CN109085262A - 血清血浆药物萃取组合物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一血清血浆药物萃取组合物,所述萃取组合物包括甲醇、乙腈、异丙醇和水,其中所述甲醇、乙腈、异丙醇和水的体积比为6:2:1:1,所述萃取组合物被适用于萃取血清血浆药物及其药物代谢物,得到释放药物,所述释放药物通过液相色谱串联质谱法进行检测,提高了检测的灵敏度以及特异性。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,特别涉及一血清血浆药物萃取组合物及其应用,该血清血浆药物萃取组合物用于释放人血清/血浆中的药物及药物代谢物,以便于这些释放物后续在液相色谱-串联质谱仪中的测定。
背景技术
为了用以预防、治疗及诊断疾病,人们在日常生活中需要服用很多药物,包括抗精神分裂类药物、抗抑郁类药物、镇静类药物、抗肿瘤类药物、抗病毒类药物等,然而药物是会影响机体器官生理功能及细胞代谢活动的化学物质,在患者使用药物时需要严格把控用药浓度,药物浓度低了达不到药效,而药物浓度高了又会对机体产生副作用。另外,再加上个体的药物代谢差异大,也就是说,即使两个个体在相同条件下服用相同剂量的药物,其针对每个个体的药物疗效也是不同的,而药物疗效对于患者来说十分重要。
实际上,药物的实际医用疗效与用药剂量之间没有直接的关联,而是与个体血清中的药物活性代谢物浓度关联性更大。因此在患者服药后,患者血清中的药物活性代谢物浓度的准确监测,是实现精准医疗、个体精准用药的基础。
目前针对治疗药物检测(TDM)主要采用免疫化学技术和液相色谱串联质谱法,免疫化学技术虽然简单易行,但是所能测定的药物种类较少,相比而言,液相色谱串联质谱法检测精准度高,几乎可用于所有药物检测,所以后者检测方法正在慢慢地取代前者方法成为治疗药物检测的主要医疗手段。然而,患者服用药物后药物经过吸收后以原药或者代谢产物的方式进入血液,然后与血浆中的蛋白结合,然后以蛋白结合形式在体内运输到达药物的作用部位,所以在进行液相色谱串联质谱检测前,需要先将检测样本中的药物和/或药物代谢物提取出来,该提取效率将极大程度地影响着检测仪器对检测标的的响应值,即,极大程度地影响着药物检测效率。
发明内容
本发明的目的在于提供一血清血浆药物萃取组合物,所述血清血浆药物萃取组合物可被用于萃取人体血清/血浆中的药物及药物代谢物,释放人体血清/血浆中的多种药物,通过该萃取组合物萃取得到的释放药物(药物及药物代谢物)被应用于液相色谱-串联质谱法检测浓度,从而显著提高液相色谱-串联质谱法检测血清血浆药物的灵敏度以及特异性。
为了实现上述目的,本发明提供提供一血清血浆药物萃取组合物,所述血清血浆药物萃取组合物包括甲醇、乙腈、异丙醇和水,其中所述甲醇、乙腈、异丙醇以及水的体积比为6:2:1:1。
所述血清血浆药物萃取组合物主要成分为有机溶剂,有机溶剂能够使蛋白质变性,从而将药物从蛋白中释放出来,进而通过液质联用方法对游离的药物进行检测。在这当中,甲醇和乙腈起到的主要作用是沉淀蛋白,实验证明,与单独使用甲醇相比,使用60%甲醇和20%乙腈可达到更好的蛋白沉淀效果;其中异丙醇的作用是提高分析物的响应信号,即为了提高分析物的响应值;所述纯水的添加可明显改变色谱峰的峰型。
所述萃取组合物的制备过程如下:
取用体积比为6:2:1:1的甲醇溶液,乙腈溶液,异丙醇和纯水直接混合,涡旋混合均匀。该制备方法简单易操作,无需其他操作,也不存在操作安全危险。
另外,所述萃取组合物被应用于萃取血清血浆药物及其药物代谢物,特别地,所述萃取组合物被应用于萃取精神类药物,包括抗精神分裂药物,抗抑郁药物和抗焦虑/催眠类药物。
其中抗精神分裂药物包括氨磺必利,阿立哌唑,脱氢阿立哌唑,氯丙嗪,氯氮平,N-去甲氯氮平,利培酮,9-羟利培酮,喹硫平,奥氮平,齐拉西酮;抗抑郁药物包括安非他酮,羟安非他酮,西酞普兰,艾司西酞普兰,文拉法辛,O-去甲文拉法辛,度洛西汀,氟西汀,去甲氟西汀,氟伏沙明,米氮平,帕罗西汀,舍曲林,曲唑酮;抗焦虑/催眠类药物包括阿普唑仑,溴西泮,氯硝西泮,地西泮,劳拉西泮,咪达唑仑,硝西泮,奥沙西泮,替马西泮。
这类药物的共同作用是作用于中枢神经系统的药物,需要透过血脑屏障和血脑脊液屏障才能进入中枢神经,所以这类药物都是高脂溶性的,所以可以通过所述药物萃取组合物将其从蛋白中提取出来。
也就是说,本发明提供一萃取组合物在萃取血清血浆药物及其药物代谢物中的应用,所述萃取组合物被作为溶剂,以用于各标准品及内标物的溶解和稀释;又同时通过向待测样本混合一定比例的内标物,其中内标物的溶剂为所述萃取组合物,此时所述萃取组合物作用于待测样本从而达到萃取出血清血浆中待测标的(血清药物活性代谢物或者血清药物本身)的目的。
使用所述萃取组合物后,显著提高了配套试剂盒和检测方法对于检测标的的响应值。
附图说明
图1到图3是使用本发明的血清血浆药物萃取组合物后药物检测图谱。
图4到图6是传统只使用单纯甲醇萃取药物的药物检测图谱。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
除非另行定义,文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外,任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
可以理解的是,术语“一”应理解为“至少一”或“一个或多个”,即在一个实施例中,一个元件的数量可以为一个,而在另外的实施例中,该元件的数量可以为多个,术语“一”不能理解为对数量的限制。
本发明提供的萃取组合物60%甲醇、20%乙腈、10%异丙醇和10%纯化水按体积比配制而成,可被应用于萃取血清/血浆中的药物及其代谢物,具体而言,被应用于萃取血清血浆药物及其药物代谢物,特别地,所述萃取组合物被应用于萃取精神类药物,包括抗精神分裂药物,抗抑郁药物和抗焦虑/催眠类药物。
实施例一:
1.材料
1.1设备:10mL量瓶、定容瓶、涡旋仪,离心机,液相色谱系统,三重四级杆质谱仪。
1.2试剂;药物标准品,萃取组合物,内标化合物,空白血清,检测用的血清取自真实患者数据。
2.检测样品准备步骤:
标准溶液的制备:精密称取各药物标准品10mg,置于10mL量瓶,用所述萃取组合物溶解所述血浆药物标准品,并定容、稀释,制成浓度为1.0mg/mL的标准溶液,其中所述药物标准品包括米氮平、O-去甲文拉法辛、羟安非他酮、安非他酮、9-羟基-利培酮、利培酮、曲唑酮、氨磺必利、氯硝西泮、阿普唑仑、舍曲林、度洛西汀,分别对应图中:MDP、O-QJWLFX、QAFTT、AFTT、9-OH-LPT、LPT、QZT、AHBL、LXXP、APZL、SQL、DLXT。
精神类药物标准混合溶液的制备:取各精神类药物标准溶液混合,得到浓度为100μg/mL的精神类标准混合溶液,本产品系列稀释得到浓度为10.0、25.0、50.0、100.0、250.0、500.0、1000.0、2500.0、5000.0、10000.0ng/mL的混合标准溶液,用空白血清稀释得到浓度为1.0、2.5、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0、250.0、500.0、1000.0ng/mL的基质浓度;
内标溶液的制备:用所述萃取组合物溶解并转移内标化合物(此处为对应药物标准品的内标)至量瓶,得到浓度为100μg/mL的内标溶液,经过稀释后得到浓度为25.0ng/mL的内标工作液;
血清检测样品的制备:精密吸取血清样品100μL,加入400μL内标溶液,涡旋混合3min,于4℃11000rpm离心15min,取上清液300μL于4℃11000rpm离心15min进样分析。
另外设置对照组,其中所述对照组的实验条件和本发明的实施内容相同,唯一不同的是所述对照组中只使用纯甲醇进行萃取,特别一提的是,对照组实验组用的血清取自同一患者同一份血清。
3.检测过程:
利用液质联用方法对游离的药物进行检测。
4.检测效果:
实验组(用本发明提供的萃取组合物进行萃取)的质谱图如图1到图3所示,对照组(单纯使用甲醇进行萃取)得到的质谱图如图4到图6所示,由图可知,从图中对比可以看出,使用本萃取剂后分析物的响应信号明显提高,峰型明显改善,因此,使用本萃取剂后提取效率更高。
实施例二:
1.材料
1.1设备:10mL量瓶、定容瓶、涡旋仪,离心机,液相色谱系统,三重四级杆质谱仪。
1.2试剂;药物标准品,萃取组合物,内标化合物,空白血浆,检测用的血浆取自真实患者数据。
2.检测样品准备步骤:
内标溶液的制备:用所述萃取组合物溶解并转移内标化合物(此处为对应药物标准品的内标)至量瓶,得到浓度为100μg/mL的内标溶液,经过稀释后得到浓度为25.0ng/mL的内标工作液;
血清检测样品的制备:精密吸取血浆样品100μL,加入400μL内标溶液,涡旋混合3min,于4℃11000rpm离心15min,取上清液300μL于4℃11000rpm离心15min进样分析。
另外设置对照组,其中所述对照组的实验条件和本发明的实施内容相同,唯一不同的是所述对照组中只使用纯甲醇进行萃取。另外,所述实施例二的实验情况和实施一的实验情况基本相同,只是其适用环境不同。
值得一提的是,虽然本发明提供了两种实施例情况的应用,但实际上其他血清血浆中药物及代谢物的萃取也类似其上,也就是说,本发明提供的萃取组合物被作为溶剂,以用于各标准品及内标物的溶解和稀释;又同时通过向待测样本混合一定比例的内标物,其中内标物的溶剂为所述萃取组合物,此时所述萃取组合物作用于待测样本从而达到萃取出血清血浆中待测标的(血清药物活性代谢物或者血清药物本身)的目的。在所述萃取组合物当中,甲醇和乙腈主要作用是沉淀蛋白,与单独使用甲醇相比,使用60%的甲醇和20%的乙腈可达到更好的蛋白沉淀效果;异丙醇能够提高分析物的响应信号;加入10%的纯化水可以明显改善色谱峰的峰型。
本发明不局限于上述最佳实施方式,任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品,但不论在其形状或结构上作任何变化,凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案,均落在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.血清血浆药物萃取组合物,其特征在于,所述萃取组合物包括甲醇、乙腈、异丙醇和水。
2.根据权利要求1所述的血清血浆药物萃取组合物,其特征在于,所述甲醇、乙腈、异丙醇和纯水的体积比为:6:2:1:1。
3.权利要求1到2任一所述的血清血浆萃取组合物的制备过程如下:取用体积比为6:2:1:1的甲醇溶液,乙腈溶液,异丙醇和纯水直接混合,涡旋混合均匀。
4.权利要求1到3任一所述的血清血浆萃取组合物被应用于萃取血清血浆药物及其药物代谢物。
5.根据权利要求4所述的血清血浆萃取组合物被应用于萃取包括抗精神分裂药物,抗抑郁药物和抗焦虑/催眠类药物。
6.根据权利要求5所述的血清血浆萃取组合物被应用于萃取氨磺必利,阿立哌唑,脱氢阿立哌唑,氯丙嗪,氯氮平,N-去甲氯氮平,利培酮,9-羟利培酮,喹硫平,奥氮平,齐拉西酮;安非他酮,羟安非他酮,西酞普兰,艾司西酞普兰,文拉法辛,O-去甲文拉法辛,度洛西汀,氟西汀,去甲氟西汀,氟伏沙明,米氮平,帕罗西汀,舍曲林,曲唑酮,溴西泮,氯硝西泮,地西泮,劳拉西泮,咪达唑仑,硝西泮,奥沙西泮以及替马西泮。
7.根据权利要求4所述的血清血浆萃取组合物被作为溶剂以用于溶解和稀释各血清/血浆标准品及血清/血浆内标物。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181225 |
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