2MS生根培养基，其丛生芽繁殖系数和生根率均高于对比例1和对比例2。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims (5)

1.一种牛耳枫叶片两步成苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取新萌发牛耳枫的嫩叶作为外植体按常规的进行消毒后，置于超净工作台内，用解剖刀切叶片边缘，剪切成1cm见方的小块，置于改良WPM培养基中培养35天，得到无菌试管苗；
(2)生根培养：将步骤(1)中得到的健壮植株置于改良1/2MS生根培养基中培养30天，得到完整带根苗；
(3)炼苗移栽：将所述完整带根苗在室温为25℃的室内打开瓶盖，瓶内加入3-10mL无菌水，炼苗4-7天，表面角质形成后将苗取出，洗净根部培养基立即移栽到按质量比为蛭石：泥炭土＝1：1的基质中，生长一个月后移栽到大田，每天早晚各喷雾一次。
2.根据权利要求1所述的牛耳枫叶片两步成苗的方法，其特征在于，所述的改良WPM培养基中含0.5-2.0mg/L的芸苔素内脂、0.1-0.5mg/L的吲哚丁酸、0.1-0.5mg/L的激动素、0.5-2.0mg/L的赤霉素、2mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
3.根据权利要求1所述的牛耳枫叶片两步成苗的方法，其特征在于，步骤(1)中培养条件为：温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10h/天。
4.根据权利要求1所述的牛耳枫叶片两步成苗的方法，其特征在于，所述的改良1/2MS生根培养基中添加0.5-2.0mg/L萘乙酸、50g/L的土豆泥、10g/L蔗糖和5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
5.根据权利要求1所述的牛耳枫叶片两步成苗的方法，其特征在于，步骤(2)中培养条件为：温度为23-27℃，光照强度3000lux，光照时间为8-10小时/天。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4837152A (en) * 1986-07-29 1989-06-06 Sungene Technologies Corporation Process for regenerating soybeans
CN105706928A (zh) * 2016-02-29 2016-06-29 广西壮族自治区药用植物园 一种密毛小花苣苔组培叶片两步成苗方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4837152A (en) * 1986-07-29 1989-06-06 Sungene Technologies Corporation Process for regenerating soybeans
CN105706928A (zh) * 2016-02-29 2016-06-29 广西壮族自治区药用植物园 一种密毛小花苣苔组培叶片两步成苗方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
耿继光: "《小麦灾害防控问答》", 31 August 2010, 安徽科学技术出版社 *

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