CN109085347A - 同时检测甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻、摇头丸的胶体金试纸条及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提出了制备试纸条的方法、试纸条、联检试纸条以及利用试纸条或者联检试纸条检测样品中待测物的方法。所述制备试纸条的方法包括：提供胶体金标记抗体溶液、抗原溶液、二抗溶液、底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫；将所述胶体金标记抗体溶液喷涂于所述结合垫上，并进行干燥处理；将所述抗原溶液喷涂于所述硝酸纤维素膜的检测线上，并进行干燥处理；将所述二抗溶液喷涂于所述硝酸纤维素膜的质控线上，并进行干燥处理；以及依次将样品垫、所述干燥处理后的结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫沿所述底板第一端至第二端的方向固定于所述底板上表面，以便得到所述试纸条。本发明试纸条能够有效地检测样品中待测物含量，且灵敏度高。

Description

同时检测甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻、摇头丸的胶体金试 纸条及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物领域。具体地，本发明涉及同时检测甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻、摇头丸的胶体金试纸条及其制备方法。更具体地，本发明涉及制备试纸条的方法、试纸条、联检试纸条以及利用试纸条或者联检试纸条检测样品中待测物的方法。
背景技术
毒品泛指非医疗、科研和教学需要而滥用的药品，是被国家依法管理、使人有依赖性的麻醉药品和精神药品，主要包括：甲基苯丙胺(冰毒)、吗啡、鸦片、海洛因、大麻、可卡因等，毒品的滥用给人们的生活带来了很大危害。2015年国家禁毒委发布的禁毒报告显示，到目前为止，我国吸毒人员估计已达到1400万人，其中49.4％的人吸食冰毒、氯胺酮和摇头丸，49.3％的人吸食海洛因，1.3％的人吸食大麻及其它，2015年全国因吸毒而注销驾驶证的人员有14.6万。吸毒引发的治安和刑事案件随之大量增加，一些毒品问题严重地区超过70％的侵财类案件是吸毒人员作案，因吸食毒品引发自伤自残、暴力杀人、劫持人质、交通肇事等案件不断增多，严重危害社会治安和公共安全。
目前对于毒品中待测成分的检测方法主要有化学检测法、色谱检测法以及光谱检测法等，其中，化学检测法是在样品中加入化学试剂，通过反应后的物质经显色剂产生的颜色变化或者产生的沉淀物质来定性，该方法操作简单，检测时间较短，可直观的定性结果，但需要的耗材量大，容易对检材造成破坏，低含量的和化学结构类似的待测成分不易检出和区分。色谱检测法包括气相色谱法、高效液相色谱法以及色谱质谱联用法等，气相色谱法是一种用气体作为流动相的色谱方法，用于分离复杂样品的化合物分析方法；高效液相色谱法是用液体作为流动相的色谱，分子量较大的、物质热稳定性不好的、不易气化的、沸点高的物质用该仪器分析；色谱质谱联用法是色谱仪和质谱仪相结合，将物质分离后分析出定性或定量结果，但该方法需要昂贵的仪器，复杂的操作过程，专业的人员以及检测时间较长等。光谱检测法就是利用不同成分的特征光谱，研究其结构或测定化学成分的方法，主要运用的光谱技术包括傅里叶变换红外光谱、太赫兹时域光谱技术、拉曼光谱技术，但这些技术均需要昂贵的设备，检测时间较长，不适合样本的快速批量筛查。胶体金免疫层析法是以胶体金为标记物，利用抗原抗体的特异性反应建立的免疫层析技术，该技术不需要昂贵的设备，操作简单，检测时间短(3-5min)，适合样本的现场批量筛查。
然而，目前利用胶体金免疫层析法检测毒品的方法及试纸条仍有待改进。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本发明提出了制备试纸条的方法、试纸条、联检试纸条以及利用试纸条或者联检试纸条检测样品中待测物的方法。利用本发明制备试纸条的方法所得到的试纸条能够有效地检测样品中待测物含量，且灵敏度高，可以准确地对待测物含量较低的样品进行检测，例如唾液。
需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：
目前毒品的检测主要是以尿液作为样本，样本的采集受到时间、场地和性别等限制，为检测带来了诸多不便。
有鉴于此，发明人发现，以唾液作为检测样本，具有明显的优势：如：可随时随地取样，不受场地和性别的限制；可避免掺假调包；节省人力物料；大幅度提高检测效率等。但是，唾液中的待测物含量较低，对于胶体金试纸条的灵敏度要求较高。进一步地，发明人发现，制备试纸条的工艺条件，例如胶体金的制备、喷涂的胶体金标记抗体溶液浓度、抗原溶液浓度以及二抗溶液的浓度等条件会影响试纸条的灵敏度。进而，发明人经过大量实验得到较佳的制备试纸条的方法，所得到的试纸条能够有效地检测样品中待测物含量，且灵敏度高，可以准确地对待测物含量较低的样品进行检测，例如唾液。另外，将该试纸条制成联检试纸条，能够达到同时检测多种毒品(如甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻以及摇头丸等)的目的，显著提高了检测效率。
为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种制备试纸条的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：提供胶体金标记抗体溶液、抗原溶液、二抗溶液、底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫；将所述胶体金标记抗体溶液喷涂于所述结合垫上，并进行干燥处理；将所述抗原溶液喷涂于所述硝酸纤维素膜的检测线上，并进行干燥处理；将所述二抗溶液喷涂于所述硝酸纤维素膜的质控线上，并进行干燥处理；以及依次将所述样品垫、干燥处理后的结合垫、干燥处理后的硝酸纤维素膜以及吸水垫沿所述底板第一端至第二端的方向固定于所述底板上表面，以便得到所述试纸条，其中，所述胶体金标记抗体溶液是通过将胶体金溶液与抗体进行混合而得到的，所述胶体金溶液是通过下列方式获得的：将预热的去离子水与HAuCl4溶液进行第一混合处理，以便得到第一混合液；将所述第一混合液与柠檬酸钠溶液进行第二混合处理，以便得到胶体金溶液。
发明人发现，目前通常采用直接将HAuCl4溶液和柠檬酸钠溶液进行混合的方法制备胶体金溶液。但是，所得到的胶体金的粒径大小不一，从而导致试纸条的检测灵敏度较低，无法准确测定低含量待测物。为此，发明人经过深入研究发现，预先将预热的去离子水与HAuCl4溶液进行混合，再将得到的混合液与柠檬酸钠溶液进行混合，所得到的胶体金粒径均匀，试纸条的检测灵敏度较高。由此，利用根据本发明实施例的制备试纸条的方法所得到的试纸条能够有效地检测样品中待测物含量，且灵敏度高，可以准确地对待测物含量较低的样品进行检测，例如唾液。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种试纸条。根据本发明的实施例，所述试纸条是通过前面所述制备试纸条的方法制备得到的。由此，根据本发明实施例的试纸条能够有效地检测样品中待测物含量，且灵敏度高，可以准确地对待测物含量较低的样品进行检测，例如唾液。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种联检试纸条。根据本发明的实施例，所述联检试纸条包括：卡壳，所述卡壳具有第一端和第二端，并且在所述卡壳的上表面，沿所述第一端至第二端的方向，平行且间隔地固定有第一试纸条、第二试纸条、第三试纸条、第四试纸条以及第五试纸条，其中，所述第一试纸条是如前面所述试纸条所限定的，其中，所述抗原为甲基苯丙胺-BSA全抗原，所述抗体为甲基苯丙胺抗体，所述二抗为羊抗鼠二抗；所述第二试纸条是如前面所限定的，其中，所述抗原为氯胺酮-BSA全抗原，所述抗体为氯胺酮抗体，所述二抗为羊抗鼠二抗；所述第三试纸条是如前面所限定的，其中，所述抗原为吗啡-BSA全抗原，所述抗体为吗啡抗体，所述二抗为羊抗鼠二抗；所述第四试纸条是如前面所限定的，其中，所述抗原为大麻-BSA全抗原，所述抗体为大麻抗体，所述二抗为羊抗鼠二抗；所述第五试纸条是如前面所限定的，其中，所述抗原为摇头丸-BSA全抗原，所述抗体为摇头丸抗体，所述二抗为羊抗鼠二抗。由此，根据本发明实施例的联检试纸条能够同时检测甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻以及摇头丸，灵敏度高，可以准确地对待测物含量较低的样品进行检测，例如唾液。
在本发明的又一方面，本发明提出了利用前面所述试纸条或者联检试纸条检测样品中待测物的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将所述样品滴加至所述样品垫上，并进行静置；以及基于所述检测线和质控线的显色结果，确定所述样品中待测物的含量，其中，所述样品为唾液。由此，能够准确地确定唾液中待测物含量，且灵敏度较高。
根据本发明的实施例，所述待测物为下列的至少之一：甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻以及摇头丸。由此，能够准确地确定唾液中甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻和/或摇头丸含量，且灵敏度较高。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1显示了根据本发明一个实施例的制备试纸条的方法的流程示意图；
图2显示了根据本发明一个实施例的试纸条的结构示意图；
图3显示了根据本发明一个实施例的联检试纸条的结构示意图；
图4显示了根据本发明一个实施例的试纸条显色结果示意图；以及
图5显示了根据本发明另一个实施例的试纸条显色结果示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“上”、“下”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征之“上”或之“下”可以包括第一和第二特征直接接触，也可以包括第一和第二特征不是直接接触而是通过它们之间的另外的特征接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。
本发明提出了制备试纸条的方法、试纸条、联检试纸条以及利用试纸条或者联检试纸条检测样品中待测物的方法，下面将分别对其进行详细描述。
制备试纸条的方法
在本发明的一个方面，本发明提出了一种制备试纸条的方法。根据本发明的实施例，参见图1，该方法包括：S100提供原料、S200喷涂胶体金标记抗体溶液、S300喷涂抗原溶液、S400喷涂二抗溶液以及S500固定。由此，利用根据本发明实施例的制备试纸条的方法所得到的试纸条能够有效地检测样品中待测物含量，且灵敏度高，可以准确地对待测物含量较低的样品进行检测，例如唾液。下面将详细描述该制备方法。
为了方便理解，下面简要阐述利用本发明的制备试纸条的方法所得到的试纸条的检测原理：
待测物与检测线(亦称作T线)上包被的抗原竞争结合吸附在结合垫上的胶体金标记的抗体。例如，一个阳性样本，在吸水垫的毛细管作用力下，样品垫上滴加的待测物首先与结合垫上的胶体金标记的抗体特异性结合，胶体金-抗体-抗原再通过检测线，检测线上附着的抗原可竞争结合抗体表面有限的抗原位点。随着时间的推移，待测物逐渐增多，结合的胶体金标记抗体越多，导致检测线上的抗原无法结合到胶体金标记抗体。当检测线上的胶体金标记抗体少到一定程度时，已经无法达到显色的浓度，此时检测线呈淡色或无色。剩余的胶体金标记抗体继续层析，由于质控线(亦称作C线)上的二抗与抗原不存在竞争位点关系，当胶体金标记抗体到达质控线时，与质控线上包被的二抗特异性结合并不断累积，直到显色。所体现的阳性结果为：检测线变浅或消失，质控线显色；阴性结果为检测线和质控线都显色；质控线不显色则为失效。
S100提供原料
在该步骤中，提供胶体金标记抗体溶液、抗原溶液、二抗溶液、底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫。
根据本发明的实施例，胶体金标记抗体溶液是通过将胶体金溶液与抗体进行混合而得到的，胶体金溶液是通过下列方式获得的：将预热的去离子水与HAuCl4溶液进行第一混合处理，以便得到第一混合液；将第一混合液与柠檬酸钠溶液进行第二混合处理，以便得到胶体金溶液。
发明人发现，目前通采用直接将HAuCl4溶液和柠檬酸钠溶液进行混合的方法制备胶体金溶液。但是，所得到的胶体金的粒径大小不一，从而导致试纸条的检测灵敏度较低，无法准确测定低含量待测物。为此，发明人经过深入研究发现，预先将预热的去离子水与HAuCl4溶液进行混合，再将得到的混合液与柠檬酸钠溶液进行混合，所得到的胶体金粒径均匀，试纸条的检测灵敏度较高。由此，利用本发明实施例的制备试纸条的方法所得到的试纸条能够有效地检测样品中待测物含量，且灵敏度高，可以准确地对待测物含量较低的样品进行检测，例如唾液。
根据本发明的实施例，预热的去离子水温度为40℃-80℃。发明人发现，预先对去离子水进行加热，然后与氯金酸溶液混合能够在该温度下活化氯金酸，从而更好的促进氯金酸与柠檬酸钠反应，使得到的胶体金的粒径大小均一，由此，以便进一步提高检测灵敏度。
根据本发明的实施例，胶体金溶液是通过下列方式获得的：将99mL 40℃-80℃去离子水与0.1～10mL 1～10质量％的HAuCl4溶液进行搅拌2分钟，以便得到第一混合液；以及将第一混合液与0.1～100mL 1～10质量％的柠檬酸钠溶液进行搅拌，以便得到胶体金溶液。由此，使得到的胶体金的粒径大小均一，以便进一步提高检测灵敏度。
根据本发明的实施例，胶体金标记抗体溶液是通过下列方式获得的：调节胶体金溶液的pH值至6～10，并将所得到的溶液与抗体进行第三混合处理，以便得到第三混合液；将第三混合液与PEG20000溶液进行第四混合处理，以便得到第四混合液；将第四混合液与BSA溶液进行封闭处理，以便得到第五混合液；以及将第五混合液进行离心处理，并向所得到的沉淀物中加入复溶液重悬，以便得到胶体金标记抗体溶液，其中，基于10mL胶体金溶液，抗体的添加量为2～100μg。发明人发现，抗体的添加量会影响检测的准确性和灵敏度。进而，发明人经过大量实验得到上述较佳的抗体添加量，在此条件下能够进一步提高检测灵敏度。
S200喷涂胶体金标记抗体溶液
在该步骤中，将胶体金标记抗体溶液喷涂于结合垫上，并进行干燥处理。
根据本发明的实施例，胶体金标记抗体溶液的浓度为1～100μL/mL。发明人发现，喷涂于结合垫上的胶体金标记抗体溶液浓度会影响检测的准确性和灵敏度。进而，发明人经过大量实验得到上述较佳的浓度，在此条件下能够进一步提高检测灵敏度。
S300喷涂抗原溶液
在该步骤中，将抗原溶液喷涂于硝酸纤维素膜的检测线上，并进行干燥处理。
根据本发明的实施例，抗原溶液的浓度为0.05～10mg/mL。发明人发现，喷涂于检测线上的抗原溶液的浓度会影响检测的准确性和灵敏度。进而，发明人经过大量实验得到上述较佳的浓度，在此条件下能够进一步提高检测灵敏度。
根据本发明的实施例，抗原为甲基苯丙胺-BSA全抗原，抗体为甲基苯丙胺抗体；或者抗原为氯胺酮-BSA全抗原，抗体为氯胺酮抗体；或者抗原为吗啡-BSA全抗原，抗体为吗啡抗体；或者抗原为大麻-BSA全抗原，抗体为大麻抗体；或者抗原为摇头丸-BSA全抗原，抗体为摇头丸抗体。由此，利用根据本发明实施例的方法所得到的试纸条能够准确地检测甲基苯丙胺、甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻以及摇头丸，且灵敏度较高。
S400喷涂二抗溶液
在该步骤中，将二抗溶液喷涂于硝酸纤维素膜的质控线上，并进行干燥处理。
根据本发明的实施例，二抗为羊抗鼠二抗。羊抗鼠二抗可以与胶体金标记抗体特异性结合，且不与抗原竞争性结合胶体金标记抗体，由此可以通过质控线上显色情况确定胶体金抗体是否失活。
根据本发明的实施例，二抗溶液的浓度为0.05～10mg/mL。发明人发现，喷涂于质控线上的二抗溶液浓度会影响检测的准确性和灵敏度。进而，发明人经过大量实验得到上述较佳的浓度，在此条件下能够进一步提高检测灵敏度。
S500固定
在该步骤中，依次将样品垫、干燥处理后的结合垫、干燥处理后的硝酸纤维素膜以及吸水垫沿底板第一端至第二端的方向固定于底板上表面，以便得到试纸条。
试纸条
在本发明的另一方面，本发明提出了一种试纸条。根据本发明的实施例，试纸条是通过前面所述制备试纸条的方法制备得到的。由此，根据本发明实施例的试纸条能够有效地检测样品中待测物含量，且灵敏度高，可以准确地对待测物含量较低的样品进行检测，例如唾液。
为了方面理解，下面将详细描述本发明试纸条的结构，具体参见图2。
根据本发明的实施例，该试纸条包括底板500，底板500具有第一端和第二端，并且在底板的上表面，沿第一端至第二端的方向依次形成有样品垫100、结合垫200、硝酸纤维素膜300和吸水垫400。
根据本发明的实施例，在硝酸纤维素膜300上形成有检测线310和质控线320。其中，检测线310形成在硝酸纤维素膜300上接近底板500第一端的一侧，质控线320形成在硝酸纤维素膜300上接近底板500第二端的一侧。
根据本发明的实施例，结合垫200上附着有胶体金标记的抗体。
根据本发明的实施例，检测线310上附着有与胶体金标记的抗体特异性结合的抗原。
根据本发明的实施例，质控线320上附着有与胶体金标记的抗体特异性结合的二抗。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对制备试纸条的方法所描述的特征和优点，同样适用于该试纸条，在此不再赘述。
联检试纸条
在本发明的又一方面，本发明提出了一种联检试纸条。根据本发明的实施例，参见图3，该联检试纸条包括：卡壳1、第一试纸条10、第二试纸条20、第三试纸条30、第四试纸条40以及第五试纸条50。由此，根据本发明实施例的联检试纸条能够同时检测甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻以及摇头丸，灵敏度高，可以准确地对待测物含量较低的样品进行检测，例如唾液。下面将详细描述该联检试纸条。
根据本发明的实施例，该联检试纸条包括：
卡壳1，卡壳1具有第一端和第二端，并且在卡壳的上表面，沿第一端至第二端的方向，平行且间隔地固定有第一试纸条10、第二试纸条20、第三试纸条30、第四试纸条40以及第五试纸条50。具体地，各试纸条的长度方向与卡壳的长度方向垂直。
需要说明的是，本发明对于卡壳的种类和结构不作严格限定，只要能够固定五个试纸条即可。根据本发明的具体实施例，卡壳上具有卡槽，可以分别将五个试纸条插入卡槽中，以便固定于卡壳上。
根据本发明的具体实施例，第一试纸条10是如前面所述试纸条所限定的，其中，抗原为甲基苯丙胺-BSA全抗原，抗体为甲基苯丙胺抗体，二抗为羊抗鼠二抗。由此，采用第一试纸条能够有效地检测甲基苯丙胺，且灵敏度较高，可以准确地对甲基苯丙胺含量较低的样品进行检测，例如唾液。
根据本发明的具体实施例，第二试纸条20是如前面所限定的，其中，抗原为氯胺酮-BSA全抗原，抗体为氯胺酮抗体，二抗为羊抗鼠二抗。由此，采用第二试纸条能够有效地检测氯胺酮，且灵敏度较高，可以准确地对氯胺酮含量较低的样品进行检测，例如唾液。
根据本发明的具体实施例，第三试纸条30是如前面所限定的，其中，抗原为吗啡-BSA全抗原，抗体为吗啡抗体，二抗为羊抗鼠二抗。由此，采用第三试纸条能够有效地检测吗啡，且灵敏度较高，可以准确地对吗啡含量较低的样品进行检测，例如唾液。
根据本发明的具体实施例，第四试纸条40是如前面所限定的，其中，抗原为大麻-BSA全抗原，抗体为大麻抗体，二抗为羊抗鼠二抗。由此，采用第四试纸条能够有效地检测大麻，且灵敏度较高，可以准确地对大麻含量较低的样品进行检测，例如唾液。
根据本发明的具体实施例，第五试纸条50是如前面所限定的，其中，抗原为摇头丸-BSA全抗原，抗体为摇头丸抗体，二抗为羊抗鼠二抗。由此，采用第五试纸条能够有效地检测摇头丸，且灵敏度较高，可以准确地对摇头丸含量较低的样品进行检测，例如唾液。
需要说明的是，沿卡壳的第一端至第二端的方向，第一试纸条、第二试纸条、第三试纸条、第四试纸条以及第五试纸条的排列顺序不作严格限定，可以根据实际需要进行选择即可，只要保证五个试纸条平行且间隔排列即可。
根据本发明的实施例，利用该联检试纸条进行检测的显色结果如图4和5所示。如果试纸条T线显色，表明试纸条检测结果为阴性，样本中不存在待检物(甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻、摇头丸)或者待检物含量较低，无法检出，视作不存在，如图4所示；如果试纸条T线不显色，表明试纸条检测结果为阳性，样本中有待检物(甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻、摇头丸)，如图5所示。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对试纸条所描述的特征和优点，同样适用于该联检试纸条，在此不再赘述。
需要说明的是，根据本发明实施例的试纸条或者联检试纸条还可以具有下列优点的至少之一：
1、灵敏度高
利用本发明的试纸条或者联用试纸条所检测的甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻及摇头丸的检测灵敏度(亦称检出限)分别为50ng/ml、150ng/ml、15ng/ml、10ng/ml、25ng/ml，明显高于现有的试纸条。例如北京库尔科技有限公司、上海凯创生物科技有限公司等生产的产品主要为毒品胶体金尿液检测试纸条，甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻以及摇头丸尿液试纸条的检测限分别为1000ng/ml、1000ng/ml、300ng/ml、50ng/ml、500ng/ml。
2、特异性强
利用本发明的试纸条或者联用试纸条特异性地检测甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻及摇头丸，能够明显地区分于甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻及摇头丸结构相似的样本，如二氢埃托啡、罂粟碱、那可丁、芬太尼、右丙氧芬、曲马多、美沙酮、纳洛酮、纳曲酮、丁丙诺菲、洛非西丁、地西泮、苯并比妥、四氢大麻酚酸、可卡因、利多卡因、雷尼替丁、加替沙星、普鲁卡因、咖啡因、东莨菪碱、非那西丁、异戊巴比妥、安非他明、扑热息痛、阿司匹林、布洛芬、阿米替林、丙咪嗪、水合氯醛、三唑仑、阿普唑仑、氯丙嗪、奥复杀星、氟哌酸、氯胺酮、先锋IV、黄连素、速可眠、去疼片、乳糖，不存在交叉。
3、稳定性高
本发明的试纸条或者联用试纸条能够在室温下储存2年，仍保持较高的准确性和灵敏度。
试纸条或者联检试纸条检测样品中待测物的方法
在本发明的又一方面，本发明提出了利用前面所述试纸条或者联检试纸条检测样品中待测物的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：将样品滴加至样品垫上，并进行静置；以及基于检测线和质控线的显色结果，确定样品中待测物的含量，其中，样品为唾液。具体地，阳性结果为：检测线变浅或消失，质控线显色；阴性结果为检测线和质控线都显色；质控线不显色则为失效。唾液中的待测物含量通常较低，所以对于试纸条的灵敏度要求较高。如前所述，本发明的试纸条或者联检试纸条具有较高的准确性和灵敏度，由此，能够准确地确定唾液中待测物含量，操作便捷，检测效率较高。
根据本发明的实施例，待测物为下列的至少之一：甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻以及摇头丸。发明人发现，利用本发明的试纸条或者联用试纸条所检测的甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻及摇头丸的检测灵敏度(亦称检出限)分别为50ng/ml、150ng/ml、15ng/ml、10ng/ml、25ng/ml，明显高于现有的试纸条。例如北京库尔科技有限公司、上海凯创生物科技有限公司等生产的产品主要为毒品胶体金尿液检测试纸条，甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻以及摇头丸尿液试纸条的检测限分别为1000ng/ml、1000ng/ml、300ng/ml、50ng/ml、500ng/ml。由此，能够准确地确定唾液中甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻和/或摇头丸含量，且灵敏度较高。
本领域技术人员能够理解的是，前面针对试纸条以及联检试纸条所描述的特征和优点，同样适用于该试纸条或者联检试纸条检测样品中待测物的方法，在此不再赘述。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
仪器：XYZ3000型三维喷点平台；试纸条切割机(BIODOT公司)；除湿机(日本川井公司)；真空干燥机(上海森信实验仪器有限公司)；恒温鼓风干燥箱(上海福玛实验设备有限公司)；包装机(丰兴包装机械材料有限公司)；磁力搅拌加热器(江苏金坛市金城国盛实验仪器厂)；高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器总厂)。
材料与试剂：氯金酸(HAuCl4，Sigma公司)；柠檬酸三钠(Sigma公司)；牛血清白蛋白(BSA，Amresco公司)；聚乙二醇20000(PEG20000，索莱宝)；硝酸纤维膜(NC膜)、结合垫、样品垫、吸水垫及PVC底板(Millipore公司)；羊抗鼠二抗(Sigma公司)。
实施例1制备试纸条及其检测
1、胶体金制备：取99ml 60℃-80℃去离子水加热，加入1ml 1质量％的HAuCl4溶液，搅拌2min后加入2ml 1～5质量％柠檬酸钠溶液，待颜色稳定后停止反应，得到胶体金溶液，通过透射电镜对材料大小及形貌进行表征，所得到的胶体金溶液中胶体金粒径较均匀。
2、胶体金标记抗体溶液：取五只反应瓶，分别加入10ml的胶体金溶液，调节pH值到6-10，分别加入1ml 2～10μg的甲基苯丙胺抗体、氯胺酮抗体、吗啡抗体、大麻抗体以及摇头丸抗体到每个反应瓶，搅拌1h，然后向每只反应瓶中分别加入1ml 10质量％PEG20000溶液，搅拌30min，向每只反应瓶分别加入1ml 10质量％BSA溶液进行封闭，继续搅拌30min。3000～8500rpm离心30min，加入复溶液重悬，然后按1～20μl/ml的浓度喷涂于结合垫上。
3、免疫层析检测方法的建立：取五条硝酸纤维素膜，分别喷涂浓度为0.2～2mg/ml的甲基苯丙胺-BSA全抗原、氯胺酮-BSA全抗原、吗啡-BSA全抗原、大麻-BSA全抗原、摇头丸-BSA全抗原作为检测线(T线)，每条膜分别喷涂浓度为0.8～1mg/ml的羊抗鼠二抗作为质控线(C线)，37℃鼓风干燥17h。依次按样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫的顺序将各部分粘贴于底板上，组装成单个试纸条。将得到的每种毒品试纸条装入五联检卡壳，组装成毒品五联检胶体金唾液试纸条。
4、检测：
滴加100-1000μl的唾液样本到试剂条加样孔，3-5min后完成免疫层析过程。
结果如图4所示，试纸条T线显色，表明试纸条检测结果为阴性，样本中不存在待检物(甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻、摇头丸)或者待检物含量较低，无法检出，视作不存在。
实施例2制备试纸条及其检测
1、胶体金制备：取99ml 60℃-80℃去离子水加热，加入1ml 1质量％的HAuCl4溶液，搅拌2min后加入2ml 1～5质量％柠檬酸钠溶液，待颜色稳定后停止反应，得到胶体金溶液，通过透射电镜对材料大小及形貌进行表征，所得到的胶体金溶液中胶体金粒径较均匀。
2、胶体金标记抗体溶液：取五只反应瓶，分别加入10ml的胶体金溶液，调节pH值到6-10，分别加入1ml 2～10μg的甲基苯丙胺抗体、氯胺酮抗体、吗啡抗体、大麻抗体以及摇头丸抗体到每个反应瓶，搅拌1h，然后向每只反应瓶中分别加入1ml 10质量％PEG20000溶液，搅拌30min，向每只反应瓶分别加入1ml 10质量％BSA溶液进行封闭，继续搅拌30min。3000～8500rpm离心30min，加入复溶液重悬，然后按1～20μl/ml的浓度喷涂于结合垫上。
3、免疫层析检测方法的建立：取五条硝酸纤维素膜，分别喷涂浓度为0.2～2mg/ml的甲基苯丙胺-BSA全抗原、氯胺酮-BSA全抗原、吗啡-BSA全抗原、大麻-BSA全抗原、摇头丸-BSA全抗原作为检测线(T线)，每条膜分别喷涂浓度为0.8～1mg/ml的羊抗鼠二抗作为质控线(C线)，37℃鼓风干燥17h。依次按样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫的顺序将各部分粘贴于底板上，组装成单个试纸条。将得到的每种毒品试纸条装入五联检卡壳，组装成毒品五联检胶体金唾液试纸条。
4、检测：
滴加100-1000μl的唾液样本到试剂条加样孔，3-5min后完成免疫层析过程。
结果如图5所示，试纸条T线不显色，表明试纸条检测结果为阳性，样本中存在待检物甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻以及摇头丸。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种制备试纸条的方法，其特征在于，包括：
提供胶体金标记抗体溶液、抗原溶液、二抗溶液、底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫；
将所述胶体金标记抗体溶液喷涂于所述结合垫上，并进行干燥处理；
将所述抗原溶液喷涂于所述硝酸纤维素膜的检测线上，并进行干燥处理；
将所述二抗溶液喷涂于所述硝酸纤维素膜的质控线上，并进行干燥处理；以及
依次将所述样品垫、干燥处理后的结合垫、干燥处理后的硝酸纤维素膜以及吸水垫沿所述底板第一端至第二端的方向固定于所述底板上表面，以便得到所述试纸条，
其中，所述胶体金标记抗体溶液是通过将胶体金溶液与抗体进行混合反应而得到的，
所述胶体金溶液是通过下列方式获得的：
将预热的去离子水与HAuCl4溶液进行第一混合处理，以便得到第一混合液；
将所述第一混合液与柠檬酸钠溶液进行第二混合处理，以便得到胶体金溶液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预热的去离子水温度为40℃-80℃。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胶体金溶液是通过下列方式获得的：
将99mL 40℃-80℃去离子水与0.1～10mL 1～10质量％的HAuCl4溶液进行搅拌2分钟，以便得到第一混合液；以及
将所述第一混合液与0.1～100mL 1～10质量％的柠檬酸钠溶液进行搅拌，以便得到胶体金溶液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗原为甲基苯丙胺-BSA全抗原，所述抗体为甲基苯丙胺抗体；或者
所述抗原为氯胺酮-BSA全抗原，所述抗体为氯胺酮抗体；或者
所述抗原为吗啡-BSA全抗原，所述抗体为吗啡抗体；或者
所述抗原为大麻-BSA全抗原，所述抗体为大麻抗体；或者
所述抗原为摇头丸-BSA全抗原，所述抗体为摇头丸抗体，
所述二抗为羊抗鼠二抗。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胶体金标记抗体溶液是通过下列方式获得的：
调节所述胶体金溶液的pH值至6～10，并将所得到的溶液与抗体进行第三混合处理，以便得到第三混合液；
将所述第三混合液与PEG20000溶液进行第四混合处理，以便得到第四混合液；
将所述第四混合液与BSA溶液进行封闭处理，以便得到第五混合液；以及
将所述第五混合液进行离心处理，并向所得到的沉淀物中加入复溶液重悬，以便得到所述胶体金标记抗体溶液，
其中，基于10mL所述胶体金溶液，所述抗体的添加量为2～100μg。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胶体金标记抗体溶液的浓度为1～100μL/mL，所述抗原溶液的浓度为0.05～10mg/mL，所述二抗溶液的浓度为0.05～10mg/mL。
7.一种试纸条，其特征在于，所述试纸条是通过权利要求1～6任一项所述制备试纸条的方法制备得到的。
8.一种联检试纸条，其特征在于，包括：
卡壳，所述卡壳具有第一端和第二端，并且在所述卡壳的上表面，沿所述第一端至第二端的方向，平行且间隔地固定有第一试纸条、第二试纸条、第三试纸条、第四试纸条以及第五试纸条，
其中，
所述第一试纸条是如权利要求7所述试纸条所限定的，其中，所述抗原为甲基苯丙胺-BSA全抗原，所述抗体为甲基苯丙胺抗体，所述二抗为羊抗鼠二抗；
所述第二试纸条是如权利要求7所述试纸条所限定的，其中，所述抗原为氯胺酮-BSA全抗原，所述抗体为氯胺酮抗体，所述二抗为羊抗鼠二抗；
所述第三试纸条是如权利要求7所述试纸条所限定的，其中，所述抗原为吗啡-BSA全抗原，所述抗体为吗啡抗体，所述二抗为羊抗鼠二抗；
所述第四试纸条是如权利要求7所述试纸条所限定的，其中，所述抗原为大麻-BSA全抗原，所述抗体为大麻抗体，所述二抗为羊抗鼠二抗；
所述第五试纸条是如权利要求7所述试纸条所限定的，其中，所述抗原为摇头丸-BSA全抗原，所述抗体为摇头丸抗体，所述二抗为羊抗鼠二抗。
9.利用权利要求7所述试纸条或者权利要求8所述联检试纸条检测样品中待测物的方法，其特征在于，包括：
将所述样品滴加至所述样品垫上，并进行静置；以及
基于所述检测线和质控线的显色结果，确定所述样品中待测物的含量，
其中，所述样品为唾液。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述待测物为下列的至少之一：甲基苯丙胺、氯胺酮、吗啡、大麻以及摇头丸。
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