CN109082437A - 一种提高大麦分蘖数量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提高大麦分蘖数量的方法，所述方法是抑制SEQ ID No.2所示基因的表达。本发明方法是向受体材料中导入所述的RNAi干涉重组载体，成功降低了SEQ ID No.2所示目标基因的表达量，并利用该材料证实了该基因的负调控作用可以有效地增加大麦的分蘖数量，从而影响产量性状，因此在遗传育种领域将有广阔的应用前景。

Description

一种提高大麦分蘖数量的方法

(一)技术领域

本发明涉及一种提高大麦分蘖数量的方法。

(二)背景技术

大麦(Hordeum vulgare L.)作为全球第四大禾谷类作物，是世界上最古老作物之一，集食用、饲用和酿造原料于一体。遗传理论和育种实践均已证明，具有一定数量的分蘖不仅能增加有效穗数，扩大光合面积，提高群体光合利用效率，从而增加产量；也利于调节群体，协调穗、粒、重之间的关系，从而稳定产量。同时，分蘖数增加有助于提高大麦对于阳光、肥料等环境资源的利用率，加大对杂草的资源竞争优势，便于田间控草。

禾本科作物中已有大量与分蘖相关的基因被克隆和功能解析，包括玉米的Tb1、gt1、Ba1，水稻的Moc1、D27、D53等。

玉米Teosinte branched1(Tb1)是最早报道抑制分蘖芽活性的基因。Tb1是玉米驯化过程中的关键基因，玉米的野生祖先类蜀黍高度分蘖，而在人类驯化过程中Tb1基因的表达量逐渐提高，最终抑制了侧枝(分蘖)生长(Doebley和Stec,1993；Doebley等，1995)。Takeda等(2003)通过筛选水稻的基因组文库，得到了同源基因OsTB1(Oryza sativaTeosinte Branched1)。OsTB1和TB1都编码一个含TCP结构域的转录因子。基因功能研究发现，OsTB1基因控制侧芽伸长，过量表达的转基因水稻植株分蘖数目显著减少，而OsTB1功能丧失型突变体fc1分蘖数显著增多。由此可知，TB1是分蘖的负调节因子。

与TB1基因不同，玉米grassy tillers1(gt1)基因突变体打破分蘖芽的休眠状态，表现出分蘖数和穗数增加，穗型伸长等表型特征。gt1编码产生一个锌指蛋白，属于HD-ZipII亚家族。gt1对分蘖的影响受TB1基因的调控，两个基因是在同一个遗传途径上影响玉米分蘖(Whipple等，2011)。

水稻极端少分蘖突变体(单秆突变体monoculm 1，Moc1)表现为完全丧失分蘖能力，只有一个主茎。组织显微观察发现这与其不能形成腋分生组织有关。遗传分析表明，该突变体由单基因隐形突变造成。Moc1基因编码的蛋白质与拟南芥Las以及番茄Ls高度同源，属于植物特有的GRAS家族蛋白。功能研究发现，Moc1基因控制着腋生分生组织的起始和腋生芽的形成，同时还有促进腋生芽生长的功能。至少有2个与分生组织分化、发育和生长有关的OSH1基因和控制侧芽伸长的OsTB1基因，它们均受Moc1基因的调控。这两个基因在Moc1突变体中表达量明显降低。因此，Moc1很可能是控制水稻分蘖的基因开关(Li等，2003)。

另一个影响分蘖发生的基因是玉米Barren stalk 1(Ba1)基因(Ritter等，2010)。Ba1突变体不能产生分蘖和雌穗，而且雄穗也不能形成小穗。Ba1基因编码一个植物特有的bHLH转录因子，该转录因子为玉米所有次级分生组织萌发所必需。水稻Laxpanicle 1(Lax1)蛋白和Ba1同源，参与启动和维持水稻穗颈的腋分生组织。水稻Lax1突变体表现为穗分枝受抑制，Lax1/Spa1(small panicle 1)双突变体分析表明Lax1基因亦影响水稻分蘖(Komatsu等，2001；Komatsu等，2003a；Komatsu等，2003b)。

水稻是目前研究分蘖芽活性调控分子机理最透彻的禾本科模式作物，D3、D10、D14/HTD2、D17/HTD1、D27和D53等一系列水稻突变体都表现为植株矮小、分蘖数增多，并且不同于Moc1突变体，这些突变体分蘖芽数未见增多但分蘖芽的活性显著增强(Ishikawa等，2005；Jiang等，2013；Zhou等，2013)。基因功能深入研究发现，控制这些突变体的基因都与新型植物激素独脚金萌发素内酯内源合成相关。

在大麦分蘖的调控基因方面，虽已鉴定到相关突变体，但调控分蘖的相关基因仍知之甚少。两个单分蘖突变体的发现使Cul4基因(Tavakol et al.,2015)和Cul2基因的功能得以解析(Okagaki et al.,2018)。因此，加强大麦分蘖相关基因的解析与操纵，将丰富国内外有关大麦产量形成规律的理论，在大麦遗传育种领域有广阔的应用前景。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种提高大麦分蘖数量的方法，在大麦遗传育种领域可用于培育不同分蘖数量的大麦新品种。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种提高大麦分蘖数量的方法，所述方法是通过抑制大麦分蘖调控基因的表达。所述大麦分蘖调控基因的基因全长序列包括启动子区如SEQ ID No.3所示，其中自5’末端起第1-3101位为启动子，第3102-6443位为基因编码区。所述大麦分蘖调控基因的开放阅读框(ORF)序列如SEQ ID No.2所示。大麦分蘖调控基因编码的蛋白为大麦分蘖调控蛋白，氨基酸序列为SEQ ID No.1所示。进一步，所述SEQ ID No.2所示基因的抑制构建含SEQ ID No.3所示核苷酸序列第3065-3364位基因的RNAi干涉重组载体，并将所述的RNAi干涉重组载体导入大麦受体提高大麦分蘖数量。

进一步，所述RNAi干涉重组载体是将SEQ ID No.3所示核苷酸序列第3065-3364位基因(包含37bp的5’-UTR非编码区和263bp的编码区域)导入干涉载体pANDA的attR1和attR2位点间构建的。

本发明所述受体大麦品种为大麦栽培品种Golden Promise。

与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：

本发明提供一种增加大麦分蘖数量的方法，所述方法是向受体材料中导入所述的RNAi干涉重组载体，成功降低了SEQ ID No.2所示目标基因的表达量，并利用该材料证实了该基因的负调控作用可以有效地增加大麦的分蘖数量，从而影响产量性状，因此在遗传育种领域将有广阔的应用前景。

(四)附图说明

图1为RNAi植株与野生型(Golden Promise,GP)植株的比较。(A)抽穗期的表型比较，(B)荧光定量PCR测定的植株叶片中基因表达水平，(C)抽穗期植株的分蘖数量。**所示为野生型与干涉植株的差异为显著，显著水平为P<0.01。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

在本发明中，若非特指，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

实施例1基因的制备与功能验证

1)大麦总RNA提取及cDNA合成

采用Takara公司的TaKaRaMiniBEST Plant RNA Extraction Kit提取大麦(Golden Promise)叶片中总RNA，采用DNase I酶去除基因组DNA，随后使用Takara公司的RT reagent Kit Perfect Real Time试剂盒将提取的总RNA反转录成单链cDNA。

2)重组干涉载体构建

以上述步骤中的cDNA为模板，用以下引物按下述方法进行两轮PCR扩增，选用TOYOBO公司的KOD-FX聚合酶，扩增得到PCR产物，全长为300bp。PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测并切胶回收目的片段，采用北京天根生化公司的胶回收试剂盒。

第一轮PCR扩增：

模板：步骤1)中的cDNA

引物：RNAi-clon_F:5’-TTCTCCTGTCCACTACGCCTGTCAACT-3’

RNAi-clon_R:5’-CCAGGGAGTACCGGCAGTAATCCTTTC-3’

PCR体系(50μL)：

PCR程序：

第二轮PCR扩增

模板：第一轮纯化后的PCR产物

引物：attB1:5’-GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCT-3’

attB2:5’-GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGT-3’

PCR体系和程序与第一轮相同。

将两轮PCR反应后纯化的产物采用Gateway BP Clonase ^TMⅡEnzyme Mix试剂盒进行BP反应连接入门载体pDNOR，将重组载体转化含30μg/ml博莱霉素的LB培养基，过夜培养后挑取单克隆，采用引物M13R和attB1进行菌液PCR验证并测序验证。将序列正确的阳性克隆进行过夜培养抽提质粒以备LR反应。

将重组成功的pDNOR载体采用Gateway LR Clonase ^TMⅡEnzyme Mix试剂盒进行LR反应连接干涉载体pANDA，将RNAi干涉重组载体转化含50μg/ml卡那霉素的LB培养基，过夜培养后挑取单克隆采用引物GuslinkR(5’-GTCGTCGGTGAACAGGTATGG-3’)和RNAi-clon_R进行菌液PCR验证并测序验证其序列(即SEQ ID No.3所示核苷酸序列第3065-3364位)。将序列正确的阳性克隆进行过夜培养抽提质粒。质粒提取试剂盒购自北京天根生化公司，提取方法参照说明书。用电转化法将测序正确的RNAi干涉重组载体转化农杆菌AGL1，筛选阳性重组子，得到含RNAi干涉重组载体的AGL1农杆菌菌株。

3)转基因植株的获取

用农杆菌介导法转化含SEQ ID No.3自5’末端第3065-3364位所示片段的RNAi干涉重组载体至大麦Golden Promise幼胚，经潮霉素筛选后，获得数十株转基因候选植株。再依次提取转基因候选植株和野生型GP的DNA，通过PCR的验证方法获得转基因阳性植株，其中验证引物为GuslinkR和RNAi-clon_R，引物信息前已所述。将经验证的阳性植株分别繁种两代获得稳定株系。

4)转基因植株分析

对转基因阳性植株与野生型GP抽穗期的叶片取样进行RNA提取、反转录进行cDNA合成及Q-PCR基因表达量的验证。定量PCR所使用的引物为Q_F:5’-TGCTGGAACAAACCCAGAGACA-3’和Q_R:5’-GTCCCAGTTGTGTGACCGGA-3’。分析结果发现RNAi植株的目的基因(即SEQ ID No.2所示)表达量显著降低，为野生型的30％左右。同时对转基因阳性植株与野生型GP植株抽穗期的分蘖数量进行统计分析。发现与野生型相比，转基因阳性植株的分蘖数量显著上升，为野生型的180％左右。通过以上分析发现该基因负调控大麦分蘖的数量。因此，可通过抑制该基因在大麦植株中的表达从而提高大麦的分蘖数量。

以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。所有涉及该基因的转录本、基因组和启动子的核苷酸序列，编码蛋白的氨基酸序列，以及含任一上诉基因的生物材料，均属于本发明的保护范畴。

序列表

<110> 浙江大学

<120> 一种提高大麦分蘖数量的方法

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 648

<212> PRT

<213> 未知(Unknown)

<400> 1

Met Lys Pro Ser Asp Asp Arg Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Arg Ser

1 5 10 15

Glu Glu Ser Ser Leu Asp Val Glu Gly His Cys Ser His His Glu Ala

20 25 30

Phe Pro Cys Ser Pro Ser Met Gln Pro Val Ala Ser Gly Cys Val His

35 40 45

Thr Glu Asn Ser Ala Ala Tyr Phe Leu Trp Pro Thr Ser Asn Leu Gln

50 55 60

His Cys Ala Ala Glu Gly Arg Ala Asn Tyr Phe Gly Asn Leu Gln Lys

65 70 75 80

Gly Leu Leu Pro Val Leu Pro Gly Lys Leu Pro Lys Gly Gln Gln Ala

85 90 95

Asn Ser Leu Leu Asp Leu Met Thr Ile Arg Ala Phe His Ser Lys Ile

100 105 110

Leu Arg Arg Phe Ser Leu Gly Thr Ala Val Gly Phe Arg Ile Thr Lys

115 120 125

Gly Val Leu Thr Glu Thr Pro Ala Ile Leu Val Phe Val Ala Arg Lys

130 135 140

Val His Lys Lys Trp Leu Asn Pro Asn Gln Cys Leu Pro Ala Ile Leu

145 150 155 160

Ala Gly Pro Gly Gly Val Trp Cys Asp Val Asp Val Val Glu Phe Ser

165 170 175

Tyr Tyr Gly Ala Pro Ala Gln Thr Pro Lys Glu Gln Thr Phe Ser Glu

180 185 190

Leu Val Asn Lys Leu Cys Gly Ser Asp Glu Tyr Ile Gly Ser Gly Ser

195 200 205

Gln Val Ala Ser Gln Asp Thr Phe Gly Thr Leu Gly Ala Ile Val Lys

210 215 220

Arg Arg Thr Asn Asn Lys Gln Val Gly Phe Leu Thr Asn Arg His Val

225 230 235 240

Ala Val Asp Leu Asp Tyr Pro Asn Gln Lys Met Phe His Pro Leu Pro

245 250 255

Pro Asn Leu Gly Pro Gly Val Tyr Leu Gly Ala Val Glu Arg Ala Thr

260 265 270

Ser Phe Ile Thr Asp Asp Val Trp Tyr Gly Ile Tyr Ala Gly Thr Asn

275 280 285

Pro Glu Thr Phe Val Arg Ala Asp Gly Ala Phe Ile Pro Phe Ala Asp

290 295 300

Asp Phe Asp Ile Ser Thr Val Thr Thr Val Val Arg Glu Val Gly Glu

305 310 315 320

Ile Gly Asp Val Lys Ile Ile Asp Leu Gln Cys Pro Ile Lys Ser Leu

325 330 335

Ile Gly Arg Gln Val Cys Lys Val Gly Arg Ser Ser Gly His Thr Thr

340 345 350

Gly Thr Val Met Ala Tyr Ala Leu Glu Tyr Asn Asp Glu Lys Gly Ile

355 360 365

Cys Phe Phe Thr Asp Leu Leu Val Val Gly Glu Asn Arg Gln Thr Phe

370 375 380

Asp Leu Glu Gly Asp Ser Gly Ser Leu Ile Ile Leu Thr Ser Gln Asp

385 390 395 400

Gly Glu Lys Pro Arg Pro Ile Gly Ile Ile Trp Gly Gly Thr Ala Asn

405 410 415

Arg Gly Arg Ile Lys Leu Thr Ser Gly Tyr Gly Pro Glu Asn Trp Thr

420 425 430

Thr Gly Val Asp Leu Gly Arg Leu Leu Asp Arg Leu Glu Leu Asp Leu

435 440 445

Ile Ile Asn Asp Glu Ser Leu Lys Asp Ala Val Gln Glu Gln Arg Asn

450 455 460

Ala Phe Val Ala Ala Ile Asn Ser Ala Ile Gly Glu Ser Ser Ala Val

465 470 475 480

Thr Val Thr Ala Pro Glu Ala Thr Pro Ala Glu Lys Val Glu Glu Ile

485 490 495

Phe Glu Pro Leu Gly Ile Gln Ile Gln Gln Leu Pro Arg His Asp Pro

500 505 510

Thr Ser Ala Ala Asp Glu Gly Glu Gly Ala Ala Asn Thr Pro Ser Asp

515 520 525

Met Glu Glu Arg Gln Phe Ile Ser Asn Phe Val Gly Met Ser Pro Val

530 535 540

Arg Arg Asp His Asp Ala Arg Arg Thr Ile Ala Asn Leu Asn Asn Pro

545 550 555 560

Ser Glu Glu Glu Leu Ala Met Ser Leu His Leu Gly Asp Arg Glu Pro

565 570 575

Lys Arg Leu Arg Leu Asp Pro Glu Ser Asn Leu Asp Leu Glu Lys Gln

580 585 590

Pro His Pro Asp Gln Glu Pro Ser Leu Asp Leu Glu Lys Gln Pro Arg

595 600 605

Ser Asp Pro Glu Met Met Ser Leu Asp Leu Glu Lys Gln Pro Arg Ser

610 615 620

Asp Pro Glu Pro Gly Leu Asp Leu Glu Lys Arg Leu Pro Ala Asp Pro

625 630 635 640

Glu Pro Ser Ile Asp Leu Glu Lys

645

<210> 2

<211> 1917

<212> DNA

<213> 未知(Unknown)

<400> 2

atgaagcctt cagatgacag gatgcagctc tcaggtttga cgcggtcgga agagtcgtct 60

cttgatgtgg aggggcattg ctctcaccat gaggcatttc cttgttctcc gtcgatgcaa 120

ccggttgctt ctgggtgcgt gcacacagaa aacagcgcgg catacttctt atggccgact 180

tcaaacctgc agcattgtgc ggcggaggga cgggcaaact actttgggaa cctccagaaa 240

ggattactgc cggtactccc tggaaagctg cccaagggtc agcaagcaaa tagcttgctt 300

gatttgatga ccataagagc tttccacagc aagatattgc ggcgtttcag ccttgggacg 360

gcagtgggct tccgcataac aaaaggggtt ctcacagaaa cccctgccat tcttgtcttc 420

gttgctcgaa aggttcacaa gaaatggctt aatccgaacc aatgccttcc tgcaattctt 480

gcgggtccag gaggtgtttg gtgtgatgtt gatgtcgtag aattttcata ctatggtgcg 540

ccggctcaaa cacctaaaga acagacgttt agtgagcttg ttaataagct gtgtggcagt 600

gacgaatata ttggttcagg ctctcaggtt gcaagccagg atacatttgg aactttgggt 660

gcaattgtga aacgacgcac caacaacaag caagttggtt tcctcacgaa ccgacatgtt 720

gcagttgatt tggactatcc taaccagaag atgtttcacc cgttgccgcc gaatcttggg 780

cctggtgttt atcttggagc tgtcgagagg gcaacatctt tcatcacaga tgatgtttgg 840

tatggaattt atgctggaac aaacccagag acatttgtac gagctgacgg cgcattcatc 900

ccatttgctg atgactttga catttccaca gtcacaactg tagttaggga agttggtgag 960

attggggatg ttaagattat agatctgcag tgtcctatca agagcctcat cgggaggcaa 1020

gtttgcaaag tcggcagaag ttccggtcac acaactggga ctgtgatggc atatgccctt 1080

gagtacaatg atgagaaagg aatatgcttc ttcactgacc tcctcgttgt tggtgagaat 1140

cgccaaacat ttgatttgga gggtgacagc ggaagcctta ttatcctgac cagccaggat 1200

ggggagaagc cacgtcctat tgggataata tggggtggca cagcaaaccg tgggaggata 1260

aagctcacaa gtggctatgg tcctgaaaac tggactacag gggttgatct tggccgcctt 1320

cttgatcgcc tagaacttga tcttatcata aacgacgaat cgctcaaaga tgctgtgcag 1380

gagcaaagga atgcttttgt ggctgcaatt aactctgcta ttggggagtc ctctgcggtg 1440

actgttactg ccccagaagc caccccagca gagaaggttg aagagatctt tgagcctctt 1500

gggatccaaa ttcagcagct gcctcgtcac gacccgacaa gcgccgcaga cgaaggggag 1560

ggcgcagcca acacaccgtc cgacatggaa gagcgtcagt tcatctcgaa cttcgttggc 1620

atgtctccgg tgcgccgtga ccatgatgct cggaggacca ttgccaacct gaacaacccg 1680

tcagaggaag agcttgccat gtcgctgcac ctaggcgacc gggagcccaa gcggctacgt 1740

ttggacccgg aatcaaacct agacctcgag aagcagcctc acccggacca ggaaccgagc 1800

ctagatctgg agaagcagcc tcgttcggac ccggaaatga tgagcctaga cctggagaag 1860

cagcctcgct cggacccgga accgggcctg gacctggaga agcgccttcc agctgac 1917

<210> 3

<211> 6743

<212> DNA

<213> 未知(Unknown)

<400> 3

acgacggcca gtgccaagct tcttattgtc acatcctcgt cccattttga tagattgcat 60

gcgtgtgtac tcaatgtgat attttaggat cattaaaatg aaaatgaaaa atcctttgtc 120

ttgtccaaca cttgtcttta agcattttta ggggtcacct tccattccaa tattgttcct 180

gaaaaaactt ttcatgaaat atatttgaag taccatcagt tctttgagat atcttgacat 240

ggattaccaa aattcacctt ggcgattaga tgcactttca ccctttcatt agaacatgca 300

tagagttggg ggtgtttaat gtttatcatt gctatcaatt cttctattgt gacatgacag 360

tttgtctgtg acattttctt tatttttctt tgacgaagct agataataga atatagggat 420

ttttcatgaa ccagacacca taaatatgct accatgccat aaagcgaaaa tgaccaagcc 480

acttgttact atctcttttg tcttgaccca cataaatgtt actatttcta gcccacataa 540

atagcaattg tgacatgctt ataaaaaata gcacatgatt aataaaagga gttttccttc 600

acttatgatg caacggtcgt ttgggaacct atattgtcaa atactccctc cattcagaaa 660

taaaatcatg ttctattttt ttattagata catatacacg ctttagtgtg cttgtttccg 720

catttcaatt tgcatatggt tcatattaaa atattcaaaa catcttacaa ttgtgaacac 780

atgaagtaat atttaatcga atattcaagc taccgaattg ttcttaacca tccaatccaa 840

ctataacata gagctatagc cactcggcaa aataacatat ttactatgaa aattttgaat 900

tgagacatgg cccttttaag atctgagtca aatttgaata gttgcatatc gagttcaata 960

ttctttaggc ccggctcttc cacagacggc ttatgaaata agctataaga agggggctgg 1020

ttattttaga agcaaaaaat gaacgagttt taggctgata ctcgcgtcta aatcttgcta 1080

tatatccaga atacatgtta gaataaaaaa acatgttcac agtctgactc ttcactacag 1140

gtcaactcca taaattttct gtttccctat cattttcata ttgtcactgt cgataatata 1200

cgatgacatg accaaaagtg caccttgttc aaaggaggga tgaagccccc aaccccccac 1260

ggccgaatct agcggaggag agagggccac gtctcctcgc cccctccacc tgcgatcggg 1320

gccgtccgtt ggaccgcgcg acacgggtga ctatgcggcc acaggtcggg gctcgacaca 1380

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agagcgcctc ctccccattc ctctctctct ctctagcctc ttcttgtggt gcttgtgcgg 1560

cgcacgcatg ccgctgctgc cgcgcacacg gcccgaacag tgagaggggg gggctgggca 1620

gggagaggga gggacgccgc ctgcgactgc aaagctggca tcttctgccc ccccggcctc 1680

gcccctaata acagtggaga ttcccgcctc cacgccccca attatggata cccgcgcggg 1740

gagaaggaga taggaggagg caggaggagt agtcgcgacg cgcgaggctg tggccattgc 1800

tccggctcca ggtgagcggc tccgccccct ccctcccctg cccgaggtcc taccggatgg 1860

ccggatcttt ctccggcccc tggggcggca ggatcttgac gccgccttcc tcgatttgcc 1920

ggctttcttt ttcggtccct cgcatccctt ttcccctccc gccccgtggt tcccgttcgc 1980

aggccgggct gctcgtcgtc cctctttggt ggttgagttg ccaatctggt atgccaggtt 2040

gttgctccct gccagtgcca tgggagttcc gtgatgcctg cacagtaaca gcttcaggcg 2100

ttctcttctt atttccttcc gccttccttg ttggcctcgc ttccggggcc aaatgccacg 2160

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caaggggaga gtgcttgcag tttgttcccc ccgatttctt gtcggcgggt tgtttcttct 2400

tttgattatg ccttttctct ttcagcaaag tgcacgatgc ctttgccaaa cttcacccgc 2460

ggtgccgcct gcttaatttg cgcgtaggcc ctaccctttt cgcgtcgata tttttgttat 2520

catcacaagt actccgtgtg gtagttgtca tgtggattta tgccaattcc ctgtgtttaa 2580

aggcagaatt tgtgccatgc ctttcgccga acaaacggat ggagacttcc tccaccctct 2640

ggcttttgca gattccactc tcctgtgata ttctctgctt ggttctacgg cggatgcgca 2700

acaagaatat acatatacaa tgggtcatat tcgtcgtaca gaggattcct cttatgatat 2760

tatctgcttt tgtttgcgtg gttgcaatcc tgcaagaacc tattccccga gaatatcagg 2820

ctactccacc agcacttgtt tatttatttt cttgtgtata atagcttgga tgctagctag 2880

cctcacactc atacattgct taatttcacc atacatttcc cagtctgatg taggtctatt 2940

agggtgcaaa cacatttggt agattgctga gtgctaactt tccagtgtct cctctcctga 3000

catttttgcc ttggggcaag attatgttct cagacttgtt tgctctaatt tttagggcca 3060

tagcttctcc tgtccactac gcctgtcaac tgttcggcac gatgaagcct tcagatgaca 3120

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tgcacacaga aaacagcgcg gcatacttct tatggccgac ttcaaacctg cagcattgtg 3300

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ctggaaagct gcccaagggt cagcaagcaa atagcttgct tgatttgatg accataagag 3420

ctttccacag caagatattg cggcgtttca gccttgggac ggcagtgggc ttccgcataa 3480

caaaaggggt tctcacagaa acccctgcca ttcttgtctt cgttgctcga aaggttcaca 3540

agaaatggct taatccgaac caatgccttc ctgcaattct tgcggtatga gaacctcatt 3600

ttatctcttg tcttatatta ttggacaggc ttgttttcag acttggagtc gtttttgtct 3660

ttgactaata tctttcactt ggctggatgt ttacagggtc caggaggtgt ttggtgtgat 3720

gttgatgtcg tagaattttc atactatggt gcgccggctc aaacacctaa agaacagacg 3780

tttagtgagc ttgttaataa gctgtgtggc agtgacgaat atattggttc aggctctcag 3840

gtttatacat ctatgctctt atctgtattg gtttgcatta cctagatatc atcttcttga 3900

agcagtgaat gctgccatgt gtataaattg gattgggcac aaacatgcac tactagttat 3960

tttctctgtc ttgccagtgg gctgaatttt gtgaagattc tttggacaaa gtgaataaaa 4020

ttgcagtgcc cataaggtta tgacaatggc tgataggtac tatgtcagtt cacactgtta 4080

tgcataacaa tgagctacta gaagtcctgc cagtgctaac tttgttcttg tttagtttaa 4140

ataaatcttt gttcgttttt cttgcggtcg tctctagagt gccaactgga tgtaacttaa 4200

gttaatccca ttgtgaactg atcagcaatc agaagtaact ttcttaacgg cagtctctag 4260

agtgtcatgt cattaatgac taagtacttg aatggtctaa gttatcatat gcagctgaac 4320

aattgggtcc ctgcacaaat ctagacacca cttatcttta aaactcatgt accattttga 4380

atgacagttt ttttttcttt ccaaaacaga actaaattat atactctaga agttagagca 4440

gcatatagtg cattgaatga ttcaagaggg catgctctca tttcctgctg agagttctct 4500

atacctgttt cactgtctca ggttgcaagc caggatacat ttggaacttt gggtgcaatt 4560

gtgaaacgac gcaccaacaa caagcaagtt ggtttcctca cgaaccgaca tgttgcagtt 4620

gatttggact atcctaacca gaagatgttt cacccgttgc cgccgaatct tgggcctggt 4680

gtttatcttg gagctgtcga gagggcaaca tctttcatca cagatgatgt ttggtatgga 4740

atttatgctg gaacaaaccc aggtagagca gctacaaatt atgcggttga tataggggat 4800

tcatgtatta ttcgcagaat tgaactttaa agtatatgtt atagaggaag gcctagttaa 4860

tgtgtcgtct atttaaacac agtgtcttaa atgcataaaa tgaataactt gatgcattcc 4920

acaaacacaa acataagttt gtgatgcagg acttgtcttt ctgattgtac cagtttttgt 4980

cagtcaggtc aacaacaact tgtgctttag actacatagg aacaaaacaa tatctgttta 5040

tggaacaaaa aacttagttt atgttttata tatgtaaatt tataatttat gttttatata 5100

tgtagattta taaacttata agtttctcct tctgtttagt gttgttatat atgatgcata 5160

tgtgctgttc taatccccaa acatatatgc tgcccctctg tggacctgca gagacatttg 5220

tacgagctga cggcgcattc atcccatttg ctgatgactt tgacatttcc acagtcacaa 5280

ctgtagttag ggaagttggt gagattgggg atgttaagat tatagatctg cagtgtccta 5340

tcaagagcct catcgggagg caagtttgca aagtcggcag aagttccggt cacacaactg 5400

ggactgtgat ggcatatgcc cttgagtaca atgatgagaa aggaatatgc ttcttcactg 5460

acctcctcgt tgttggtgag aatcgccaaa catttgattt ggagggtgac agcggaagcc 5520

ttattatcct gaccagccag gatggggaga agccacgtcc tattgggata atatggggtg 5580

gcacagcaaa ccgtgggagg ataaagctca caagtggcta tggtcctgaa aactggacta 5640

caggggttga tcttggccgc cttcttgatc gcctagaact tgatcttatc ataaacgacg 5700

aatcgctcaa aggtgagcac tgcaacagtt tccttcatat tccagtgttg tcctggaaat 5760

acatttgcca tgcaaacttt tattatgtta ttggcatttt tcatatctca ttgttgaatc 5820

acgtttgctc caatgttaca aggctgacgt aattcatcta taataaagat gctgtgcagg 5880

agcaaaggaa tgcttttgtg gctgcaatta actctgctat tggggagtcc tctgcggtga 5940

ctgttactgc cccagaagcc accccagcag agaaggttga agagatcttt gagcctcttg 6000

ggatccaaat tcagcagctg cctcgtcacg acccgacaag cgccgcagac gaaggggagg 6060

gcgcagccaa cacaccgtcc gacatggaag agcgtcagtt catctcgaac ttcgttggca 6120

tgtctccggt gcgccgtgac catgatgctc ggaggaccat tgccaacctg aacaacccgt 6180

cagaggaaga gcttgccatg tcgctgcacc taggcgaccg ggagcccaag cggctacgtt 6240

tggacccgga atcaaaccta gacctcgaga agcagcctca cccggaccag gaaccgagcc 6300

tagatctgga gaagcagcct cgttcggacc cggaaatgat gagcctagac ctggagaagc 6360

agcctcgctc ggacccggaa ccgggcctgg acctggagaa gcgccttcca gctgacccgg 6420

agccgagcat agacttggag aagtgaactc gctgattcga atgacgtctt tggaatgagc 6480

ttgcaaacga taaaatcgag tagatggaag aacccctgtg gttcagcaaa ctggacctgc 6540

gatgttagct taagttaact actactgctg gccttgtggg gaagcatatc atttcatatc 6600

atgtactagt atggcacttg attcagctcc ttgtaggata ttgttgggtg gtatagccct 6660

gcagttttgc tgtgctcata agatttgata tacagaatgc tgaatctgaa tctcttctct 6720

tggagaacaa tatgccggca ctg 6743

Claims (5)

1.一种提高大麦分蘖数量的方法，其特征在于所述方法是抑制SEQ ID No.2所示基因的表达。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述SEQ ID No.2所示基因编码蛋白为大麦分蘖调控蛋白，氨基酸序列为SEQ ID No.1所示。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述抑制SEQ ID No.2所示基因表达的方法为：构建含SEQ ID No.3所示核苷酸序列第3065-3364位基因的RNAi干涉重组载体，并将所述的RNAi干涉重组载体导入大麦受体提高大麦分蘖数量。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述RNAi干涉重组载体是将SEQ ID No.3所示核苷酸序列第3065-3364位基因导入干涉载体pANDA的attR1和attR2位点间构建的。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述大麦受体为大麦栽培品种GoldenPromise。