CN102944639A - 红辣椒与番茄中苏丹红染料的鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种红辣椒中苏丹红染料的鉴别方法，红辣椒样品经预处理后由甲醇、乙腈与异丙醇的混合物进行提取，然后置于水浴中进行超声振荡提取，再在摇床中继续振荡提取，过滤后的滤液进行减压浓缩，得到的残留物用甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂进行复溶，再用0.45μm聚四氟乙烯膜进行过滤，得到一种红辣椒提取液。经过高效液相色谱法分析和苏丹红染料标准样品的HPLC分析，得到鉴别结果。本发明方法灵敏，其苏丹红检测限仅为1-5μg/g，因此非常适合于鉴别瓜果蔬菜中是否有苏丹红I-IV存在。
Description
【技术领域】
本发明属于食品技术领域。更具体地，本发明涉及红辣椒与番茄中苏丹红染料的鉴别方法。
【背景技术】
苏丹红作为一种有机染料，近年来被非法用于食品上色，因其具有毒性和致癌性被世界各国禁止添加。
尽管苏丹红和类胡萝卜素化学结构不同，但两者相似的溶解性，且最大吸收波长都在400-600nm范围内，从而加大在含有类胡萝卜素的食品中检测出苏丹红染料的难度。为了在液相色谱中尽量分开类胡萝卜素与苏丹红系列染料，利用苏丹红系列染料极性比类胡萝卜素略大的特点，通过流动相中加入水，缩短苏丹红系列染料的保留时间，使得组分得到充分分离。
目前检测食品中苏丹红的方法包括极谱法、薄层层析法（TLC）、高效液相色谱法（HPLC）。近年来，HPCL-SPE法、HPLC-MS法和HPLC-MS-MS法逐步应用于辣味番茄酱以及辣味芝士酱中苏丹红I、II、III及IV的检测。
本发明采用HPLC法简易、快速鉴别红辣椒及番茄中类胡萝卜素和苏丹红。
【发明内容】
[要解决的技术问题]
本发明的目的是提供一种红辣椒中苏丹红染料的鉴别方法。
本发明的另一个目的是提供一种番茄中苏丹红染料的鉴别方法。
[技术方案]
本发明是通过下述技术方案实现的。
本发明涉及一种红辣椒中苏丹红染料的鉴别方法。
该鉴别方法的步骤如下：
A、红辣椒样品处理
红辣椒样品经清洗干燥预处理后进行粉碎，得到的红辣椒粉加到一种提取溶剂混合物中，搅拌混合均匀，再转移至锥形瓶中，所述的提取溶剂混合物是由甲醇、乙腈与异丙醇按照体积比2：1.8~2.2：0.8~1.2混合配制的；所述的红辣椒粉与所述的提取溶剂混合物的重量比是1:40~60。
红辣椒含有丰富的维生素C和胡萝卜素(维生素A前体)。此外，辣椒还富含多种的维生素B（尤其是维生素B6)，以及钾，镁和铁等人体所必需微量元素。辣椒中高含量的维生素C还有助于食物（豆类和谷物）中非血红素源的铁元素的吸收。
红辣椒样品需用水清洗，除去其泥砂或其它杂质，然后使用食品加工技术领域里通常使用的粉碎设备进行粉碎，得到红辣椒粉的粒度为0.01~0.1mm，优选地0.08~0.02mm。
在本发明的提取溶剂混合物中，甲醇、乙腈与异丙醇的体积比是2：2：1。
在本发明中，所述的红辣椒粉与所述的提取溶剂混合物的重量比优选地是1:45~55，更优选地是1:50。
B、提取与分离
将步骤A装有红辣椒粉与提取溶剂混合物的锥形瓶置于水浴中进行超声振荡提取1.5~2.5min，然后在摇床中继续振荡提取12~18min；接着固液分离，其溶液先使用滤纸进行过滤，得到的滤液再在温度38~42℃与压力0.001~0.01Pa下进行减压浓缩，得到的残留物使用按照体积比10：30~40：50~60混合配制的甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂进行复溶，接着使用0.45μm聚四氟乙烯膜进行过滤，得到一种红辣椒提取液。
在本发明中，所述的超声振荡提取与振荡提取都是在食品加工技术领域里通常采用的提取技术。
在本发明中，超声振荡提取时超声振荡提取的频率是30~50Hz，优选地是36~45Hz。
在本发明中，所述超声振荡提取与振荡提取的温度是20~40℃，优选地是28~35℃。
本发明使用的超声振荡提取设备、振荡提取设备、摇床与减压浓缩都是在食品加工技术领域里通常使用的设备，也是目前市场上销售的设备。
C、高效液相色谱法分析
在步骤B得到的红辣椒提取液在下述条件下进行HPLC分析，得到HPLC分析结果：光电二极管检测器；色谱条件为Nucleosil100柱，250mm×4.6mm，直径3μm，流动相A为含有9.0重量%水的甲醇；流动相B为按照体积比10：35：65混合配制的甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂；流动相C为甲醇。
Nucleosil100柱是德国macherey Nagel公司销售的产品。
使用流动相A、流动相B与流动相C进行梯度洗涤的条件列于下表1.
表1：HPLC色谱分离梯度条件
在HPLC色谱分析时，按照常规方法绘制苏丹红染料的标准曲线，根据其标准曲线可以确定其苏丹红I、苏丹红Ii、苏丹红III与苏丹红IV回归方程、回归系数范围与苏丹红的检测限。其分析结果列于表2。
表2：HPLC色谱分析结果
这些分析结果表明，由该预处理方法制备得到的萃取液经过高效液相色谱一定条件下，可实现有效鉴别，且检测灵敏，结果可靠。
D、苏丹红染料标准样品的HPLC分析
在与步骤C相同的HPLC条件下对苏丹红染料进行HPLC分析，将其分析结果与步骤C得到的红辣椒提取液HPLC分析结果进行比对，鉴别出红辣椒中的苏丹红染料。
本发明还涉及一种番茄中苏丹红染料的鉴别方法。
该鉴别方法的步骤如下：
A、番茄样品处理
番茄清洗干净，然后压榨得到番茄汁，再往所述番茄汁中加入苏丹红标准样品，得到含有1~10μg/g苏丹红的番茄汁。
本发明使用的压榨设备是在食品加工技术领域里通常使用的设备，也是目前市场上销售的设备。
B、萃取
按照步骤A得到的含有苏丹红的番茄汁与甲醇的重量比为1~5：15~25，往含有苏丹红的番茄汁中加入甲醇，混合均匀，静置1.5~2.5min，分离得到上清液与沉淀残渣；所述的沉淀残渣进行压榨，得到的压榨汁与所述的上清液混合，再往该混合液中加入萃取剂进行萃取，所述混合液与所述萃取剂的体积比是1~5：55~65；所述的萃取剂是由甲醇与二氯乙烷按照体积比1:4.5~5.5组成的萃取剂；
得到的萃取液倒入甲醇萃取瓶中，充分震荡12~18min，静置，收集二氯乙烷相，往二氯乙烷相中加入无水硫酸钠脱水，然后在温度38~42℃与压力0.001~0.01Pa下减压浓缩，得到的残留物按照其残留物与三氯甲烷重量比1：2.8~3.2用三氯甲烷进行复溶，再使用按照体积比10：35：65混合配制的甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂定容至10mL，接着使用0.45μm聚四氟乙烯膜进行过滤，得到一种番茄提取液；
C、高效液相色谱法分析
在步骤B得到的番茄提取液在下述条件下进行HPLC分析：光电二极管检测器；色谱条件为Nucleosil100柱，250mm×4.6mm，直径3μm，流动相A为含有9.0重量%水的甲醇；流动相B为按照体积比10：35：65混合配制的甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂；流动相C为甲醇。
其番茄样品高效液相色谱法分析情况与红辣椒样品高效液相色谱法分析情况相同，这里不再赘述。
[有益效果]
本发明的有益效果是：本发明方法灵敏，其苏丹红检测限仅为1-5μg/g，因此非常适合于鉴别瓜果蔬菜中是否有苏丹红I-IV存在。
【具体实施方式】
通过下述实施例将能够更好地理解本发明。
实施例1：红辣椒中苏丹红染料的鉴别
该实施例的实施步骤如下：
A、红辣椒样品处理
产自山东德州红辣椒样品经清洗干燥预处理后进行粉碎得到0.01mm红辣椒粉，把这种红辣椒粉加到一种提取溶剂混合物中，搅拌混合均匀，再转移至锥形瓶中，所述的提取溶剂混合物是由甲醇、乙腈与异丙醇按照体积比2：1.8：1.0混合配制的；所述的红辣椒粉与所述的提取溶剂混合物的重量比是1:55；
B、提取与分离
将步骤A装有红辣椒粉与提取溶剂混合物的锥形瓶置于水浴中在超声频率30Hz与温度30℃的条件下进行超声振荡提取2.0min，然后在摇床中在温度30℃的条件下继续振荡提取18min；接着固液分离，其溶液先使用640MN滤纸进行过滤，得到的滤液再在温度38℃与压力0.001Pa的条件下进行减压浓缩，得到的残留物使用按照体积比10：30：58混合配制的甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂进行复溶，接着使用0.45μm聚四氟乙烯膜进行过滤，得到一种红辣椒提取液；
C、高效液相色谱法分析
在步骤B得到的红辣椒提取液在下述条件下进行HPLC分析，得到HPLC分析：光电二极管检测器；色谱条件为Nucleosil100柱，250mm×4.6mm，直径3μm，流动相A为含有9.0重量%水的甲醇；流动相B为按照体积比10：35：65混合配制的甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂；流动相C为甲醇；
D、苏丹红染料标准样品的HPLC分析
在与步骤C相同的HPLC条件下对苏丹红染料进行HPLC分析，将其分析结果与步骤C得到的红辣椒提取液HPLC分析结果进行比对，鉴别出该红辣椒中有苏丹红染料存在。
实施例2：红辣椒中苏丹红染料的鉴别
该实施例的实施步骤如下：
A、红辣椒样品处理
产自山东德州红辣椒样品经清洗干燥预处理后进行粉碎得到0.04mm红辣椒粉，把这种红辣椒粉加到一种提取溶剂混合物中，搅拌混合均匀，再转移至锥形瓶中，所述的提取溶剂混合物是由甲醇、乙腈与异丙醇按照体积比2：2.2：0.8混合配制的；所述的红辣椒粉与所述的提取溶剂混合物的重量比是1:40；
B、提取与分离
将步骤A装有红辣椒粉与提取溶剂混合物的锥形瓶置于水浴中在超声频率50Hz与温度20℃的条件下进行超声振荡提取1.5min，然后在摇床中在温度20℃的条件下继续振荡提取14min；接着固液分离，其溶液先使用640MN滤纸进行过滤，得到的滤液再在温度42℃与压力0.01Pa下进行减压浓缩，得到的残留物使用按照体积比10：36：50混合配制的甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂进行复溶，接着使用0.45μm聚四氟乙烯膜进行过滤，得到一种红辣椒提取液；
C、高效液相色谱法分析
在步骤B得到的红辣椒提取液在如实施例1描述的条件下进行HPLC分析，得到HPLC分析结果；
D、苏丹红染料标准样品的HPLC分析
在与步骤C相同的HPLC条件下对苏丹红染料进行HPLC分析，将其分析结果与步骤C得到的红辣椒提取液HPLC分析结果进行比对，鉴别出红辣椒中存在苏丹红染料。
实施例3：红辣椒中苏丹红染料的鉴别
该实施例的实施步骤如下：
A、红辣椒样品处理
产自山东德州红辣椒样品经清洗干燥预处理后进行粉碎得到0.06mm红辣椒粉，把这种红辣椒粉加到一种提取溶剂混合物中，搅拌混合均匀，再转移至锥形瓶中，所述的提取溶剂混合物是由甲醇、乙腈与异丙醇按照体积比2：1.9：1.2混合配制的；所述的红辣椒粉与所述的提取溶剂混合物的重量比是1:60；
B、提取与分离
将步骤A装有红辣椒粉与提取溶剂混合物的锥形瓶置于水浴中在超声频率36Hz与温度40℃的条件下进行超声振荡提取2.5min，然后在摇床中在温度40℃的条件下继续振荡提取12min；接着固液分离，其溶液先使用640MN滤纸进行过滤，得到的滤液再在温度40℃与压力0.04Pa下进行减压浓缩，得到的残留物使用按照体积比10：34：60混合配制的甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂进行复溶，接着使用0.45μm聚四氟乙烯膜进行过滤，得到一种红辣椒提取液；
C、高效液相色谱法分析
在步骤B得到的红辣椒提取液在实施例1描述的条件下进行HPLC分析，得到HPLC分析结果；
D、苏丹红染料标准样品的HPLC分析
在与步骤C相同的HPLC条件下对苏丹红染料进行HPLC分析，将其分析结果与步骤C得到的红辣椒提取液HPLC分析结果进行比对，鉴别出红辣椒中的苏丹红染料。
实施例4：红辣椒中苏丹红染料的鉴别
该实施例的实施步骤如下：
A、红辣椒样品处理
产自山东德州红辣椒样品经清洗干燥预处理后进行粉碎得到0.1mm红辣椒粉，把这种红辣椒粉加到一种提取溶剂混合物中，搅拌混合均匀，再转移至锥形瓶中，所述的提取溶剂混合物是由甲醇、乙腈与异丙醇按照体积比2：2.0：1.1混合配制的；所述的红辣椒粉与所述的提取溶剂混合物的重量比是1:45；
B、提取与分离
将步骤A装有红辣椒粉与提取溶剂混合物的锥形瓶置于水浴中在超声频率45Hz与温度30℃的条件下进行超声振荡提取2.2min，然后在摇床中在温度30℃的条件下继续振荡提取16min；接着固液分离，其溶液先使用640MN滤纸进行过滤，得到的滤液再在温度42℃与压力0.06Pa下进行减压浓缩，得到的残留物使用按照体积比10：40：54混合配制的甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂进行复溶，接着使用0.45μm聚四氟乙烯膜进行过滤，得到一种红辣椒提取液；
C、高效液相色谱法分析
在步骤B得到的红辣椒提取液在实施例1描述的条件下进行HPLC分析，得到HPLC分析结果；
D、苏丹红染料标准样品的HPLC分析
在与步骤C相同的HPLC条件下对苏丹红染料进行HPLC分析，将其分析结果与步骤C得到的红辣椒提取液HPLC分析结果进行比对，鉴别出红辣椒中存在苏丹红染料。
Claims (5)
1.一种红辣椒中苏丹红染料的鉴别方法，其特征在于该方法的步骤如下：
A、红辣椒样品处理
红辣椒样品经清洗干燥预处理后进行粉碎，得到的红辣椒粉加到一种提取溶剂混合物中，搅拌混合均匀，再转移至锥形瓶中，所述的提取溶剂混合物是由甲醇、乙腈与异丙醇按照体积比2：1.8~2.2：0.8~1.2混合配制的；所述的红辣椒粉与所述的提取溶剂混合物的重量比是1:40~60；
B、提取与分离
将步骤A装有红辣椒粉与提取溶剂混合物的锥形瓶置于水浴中进行超声振荡提取1.5~2.5min，然后在摇床中继续振荡提取12~18min；接着固液分离，其溶液先使用滤纸进行过滤，得到的滤液再在温度38~42℃与压力0.001~0.01Pa下进行减压浓缩，得到的残留物使用按照体积比10：30~40：50~60混合配制的甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂进行复溶，接着使用0.45μm聚四氟乙烯膜进行过滤，得到一种红辣椒提取液；
C、高效液相色谱法分析
在步骤B得到的红辣椒提取液在下述条件下进行HPLC分析，得到HPLC分析：光电二极管检测器；色谱条件为Nucleosil100柱，250mm×4.6mm，直径3μm，流动相A为含有9.0重量%水的甲醇；流动相B为按照体积比10：35：65混合配制的甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂；流动相C为甲醇；
D、苏丹红染料标准样品的HPLC分析
在与步骤C相同的HPLC条件下对苏丹红染料进行HPLC分析，将其分析结果与步骤C得到的红辣椒提取液HPLC分析结果进行比对，鉴别出红辣椒中的苏丹红染料。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于红辣椒粉的粒度是0.01~0.1mm。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述超声振荡提取的频率是30~50Hz。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述超声振荡提取与振荡提取的温度是20~40℃。
5.一种番茄中苏丹红染料的鉴别方法，其特征在于该方法的步骤如下：
A、番茄样品处理
番茄清洗干净，然后压榨得到番茄汁，再往所述番茄汁中加入苏丹红标准样品，得到含有1~10μg/g苏丹红的番茄汁；
B、萃取
按照步骤A得到的含有苏丹红的番茄汁与甲醇的重量比为1~5：15~25，往含有苏丹红的番茄汁中加入甲醇，混合均匀，静置1.5~2.5min，分离得到上清液与沉淀残渣；所述的沉淀残渣进行压榨，得到的压榨汁与所述的上清液混合，再往该混合液中加入萃取剂进行萃取，所述混合液与所述萃取剂的体积比是1~5：55~65；所述的萃取剂是由甲醇与二氯乙烷按照体积比1:4.5~5.5组成的萃取剂；
得到的萃取液倒入甲醇萃取瓶中，充分震荡12~18min，静置，收集二氯乙烷相，往二氯乙烷相中加入无水硫酸钠脱水，然后在温度38~42℃与压力0.001~0.01Pa下减压浓缩，得到的残留物按照其残留物与三氯甲烷重量比1：2.8~3.2用三氯甲烷进行复溶，再使用按照体积比10：35：65混合配制的甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂定容至10mL，接着使用0.45μm聚四氟乙烯膜进行过滤，得到一种番茄提取液；
C、高效液相色谱法分析
在步骤B得到的番茄提取液在下述条件下进行HPLC分析：光电二极管检测器；色谱条件为Nucleosil100柱，250mm×4.6mm，直径3μm，流动相A为含有9.0重量%水的甲醇；流动相B为按照体积比10：35：65混合配制的甲醇、乙腈与异丙醇混合溶剂；流动相C为甲醇。
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