CN109096344A - 一种人参二醇型皂苷的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种人参二醇型皂苷的提取方法，涉及中药有效成分提取技术领域。本发明所述方法包括以下步骤：1)将三七与水混合，煮沸，进行第一过滤后收集滤液，得无蛋白提取液；2)将所述无蛋白提取液进行酶解，进行第二过滤后收集滤液，得酶解提取液；3)将述酶解提取液与絮凝剂混合，进行第三过滤后收集滤液，得无絮凝提取液；4)利用树脂吸附所述无絮凝提取液，得吸附提取物树脂；5)将所述吸附提取物树脂与分解剂混合后脱色，得脱色提取液；6)去除所述脱色提取液中的分解剂后浓缩、干燥，得人参二醇型皂苷。本发明所述方法不仅避免了提取过程中溶剂二次污染的问题，很大程度的缩短了提取周期，提高了目标成分的安全性。

Description

一种人参二醇型皂苷的提取方法

技术领域

本发明属于中药有效成分提取技术领域，具体涉及一种人参二醇型皂苷的提取方法。

背景技术

人参皂苷是一种固醇类化合物，属于三萜皂苷，主要存在于人参属药材中，例如人参、三七、西洋参等植物中。目前研究表明人参总皂苷具有多种生物活性，例如抗肿瘤作用。

但是在提取人参皂苷时，传统方法是锁定目标成分后，根据目标成分的理化性质，采用不同的工序方法把目标成分提取出来，工序繁琐，提取效率较低，如在中国专利CN100378117C中就记载了一种从人参根中获得二醇型人参皂苷F2含量较高的人参皂苷粗提物的方法：将人参根和五味子分别加工成粉末，在盛有人参根粉末的容器中加入氯仿、石油醚或乙醚有机溶剂，加入量超过粉末的体积，在50℃～80℃的范围内加热1.5～4小时，倾出有机溶剂；在上述容器中加入五味子粉末，使其与人参根粉末的质量比为1～3∶1；再加入水，加入量一般以水的质量是人参根与五味子粉末的总质量的10～20倍为宜，搅拌，使粉末混合均匀，加热，水溶液保持微沸状态1.5～4小时，将水溶液倒出；再加水加热2～4次，每次加入的水质量相同，且水溶液保持微沸状态1.5～4小时后再倒出；将几次倒出的水溶液合并，过滤，浓缩，使水溶液的体积减少2/3～4/5后，缓慢加入乙醇溶液，使乙醇在溶液中的体积含量占60％～85％，静置12～24小时，滤去沉淀，低压回收乙醇，得到二醇型人参皂苷F2含量很高的人参皂苷粗提物。可见，传统提取人参皂苷的方法中需要多种有机溶剂的配合使用，有可能带来非目标成分的夹杂或二次污染。目前并没有一种简便、纯度高的人参皂苷提取方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种人参二醇型皂苷的提取方法，缩短提取周期，提高目标成分的安全性，避免有机溶剂的二次污染。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种人参二醇型皂苷的提取方法，包括以下步骤：1)将三七与水混合，煮沸，进行第一过滤后收集滤液，得无蛋白提取液；所述水的电导率≤3；2)将步骤1)得到的所述无蛋白提取液进行酶解、第二过滤后收集滤液，得酶解提取液；所述酶解用酶包括果胶酶和淀粉酶；3)将步骤2)得到的所述酶解提取液与絮凝剂混合，进行第三过滤后收集滤液，得无絮凝提取液；4)利用树脂吸附步骤3)得到的所述无絮凝提取液，得吸附提取物树脂；5)将步骤4)得到的所述吸附提取物树脂与分解剂混合后脱色，得脱色提取液；6)去除步骤5)所述脱色提取液中的分解剂后浓缩、干燥，得人参二醇型皂苷。

优选的，步骤1)所述三七包括三七全株、三七根茎、三七叶或三七花。

优选的，步骤1)所述三七与水混合的质量比为1：(7～13)。

优选的，步骤1)所述煮沸的时间为1.5～4h。

优选的，步骤2)所述果胶酶和淀粉酶的体积比为(1.8～5)：1。

优选的，步骤2)所述酶解用酶的质量为步骤1)所述三七质量的0.8～1.4‰。

优选的，步骤3)所述絮凝剂占所述酶解提取液体积的0.5～1.2‰。

优选的，步骤5)所述分解剂包括体积分数为45～80％的乙醇水溶液。

优选的，步骤6)所述浓缩为浓缩至相对密度1.20～1.40。

本发明提供了一种人参皂苷的提取方法，在提取过程中，依次去除了植物蛋白、树胶(果胶)、淀粉、植物纤维及木质、农药残留及重金属、糖类化合物、色素(叶绿素、叶黄素、黑色素等)及其他微量元素等非目标成分，制备得到的人参二醇型皂苷中，纯度达90％以上，不仅避免了提取过程中溶剂给目标成分带来二次污染的问题，而且很大程度的缩短了提取生产周期，提高了目标成分的安全性。

具体实施方式

本发明提供了一种人参二醇型皂苷的提取方法，包括以下步骤：1)将三七与水混合，煮沸，进行第一过滤后收集滤液，得无蛋白提取液；所述水的电导率≤3；2)将步骤1)得到的所述无蛋白提取液进行酶解、第二过滤后收集滤液，得酶解提取液；所述酶解用酶包括果胶酶和淀粉酶；3)将步骤2)得到的所述酶解提取液与絮凝剂混合，进行第三过滤后收集滤液，得无絮凝提取液；4)利用树脂吸附步骤3)得到的所述无絮凝提取液，得吸附提取物树脂；5)将步骤4)得到的所述吸附提取物树脂与分解剂混合后脱色，得脱色提取液；6)去除步骤5)所述脱色提取液中的分解剂后浓缩、干燥，得人参二醇型皂苷。

在本发明所述人参二醇型皂苷的提取方法中，将三七与水混合，煮沸，进行第一过滤后收集滤液，得无蛋白提取液。本发明所述三七优选包括三七全株、三七根茎、三七叶或三七花，本发明对所述三七的来源并没有特殊限定，优选为三年生三七。本发明所述三七与水混合的质量比优选为1：(7～13)，更优选为1：(8.5～12)，最优选为1:10。本发明所述水的电导率优选≤3，本发明所述水具有极强的渗透率，扩散力、溶解力，可以迅速渗透至植物细胞，将目标成分溶出，不仅能提高有效成分的溶出率，同时能减少提取的时间。本发明所述煮沸的时间优选为1.5～4h，更优选为1.8～3h，最优选为2h。本发明在所述煮沸过程中，对三七中有效成分进行水提，蛋白质变性析出，经第一过滤后可除去蛋白质。

得无蛋白提取液后，本发明将所述无蛋白提取液进行酶解，进行第二过滤后收集滤液，得酶解提取液；所述酶解用酶包括果胶酶和淀粉酶。本发明所述酶解前优选将所述无蛋白提取液与酶解用酶混合均匀，本发明对所述混合的方法没有特殊限定，优选为搅拌。本发明所述搅拌的速度优选为60～160转/min，更优选为80～120转/min，最优选为100转/min。本发明所述搅拌的时间优选为20～45min，更优选为25～35min，最优选为30min。本发明所述酶解用酶的添加量优选为所述三七质量的0.8～1.4‰，更优选为0.9～1.2‰，最优选为1.0‰。本发明所述酶解用酶中果胶酶和淀粉酶的体积比优选为(1.8～5)：1，更优选为(2.4～4)：1，最优选为3:1。本发明所述酶解的温度优选为35～55℃，更优选为42～53℃，最优选为50℃。本发明所述酶解的pH优选为4～7，更优选为5～6.8，最优选为6。本发明对所述果胶酶和淀粉酶的来源并没有特殊限定，利用本领域的常规市售酶即可。本发明在所述酶量的酶解条件下，可以去除大部分树胶(果胶)、淀粉、植物纤维及木质。

得酶解提取液后，本发明将所述酶解提取液与絮凝剂混合，进行第三过滤后收集滤液，得无絮凝提取液。本发明所述絮凝剂优选占所述酶解提取液体积的0.5～1.2‰，更优选为0.6～1‰，最优选为0.8‰。本发明所述絮凝剂的有效成分优选包括甲壳素和壳聚糖，所述甲壳素和壳聚糖的质量比优选为(0.5～1.2)：(0.8～1.7)，更优选为(0.8～1.1)：(0.9～1.5)，最优选为1:1。本发明在所述混合后，优选包括搅拌，所述搅拌的速度优选为60～160转/min，更优选为80～120转/min，最优选为100转/min。本发明所述搅拌的时间优选为15～30min，更优选为18～25min，最优选为20min。本发明在所述搅拌过程中絮凝剂与树胶(果胶)、淀粉以及水溶性的其他非目标成分结合形成沉淀，所述沉淀的时间优选6～15小时，更优选为10～13h，最优选为12小时。本发明所述过滤用滤筛的筛孔优选为80～200目，更优选为100～150目，最优选为120目。

得无絮凝提取液后，本发明利用树脂吸附所述无絮凝提取液，得吸附提取物树脂。本发明所述树脂优选包括极性树脂，更优选包括AB-8大孔树脂。本发明对所述树脂的来源没有特殊限定，利用本领域的常规市售产品即可。本发明所述树脂可吸附所述无絮凝提取液中的人参二醇型皂苷，并使农药残留及重金属、糖类化合物及部分色素经水相自然流出，达到去除效果。

得吸附提取物树脂后，本发明将所述吸附提取物树脂与分解剂混合后脱色，得脱色提取液。本发明对所述分解剂的用量并没有特殊限定，分解剂没过所述吸附提取物树脂即可。本发明所述分解剂包括乙醇水溶液，所述乙醇水溶液的体积分数优选为45～80％，更优选为52～70％，最优选为60％。本发明所述分解剂可以将所述吸附提取物树脂上的含色素的目标成分解吸出来。本发明优选在所述吸附提取物树脂与分解剂混合后产生稳定溶液，并且颜色没有明显变化后进行脱色。本发明所述脱色优选为将产生的所述稳定溶液经过脱色树脂，从而去除色素，如叶绿素、叶黄素和黑色素。本发明对所述脱色树脂的来源没有特殊限定，利用本领域的常规市售产品即可。

得脱色提取液后，本发明去除所述脱色提取液中的分解剂后浓缩、干燥，得人参二醇型皂苷。本发明所述去除优选为回收分解剂，所述回收分解剂与所述浓缩优选在真空浓缩罐中进行，所述回收与浓缩时的真空度优选为0.02～0.09Mpa，更优选为0.08～0.09Mpa.。本发明所述回收与浓缩优选为浓缩至相对密度1.20～1.40(相对密度根据所选择的干燥方式合理控制)。本发明对所述干燥的方法没有特殊限定，利用本领域的常规方法即可。

下面结合实施例对本发明提供的人参二醇型皂苷的提取方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

将100g三七根茎原料投入提取灌中，加入1000mL电导率小于等于3的“小分子水”，加热至沸腾。保持沸腾提取2小时，去除蛋白质，收集滤液。

在上述滤液中加入0.1g果胶酶和淀粉酶(3:1)的混合物，搅拌30分钟，充分酶解，过滤，收集滤液(约80ml)。

在上述滤液中加入0.08g的絮凝剂，搅拌20分钟，沉淀12小时后过滤，收集滤液。

将滤液吸附在符合于人参二醇型皂苷极性范围内的AB-8大孔树脂上，用60％的食用乙醇将大孔树脂上的含色素的目标成分解吸出来后，经过脱色树脂进行脱色。

把经过脱色的脱色液置于真空浓缩罐中将食用乙醇回收完毕，剩下的是溶解于水相的目标成分；继续用真空浓缩罐进行浓缩，浓缩至相对密度1.35，收集浓缩液，干燥，去除水相，得到的就是人参二醇型皂苷目标成分。

利用本方法制备的人参二醇型皂苷(Rb族)提取物2.6g，提取率为2.6％，纯度为94.6％。

实施例2

将100g三七茎叶原料投入提取灌中，加入900mL电导率小于等于3的“小分子水”，加热至沸腾。保持沸腾提取2小时，去除蛋白质，收集滤液。

在上述滤液中加入0.1g果胶酶和淀粉酶(3:1)的混合物，搅拌30分钟，充分酶解，过滤，收集滤液。

在上述滤液中加入0.08g的絮凝剂，搅拌20分钟，沉淀12小时后过滤，收集滤液。

将滤液吸附在符合于人参二醇型皂苷极性范围内的AB-8大孔树脂上，用60％的食用乙醇将大孔树脂上的含色素的目标成分解吸出来后，经过脱色树脂进行脱色。

把经过脱色的脱色液置于真空浓缩罐中将食用乙醇回收完毕，剩下的是溶解于水相的目标成分；继续用真空浓缩罐进行浓缩，浓缩至相对密度1.35，收集浓缩液，干燥，去除水相，得到的就是人参二醇型皂苷目标成分。

利用本方法制备的人参二醇型皂苷(Rb族)提取物3.2g，提取率为3.2％，纯度为95.62％。

实施例3

将100g三七花原料投入提取灌中，加入1200mL电导率小于等于3的“小分子水”，加热至沸腾。保持沸腾提取2小时，去除蛋白质，收集滤液。

在上述滤液中加入0.1g果胶酶和淀粉酶(3:1)的混合物，搅拌30分钟，充分酶解，过滤，收集滤液。

在上述滤液中加入0.08g的絮凝剂，搅拌20分钟，沉淀12小时后过滤，收集滤液。

将滤液吸附在符合于人参二醇型皂苷极性范围内的AB-8大孔树脂上，用60％的食用乙醇将大孔树脂上的含色素的目标成分解吸出来后，经过脱色树脂进行脱色。

把经过脱色的脱色液置于真空浓缩罐中将食用乙醇回收完毕，剩下的是溶解于水相的目标成分；继续用真空浓缩罐进行浓缩，浓缩至相对密度1.35，收集浓缩液，干燥，去除水相，得到的就是人参二醇型皂苷目标成分。

利用本方法制备的人参二醇型皂苷(Rb族)提取物为16.4g，提取率为16.4％，纯度为93.6％。

综上所述，本发明提供了一种人参二醇型皂苷的提取方法，提取周期为24小时，提取纯度为大于90％。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种人参二醇型皂苷的提取方法，包括以下步骤：1)将三七与水混合，煮沸，进行第一过滤后收集滤液，得无蛋白提取液；所述水的电导率≤3；2)将步骤1)得到的所述无蛋白提取液进行酶解、第二过滤后收集滤液，得酶解提取液；所述酶解用酶包括果胶酶和淀粉酶；3)将步骤2)得到的所述酶解提取液与絮凝剂混合，进行第三过滤后收集滤液，得无絮凝提取液；4)利用树脂吸附步骤3)得到的所述无絮凝提取液，得吸附提取物树脂；5)将步骤4)得到的所述吸附提取物树脂与分解剂混合后脱色，得脱色提取液；6)去除步骤5)所述脱色提取液中的分解剂后浓缩、干燥，得人参二醇型皂苷。

2.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤1)所述三七包括三七全株、三七根茎、三七叶或三七花。

3.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤1)所述三七与水混合的质量比为1：(7～13)。

4.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤1)所述煮沸的时间为1.5～4h。

5.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤2)所述果胶酶和淀粉酶的体积比为(1.8～5)：1。

6.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤2)所述酶解用酶的质量为步骤1)所述三七质量的0.8～1.4‰。

7.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤3)所述絮凝剂占所述酶解提取液体积的0.5～1.2‰。

8.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤5)所述分解剂包括体积分数为45～80％的乙醇水溶液。

9.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤6)所述浓缩为浓缩至相对密度1.20～1.40。