CN109081878A - 一种瓜蒌根有效成分提取工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种瓜蒌根有效成分提取工艺，涉及瓜蒌加工技术领域；包括清洗、冷冻、提取醇溶物、提取多糖、提取蛋白质和提取多种酶，清洗过程采用石灰水清洗，冷冻是将瓜蒌根粉置于‑10℃冷冻3‑4h，解冻后加入乙醇中回流提取醇溶物，醇溶物离心后将滤渣加入提取物用于提取多糖，蛋白质提取过程中首先采用盐酸将蛋白质溶出，再加入硫酸钾饱和溶液使蛋白质析出，多种酶提取过程中，甲基葡萄糖苷能够促使酶从细胞中溶出，再用水和酶溶解剂将酶提取到溶液中便于分离，通过所述工艺能够将瓜蒌根中有效成分逐步提出，并且有效成分得率高，提取效率高、纯度高，提取方法简单易操作，生产成本低。

Description

一种瓜蒌根有效成分提取工艺
技术领域：
本发明涉及瓜蒌加工技术领域，具体涉及一种瓜蒌根有效成分提取工艺。
背景技术：
瓜蒌，别名：栝楼、糖瓜蒌、蒌瓜。栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim.)，多年生攀缘型草本植物。喜生于深山峻岭、荆棘丛生的山崖石缝之中。其果实、果皮、果仁(籽)、根茎均为上好的中药材。主治：清热涤痰，宽胸散结，润燥滑肠。用于肺热咳嗽，痰浊黄稠，胸痹心痛，结胸痞满，乳痈，肺痈，肠痈肿痛，大便秘结。
瓜蒌根又名天花粉，是一种比较有名气的中药药材，它的用途很广泛，可以用来治疗热病、糖尿病，还具有抗癌的作用，其本身功效为清热泻火、生津止渴、排脓消肿等。具体功效作用为：1、清热生津。用于热病伤津口渴，亦可用于肺胃热盛的消渴病。常配生地、知母、芦根等同用。2、清肺化痰。治疗肺热燥咳，以咳嗽、痰少难出、咽干、苔少或苔厚腻为主要症状。本品既能化除痰浊，又能润肺止咳，对燥痰内结于肺尤为适宜。3、解毒消肿。多与银花、赤芍同用，对燥毒炽盛的疮肿。
瓜蒌根中含有纤维素多糖和葡萄糖、半乳糖、果糖、甘露糖、木糖，含有由α羟甲基丝氨酸、天冬氨酸、瓜氨酸、苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸等组成的蛋白质，以及β-半乳糖甙酶、α-甘露糖甙酶等多种活性酶，如何将以上瓜蒌根有效成分快速高效的提取，是瓜蒌加工技术领域需要解决的一大问题。
发明内容：
本发明所要解决的技术问题在于提供一种瓜蒌根有效成分提取工艺，通过所述工艺能够将瓜蒌根中有效成分逐步提出，并且有效成分得率高，提取效率高、纯度高，提取方法简单易操作，生产成本低。
本发明所要解决的技术问题采用以下的技术方案来实现：
一种瓜蒌根有效成分提取工艺，包括以下步骤：
(1)清洗：将瓜蒌根浸于饱和石灰水中浸泡20-30min，用水冲洗，自然晾干，粉碎，过30目筛，制得瓜蒌根粉；
(2)冷冻：将瓜蒌根粉用水浸湿至含水量为16-20％，浸湿后的瓜蒌根粉置于-10℃冷冻3-4h，然后放入5-10℃水中解冻，解冻后放入干燥箱中升温到60-70℃，保温10-12h；
(3)提取醇溶物：将上述步骤干燥后的瓜蒌根粉加入瓜蒌根粉重量35-40倍的乙醇中，在85-90℃下回流提取5-6h得到提取液和粉渣，收集提取液，将提取液进行抽滤制得滤液和滤渣，滤渣备用，滤液减压浓缩回收乙醇，浓缩成膏状后放入真空烘箱中常温保存；
(4)提取多糖：向上述步骤制备的滤渣中加入滤渣质量5-8％的纤维素酶、3-5％的柠檬酸、1-2％的特丁基对苯二酚、1-2％的间苯二甲酸二烯丙酯混合均匀，向混合物中加入醋酸调节PH为5-6，在28-32℃下酶解反应5-6h，反应后向混合物中加入混合物重量40-60倍、60-80℃的水，在200-300r/min转速下搅拌2-3h，离心得沉淀物Ⅰ和上清液，将上清液降温到3-5℃，再次离心得沉淀物Ⅱ和上清液，合并两次上清液，将上清液减压浓缩成膏状后放入真空烘箱中常温保存；
(5)提取蛋白质：将步骤(3)回流提取后的粉渣和步骤(4)离心后的沉淀物Ⅰ混合均匀，加入混合物重量30-40倍、质量浓度为3-5％的盐酸溶液中，在35-40℃、300-400r/min转速下搅拌提取80-100min，提取后离心得沉淀物Ⅲ和上清液，向上清液中加入氢氧化钠至溶液成中性，再向溶液中加入硫酸钾至饱和状态，静置溶液使沉淀缓慢析出，当沉淀量不再增加时将溶液离心，取沉淀物放入真空烘箱保存；
(6)提取多种酶：将上述步骤得到的沉淀物Ⅲ加入沉淀物Ⅲ重量5-8％的甲基葡萄糖苷混合均匀，在200-300r/min转速下搅拌20-30min，向混合物中加入混合物重量30-50倍的水和0.3-0.5倍的酶溶解剂，在28-40℃下静置30min，离心，取上清液，将上清液降低到8-10℃，再次离心，取沉淀物放入真空干燥箱常温保存；
(7)将步骤(3)-(6)分别制备的醇溶物、多糖、蛋白质和多种酶用喷雾干燥法干燥制得颗粒。
所述步骤(1)和步骤(2)之间还包括以下步骤：将瓜蒌根粉平摊成1-1.5cm厚的薄层，将薄层首先置于90℃、0.07Mpa饱和蒸气压下静置30min，再转入120℃、2Mpa高温高压环境中静置20min，然后快速收集薄层放入1-3℃水中冷却，冷却后放入干燥箱中在60-80℃干燥完全，于真空环境中加入干燥物重量2.6-3.2％的活性铝混合均匀，在200-300r/min转速下搅拌20-30min，向混合物中加入3-5％质量浓度的盐酸溶液，当溶液中无气泡产生时停止加入，离心，用水清洗沉淀物2-3次，放入干燥箱在60-80℃干燥完全。
所述酶溶解剂由以下重量份的原料组成：特丁基-4-羟基茴香醚10-16份、二正丁基二硫代氨基甲酸锌3-5份、羧甲基纤维素钠12-15份、邻苯二甲酸二丁氧基乙酯6-7份、乙二胺四乙酸二钠20-25份、水杨酸甲酯2-3份、硝酸铵3-5份。
本发明提供了一种瓜蒌根有效成分提取工艺，其有益效果为：
(1)将瓜蒌根浸泡于石灰水中不仅能将瓜蒌根表面的泥土等脏物洗掉，而且能将根部最外层表皮中的死组织溶解掉，避免根部死组织混入有效成分，降低有效成分纯度；冷冻使得根部细胞壁变薄，有利于醇提过程升温时细胞壁快速破碎，从而提高醇提效率，并且冷冻能锁住根部有效成分；用纤维素酶处理能将纤维素多糖分解成单糖，由于纤维素多糖不溶于水，而单糖溶于水，因此用纤维素酶处理后能够将不易提取的纤维素多糖转化提取出，实现有效物质最大化利用，柠檬酸、特丁基对苯二酚和间苯二甲酸二烯丙酯能够将转化的单糖和根部原有的单糖融合并与其它组织分相，从而易于从其它组织分离，蛋白质提取过程中首先采用盐酸将蛋白质溶出，再加入硫酸钾饱和溶液使蛋白质析出，多糖和蛋白质提取过程不仅能够快速高效将多糖和蛋白质提取出，而且增加了多糖和蛋白质的纯度，此外，提取剂易于从提取物中分离，避免给提取物造成污染；多种酶提取过程中，甲基葡萄糖苷能够促使酶从细胞中溶出，再用水和酶溶解剂将酶提取到溶液中便于分离，不仅提高了酶的纯度，而且保证了酶的活性不受影响。
(2)在冷冻前将瓜蒌根粉平摊成薄层，依次经过饱和蒸气压、高温高压处理，再迅速降温，不仅能对瓜蒌根粉杀菌，而且能软化细胞壁，破坏细胞壁结构，使有害易挥发性物质从粉中挥发，还能降低瓜蒌根粉的寒性，活性铝的加入有利于降低瓜蒌根粉的硬度，增加瓜蒌根粉的分散性，利于提取过程的进行。
(3)特制酶溶解剂将酶从沉淀物中溶出，不仅提高酶的提取速度，而且降低了生产成本。
具体实施方式：
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1：
一种瓜蒌根有效成分提取工艺，包括以下步骤：
(1)清洗：将瓜蒌根浸于饱和石灰水中浸泡20min，用水冲洗，自然晾干，粉碎，过30目筛，制得瓜蒌根粉；
(2)冷冻：将瓜蒌根粉用水浸湿至含水量为16％，浸湿后的瓜蒌根粉置于-10℃冷冻4h，然后放入5℃水中解冻，解冻后放入干燥箱中升温到65℃，保温12h；
(3)提取醇溶物：将上述步骤干燥后的瓜蒌根粉加入瓜蒌根粉重量35倍的乙醇中，在85℃下回流提取5h得到提取液和粉渣，收集提取液，将提取液进行抽滤制得滤液和滤渣，滤渣备用，滤液减压浓缩回收乙醇，浓缩成膏状后放入真空烘箱中常温保存；
(4)提取多糖：向上述步骤制备的滤渣中加入滤渣质量8％的纤维素酶、4％的柠檬酸、1％的特丁基对苯二酚、2％的间苯二甲酸二烯丙酯混合均匀，向混合物中加入醋酸调节PH为5，在30℃下酶解反应6h，反应后向混合物中加入混合物重量50倍、70℃的水，在250r/min转速下搅拌2h，离心得沉淀物Ⅰ和上清液，将上清液降温到4℃，再次离心得沉淀物Ⅱ和上清液，合并两次上清液，将上清液减压浓缩成膏状后放入真空烘箱中常温保存；
(5)提取蛋白质：将步骤(3)回流提取后的粉渣和步骤(4)离心后的沉淀物Ⅰ混合均匀，加入混合物重量30倍、质量浓度为3％的盐酸溶液中，在35℃、300r/min转速下搅拌提取80min，提取后离心得沉淀物Ⅲ和上清液，向上清液中加入氢氧化钠至溶液成中性，再向溶液中加入硫酸钾至饱和状态，静置溶液使沉淀缓慢析出，当沉淀量不再增加时将溶液离心，取沉淀物放入真空烘箱保存；
(6)提取多种酶：将上述步骤得到的沉淀物Ⅲ加入沉淀物Ⅲ重量8％的甲基葡萄糖苷混合均匀，在300r/min转速下搅拌30min，向混合物中加入混合物重量50倍的水和0.5倍的酶溶解剂，在40℃下静置30min，离心，取上清液，将上清液降低到10℃，再次离心，取沉淀物放入真空干燥箱常温保存；
(7)将步骤(3)-(6)分别制备的醇溶物、多糖、蛋白质和多种酶用喷雾干燥法干燥制得颗粒。
实施例2：
一种瓜蒌根有效成分提取工艺，包括以下步骤：
(1)清洗：将瓜蒌根浸于饱和石灰水中浸泡30min，用水冲洗，自然晾干，粉碎，过30目筛，制得瓜蒌根粉；
(2)将瓜蒌根粉平摊成1cm厚的薄层，将薄层首先置于90℃、0.07Mpa饱和蒸气压下静置30min，再转入120℃、2Mpa高温高压环境中静置20min，然后快速收集薄层放入1℃水中冷却，冷却后放入干燥箱中在60℃干燥完全，于真空环境中加入干燥物重量2.6％的活性铝混合均匀，在200r/min转速下搅拌20min，向混合物中加入3％质量浓度的盐酸溶液，当溶液中无气泡产生时停止加入，离心，用水清洗沉淀物2次，放入干燥箱在60℃干燥完全；
(3)冷冻：将瓜蒌根粉用水浸湿至含水量为18％，浸湿后的瓜蒌根粉置于-10℃冷冻3h，然后放入10℃水中解冻，解冻后放入干燥箱中升温到65℃，保温11h；
(4)提取醇溶物：将上述步骤干燥后的瓜蒌根粉加入瓜蒌根粉重量40倍的乙醇中，在90℃下回流提取6h得到提取液和粉渣，收集提取液，将提取液进行抽滤制得滤液和滤渣，滤渣备用，滤液减压浓缩回收乙醇，浓缩成膏状后放入真空烘箱中常温保存；
(5)提取多糖：向上述步骤制备的滤渣中加入滤渣质量7％的纤维素酶、4％的柠檬酸、2％的特丁基对苯二酚、1％的间苯二甲酸二烯丙酯混合均匀，向混合物中加入醋酸调节PH为6，在30℃下酶解反应5h，反应后向混合物中加入混合物重量50倍、60℃的水，在250r/min转速下搅拌2h，离心得沉淀物Ⅰ和上清液，将上清液降温到3℃，再次离心得沉淀物Ⅱ和上清液，合并两次上清液，将上清液减压浓缩成膏状后放入真空烘箱中常温保存；
(6)提取蛋白质：将步骤(3)回流提取后的粉渣和步骤(4)离心后的沉淀物Ⅰ混合均匀，加入混合物重量40倍、质量浓度为5％的盐酸溶液中，在40℃、400r/min转速下搅拌提取100min，提取后离心得沉淀物Ⅲ和上清液，向上清液中加入氢氧化钠至溶液成中性，再向溶液中加入硫酸钾至饱和状态，静置溶液使沉淀缓慢析出，当沉淀量不再增加时将溶液离心，取沉淀物放入真空烘箱保存；
(7)提取多种酶：将上述步骤得到的沉淀物Ⅲ加入沉淀物Ⅲ重量7％的甲基葡萄糖苷混合均匀，在260r/min转速下搅拌26min，向混合物中加入混合物重量45倍的水和0.4倍的酶溶解剂，在36℃下静置30min，离心，取上清液，将上清液降低到9℃，再次离心，取沉淀物放入真空干燥箱常温保存；
(8)将步骤(4)-(7)分别制备的醇溶物、多糖、蛋白质和多种酶用喷雾干燥法干燥制得颗粒。
实施例3：
一种瓜蒌根有效成分提取工艺，包括以下步骤：
(1)清洗：将瓜蒌根浸于饱和石灰水中浸泡20min，用水冲洗，自然晾干，粉碎，过30目筛，制得瓜蒌根粉；
(2)冷冻：将瓜蒌根粉用水浸湿至含水量为20％，浸湿后的瓜蒌根粉置于-10℃冷冻4h，然后放入10℃水中解冻，解冻后放入干燥箱中升温到70℃，保温10h；
(3)提取醇溶物：将上述步骤干燥后的瓜蒌根粉加入瓜蒌根粉重量35倍的乙醇中，在90℃下回流提取5h得到提取液和粉渣，收集提取液，将提取液进行抽滤制得滤液和滤渣，滤渣备用，滤液减压浓缩回收乙醇，浓缩成膏状后放入真空烘箱中常温保存；
(4)提取多糖：向上述步骤制备的滤渣中加入滤渣质量6％的纤维素酶、5％的柠檬酸、2％的特丁基对苯二酚、2％的间苯二甲酸二烯丙酯混合均匀，向混合物中加入醋酸调节PH为5，在32℃下酶解反应6h，反应后向混合物中加入混合物重量60倍、80℃的水，在300r/min转速下搅拌3h，离心得沉淀物Ⅰ和上清液，将上清液降温到5℃，再次离心得沉淀物Ⅱ和上清液，合并两次上清液，将上清液减压浓缩成膏状后放入真空烘箱中常温保存；
(5)提取蛋白质：将步骤(3)回流提取后的粉渣和步骤(4)离心后的沉淀物Ⅰ混合均匀，加入混合物重量35倍、质量浓度为4％的盐酸溶液中，在35℃、300r/min转速下搅拌提取90min，提取后离心得沉淀物Ⅲ和上清液，向上清液中加入氢氧化钠至溶液成中性，再向溶液中加入硫酸钾至饱和状态，静置溶液使沉淀缓慢析出，当沉淀量不再增加时将溶液离心，取沉淀物放入真空烘箱保存；
(6)提取多种酶：将上述步骤得到的沉淀物Ⅲ加入沉淀物Ⅲ重量6％的甲基葡萄糖苷混合均匀，在220r/min转速下搅拌22min，向混合物中加入混合物重量40倍的水和0.4倍的酶溶解剂，在32℃下静置30min，离心，取上清液，将上清液降低到9℃，再次离心，取沉淀物放入真空干燥箱常温保存；
(7)将步骤(3)-(6)分别制备的醇溶物、多糖、蛋白质和多种酶用喷雾干燥法干燥制得颗粒。
所述酶溶解剂由以下重量份的原料组成：特丁基-4-羟基茴香醚16份、二正丁基二硫代氨基甲酸锌5份、羧甲基纤维素钠15份、邻苯二甲酸二丁氧基乙酯7份、乙二胺四乙酸二钠25份、水杨酸甲酯3份、硝酸铵5份。
实施例4：
一种瓜蒌根有效成分提取工艺，包括以下步骤：
(1)清洗：将瓜蒌根浸于饱和石灰水中浸泡30min，用水冲洗，自然晾干，粉碎，过30目筛，制得瓜蒌根粉；
(2)将瓜蒌根粉平摊成1.5cm厚的薄层，将薄层首先置于90℃、0.07Mpa饱和蒸气压下静置30min，再转入120℃、2Mpa高温高压环境中静置20min，然后快速收集薄层放入3℃水中冷却，冷却后放入干燥箱中在80℃干燥完全，于真空环境中加入干燥物重量3.2％的活性铝混合均匀，在300r/min转速下搅拌30min，向混合物中加入5％质量浓度的盐酸溶液，当溶液中无气泡产生时停止加入，离心，用水清洗沉淀物3次，放入干燥箱在80℃干燥完全；
(3)冷冻：将瓜蒌根粉用水浸湿至含水量为18％，浸湿后的瓜蒌根粉置于-10℃冷冻3h，然后放入5℃水中解冻，解冻后放入干燥箱中升温到60℃，保温12h；
(4)提取醇溶物：将上述步骤干燥后的瓜蒌根粉加入瓜蒌根粉重量40倍的乙醇中，在85℃下回流提取6h得到提取液和粉渣，收集提取液，将提取液进行抽滤制得滤液和滤渣，滤渣备用，滤液减压浓缩回收乙醇，浓缩成膏状后放入真空烘箱中常温保存；
(5)提取多糖：向上述步骤制备的滤渣中加入滤渣质量5％的纤维素酶、3％的柠檬酸、1％的特丁基对苯二酚、1％的间苯二甲酸二烯丙酯混合均匀，向混合物中加入醋酸调节PH为6，在28℃下酶解反应5h，反应后向混合物中加入混合物重量40倍、60℃的水，在200r/min转速下搅拌2h，离心得沉淀物Ⅰ和上清液，将上清液降温到3℃，再次离心得沉淀物Ⅱ和上清液，合并两次上清液，将上清液减压浓缩成膏状后放入真空烘箱中常温保存；
(6)提取蛋白质：将步骤(3)回流提取后的粉渣和步骤(4)离心后的沉淀物Ⅰ混合均匀，加入混合物重量35倍、质量浓度为4％的盐酸溶液中，在38℃、350r/min转速下搅拌提取90min，提取后离心得沉淀物Ⅲ和上清液，向上清液中加入氢氧化钠至溶液成中性，再向溶液中加入硫酸钾至饱和状态，静置溶液使沉淀缓慢析出，当沉淀量不再增加时将溶液离心，取沉淀物放入真空烘箱保存；
(7)提取多种酶：将上述步骤得到的沉淀物Ⅲ加入沉淀物Ⅲ重量5％的甲基葡萄糖苷混合均匀，在200r/min转速下搅拌20min，向混合物中加入混合物重量30倍的水和0.3倍的酶溶解剂，在28℃下静置30min，离心，取上清液，将上清液降低到8℃，再次离心，取沉淀物放入真空干燥箱常温保存；
(8)将步骤(4)-(7)分别制备的醇溶物、多糖、蛋白质和多种酶用喷雾干燥法干燥制得颗粒。
所述酶溶解剂由以下重量份的原料组成：特丁基-4-羟基茴香醚10份、二正丁基二硫代氨基甲酸锌3份、羧甲基纤维素钠12份、邻苯二甲酸二丁氧基乙酯6份、乙二胺四乙酸二钠20份、水杨酸甲酯2份、硝酸铵3份。
对比例：
本发明从天花粉中综合提取多种生物活性成分的方法，其详细步骤为：
a、醇溶物的提取：
首先称取1000g新鲜天花粉粉碎，粉碎后加入10倍天花粉重量的乙醇(乙醇的体积百分浓度为95％)，然后在25℃条件下超声波震荡10分钟，超声波处理后加热至90℃回流提取4小时，移出提取液；将移出的提取液进行抽滤，所得滤渣按照上面同样方法再提取一次，提取后移出提取液，提取液移出后再次进行抽滤，所得滤渣用于步骤b进一步提取；合并两次抽滤所得的滤液，将所得滤液进行减压浓缩(减压浓缩过程中真空度为0.09MPa、温度为40℃)，回收乙醇；当滤液浓缩至膏状后再次进行真空干燥(其真空度为0.07MPa、温度为40℃)，干燥至粉末状，得到粉状醇溶物205.6g；
b、天花粉水溶性多糖的提取：
将步骤a抽滤后多次收集的滤渣1000g中加入6kg的蒸馏水，加热至70℃条件下搅拌提取2小时，移出提取液进行离心，离心后移出上清液；在移出上清液后所剩的沉淀物中加入蒸馏水，所述沉淀物与蒸馏水二者之间的质量比为1：6，加热至70℃条件下搅拌再次提取3小时，移出提取液，进行离心，离心后移出上清液；合并两次离心后得到的上清液，两次提取后所剩沉淀物用于步骤c进一步提取；将合并后上清液中加入无水乙醇至体积百分浓度为60％，静置收集沉淀物用于步骤c进一步提取，所得上清液进行旋转蒸发(旋转蒸发时压力为0.08MPa、干燥温度为80℃，旋转蒸发仪的旋转速度为100rmp)，浓缩至原上清液体积的1/6，所得浓缩液中加入质量百分浓度为20％的三氯乙酸，当三氯乙酸终浓度为8％时停止加入，然后搅拌50分钟，搅拌后在4℃条件下静置14小时，静置后离心，离心后所得沉淀物用于步骤c进一步提取，所得上清液中加入无水乙醇至体积百分浓度为80％，静置沉淀出的多糖用体积百分浓度为95％的乙醇进行洗涤，洗涤后进行真空干燥(真空度为0.07MPa、温度为40℃)，干燥至粉末状，得到粉状天花粉水溶性粗多糖280g；
c、天花粉碱溶性多糖的提取：
将步骤b多次收集的沉淀物1000g中加入7kg质量浓度为4％的氢氧化钠水溶液，加热至65℃提取50分钟，提取后移出提取液，进行离心，离心后移出上清液；移出上清液后的沉淀物按照同样的方法进行第二次提取，提取后移出提取液、离心分离，移出第二次上清液，同时得到所剩的沉淀物，该沉淀物用于步骤d进一步提取；合并两次所得上清液，在上清液中加入浓度为12mol/L浓盐酸中和至pH值为7.0，接着进行离心，移出上清液，得到沉淀碱溶性多糖，用水洗涤所得碱溶性多糖3次，洗涤后进行真空干燥(真空度为0.07MPa，干燥温度为40℃)，干燥至粉末状，得到粉状碱溶性粗多糖30.8g；
d、天花粉蛋白的提取：
称取步骤c多次提取后所剩沉淀物1000g，然后加入pH值为10的氢氧化钠水溶液10L，在4℃条件下搅拌提取50分钟，提取后移出提取液进行离心分离，离心分离后移出上清液，得到的沉淀物用于步骤e进一步提取；所得上清液减压浓缩至原体积的1/5(减压浓缩采用旋转蒸发仪进行，其压力为0.08MPa，干燥温度为40℃，旋转蒸发仪的旋转速度为100rmp)，所得浓缩液中加入5倍体积的无水乙醇，所述无水乙醇预先冷却至4℃，无水乙醇边加入边搅拌，充分搅拌后于4℃条件下静置22小时；静置后离心，离心后得到沉淀的蛋白；所得蛋白用体积百分浓度为95％乙醇洗涤3次，洗涤后真空干燥至粉末状(真空干燥时真空度为0.07MPa、温度为40℃)，得天花粉蛋白10g；
e、天花粉凝集素的提取：
称取步骤d多次提取后得到的沉淀物1000g，然后加入pH值5.5的盐酸水溶液10L，然后在4℃下搅拌提取20小时，提取后移出提取液，移出提取液后所剩的沉淀物用于步骤f进一步提取；所得提取液中加入饱和硫酸铵溶液，所述提取液与饱和硫酸铵溶液之间的体积比1：0.8，静置收集所得沉淀、透析过夜后真空干燥至粉末状(真空干燥时真空度为0.07MPa、温度为40℃)，干燥后得到天花粉凝集素5g；
g、天花粉淀粉的提取：
称取步骤e中多次提取后所剩的沉淀物1000g，首先用蒸馏水洗涤3次，以除去沉淀物中残留的盐酸，然后在100℃烘干6小时，烘干后得到天花粉淀粉354g。10
对以上各实施例和对比例的提取效率、提取物纯度和提取率进行检测，结果如下：
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (3)

1.一种瓜蒌根有效成分提取工艺，其特征在于，包括以下步骤：
(1)清洗：将瓜蒌根浸于饱和石灰水中浸泡20-30min，用水冲洗，自然晾干，粉碎，过30目筛，制得瓜蒌根粉；
(2)冷冻：将瓜蒌根粉用水浸湿至含水量为16-20％，浸湿后的瓜蒌根粉置于-10℃冷冻3-4h，然后放入5-10℃水中解冻，解冻后放入干燥箱中升温到60-70℃，保温10-12h；
(3)提取醇溶物：将上述步骤干燥后的瓜蒌根粉加入瓜蒌根粉重量35-40倍的乙醇中，在85-90℃下回流提取5-6h得到提取液和粉渣，收集提取液，将提取液进行抽滤制得滤液和滤渣，滤渣备用，滤液减压浓缩回收乙醇，浓缩成膏状后放入真空烘箱中常温保存；
(4)提取多糖：向上述步骤制备的滤渣中加入滤渣质量5-8％的纤维素酶、3-5％的柠檬酸、1-2％的特丁基对苯二酚、1-2％的间苯二甲酸二烯丙酯混合均匀，向混合物中加入醋酸调节PH为5-6，在28-32℃下酶解反应5-6h，反应后向混合物中加入混合物重量40-60倍、60-80℃的水，在200-300r/min转速下搅拌2-3h，离心得沉淀物Ⅰ和上清液，将上清液降温到3-5℃，再次离心得沉淀物Ⅱ和上清液，合并两次上清液，将上清液减压浓缩成膏状后放入真空烘箱中常温保存；
(5)提取蛋白质：将步骤(3)回流提取后的粉渣和步骤(4)离心后的沉淀物Ⅰ混合均匀，加入混合物重量30-40倍、质量浓度为3-5％的盐酸溶液中，在35-40℃、300-400r/min转速下搅拌提取80-100min，提取后离心得沉淀物Ⅲ和上清液，向上清液中加入氢氧化钠至溶液成中性，再向溶液中加入硫酸钾至饱和状态，静置溶液使沉淀缓慢析出，当沉淀量不再增加时将溶液离心，取沉淀物放入真空烘箱保存；
(6)提取多种酶：将上述步骤得到的沉淀物Ⅲ加入沉淀物Ⅲ重量5-8％的甲基葡萄糖苷混合均匀，在200-300r/min转速下搅拌20-30min，向混合物中加入混合物重量30-50倍的水和0.3-0.5倍的酶溶解剂，在28-40℃下静置30min，离心，取上清液，将上清液降低到8-10℃，再次离心，取沉淀物放入真空干燥箱常温保存；
(7)将步骤(3)-(6)分别制备的醇溶物、多糖、蛋白质和多种酶用喷雾干燥法干燥制得颗粒。
2.根据权利要求1所述的瓜蒌根有效成分提取工艺，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(2)之间还包括以下步骤：将瓜蒌根粉平摊成1-1.5cm厚的薄层，将薄层首先置于90℃、0.07Mpa饱和蒸气压下静置30min，再转入120℃、2Mpa高温高压环境中静置20min，然后快速收集薄层放入1-3℃水中冷却，冷却后放入干燥箱中在60-80℃干燥完全，于真空环境中加入干燥物重量2.6-3.2％的活性铝混合均匀，在200-300r/min转速下搅拌20-30min，向混合物中加入3-5％质量浓度的盐酸溶液，当溶液中无气泡产生时停止加入，离心，用水清洗沉淀物2-3次，放入干燥箱在60-80℃干燥完全。
3.根据权利要求1所述的瓜蒌根有效成分提取工艺，其特征在于，所述酶溶解剂由以下重量份的原料组成：特丁基-4-羟基茴香醚10-16份、二正丁基二硫代氨基甲酸锌3-5份、羧甲基纤维素钠12-15份、邻苯二甲酸二丁氧基乙酯6-7份、乙二胺四乙酸二钠20-25份、水杨酸甲酯2-3份、硝酸铵3-5份。
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