CN109091393A

CN109091393A - 一种防治小儿癫痫的脂质体微囊剂

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Publication number: CN109091393A
Application number: CN201811299998.4A
Authority: CN
Inventors: 李建伟; 张振洪; 陈树杰
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2018-11-02
Filing date: 2018-11-02
Publication date: 2018-12-28
Anticipated expiration: 2038-11-02
Also published as: CN109091393B

Abstract

本发明属医药技术领域，特别涉及一种防治小儿癫痫的脂质体微囊剂及其制备方法。由植物类中药原料和动物类原料鹿茸、海马、紫河车、猪脊髓及海参配伍组方，通过特殊制作的耐压容器和相应的制备方法，经粉碎、缺氧浸提、药曲发酵、复合酶解、精滤、喷雾凝胶、冷冻干燥等组合工艺制备而成。本发明的脂质体微囊剂具有组方独特、工艺创新、无毒副作用、能透过血脑屏障、疗效显著、质量稳定和小儿服用方便的优点。

Description

一种防治小儿癫痫的脂质体微囊剂

技术领域

本发明属于医药技术领域，特别涉及一种防治小儿癫痫的脂质体微囊剂。

背景技术

癫痫是小儿时期常见的神经系统疾病，患病率高，全世界的癫痫患病率约为千分之七，我国癫痫患者的人数高达900万左右，而且每年还会增加约40万新发病例。因此，癫痫病已成为威胁人类健康的一大杀手。由于癫痫病的病因复杂，诊治困难，致残率高，病程长，其治疗现状不容乐观。癫痫病对患者的身心健康和生活质量的影响，以及给家庭和社会带来的沉重负担都特别严重。国际组织为此确定了“世界癫痫日”，我国也发起创办了“国际癫痫关爱日”，这都显示出人们对癫痫病的高度重视。

随着现代医学及检测手段的进步，对癫痫病的病因、分类和发病机理有了更新的认识，对癫痫病的治疗药物也有一定的进步。但是，目前对癫痫的治疗仍主要是依赖抗癫痫西药来控制发作，在预防、促进康复方面还没有满意的方法和效果。西药在癫痫缓解期多考虑用药剂量的变化，而药物品种的变化不大，对康复及治愈方面仍难有较好的作为，反而由于长期服用西药而产生的毒副作用的累积却日渐加重，致使大脑神经功能受损，耐药性问题又需增加药剂量或药物品种，形成恶性循环。

传统中医对癫痫病的认识始见于《黄帝内经》，再经历代医家不断探索和总结，使中医药在防治癫痫方面体现了整体治疗以及在预防和康复方面的优势。中医独特的整体观理论和辨症的思维方式，并通过胎养、预防、扶正、祛邪、调养和修复的综合手段，结合相应严谨而又灵活变通的方剂，使患者的治疗和康复走向良性循环的进程，病情趋向减轻、向愈，以致康复。但是，传统中医药由于当时科学水平的历史局限，在药理方面缺乏科学的认识，在发挥药物和营养功能方面也未能有进一步的突破，以致于中医对癫痫病的治疗也没有较理想的疗效，故亦将其列为难治之症。也正因这样，使得本已对中医理论理解较为肤浅的西医更缺乏采用中西医结合防治癫痫病的信心和热情。

综上所述，对于小儿癫痫的防治，中西医都各自遇到了困难，进展缓滞，尤其中医基本上依然停留在千年以来的所谓的“通窍”、“息风解痉”、“化痰”之类的方法上，所用药物亦都离不开如犀角、牛黄、麝香、羚羊角之类的稀贵中药和南星、全虫、蜈蚣、雄黄、胆矾之类有较大毒性的中药材，如发明专利申请号为96100072.4，发明名称为“治疗癫痫的中成药”的配方原料中就含有麝香、牛黄、胆矾、雄黄、南星、全虫。又如发明专利申请号为94117502.2，发明名称为“治疗癫痫病的中成药”的配方原料中，也含有蜈蚣、全蝎、南星、白矾、牛黄。上述中药虽然具有一定的“开窍”、“解痉”及“抗惊厥”作用，但是，我们发明团队在临床总结中发现，这些作用对癫痫病来说，依然仅能起到暂时缓解的作用，很难对癫痫病产生本质性的改善，也是治标为主，治本的作用甚微。而且，反复使用上述药物，反而有中医所述“伤正”的不良效果，这与上述“开窍”药的发散性和“解痉”、“抗惊厥”药的毒性有关，可见传统治疗癫痫的中药也同样存在毒副作用的问题。

现有防治小儿癫痫技术存在的上述缺陷，引发了本发明团队如何对中医药防治小儿癫痫病有所突破的重新思考，即开辟中医药防治癫痫以治本为主，治标为辅，能从本质上显著改善癫痫病症的新思维、新路径，以及创新性药物组方的探索，充分焕发中医药优势，实现中西医结合高效防治癫痫病的理想目标。

在本发明团队成员中，陈树杰主治医师曾诊治一位三叉神经痛患者，患者姓陈，男性， 65岁，患三叉神经痛三年，历经中、西医诊治不愈，于2016年3月28日到广州中山大学附属第一医院神经科教授门诊就诊，头部(MR)平扫3.0T影像诊断结果为：“右侧三叉神经脑池段见小动脉骑跨，血管神经关系密切”。患者拒绝手术治疗，采用西药控制，因为仍然常常发作疼痛，于2018年2月27日由其亲戚介绍来诊，再试求中医治疗，患者自诉每年6月至 7月份天气炎热时发作更频繁，诊其左关脉弦浮有力，右寸浮而无力，余脉皆沉弱而涩，舌尖红，舌苔薄而黄燥，唇稍淡，下唇有明显瘀斑，常有轻度咽喉痛，平时畏风怕冷，有轻度眩晕感，有糖尿病8年和高血压1年病史，综合四诊，印象为气血虚弱，血瘀郁热伤津，气血凝滞，风热困于上焦，宜先解上焦郁结之风热瘀热，处以：连翘10g、桑叶10g、防风6g、荆芥6g、薄荷4g、淡竹叶6g、丹皮12g、川芎3g、桔梗6g、黄苓6g、甘草4g，三剂。药后咽喉痛消失，舌苔转为薄白，舌尖红亦转正常。但后续如何用药呢，细思三叉神经痛的病因，传统中医多认为痰涎风火，常离不开采用全蝎、蜈蚣、僵蚕等“风药”，但通常结果都是或能暂时缓解，仅能治标，难以获得痊愈，因为这些药物主要是起暂时的“解痉”和镇痛作用，不能从本质上切中病机。从现代影像诊断的结果分析，本例三叉神经痛的发病机理应当是右侧三叉神经脑池段小动脉骑跨，当血管与神经发生触碰时，刺激引发疼痛，但问题是其骑跨是既定的生理状态，为什么之前没有出现触碰而现在却发生了触碰呢，令其发生触碰可能的诱发因素是什么呢？医者从中医的瘀阻理论结合现代物理学的压力常识分析认为，血管的瘀阻导致血管内压力的升高，使血管膨胀增粗，患者年纪较大，血管老化使调节血压的张力不足，也是患者近半年出现高血压的因素之一，每于6至7月天气炎热时更频繁发病，是因为天气炎热血管膨胀增粗，更易使血管触碰到三叉神经，因此，必须从瘀论治，而瘀的产生，本质上是由于气血虚弱，气血虚弱使气血运行不够畅旺，导致气滞血瘀，血管壁沉积增厚，血管内有效流通截面积减少，血压升高，使血管膨胀增粗，同时，西药的毒副作用累积，血液质量的变差，毒素、血脂的积聚，营养供给受阻，使血管硬化，弹性变差，不能很好地缓冲和调节血压，于是血管与三叉神经就会容易产生触碰，从而引发疼痛。在这一思维和认识的引导下，亦启发了对中医所谓“治风先治血，血行风自灭”的本质思考，即“风”是表面症状的反映，血虚血瘀才是病因，无论“风寒郁久发热”或“血热生风”，都是血中毒素积累增加而出现的反映。因此，改善血的生理指标，提高血的质量，以至恢复与之关联组织的健康生理功能，才能真正达到治愈的目的。中医的调整阴阳平衡，本质上就是调整人体整体机能健康状态，使各器官、组织恢复较佳的状况。于是，运用中医补气血、行气解郁、活血化瘀、凉血活血、清热解毒和活络通经的扶正祛邪综合治法，处以：北芪10g、全当归12g、丹皮8g、丹参6g、川芎3g、赤芍6g、白芍8g、鸡血藤6g、郁金10g、柴胡3g、佛手8g、桑枝8g、羌活8g、防风3g、桂枝4g、白芷6g、白术6g、云苓10g、熟地10g、骨碎补10g、地龙干12g、山萸肉8g、山楂6g、玉竹10g、杭菊4g、红景天6g、甘草3g，六剂，服后未见疼痛发作，右关弦脉有所缓解，下唇瘀斑有轻微减轻，效不更方，隔日一剂，连服十五剂，未见病发，眩晕感消失，感觉精神气力有所改善，再嘱其隔三日服一剂，服三十剂，并同时每晚服用日本纳豆素2粒，复诊其六脉已趋于平和正常，下唇瘀斑明显减退，精神良好，至今未见复发。从本案例中可以得到启发，三叉神经痛与癫痫都是神经系统发生的疾病，都属传统的难治之症，传统中医亦都从“风痰”论治为主，亦都离不开全蝎、蜈蚣、僵蚕之类“风药”，疗效同样不够理想，这就说明对使用传统“风药”、“解痉药”的治病机理要有本质的认识。从本案成功治愈的总结中，至少启发了以下多个命题的思考：1、对中医的辨证理论与现代病理学、解剖学要融会贯通地去理解，既要以现代医学的科学理论认识和破解中医辨证理论的本质，又要从中医的整体观和辨证思维理论中启发现代医学科学对疾病与人体整体关系、养护体能与抗菌治疗间的取舍及协同关系的深入探索和研究；2、中药的功能主治以及药性和归经的作用机理一旦被现代科学破解，将对中医方剂学产生重大影响，中药方剂的运用水平将获得飞跃发展，因此，应当努力在临床中发现和探索中药药性和归经作用的本质效果和机理；3、即使在日常临床中，医师只要有不断求索的精神和敏锐的思维，也能在辨证、药理的本质方面，通过中西互参、互证和互相融通理解而获得觉悟、获得成果和疗效，尤其对于传统中医的一些定式论断，有其经验、规律的总结价值，但历史科学水平的局限，无法再有本质认识的突破，却正是现成的最宝贵的初级成果资源，亦正是现代科学之可为之处，所以毛泽东主席说：“中国医药学是一个伟大的宝库，应当努力发掘，加以提高。”这是极具智慧和战略眼光的论断，所说的“宝库”，不仅是传统方剂的发掘，更是启示未来医学科学研究发展的重要资源和题材，青蒿素的研究发现只是一个药剂案例，相信将有更多的医学成果会因得益于中医药学的启示而出现；4、不要被生理解剖位置或检验指标将思维“狭义”地限定在某病的定性上，应吸取中医整体观的理论和成果，理解和承认人体生理链性关联的复杂性，广泛涉及如内分泌、生物电信息、遗传信息、神经功能系统等诸多生理组织和功能，善于开辟多耙用药和协同作用的施治研究；5、疾病的形成也有从量变到质变的过程，在量变的初始阶段，可能现代检验指标亦未能反映出来，但中医的“四诊”及“八纲论治”已能发现身体的不良变化，这是中医治未病的优势，还有，在疾病康复的过程中，中医也能以调节脏腑生克关系、调养正气和平衡阴阳的方法促进人体整体健康的，从而促进局部康复，这些都揭示了人体疾病从微与大、轻与重，以及局部与整体的相对转化关系，为现代医学开拓整体思维、探索和认识微观变化的物质基础及其本质，展现了广阔的空间和前景。如何从本质上改善与癫痫相关的大脑神经的生理状态和功能，以有效防治癫痫的发生，应当发挥中医“治病必求其本”的精神和整体观理念，以新的思维、新的路径和新的方案，探索具有标本兼治，疗效显著的方剂，发挥中医药优势，并融合现代医药学和营养学的新知识，为提高中西医结合防治小儿癫痫的水平，本发明团队开展了创造性的研发。

发明内容

针对上述目前存在的防治小儿癫痫病疗效不理想的技术缺陷，基于上述病例总结所得到的启示，本发明团队从病理病机的研讨、治疗方案的设计、组方和剂型的优化及试验进行了综合的研究和探索。

本发明的目的是提供一种防治小儿癫痫的脂质体微囊剂。

本发明的目的是这样实现的。

一种防治小儿癫痫的脂质体微囊剂的制备方法，由以下制备步骤制成：

A、用钢号为316的奥氏体不锈钢制作一个耐压容器，耐压容器的容量为300升，耐压≥ 0.5MPa，耐压容器由圆柱形的容器体(1)、容器体密封盖(2)、密封盖锁紧装置(3)、排气管(4)、排气管阀门(5)、压力表(6)、温度表(7)、加药漏斗(8)、加药漏斗密封盖(9)、加药漏斗密封盖锁紧装置(10)、加药漏斗阀门(11)、排水管(12)和排水管阀门(13)组成；

B、用厚度为2.0mm、钢号为316的奥氏体不锈钢板制作12～20个药曲发酵圆盘，药曲发酵圆盘的直径要比耐压容器的容器体(1)内径小20mm，在药曲发酵圆盘的整个盘底上均匀地钻透气孔，孔径为3～6mm，孔与孔之间的中心距离为6～12mm，圆盘的边高为65～75mm，在药曲发酵圆盘边的上段，围绕圆盘边钻一排透气孔，孔的直径为8mm，孔与孔之间的中心距离为16mm，每个药曲发酵圆盘配制一个圆饼形的圆盘平盖，圆盘平盖是用陶土烧制而成的低密度无釉陶器，圆盘平盖的直径比药曲发酵圆盘的内径小4～8mm，圆盘平盖的厚度为8～ 15mm；

C、在每个药曲发酵圆盘内的底部铺垫一块80目的圆形滤网，滤网的直径与药曲发酵圆盘的内径相同，再在滤网上盖上一个圓盘平盖，然后将全部药曲发酵圆盘依次叠放于耐压容器的容器体(1)内，用蒸汽121℃，10min灭菌处理，取出备用；

D、称取人参1.20～2.00kg、白术2.00kg、茯神3.00kg、山药3.00kg、陈皮0.50kg、砂仁0.30kg、法半夏0.70kg、石菖蒲0.40kg、当归1.60～2.00kg、生地1.80kg、川芎0.20kg、丹参2.00kg、天麻1.00～1.20kg、钩藤1.30kg、羌活0.80kg、桂枝0.45～0.65kg、五味子0.50kg、麦冬1.20kg、柴胡0.60kg、地龙干2.00kg，混合，粉碎成中药粗粉；

E、在步骤A制得的耐压容器的容器体(1)内加入中药粗粉重量2.5～2.8倍的纯水，盖上容器体密封盖(2)，将密封盖锁紧装置(3)锁紧，使容器体密封盖(2)与容器体(1)之间紧密封闭，将排气管(4)上的排气管阀门(5)开启，将加药漏斗阀门(11)和排水管阀门(13)关闭，加热容器体(1)至容器体(1)内的纯水沸腾2min，关闭排气管(4)上的排气管阀门(5)，继续加热容器体(1)至压力表(6)显示为0.05MPa时，打开排气管(4) 上的排气管阀门(5)排气，当压力表(6)显示压力降至0.005MPa时，关闭排气管(4)上的排气管阀门(5)，停止加热，待容器体(1)内的纯水温度降至20～30℃，容器体(1)内形成负压时，将步骤D制得的中药粗粉装入到加药漏斗(8)中，加药漏斗(8)中剩余的容积空间用高密度的软棉布包扎淀粉来填满，以尽量减少加药漏斗(8)中的空气，将加药漏斗密封盖(9)盖在加药漏斗(8)上，并锁紧加药漏斗密封盖锁紧装置(10)，使加药漏斗(8) 与加药漏斗密封盖(9)之间密闭，缓慢开启加药漏斗阀门(11)，中药粗粉在自重和容器体 (1)内的负压作用下被吸入容器体(1)内，落入容器体(1)内的纯水中，将加药漏斗阀门 (11)关闭，加热容器体(1)至容器体(1)内药液温度为80～82℃，调节加热以保持此温度50min，将一组蒸馏冷凝器与排气管(4)相连接，加热容器体(1)使药液保持沸腾，同时缓慢开启排气管阀门(5)，让药液中的挥发性物质随水蒸气通过冷凝器而得到收集，蒸馏 18～25min后，得蒸馏药液，停止加热，关闭排气管阀门(5)，将收集得的蒸馏药液进行重蒸馏1～2次，得到浓缩蒸馏药液，于1～3℃保存备用；

F、将容器体(1)内含药渣的药液取出，经离心分离至药渣含水量为75～80％，得到药液和药渣，将药液经初步过滤后再经0.60～0.80μm孔径的滤膜进行膜过滤，得到中药精滤液，于1～3℃保存备用；

G、将步骤F所得的药渣降温至29℃，加入1～5％重量的酒曲混合均匀，酒曲的种类和比例为：大曲:小曲:红曲＝1～2:1:0.3～0.5，制得药曲混合料；

H、将步骤G制得的药曲混合料分装于经过步骤C灭菌处理的、铺垫了滤网的药曲发酵圆盘中，盖上圆盘平盖，并用圆盘平盖将药曲混合料压平、压实，压实后，以圆盘平盖不高于圆盘边的透气孔的最低点为准，分装完后，依次叠放于耐压容器的容器体(1)中，将耐压容器的排水管阀门(13)和排气管阀门(5)都完全开启，在排水管(12)上通入洁净空气，洁净空气是通过电子智能控温设备调控温度，使药曲混合料温度依次在29～31℃之间发酵42h、38～41℃之间发酵38h、43～45℃之间发酵36h，然后在24h内缓慢地将温度逐渐降至18～20℃，维持18～20℃10h，制得发酵药曲；

I、将发酵药曲放入耐压容器的容器体(1)内，关闭耐压容器的排水管阀门(13)，加入发酵药曲重量相等的70℃无菌纯水，盖上容器体密封盖(2)，利用密封盖锁紧装置(3)锁紧容器体密封盖(2)，关闭加药漏斗阀门(11)，利用排气管(4)通过抽真空设备抽真空，通过控制真空度和对容器体(1)的加热，使容器体(1)内含发酵药曲的药液在69～71℃之间沸腾5min,关闭排气管阀门(5)，停止抽真空，维持药液在69～71℃之间45min，取出，经离心分离，除去药渣，所得药曲提取液经初步过滤后再用膜孔直径0.60～0.80μm的滤膜进行膜过滤，得药曲提取精滤液；

J、称取鹿茸0.80～1.00kg、海马1.60～2.00kg、紫河车2.00～4.20kg，混合，粉碎成能通过80目网筛的粉末；

K、称取猪脊髓2.00～4.00kg和海参2.00～4.00kg，用沸水漂烫2～3min，沥干，加入步骤J制得的粉末和19～39kg纯水，用胶体磨磨成幼滑的浆体，加纯水调整成底物浓度为17～22％的匀浆液，经128℃，30s灭菌，冷却至37℃，用盐酸调PH值为2，加入胃蛋白酶进行酶解，胃蛋白酶用量为2000U～3000U/g匀浆液，酶解温度为37℃，酶解时间为120～160min，将温度调升至53℃，调PH为7.2，加入胰蛋白酶3000U～4000U/g匀浆液、木瓜蛋白酶1500U～3000U/g匀浆液和风味蛋白酶500U～1000U/g匀浆液，酶解3～4h，加热沸腾18～30min，离心分离去除沉淀物，将所得上清液用膜孔直径0.60～0.80μm的滤膜进行膜过滤，得到酶水解提取液；

L、将步骤E制得的浓缩蒸馏药液、步骤F制得的中药精滤液、步骤I制得的药曲提取精滤液和步骤K制得的酶水解提取液混合，经45～60MPa高压均质，用膜孔直径0.30μm的滤膜进行除菌滤过，得无菌混合药液；

M、在现有脂质体制备技术的基础上，于制备脂质体薄膜的脂质原料配方中，加入0.06～ 0.25％的虾青素，制得含虾青素脂质体膜的囊材，再加入步骤L所得的无菌混合药液作为心料，制成脂质体制剂，然后将脂质体制剂冷冻干燥，制得脂质体干粉制剂；

N、称取食品级海藻酸钠0.90kg、普鲁兰糖0.60～0.90kg，水溶性β-胡萝卜素0.20～0.40kg和白砂糖0.40～0.70kg，混合均匀，加入到66kg去离子水中，快速搅拌分散，搅拌下加热煮沸至完全溶解，冷却至55～65℃，加入步骤M制得的脂质体干粉制剂，搅拌至均匀，制得含脂质体干粉制剂和复合胶浆的混合浆；

O、用无菌水配制含钙浓度为0.5～0.8％的钙溶液200kg；

P、将步骤N制得的混合浆、步骤O制得的钙溶液分别通过压力雾化喷入同一混合室中，其中，混合浆用一个喷雾器从混合室的上部或底部的中心位置向混合室内的中心点喷射，钙溶液则通过两个喷雾器分别从混合室的两侧相对地并等量地向混合室内的中心点喷射，调节钙溶液的总喷雾量≥混合浆的喷雾量，在混合室底部装有接料盘，接料盘中装有钙溶液，混合浆的雾与钙溶液的雾相遇，产生固化微粒而落入接料盘中的钙溶液中，形成微囊，再经过 30～60min的增强固化，捞出，筛去粗粒，冷冻干燥，获得粒径≤0.2mm的微胶囊，制得一种防治小儿癫痫的脂质体微囊剂。

本发明的有益效果如下：

(1)本发明的耐压容器，同时具备了高压灭菌、缺氧浸提、蒸馏、真空低温浸提和药曲多层洁净发酵的综合功能，实用性强，使药剂的制备流程连贯性好，节省设备投资，简化工艺，卫生和质量更有保证，发酵圆盘有透气孔，圆盘平盖为陶土低密度无釉陶器，都有利于透气发酵，发酵圆盘直径比容器体内径小20min，以及发酵圆盘边上段的透气孔是利于盘与盘相叠后仍能保证盘层间的有效透气，设计巧妙。

(2)本发明团队在临床观察和探索中发现，人体有自我修复和向正常痊愈的方向逐渐调节的功能，对于癫痫来说，只要能针对性地、有效地帮助和促进这一功能的持续增强，那么，向愈的速度和效果就会显著提高。但是，如何能实现上述的“针对性地、有效地”，则是问题的关键。由于小儿癫痫的成因复杂，发作的原因也众多，如最早在中医经典《黄帝内经·素问·奇病论》云：“人生而有病癫痫者，……此得之在母腹中时，其母有所大惊，气上而不下，精气并居，故令子发癫痫也。”明确指出了先天因素在本病发生中的重要作用。《证治汇补·痫病》中指出了阴痫、阳痫的分证方法和治则：“阳痫痰热客于心胃，闻惊而作，若痰热甚者，虽不闻惊亦作也，宜用寒凉。阴痫本乎痰热，因用寒凉太过，损伤脾胃变而成阴，法当燥湿温补祛痰”。小儿癫痫发作既可由受惊刺激而发，又可因风邪外感，或饮食不节所伤，使内脏受影响而引发，还有肝风内动，脾运不健，湿滞生痰，心火血燥，火升痰壅，甚至脾肾亏损，经常发作。由此可见，惊、风、痰、火、瘀、虚，一派表象，纷呈各异，亦如同现代对癫痫的分类一样繁杂，使人难以握其要领，更难言提高疗效。

本发明团队经过不断的临床探索和总结，结合前人的经验启示，通过反复热烈的讨论，透过现象看本质，获得如下大胆和具有创新性的论断：

①癫痫病因就目前技术而言有可解释的中枢神经系统病变或遗传因素有关的原因，亦有无法解释的隐源性癫痫，正如我国癫痫领域权威机构CAAE于2015年新版癫痫临床诊疗指南将癫痫定义为不是单一的疾病实体，而是一种有着不同病因基础、临床表现各异但以反复癫痫发作为共同特征的慢性脑部疾病状态，但既然是众多的不良因素导致了小儿癫痫病的产生，而且与人的整体有复杂的关联性，那么，反之，以良好的有益因素同样可影响小儿癫痫的向愈，尤其小儿处于生长的旺盛生理期，具有较强的自我调整、矫正、健全和修复的生理机能，因此，不管其病因和症状多么复杂，只要能针对相关神经器质和生理功能给予有效保护、增益和修复的正面影响，结合中医整体调理的优势，而尽量排除与之相反的功能损害因素，结合人体的自愈机能，便有可能使癫痫患者渐渐地和有效地达到治愈的目的。

②在用药组方的选择上，本发明团队认为，传统中医对癫痫病从“痰”、从“风”论治的本质，是将人体机能调整至较佳的健康状态。因此，应将传统中医认为有祛风镇痉，但实际只是能暂时缓解症状，而对治本无益，并且含毒性较大的药物如全蝎、蜈蚣、南星等剔除，也将稀贵，但对治本无实质帮助的如牛黄、犀角、羚羊角和麝香之类中药剔除，而通过对比试验和优选，以价廉易得的中药和天然提取物优化组合，获得具有标本兼治，治本为主，先调整总体健康状态，再激发人体潜能，达到可靠正向疗效的目的。

③为提高药剂的药效和药剂质量的稳定性，以及小儿服用的方便性，必须将本制剂按现代中药制剂的设计方向进行开发，并有所突破。

(3)经过上述长时间团队成员的协同、探索、试验和总结的基础上，在中医传统“君、臣、佐、使”方剂理论中，引入现代医学和营养学，以及现代药剂学元素，丰富了中医方剂学内涵的深度和广度，并最终确立了本发明制剂的原料组方为：①君药：脾为后天之本，气血生化之源，故用人参、白术、茯神、山药、陈皮、砂仁、法半夏益气健脾，除湿祛痰，使人体运化、消化功能正常，为整体健康打好基础，亦增强对组方中营养及功能成份的吸收能力；②臣药：气为血帅，血为气母，气血畅旺，阴阳平衡，方能使机体内协调良好，状态最佳，而“血行风自灭”，故用当归、生地、川芎、丹参、五味子、麦冬养血，活血，滋阴；③佐药：在保证气血畅旺，运化正常的基础上，以鹿茸、海马、紫河车大补先天的不足，激发小儿生长、修复和健全机体功能的能力，并针对性地配合猪脊髓和海参酶解提取物，作为神经功能营养因子，直接配合和助益小儿脑神经的发育和修复；④使药：通过天麻、钩藤、羌活、桂枝、柴胡、地龙干这些通经络、调气机及具有镇静、息风作用的药物，本团队研究认为有引经作用，包括现代脂质体剂型的优势，以及虾青素能透过血脑屏障的功能，综合达到引经药“使”的作用，使药物易于吸收，直达病所靶点。另外各“君、臣、佐、使”范围的药物原料又相互协同，有些药物还同时兼有多种功能，如当归既有养血补血和活血作用，又有镇静、息风作用，现代药理发现当归、川芎蒸馏提取的挥发油中含藁本内酯，有很强的解痉、平喘和镇静作用，藁本内酯可通过血脑屏障，同时起到中医所言“引经”药的作用。

(4)本发明巧妙地和关键性地采用猪脊髓、海参、紫河车与海马配伍，其对增强神经生长因子的活性，修复并促使脑神经再次发育乃至促进形成新的丰富的神经网络的作用不可低估，虽然这还有待在今后更深入的成像探索中去确认，但就目前临床实践的统计总结中，已证明疗效确切。对于中药海马的最新研究发现，具有抗缺氧、增强记忆力、补肾、促进发育、治疗脑萎缩、抗血栓形成、抗骨髓纤维化、抗氧自由基、镇静以及能显著促进大鼠I/R后的神经功能恢复、显著缩小I/R后脑梗死体积和显著降低脑水肿的反应，而海参是现存最早的生物物种，有海洋活化石之称，能经历2次地球大毁灭而生存下来，足见其生命力之强大，海参能从肛门排出内部器官，以逃避敌害，然后再生新的器官，可见其细胞再生能力之强，中医认为海参具有补肾强壮，益精髓之功能，受此启发，采用海参作配伍原料。紫河车更是来自于人体的胎盘组织，有天然的人体生长基因因子，是先天生发的原基础物质。中医认为紫河车有补肾益精、益气养血，补先天不足之功。猪脊髓含大脑组织的物质成份，含有相应的独特营养因子，亦即是中医朴实的“以形补形”理论和经验，中医认为猪脊髓能补精髓益肾阴。因此，将以上四种原料配伍，达到相互协同增效的良好预期。在上述四种原料的配伍物中，含有丰富的天然神经营养因子，可能包括神经生长因子(NGF)、神经节苷脂(GM)或其它未知的营养因子，这有待进一步的研究，但从本发明团队的临床试验效果来看，确能显著促进小儿癫痫症状的缓解和“向愈”。

(5)本发明原料组方在具有补气血、补肾培元、健脾健运、祛痰息风，激发生机、填精益髓、营养神经、引药入经和协同增效等综合作用的同时，对内源性神经营养因子(BDNF)有很好的激活作用，从而大大增强神经的再生功能，对大脑神经的健全、修复起到很好的促进作用。

(6)在具备上述优良精选的原料组方的基础上，剂型优势亦必须具备，即必须提高药剂的效价和人体的吸收率。因此，本发明在制备方法和剂型方面采取了如下技术方案予以实现：

①将组方原料中的人参、白术、茯神、山药、陈皮、砂仁、法半夏、石菖蒲、当归、生地、川芎、丹参、天麻、钩藤、羌活、桂枝、五味子、麦冬、柴胡、地龙干混合，粉碎成中药粗粉，加入2.5～2.8倍的纯水，在特制的耐压容器的容器体内，经过缺氧状态下80～82℃， 50min的浸提，得到药液和蒸馏药液。这一缺氧加热浸提的提取方法，是受益于一次试验发现，在一次使用透明玻璃烧杯煎煮药液时，发现所得药液比用传统瓷质煎药锅煎煮的同样方剂药液的外观色泽要深色得多，即说明由于透明玻璃透光，在高温长时间的煎煮过程中，光照会大大加速了药液成份物质的氧化反应，对药效会造成一定的损失，受此启发，本案采用排除空气后才加入中药粗粉的方式，使药粉在缺氧和较低温度下提取，有效减少氧化损失，同时又避免常规抽真空的方法而使挥发性功能物质随抽真空而损失，获得高质量药液和蒸馏药液，这些具备大量完整和优质的混合挥发性物质，含有较多能透过血脑屏障的高效功能成份，包括已知的藁本内酯及有待探索的未知物质；

②常规中药煎煮提取存在着提取不充分，需多次复煎提取，浪费药物资源和消耗过多能源，本发明通过生物发酵技术，采取将药渣与大曲、小曲、红曲的复合酒曲混合发酵，并摸索出通过智能控温不同温度和时间的多温度多时段的发酵工艺，这是根据三种不同曲种的微生物特性，设计和反复通过正交试验摸索出的最佳工艺，使不同酒曲产生综合协同作用，达到充分酶解、利用药物以及产生新的功能酵素的结果，又通过真空低温加热提取，得到功能成份丰富的药曲提取液，发酵酶解的作用，也使功能因子的分子更小，有利于人体吸收；

③将鹿茸、海马、紫河车、猪脊髓和海参磨浆并通过胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶在不同PH值和温度与时间的分别酶解，使这些动物属性的药物能高效酶解，获得小分子肽和氨基酸，既能更好地充分利用资源，又能提高其生物利用度，有利于人体吸收利用，易于透过血脑屏障；

④脂质体由于能透过生物体膜，使药物通过正常的半透性屏障，并具有与细胞膜的亲和性，能缓慢和稳定地向血液中释放。因为本发明的组方原料中含有已知能透过血脑屏障且对脑神经疾病具有正面的治疗作用的功能成份，如当归、川芎挥发油中所含的藁本内酯，猪脊髓中所含的神经节苷脂，可能还有一些未知成份亦能起协同作用。因此，本发明利用这些成份的上述特性，以及其与脂质体的相融性，复配制成脂质体，又加入能通过血脑屏障，具有强大抗氧化、抗炎症和保护神经作用的脂溶性虾青素，使本发明的脂质体微囊剂透过血脑屏障的能力和稳定性大大提高，功效更为显著。

⑤对于虾青素以及作为脂类的脂质体的稳定性和保存性，关键是防止氧化，因此，为使所制得的脂质体干粉制剂能稳定地保存，本发明还在此基础上，将脂质体干粉制剂再制成微囊剂。制成微囊剂的工艺，目前有10多种，其中有喷雾干燥法和喷雾冻凝法。喷雾干燥法既需要热风的加热，能源消耗大，又会损害热敏成份。喷雾冻凝法则需要制冷耗能。本发明则创新性地采用喷雾凝胶的方法，将脂质体干粉制剂与由食品级海藻酸钠、普鲁兰糖、水溶性β-胡萝卜素、白砂糖和去离子水制成的复合胶浆混合，搅拌至均匀，制得含脂质体干粉制剂和复合胶浆的混合浆，并与钙溶液同时喷雾于混合室中，由于海藻酸钠与钙离子产生凝胶固化反应，于是形成微囊，落入到接料盘内的钙溶液中，再经增强固化、冷冻干燥而成脂质体微囊剂。因为复合胶浆形成的胶体薄膜包覆着脂质体，薄膜中的普鲁兰糖有很好的空气阻隔性，有效保证了脂质体干粉制剂的稳定保存，还使得产品具有良好的口感、橙红色的观感和微细易于加水吞服，大大有利于小儿的服用。

(7)综上所述，本发明通过大量临床的实践和总结，敢于挑战前人的认识误区，去伪存真，善于以现代科学思维突破和拓展传统中医的运用，摒弃了稀贵和毒性大的药物，并经过对组方原料及用量的多范围正交试验，得出了一组更合理和更有效的原料配伍组方，达到标本兼治，治本为主，药物作用与营养协同增效，并配合现代剂型的再创新，使本制剂的有效功能物质能较高效率地透过血脑屏障直达病所，较为理想地获得高效、长效，以至治愈小儿癫痫的临床效果，且口感好，外观色泽艳丽，易服食，非常便于小儿服食。

附图说明

以下结合附图对本发明作进一步说明，附图作为描述本发明中耐压容器结构的示意图，但仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据本附图获得其他的附图。

图1：耐压容器结构示意图

附图标示说明：

(1)圆柱形的容器体；(2)容器体密封盖；(3)密封盖锁紧装置；(4)排气管；(5)排气管阀门；(6)压力表；(7)温度表；(8)加药漏斗；(9)加药漏斗密封盖；(10)加药漏斗密封盖锁紧装置；(11)加药漏斗阀门；(12)排水管；(13)排水管阀门。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明作进一步说明。

一种防治小儿癫痫的脂质体微囊剂的制备方法，由以下制备步骤制得：

O、用无菌水配制含钙浓度为0.5～0.8％的钙溶液200kg；

在进行本发明的探索过程中，从原料组方、配比，以及制备工艺的每一个细节上，都进行了大量的正交试验和临床验证，其中，包括以下两项重要的对比试验(在保持西药常规小剂量用药控制的同时，增加服用以下脂质体微囊剂样品作相应对比)：

1.所述中药粗粉浸提后的药渣制成发酵药曲再制取药曲提取精滤液对提高制剂疗效的临床效果观察；

2.制备步骤中的步骤J和步骤K采用鹿茸、海马、紫河车以及猪脊髓、海参经过粉碎、磨浆、酶解所得提取液对提高制剂疗效的临床效果观察。

具体的对比试验方法如下：

(1)按上述实施例的制备方法制得脂质体微囊剂样品1；

(2)在上述实施例的制备方法中，将步骤F中经离心分离所得的药渣，不经过步骤G和步骤H的发酵药曲制作，而直接进入步骤I的真空加热提取工艺，其余工艺不变，制得脂质体微囊剂样品2；

(3)在上述实施例的制备方法中，取消步骤J和步骤K，其余步骤不变，制得脂质体微囊剂样品3；

(4)样品1、样品2和样品3对治疗小儿局灶性发作癫痫的临床效果比较结果见表1：

表1：样品1、样品2和样品3对治疗小儿局灶性发作癫痫的临床效果比较

(注：用药方法和用药量：每天早晚各口服样品50ml)

(5)评价标准：

①无效：与过往局灶性发作癫痫出现的频率及症状表现的程度一样，没有减轻；

②有效：比过往局灶性发作癫痫出现的频率有所减少及/或症状表现的程度有所减轻；

③疗效显著：比过往局灶性发作癫痫出现的频率有显著的减少，发作时症状表现的程度有显著的减轻；

④1年内不发作：采用上述样品经过疗程为49天的治疗之后，改为每3天服用1次，每次50ml，1年内未出现发作。

(6)试验结果分析：从表1可见，样品1的无效率为6％，比样品2的无效率14％低8％，比样品3的无效率31％低25％；样品1的有效率为94％，比样品2的有效率86％高8％，比样品3的有效率69％高25％；样品1的疗效显著率为34％，比样品2疗效显著率8％高 26％，比样品3疗效显著率3％高31％；样品1的1年内不发作率为13％，比样品2的1年内不发作率3％高10％，比样品3的1年内不发作率1％高12％。尤其是，样品1的疗效显著率和1年内不发作率明显地比样品2高，更比样品3高，由此可见，本发明采用增加药渣制作药曲后再提取的工艺对提高制剂疗效的效果是较为明显的，这与药曲发酵酶解后，功能物质分子变小，更能配合组方的协同增效作用，并利于透过人体血脑屏障而发挥更好的疗效，而采用鹿茸、海马、紫河车以及猪脊髓、海参经过磨浆酶解所得提取液对提高制剂疗效则更为显著。

(7)样品1、样品2和样品3对治疗小儿全面性发作癫痫的临床效果比较结果见表2：

表2：样品1、样品2和样品3对治疗小儿全面性发作癫痫的临床效果比较

(注：用药方法和用药量：每天早晚各口服样品50ml)

(8)评价标准：

①无效：与过往全面性发作癫痫出现的频率及症状表现的程度一样，没有减轻；

②有效：比过往全面性发作癫痫出现的频率有所减少及/或症状表现的程度有所减轻；

③疗效显著：比过往全局性癫痫出现的频率有显著减少，发作时出现的症状程度有显著的减轻；

(9)试验结果分析：从表2可见，样品1的无效率为9％，比样品2的无效率26％低17％，比样品3的无效率42％低33％；样品1有效率为91％，比样品2的有效率74％高17％，比样品3的有效率58％高33％；样品1的疗效显著率为23％，比样品2的疗效显著率4％高19％，比样品3的疗效显著率1％高22％；样品1的1年内不发作率为8％，比样品2的1 年内不发作率1％高7％，而样品3的1年内不发作率则为零。由此可见，本发明组方中加入鹿茸、海马、紫河车、猪脊髓和海参的复合提取液对提高组方的疗效起到非常显著的作用，这应当与有效大量补充小分子的神经功能因子并通过组方中的中药原料提取物，尤其经过药曲发酵提取物的综合协调增效作用有极大的关系，该工艺的多酶复合酶解能将原料中功能因子较充分地提取，得到多种酶解肽，对相对于局灶性发作癫痫更为严重的全面性发作癫痫也同样能起到较为显著的疗效。

从上述实施例及临床效果的比较中可以发现，本发明对小儿癫痫能起到显著疗效，将可逐渐减少以至完全停止西药的服用，解决长期服用西药治疗产生耐药性复发和容易出现并发症的缺陷，并具有预防、治疗、促进康复的良性循环综合功能，治本为主，标本兼治，能为小儿癫痫的康复建立良好健康基础和起点，为提高生存质量提供保证，以至达到完全控制发作并逐渐康愈的可能，突破了中医传统治疗癫痫已固化的思维和认识盲区，创新中医与现代科学理论的有机结合，为新中医药的创新发展，为中西医优化结合治疗癫痫的促进作出了有效的探索，工艺具有创新性，产品具有新颖性和实用性。

以上所述实施例仅表达了本发明的较佳实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制，本发明专利的保护范围以所附权利要求为准。

Claims

1.一种防治小儿癫痫的脂质体微囊剂的制备方法，其特征在于，由以下制备步骤制得：

A、用钢号为316的奥氏体不锈钢制作一个耐压容器，耐压容器的容量为300升，耐压≥

0.5MPa，耐压容器由圆柱形的容器体（1）、容器体密封盖（2）、密封盖锁紧装置（3）、排气管（4）、排气管阀门（5）、压力表（6）、温度表（7）、加药漏斗（8）、加药漏斗密封盖（9）、加药漏斗密封盖锁紧装置（10）、加药漏斗阀门（11）、排水管（12）和排水管阀门（13）组成；

B、用厚度为2.0mm、钢号为316的奥氏体不锈钢板制作12～20个药曲发酵圆盘，药曲发酵圆盘的直径要比耐压容器的容器体（1）内径小20mm，在药曲发酵圆盘的整个盘底上均匀地钻透气孔，孔径为3～6mm，孔与孔之间的中心距离为6～12mm，圆盘的边高为65～75mm，在药曲发酵圆盘边的上段，围绕圆盘边钻一排透气孔，孔的直径为8mm，孔与孔之间的中心距离为16mm，每个药曲发酵圆盘配制一个圆饼形的圆盘平盖，圆盘平盖是用陶土烧制而成的低密度无釉陶器，圆盘平盖的直径比药曲发酵圆盘的内径小4～8mm，圆盘平盖的厚度为8～15mm；

C、在每个药曲发酵圆盘内的底部铺垫一块80目的圆形滤网，滤网的直径与药曲发酵圆盘的内径相同，再在滤网上盖上一个圓盘平盖，然后将全部药曲发酵圆盘依次叠放于耐压容器的容器体（1）内，用蒸汽121℃，10min灭菌处理，取出备用；

E、在步骤A制得的耐压容器的容器体（1）内加入中药粗粉重量2.5～2.8倍的纯水，盖上容器体密封盖（2），将密封盖锁紧装置（3）锁紧，使容器体密封盖（2）与容器体（1）之间紧密封闭，将排气管（4）上的排气管阀门（5）开启，将加药漏斗阀门（11）和排水管阀门（13）关闭，加热容器体（1）至容器体（1）内的纯水沸腾2min，关闭排气管（4）上的排气管阀门（5），继续加热容器体（1）至压力表（6）显示为0.05MPa时，打开排气管（4）上的排气管阀门（5）排气，当压力表（6）显示压力降至0.005MPa时，关闭排气管（4）上的排气管阀门（5），停止加热，待容器体（1）内的纯水温度降至20～30℃，容器体（1）内形成负压时，将步骤D制得的中药粗粉装入到加药漏斗（8）中，加药漏斗（8）中剩余的容积空间用高密度的软棉布包扎淀粉来填满，以尽量减少加药漏斗（8）中的空气，将加药漏斗密封盖（9）盖在加药漏斗（8）上，并锁紧加药漏斗密封盖锁紧装置（10），使加药漏斗（8）与加药漏斗密封盖（9）之间密闭，缓慢开启加药漏斗阀门（11），中药粗粉在自重和容器体（1）内的负压作用下被吸入容器体（1）内，落入容器体（1）内的纯水中，将加药漏斗阀门（11）关闭，加热容器体（1）至容器体（1）内药液温度为80～82℃，调节加热以保持此温度50min，将一组蒸馏冷凝器与排气管（4）相连接，加热容器体（1）使药液保持沸腾，同时缓慢开启排气管阀门（5），让药液中的挥发性物质随水蒸气通过冷凝器而得到收集，蒸馏18～25min后，得蒸馏药液，停止加热，关闭排气管阀门（5），将收集得的蒸馏药液进行重蒸馏1～2次，得到浓缩蒸馏药液，于1～3℃保存备用；

F、将容器体（1）内含药渣的药液取出，经离心分离至药渣含水量为75～80％，得到药液和药渣，将药液经初步过滤后再经0.60～0.80μm孔径的滤膜进行膜过滤，得到中药精滤液，于1～3℃保存备用；

H、将步骤G制得的药曲混合料分装于经过步骤C灭菌处理的、铺垫了滤网的药曲发酵圆盘中，盖上圆盘平盖，并用圆盘平盖将药曲混合料压平、压实，压实后，以圆盘平盖不高于圆盘边的透气孔的最低点为准，分装完后，依次叠放于耐压容器的容器体（1）中，将耐压容器的排水管阀门（13）和排气管阀门（5）都完全开启，在排水管（12）上通入洁净空气，洁净空气是通过电子智能控温设备调控温度，使药曲混合料温度依次在29～31℃之间发酵42h、38～41℃之间发酵38h、43～45℃之间发酵36h，然后在24h内缓慢地将温度逐渐降至18～20℃，维持18～20℃10h，制得发酵药曲；

I、将发酵药曲放入耐压容器的容器体（1）内，关闭耐压容器的排水管阀门（13），加入发酵药曲重量相等的70℃无菌纯水，盖上容器体密封盖（2），利用密封盖锁紧装置（3）锁紧容器体密封盖（2），关闭加药漏斗阀门（11），利用排气管（4）通过抽真空设备抽真空，通过控制真空度和对容器体（1）的加热，使容器体（1）内含发酵药曲的药液在69～71℃之间沸腾5min,关闭排气管阀门（5），停止抽真空，维持药液在69～71℃之间45min，取出，经离心分离，除去药渣，所得药曲提取液经初步过滤后再用膜孔直径0.60～0.80μm的滤膜进行膜过滤，得药曲提取精滤液；

M、在现有脂质体制备技术的基础上，于制备脂质体薄膜的脂质原料配方中，加入0.06～0.25％的虾青素，制得含虾青素脂质体膜的囊材，再加入步骤L所得的无菌混合药液作为心料，制成脂质体制剂，然后将脂质体制剂冷冻干燥，制得脂质体干粉制剂；

O、用无菌水配制含钙浓度为0.5～0.8％的钙溶液200kg；

P、将步骤N制得的混合浆、步骤O制得的钙溶液分别通过压力雾化喷入同一混合室中，其中，混合浆用一个喷雾器从混合室的上部或底部的中心位置向混合室内的中心点喷射，钙溶液则通过两个喷雾器分别从混合室的两侧相对地并等量地向混合室内的中心点喷射，调节钙溶液的总喷雾量≥混合浆的喷雾量，在混合室底部装有接料盘，接料盘中装有钙溶液，混合浆的雾与钙溶液的雾相遇，产生固化微粒而落入接料盘中的钙溶液中，形成微囊，再经过30～60min的增强固化，捞出，筛去粗粒，冷冻干燥，获得粒径≤0.2mm的微胶囊，制得一种防治小儿癫痫的脂质体微囊剂。

2.一种如权利要求1所述的制备方法制备得到的防治小儿癫痫的脂质体微囊剂。