CN109096390A - 一种人血高密度脂蛋白的制造方法 - Google Patents

一种人血高密度脂蛋白的制造方法 Download PDF

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张文斌
丁灿明
卢和
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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Abstract

本发明公开了一种人血高密度脂蛋白的制造方法，S1、取血浆，调节PH值为7.2‑7.3，加入混合液比重8％‑10％乙醇，温度控制在零下2‑3℃，蛋白浓度控制在4.5％‑5％，离心取得上清，将上清的PH值调节为6.9％，向上清中加入混合液比重20％‑25％的乙醇，温度控制在零下4‑5℃，蛋白浓度控制在2.5％‑3％，离心得上清，涉及杂志制作技术领域。该人血高密度脂蛋白的制造方法，制作周期短，制作过程简单，可以直接以血浆为原材料，节约了制作成本，能制作出高质量的人血高密度脂蛋白，该人血高密度脂蛋白对转运胆固醇有很大作用，能把血管中沉淀的血垢运送到血管外，从而对抗动脉硬化，保护血管年轻化，对心血管疾病和器官障碍综合症相关药物的制作起到关键性作用。

Description

一种人血高密度脂蛋白的制造方法
技术领域
本发明涉及高密度脂蛋白制造技术领域，具体为一种人血高密度脂蛋白的制造方法。
背景技术
高密度脂蛋白为血清蛋白之一,缩写为HDL,亦称为a1脂蛋白,比较富含磷脂质，在血清中的含量约为300mg/dl。其蛋白质部分，A－Ⅰ约为75％，A－Ⅱ约为20％。由于可输出胆固醇促进胆固醇的代谢，所以现在作为动脉硬化预防因子而受到重视。高密度脂蛋白运载周围组织中的胆固醇，再转化为胆汁酸或直接通过胆汁从肠道排出，动脉造影证明高密度脂蛋白胆固醇含量与动脉管腔狭窄程度呈显著的负相关。所以高密度脂蛋白是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是冠心病的保护因子。俗称“血管清道夫”，HDL主要由肝和小肠合成。肝合成的新生HDL以磷脂和ApoA Ⅰ为主。在LCAT作用下，游离胆固醇变成胆固醇酯，脂蛋白则变成成熟球形HDL3，再经LPL作用转变成HDL2。HDL可将蓄积于末梢组织的游离胆固醇与血液循环中脂蛋白或与某些大分子结合而运送到各组织细胞，主要是肝脏。实际上是胆固醇逆转，胆固醇逆转促进组织细胞内胆固醇的清除，维持细胞内胆固醇量的相对衡定，从而限制动脉粥样硬化的发生发展，起到抗动脉粥样硬化作用。
传统的人血高密度脂蛋白的制造方法，在制作的时候周期较长，制作过程繁杂，没有直接以血浆为原材料，增加了制作成本，不能制作出高质量的人血高密度脂蛋白，传统的人血高密度脂蛋白对转运胆固醇的作用有限，没有很好的保护血管年轻化。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种人血高密度脂蛋白的制造方法，解决了现有的人血高密度脂蛋白的制造方法制作步骤繁杂，制作成本高，制作周期长，不能得到高质量人血高密度脂蛋白的问题。
(二)技术方案
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种人血高密度脂蛋白的制造方法，包括如下步骤：
S1、取血浆，调节PH值为7.2-7.3，加入混合液比重8％-10％的乙醇，温度控制在零下2-3℃，蛋白浓度控制在4.5％-5％，离心取得上清，将上清的PH值调节为6.9％，向上清中加入混合液比重20％-25％的乙醇，温度控制在零下4-5℃，蛋白浓度控制在2.5％-3％，离心得上清，向上清中加入混合液比重15％-20％的乙醇，调节PH为5.8，温度控制在零下5-6℃，蛋白浓度控制在1％-1.5％，离心得沉淀；
S2、将S1得到的沉淀中加入氯化钠溶液溶解，离心弃沉淀得滤液；
S3、将S2中得到的滤液加入醋酸盐缓冲液，PH值调节为4.5-5.0，温度控制在3-5℃，进行搅拌30分钟，离心得沉淀；
S4、将S3得到的沉淀中加入氯化钠溶液，调节PH值为6.2-6.7，待沉淀溶解，离心得滤液；
S5、将S4得到的滤液中加入滤液比重18％-22％的乙醇，PH值调节为4.8-5.2，离心得沉淀；
S6、向S5得到的沉淀中加水溶解，得滤液，用超滤膜对滤液进行超滤，对滤液进行消毒处理，得到HDL，对成品进行灌装。
优选的，所述步骤S1中，使用低温乙醇提取法提取沉淀，低温乙醇提取法是一种较好的制备HDL的方法，它以低温乙醇法制备人血白蛋白及免疫球蛋白后废弃的沉淀为原料通过精制纯化，得到HDL制品，该方法对白蛋白及免疫球蛋白的收率影响极小。
优选的，所述步骤S2和步骤S4中，加入的氯化钠溶液浓度为5％-10％。
优选的，所述步骤S3中，搅拌30分钟后的沉淀为高密度脂蛋白的粗品。
优选的，所述步骤S6中，在加水溶解时，控制蛋白含量为1％-2％，加入蔗糖，蔗糖浓度为8％-12％，PH值控制在6.0％6.5％，消毒使用巴氏消毒法，超滤膜为10-60KD超滤膜。
优选的，所述步骤S1-S5中,调节PH值的方法为加入醋酸氢钠溶液，乙醇浓度为90％，离心机为高速管式离心机，在溶液离心之前均静置1-2个小时。
(三)有益效果
本发明提供了一种人血高密度脂蛋白的制造方法。具备以下有益效果：该人血高密度脂蛋白的制造方法，通过在S1中取血浆，得沉淀，S2中将沉淀溶解，离心得滤液，S3中将滤液中加入醋酸盐溶液，离心得沉淀，S4中将沉淀中添加氯化钠溶液，离心得滤液，S5中将滤液中加入乙醇，离心得沉淀，S6中将沉淀溶解，进行超滤、消毒、灌装，相对于传统的人血高密度脂蛋白制作过程而言，制作周期短，制作过程简单，可以直接以血浆为原材料，节约了制作成本，能制作出高质量的人血高密度脂蛋白，该人血高密度脂蛋白对转运胆固醇有很大作用，能把血管中沉淀的血垢运送到血管外，从而对抗动脉硬化，保护血管年轻化，对心血管疾病和器官障碍综合症相关药物的制作起到关键性作用。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明公开了一种人血高密度脂蛋白的制造方法，包括如下步骤：
S1、取血浆，调节PH值为7.2-7.3，加入混合液比重8％-10％的乙醇，温度控制在零下2-3℃，蛋白浓度控制在4.5％-5％，离心取得上清，将上清的PH值调节为6.9％，向上清中加入混合液比重20％-25％的乙醇，温度控制在零下4-5℃，蛋白浓度控制在2.5％-3％，离心得上清，向上清中加入混合液比重15％-20％的乙醇，调节PH为5.8，温度控制在零下5-6℃，蛋白浓度控制在1％-1.5％，离心得沉淀；
S2、将S1得到的沉淀中加入氯化钠溶液溶解，离心弃沉淀得滤液；
S3、将S2中得到的滤液加入醋酸盐缓冲液，PH值调节为4.5-5.0，温度控制在3-5℃，进行搅拌30分钟，离心得沉淀；
S4、将S3得到的沉淀中加入氯化钠溶液，调节PH值为6.2-6.7，待沉淀溶解，离心得滤液；
S5、将S4得到的滤液中加入滤液比重18％-22％的乙醇，PH值调节为4.8-5.2，离心得沉淀；
S6、向S5得到的沉淀中加水溶解，得滤液，用超滤膜对滤液进行超滤，对滤液进行消毒处理，得到HDL，对成品进行灌装。
本发明中，步骤S1中，使用低温乙醇提取法提取沉淀，低温乙醇提取法是一种较好的制备HDL的方法，它以低温乙醇法制备人血白蛋白及免疫球蛋白后废弃的沉淀为原料通过精制纯化，得到HDL制品，该方法对白蛋白及免疫球蛋白的收率影响极小。
本发明中，步骤S2和步骤S4中，加入的氯化钠溶液浓度为5％-10％。
本发明中，步骤S3中，搅拌30分钟后的沉淀为高密度脂蛋白的粗品。
本发明中，步骤S6中，在加水溶解时，控制蛋白含量为1％-2％，加入蔗糖，蔗糖浓度为8％-12％，PH值控制在6.0％6.5％，消毒使用巴氏消毒法，超滤膜为10-60KD超滤膜。
本发明中，步骤S1-S5中，调节PH值的方法为加入醋酸氢钠溶液，乙醇浓度为90％，离心机为高速管式离心机，在溶液离心之前均静置1-2个小时。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种人血高密度脂蛋白的制造方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、取血浆，调节PH值为7.2-7.3，加入混合液比重8％-10％的乙醇，温度控制在零下2-3℃，蛋白浓度控制在4.5％-5％，离心取得上清，将上清的PH值调节为6.9％，向上清中加入混合液比重20％-25％的乙醇，温度控制在零下4-5℃，蛋白浓度控制在2.5％-3％，离心得上清，向上清中加入混合液比重15％-20％的乙醇，调节PH为5.8，温度控制在零下5-6℃，蛋白浓度控制在1％-1.5％，离心得沉淀；
S2、将S1得到的沉淀中加入氯化钠溶液溶解，离心弃沉淀得滤液；
S3、将S2中得到的滤液加入醋酸盐缓冲液，PH值调节为4.5-5.0，温度控制在3-5℃，进行搅拌30分钟，离心得沉淀；
S4、将S3得到的沉淀中加入氯化钠溶液，调节PH值为6.2-6.7，待沉淀溶解，离心得滤液；
S5、将S4得到的滤液中加入滤液比重18％-22％的乙醇，PH值调节为4.8-5.2，离心得沉淀；
S6、向S5得到的沉淀中加水溶解，得滤液，用超滤膜对滤液进行超滤，对滤液进行消毒处理，得到HDL，对成品进行灌装。
2.根据权利要求1所述的一种人血高密度脂蛋白的制造方法，其特征在于：所述步骤S1中，使用低温乙醇提取法提取沉淀，低温乙醇提取法是一种较好的制备HDL的方法，它以低温乙醇法制备人血白蛋白及免疫球蛋白后废弃的沉淀为原料通过精制纯化，得到HDL制品，该方法对白蛋白及免疫球蛋白的收率影响极小。
3.根据权利要求1所述的一种人血高密度脂蛋白的制造方法，其特征在于：所述步骤S2和步骤S4中，加入的氯化钠溶液浓度为5％-10％。
4.根据权利要求1所述的一种人血高密度脂蛋白的制造方法，其特征在于：所述步骤S3中，搅拌30分钟后的沉淀为高密度脂蛋白的粗品。
5.根据权利要求1所述的一种人血高密度脂蛋白的制造方法，其特征在于：所述步骤S6中，在加水溶解时，控制蛋白含量为1％-2％，加入蔗糖，蔗糖浓度为8％-12％，PH值控制在6.0％6.5％，消毒使用巴氏消毒法，超滤膜为10-60KD超滤膜。
6.根据权利要求1所述的一种人血高密度脂蛋白的制造方法，其特征在于：所述步骤S1-S5中，调节PH值的方法为加入醋酸氢钠溶液，乙醇浓度为90％，离心机为高速管式离心机，在溶液离心之前均静置1-2个小时。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO1996005227A1 (fr) * 1994-08-16 1996-02-22 Laboratoires Fournier S.C.A. Peptides inhibiteurs de la proteine de transfert des esters de cholesterol et leur utilisation en therapeutique
CN1699417A (zh) * 2005-06-21 2005-11-23 江永忠 人血高密度脂蛋白、其制造方法及其应用
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Title
谭邦青等: "人血高密度脂蛋白的提取及检定", 《南华大学学报（医学版）》 *
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