CN109078143B

CN109078143B - 一种治疗子宫内膜异位症的中药组合物及其应用

Info

Publication number: CN109078143B
Application number: CN201811249785.0A
Authority: CN
Inventors: 张婷婷; 曹阳; 庄梦斐; 谭丽; 杜尘; 周晓瑜
Original assignee: Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Shanghai University of TCM
Current assignee: Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Shanghai University of TCM
Priority date: 2018-10-25
Filing date: 2018-10-25
Publication date: 2020-12-15
Anticipated expiration: 2038-10-25
Also published as: CN109078143A

Abstract

本发明涉及中药技术领域，具体公开了一种治疗子宫内膜异位症的中药组合物，所述中药组合物由红藤、丹皮、丹参、米仁、牡蛎、延胡索、川楝子、续断、菟丝子、仙灵脾、巴戟天、路路通、紫石英、石楠叶、皂角刺、桑寄生、砂仁组成，本发明还公开了上述中药组合物的应用。在临床实验中，本发明的中药组合物能显著缓解患者的疼痛，提高患者的精力及情感职能，相比西药组，有明显优势；在大鼠模型实验中，发现本发明中药组合物可以抑制VEGF和SPARC表达，从而可以影响异位内膜周围新生血管的形成，抑制异位内膜的生长，使其萎缩；本发明中药易于取材，成本低，疗效高，为纯中药制剂，无毒副作用，易于被患者接受。

Description

一种治疗子宫内膜异位症的中药组合物及其应用

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体地说，是一种治疗子宫内膜异位症的中药组合物及其应用。

背景技术

子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)是妇科常见的疑难疾病和慢性疾病，是指有活动功能的子宫内膜出现于子宫内壁以外的部位，在身体其他部位生长。发病部位以卵巢、子宫骶骨韧带、子宫直肠窝为多见，其他如阴道、宫颈、阴道直肠隔、输卵管、外阴、鼠蹊部、脐部、剖宫产腹部切口、侧切伤口、甚至在肺、脑膜等处出现异位病灶。影响了10％～15％生育期妇女的健康和生活质量，且发病率有明显升高的趋势。该病临床表现复杂多变，极具侵袭性和复杂性，主要临床特征是慢性盆腔疼痛、性交痛和不孕。EMs虽为良性疾病，但具有良性肿瘤的生物学特性和向恶性肿瘤转化的恶性变倾向。

目前，EMs的发病机制仍不清楚，按照经血逆流的理论，在异位病灶的形成过程中，异位子宫内膜必须要经过“黏附－侵袭－血管形成”3个过程，其中血管形成是其种植后生长的必要条件。血管内皮生长因子(VEGF)是一种关键的血管形成刺激因子，异位内膜的种植依赖新生血管的形成和生长，与富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)基因和肿瘤的浸润和转移密切相关，并通过与VEGF的相互作用参与血管形成。EMs的西医治疗战略是卵巢抑制，目前除根治性手术外，尚无一种理想的根治方法，无论是药物治疗抑或保守性手术均有相当高的复发率和副作用。中药作用于EMs的临床疗效得到广泛认同，其最大优势是对卵巢功能无抑制作用。

近几年来，许多中医妇科学者根据本病临床症状与体征的特点参诸历代中医文献有关痛经、瘕、不孕等论述，提出对本病的认识并在治疗方法上做了深入有益的研究。普遍认为瘀血阻滞是EMs的主要病机。可表现为气滞血、阏寒凝血、阏热郁血、阏气虚血阏等不同证型。在治疗上以活血化阏基本治法，依据辨证的不同，分别提出活血化、阏温经法、阏清热化、阏化阏通脉、补肾化、阏疏肝活血、益气活血等法。

中国专利文献201310401962.3公开了一种治疗子宫内膜异位症的中药组合物，中药组合物中各种原料药的重量份数比为：鹿角片、菟丝子、仙灵脾、当归、川芎、赤芍、炒白芍、莪术、三棱、半枝莲、茯苓、白毛委陵菜、薏苡仁、延胡索、蒲黄、乳香、没药、片姜黄、夏枯草、丹参、桂枝、丹皮、小茴香、艾叶、木香、葫芦巴、猫爪草、红藤、五灵脂、补血草、刘寄奴和山慈姑；该发明具有补肾活血、化瘀消癥，理气活血、化瘀止痛的功效，主治子宫内膜异位症；且制作工艺简便，毒副作用小且给药方便，药剂易于制造，成本低廉的新药；能直达病灶，治愈时间短，治愈后不易复发。中国专利文献201210310669.1公开了一种治疗子宫内膜异位症的复方中药，它包括如下重量份数的组分：生蒲黄8～12份、五灵脂8～12份、血竭1～3份、生黄芪12～20份、川断8～12份、炙没药8～12份、延胡索8～12份、川楝子8～12份；该发明还公开了上述复方中药的制备方法及应用；该发明的复方中药发挥了中医药治病多靶点的优势，通过药物抑制大鼠子宫内膜异位症模型中异位子宫内膜发展的实验观察，发现该发明的中药复方可以在抑制异位子宫内膜组织中细胞增殖、血管生成与侵袭，降低腹腔液中炎性细胞因子水平等方面抑制子宫内膜异位症的发展。但是关于本发明所述中药组合物对子宫内膜异位症的治疗，目前还未见报道。

发明内容

本发明的第一个目的是，针对现有技术中的不足，提供一种治疗子宫内膜异位症的中药组合物。

本发明的第二个目的是，提供一种上述中药组合物的用途。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种治疗子宫内膜异位症的中药组合物，由下列重量份的原料药制成：红藤12-18份、丹皮6-12份、丹参6-12份、米仁6-12份、牡蛎27-33份、延胡索17-23份、川楝子6-12份、续断6-12份、菟丝子12-18份、仙灵脾9-15份、巴戟天6-12份、路路通6-12份、紫石英12-18份、石楠叶3-9份、皂角刺9-15份、桑寄生12-18份、砂仁1-5份。

优选地，所述的中药组合物由下列重量份的原料药制成：红藤14-16份、丹皮8-10份、丹参8-10份、米仁8-10份、牡蛎29-31份、延胡索19-21份、川楝子8-10份、续断8-10份、菟丝子14-16份、仙灵脾11-13份、巴戟天8-10份、路路通8-10份、紫石英14-16份、石楠叶5-7份、皂角刺11-13份、桑寄生14-16份、砂仁2-4份。

优选地，所述的中药组合物由下列重量份的原料药制成：红藤15份、丹皮9份、丹参9份、米仁9份、牡蛎30份、延胡索20份、川楝子9份、续断9份、菟丝子15份、仙灵脾12份、巴戟天9份、路路通9份、紫石英15份、石楠叶6份、皂角刺12份、桑寄生15份、砂仁3份。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

如上任一所述的中药组合物在制备治疗子宫内膜异位症药物中的应用。

优选地，所述的药物还包括药学上常规的辅料，包括：稀释剂、赋形剂和水等，填充剂如淀粉、蔗糖，乳糖、微晶纤维素等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇、十二烷基硫酸钠；吸附载体如高龄土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶和聚乙二醇等。

优选地，所述的药物为口服制剂，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、汤剂、合剂、丸剂、口服液或糖浆剂。

本发明优点在于：

1、本发明的中药组合物在临床实验中，能显著缓解患者的疼痛，提高患者的精力及情感职能，相比西药组，有明显优势；治疗有效率高达93.33％，相比米非司酮提高了30％；服用分发明的中药组合物后，患者的全血粘度值、血浆粘度值、红细胞聚集指数、血沉方程K值、外周血ET-1、外周血t-PA、外周血TNF-α水平、外周血sICAM-1水平均得到了有效的改善，相比服用前，差异具有统计学意义。

2、在大鼠模型实验中，采用本发明的中药组合物治疗后，在位和异位内膜中VEGF和SPARC表达均有不同程度的降低，且与剂量呈正相关。说明本发明中药组合物可以抑制VEGF和SPARC表达，从而可以影响异位内膜周围新生血管的形成，抑制异位内膜的生长，使其萎缩。

3、本发明中药易于取材，成本低，疗效高，为纯中药制剂，无毒副作用，易于被患者接受。

附图说明

图1是患者手术原因构成比，其中，左侧是中药组手术原因构成比，右侧是西药组手术原因构成比。

图2是治疗后中药组合西药组SF-36各维度得分比较；注：*表示与同组治疗前比较P<0.01，▲表示组间比较P<0.05，▲▲表示组间比较P<0.01。

图3是两组治疗前后在躯体疼痛，精力和情感职能三维度得分比较；注：*表示与同组治疗前比较P<0.01，▲表示组间比较P<0.05，▲▲表示组间比较P<0.01。

图4是两组治疗前后中医证候积分比较；注：*与同组治疗前比较P<0.01，▲表示组间比较P<0.01。

图5是两组中医证候有效率比较；注：经非参数检验，Z＝-3.05，P＝0.002。秩次越小，疗效越好。

图6是两组治疗前后全血粘度值(高切)比较；注：*与同组治疗前比较P<0.01，▲表示组间比较P<0.01。

图7是两组治疗前后全血粘度值(低切)比较；注：*与同组治疗前比较P<0.01，▲表示组间比较P<0.01。

图8是两组治疗前后血浆粘度值比较；注：*与同组治疗前比较P<0.01，▲表示组间比较P<0.01。

图9是两组治疗前后红细胞聚集指数比较；注：*与同组治疗前比较P<0.01，▲表示组间比较P<0.01。

图10是两组治疗前后血沉方程K值比较；注：*与同组治疗前比较P<0.01，▲表示组间比较P<0.05。

图11左是两组治疗前后外周血ET-1水平比较变化，右是两组治疗前后外周血ET-1水平变化；注：*表示与同组治疗前比较P<0.01。

图12左是两组治疗前后外周血t-PA水平比较变化，右是两组治疗前后外周血t-PA水平变化；注：*表示与同组治疗前比较P<0.01。

图13左是两组治疗前后TNF-α水平比较变化，右是两组治疗前后TNF-α1水平变化。

图14左是两组治疗前后外周血sICAM-1水平比较变化，右是两组治疗前后外周血sICAM-1水平变化；注：*表示与同组治疗前比较P<0.01。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围；此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1治疗子宫内膜异位症的中药组合物的制备(一)

红藤15份、丹皮9份、丹参9份、米仁9份、牡蛎30份、延胡索20份、川楝子9份、续断9份、菟丝子15份、仙灵脾12份、巴戟天9份、路路通9份、紫石英15份、石楠叶6份、皂角刺12份、桑寄生15份、砂仁3份，按常规方法煎煮。

实施例2治疗子宫内膜异位症的中药组合物的制备(二)

红藤12份、丹皮6份、丹参6份、米仁6份、牡蛎27份、延胡索17份、川楝子9份、续断9份、菟丝子15份、仙灵脾12份、巴戟天9份、路路通9份、紫石英18份、石楠叶9份、皂角刺15份、桑寄生18份、砂仁5份，按常规方法煎煮。

实施例3治疗子宫内膜异位症的中药组合物的制备(三)

红藤15份、丹皮9份、丹参9份、米仁9份、牡蛎30份、延胡索20份、川楝子12份、续断12份、菟丝子18份、仙灵脾15份、巴戟天12份、路路通12份、紫石英12份、石楠叶3份、皂角刺9份、桑寄生12份、砂仁1份，按常规方法煎煮。

实施例4治疗子宫内膜异位症的中药组合物的制备(四)

红藤18份、丹皮12份、丹参12份、米仁12份、牡蛎33份、延胡索23份、川楝子6份、续断6份、菟丝子12份、仙灵脾9份、巴戟天6份、路路通6份、紫石英15份、石楠叶6份、皂角刺12份、桑寄生15份、砂仁3份，按常规方法煎煮。

实施例5治疗子宫内膜异位症的中药组合物的制备(五)

红藤14份、丹皮8份、丹参8份、米仁8份、牡蛎29份、延胡索19份、川楝子9份、续断9份、菟丝子15份、仙灵脾12份、巴戟天9份、路路通9份、紫石英16份、石楠叶7份、皂角刺13份、桑寄生16份、砂仁4份，按常规方法煎煮。

实施例6治疗子宫内膜异位症的中药组合物的制备(六)

红藤15份、丹皮9份、丹参9份、米仁9份、牡蛎30份、延胡索20份、川楝子10份、续断10份、菟丝子16份、仙灵脾13份、巴戟天10份、路路通10份、紫石英14份、石楠叶5份、皂角刺11份、桑寄生14份、砂仁2份，按常规方法煎煮。

实施例7治疗子宫内膜异位症的中药组合物的制备(七)

红藤16份、丹皮10份、丹参10份、米仁10份、牡蛎31份、延胡索21份、川楝子8份、续断8份、菟丝子14份、仙灵脾11份、巴戟天10份、路路通10份、紫石英15份、石楠叶6份、皂角刺12份、桑寄生15份、砂仁3份，按常规方法煎煮。

需要说明的是，实施例1～7所述的常规方法煎煮是中药汤剂常规的制作方法，即将所述的原料药加水煎煮成汤剂。

实施例8治疗子宫内膜异位症的中药组合物汤剂的制备

按照实施例1～7任一所述的比例称取中药原料，加水煎煮2次，每次1h，第一次加水12倍量，第二次加8倍量水，制得所述的中药组合物汤剂。

实施例9治疗子宫内膜异位症的中药组合物片剂的制备

按照实施例1～7任一所述的比例称取中药原料，加水煎煮2次，每次1h，第一次加水12倍量，第二次加8倍量水，滤药渣，合并两次滤液，将水溶液合并后浓缩至相对密度为1.05～1.06(70℃)，加乙醇使含醇量达55％，静置，滤过，滤液回收乙醇后并浓缩至相对密度为1.12～1.16(60℃)的流浸膏；将上述药物药渣细粉、包合物、流浸膏、与适量辅料混匀后一步制粒，压片，包薄膜衣即得。

实施例10治疗子宫内膜异位症的中药组合物颗粒的制备

按照实施例1～7任一所述的比例称取中药原料，加水煎煮2次，每次1h，第一次加水12倍量，第二次加8倍量水，滤药渣，合并两次滤液，与上述水溶液合并后浓缩至相对密度为1.05～1.06(70℃)，加乙醇使含醇量达55％，静置，滤过，滤液回收乙醇后并浓缩至相对密度为1.12～1.16(60℃)的流浸膏；将上述药物细粉、包合物、流浸膏、与适量辅料混匀后一步制粒，即得。

实施例11治疗子宫内膜异位症的中药组合物胶囊的制备

按照实施例1～7任一所述的比例称取中药原料，加水煎煮2次，每次1h，第一次加水12倍量，第二次加8倍量水，滤药渣，合并两次滤液，与上述水溶液合并后浓缩至相对密度为1.05～1.06(70℃)，加乙醇使含醇量达55％，静置，滤过，滤液回收乙醇后并浓缩至相对密度为1.12～1.16(60℃)的流浸膏；将上述药物细粉、包合物、流浸膏、与适量辅料混匀，装胶囊即得。

实施例12治疗子宫内膜异位症的中药组合物合剂/口服液/糖浆剂的制备

按照实施例1～7任一所述的比例称取中药原料，加8-10倍量水，煎煮3小时，滤出药汁。再加8倍量水，煎煮2小时，滤出药汁，合并二次煎液，静置，滤取上清液，浓缩，放冷，加浓缩液2倍量酒精，搅拌沉淀过夜。取上清液，浓缩至稠浸膏；加适当制药辅料，制成合剂、口服液或糖浆剂。

实施例13本发明中药组合物的临床研究

1治疗标准

1.1病例来源

本课题病例来源于2012年6月-2013年10月上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院妇科门诊的患者。

1.2诊断标准

参照1993年卫生部颁布的《中药新药治疗盆腔子宫内膜异位症的临床研究指导原则》。

1.2.1西医诊断标准

(1)腹腔镜检查：子宫直肠窝、后腹膜见多个紫兰色小点，伴腹腔液增多(常为血性)；子宫骶骨韧带增粗、灰白色结节，伴有疏松粘连，输卵管多数通畅；卵巢包膜增厚、表面不平、粘连，并常见表面有褐色陈旧性出血斑块，卵巢穿刺有巧克力样陈血；卵巢有粘连，而输卵管大多通畅。

(2)病理切片中有以下证据：子宫内膜腺体；子宫内膜间质；有组织内出血证据，见红细胞、含铁血黄素、局部结缔组织增生可确诊。

1.2.2中医诊断标准

(1)月经前后少腹、腰骶部有不适或疼痛，逐渐加剧；

(2)盆腔病理性包块、结节；

(3)舌质紫或舌体瘀斑、瘀点；

(4)脉涩或结、代；

(5)固定性刺痛并拒按；

(6)血管异常：包括舌下及其他部位静脉曲张、毛细血管扩张、血管痉挛、舌及肢端紫绀、血管阻塞；

(7)皮下瘀斑等。

具有以上主要依据(1)、(2)两项之一，和(3)～(7)项之一，并有实验室依据证实微循环障碍，血液流变性异常，血液动力学障碍，血小板聚集性增高，即可诊断。

1.3纳入标准

(1)符合上述诊断标准的患者；

(2)年龄在25-45岁之间；

(3)初次行保守性手术；

(4)初诊日期为手术治疗后1个月以内；

(5)同意参加临床实验观察，签署知情同意书并能配合按期随访者；

(6)接受本治疗前2周内未服用激素类药物。

1.4排除标准

(1)盆腔炎性包块，一般卵巢囊肿、卵巢恶性肿瘤者及内生殖道结核结节者；

(2)对所用药物过敏者；

(3)不符合纳入标准者；

(4)正在参加其他药物试验者。

1.5剔除标准

(1)不符合纳入标准而被误纳的病例应予以剔除；

(2)治疗期间发现影响治疗的其它疾病及合并用药；

(3)资料进行统计之前，经核查不符合课题研究者应予以剔除。

1.6脱落标准

(1)临床研究过程中失访者；

(2)治疗过程中发生严重不良反应或意外情况而不能坚持接受治疗者；

(3)临床研究过程中依从性差、资料不完整者。

2治疗方案

2.1分组方法

采用随机数字表法，将腹腔镜确诊的内异症病人60例随机分为中药组和西药组两组各30例。

2.2分组治疗

(1)治疗组：服用实施例1中制得的中药组合物，连用3个月为一个疗程，停药后每3个月随访1次，连续随访半年。

(2)对照组：达菲林(注射用醋酸曲普瑞林)，达菲林在月经周期的第1-5天开始治疗。一次1支，每4周注射一次，连续注射3个月；连用3个月为一个疗程，停药后每3个月随访1次，连续随访半年。

2.3合并用药

(1)详尽记录合并用药的名称、数量和剂量，包括处方用药、非处方用药、中成药、维生素、保健品等；

(2)与治疗有关的同类药物和干扰治疗的药物为禁用药物；

(3)如确实需要，必须服用上列药物，应该将应用的原因详细记录，从而来判定还是否适合作为研究的观察对象。

2.4临床信息采集内容

(1)子宫内膜异位症调查表：包含中医症候、经带胎产情况、实验室检查、中医症候按不出现、轻度、中度、重度分别赋予0、1、2、3分，舌像、脉象客观描述等详细资料，全面概况中医辨证所需的四诊信息；

(2)加用上海中医药大学研制的脉象数字化分析仪和舌像计算机识别系统收集脉象和舌像；

(3)生存质量评分量表；

(4)将患者的所有资料的各项指标作为变量输入计算机，建立SPSS数据库。

2.5观察指标：

(1)安全性指标：

a一般体检项目：心率、心律、血压、体重；

b血、尿、便常规化验(治疗前后必检项)；

c心电图、肾功能(Cr、BUN)检查(治疗前后必检项)。

(2)效应性指标：

a西医疗效标准：血液流变学指标：血液粘度，血小板聚集性，t-PA，ET等；免疫指标：TNF-ɑ、sICAM-1；

b痛经评分表(参照《中药新药临床指导原则》)以及痛经视觉模拟评分法；

c生存质量量表：引用美国医学结局研究组开发的普适性量表SF-36，子宫内膜异位症特异性量表EHP-30。

(3)子宫内膜异位症术后的复发率：观察治疗组及对照组子宫内膜异位症的有效率和复发率。

2.6疗效判定标准

(1)痊愈：服药后积分恢复至0分，腹痛及其他症状消失，停药3个月经周期未复发者；显效：治疗后积分降低至治疗前积分的1/2以下，腹痛明显减轻，其余症状好转，不服止痛药能坚持工作；有效：治疗后积分降低至治疗前积分的1/2—3/4，腹痛减轻，其余症状好转，服止痛药能坚持工作；无效：腹痛及其他症状无改变者。

(2)中医证候疗效评分表及判定标准

疗效指数N＝[(治疗前积分－治疗后积分)/治疗前积分]×100％；

痊愈：N≥90％；显效：66.67％≤N<90％；有效：33.33％≤N<66.67％；无效：N<33.33％。

2.7疗效性观察

(1)痛经评分标准：参照《中药新药临床研究指导原则》及痛经视觉模拟评分法；

(2)中医证侯评分表；

(3)普适型量表SF-36；

(4)子宫内膜异位症特异性量表EHP-30。

2.8统计方法

统计分析将采用SPSS15.0统计分析软件进行计算。所有的统计检验均采用双侧检验，P值小于或等于0.05将被认为所检验的差别有统计意义。

(1)脱落分析：两组总脱落率和由于不良事件而脱落率的比较将采用χ²检验。

(2)基础值的均衡性分析：采用方差分析或χ²检验来比较人口学资料和其它基础值指标，以衡量两组均衡性如何。

(3)对于计量资料，服从正态分布的数据，用均数±标准差表示；若数据符合方差齐性要求，各组间差异采用单因素单因素方差分析(ANOVA分析)及LSD法进行多重比较；若数据不符合方差齐性要求，各组间差异则采用Kruskal-Wallis非参数检验及LSD法进行多重比较。采用非参数方法评估有效性指标。

(4)不同等级资料两两比较用Ridit分析；不同检测项目之间关系采用相关分析法，回归分析等。

3治疗结果

本次研究共纳入病67例，其中，中药组因观察期妊娠改予中药保胎治疗2例，不愿配合随访检查化验者3例，因家庭住址较远不愿继续服药而退出试验者2例，两组均无患者因药物不良反应退出试验最后完成研究的患者共60例，中药组30例，西药组30例。

3.1一般情况

表1两组年龄、身高、体重、BMI、CA125比较

两组年龄、身高、体重、体重指数、术后药物治疗前CA125值比较，经t检验或非参数检验，P>0.05，两组年龄、身高、体重、BMI指数，CA125值差异无统计学意义，具有可比性。

表2患者婚育情况[例(％)]

注：x²＝1.09，P＝0.58。

两组患者婚育情况构成比，经卡方检验，P>0.05，两组婚育情况无差异，具有可比性。

表3患者手术原因情况[频数(％)]

注：x²＝1.10，P＝0.804。

两组患者手术原因构成比，将患者手术原因分为疼痛，不孕，单纯发现盆腔包块而无其他症状者，其他原因(如CA125异常升高)，经卡方检验，P>0.05，两组患者手术原因构成比无差异，具有可比性，其中疼痛和不孕是患者手术治疗的主要原因(见表3，图1)。

3.2两组生活质量比较

表4两组患者治疗前后生活质量SF-36评分变化

注：*表示与同组治疗前比较P<0.01，▲表示组间比较P<0.05，▲▲表示组间比较P<0.01。

治疗前两组患者生活质量各维度评分比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；中药组治疗后在躯体疼痛，情感职能两方面与治疗前比较评分升高(P<0.01)；西药组治疗后在躯体疼痛方面评分升高(P<0.01)，但在精力方面评分下降(P<0.01)；两组组间比较精力和情感职能方面评分有显著差异(P<0.01或P<0.05)，在躯体疼痛方面无显著差异(P>0.05)。(见表4，图2、3)

3.3两组中医证候疗效比较

3.3.1两组中医证候积分比较

表5两组治疗前后中医证候积分比较

注：*表示与同组治疗前比较P<0.01，▲表示组间比较P<0.01。

治疗前两组中医证侯积分比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；两组治疗后与治疗前比较中医证侯积分均降低(P<0.01)；两组治疗后中医证侯积分变化组间比较差异有统计学意义(P<0.01)(见表5，图4)。

3.3.2两组中医证候有效率比较

表6两组中医证候疗效比较[例(％)]

中药组总有效率93.33％，西药组总有效率63.33％，两组患者中医证侯疗效比较差异有统计学意义(P<0.05)，中药组在改善中医证侯方面疗效优于西药组(见表6，图5。)

3.4两组实验室指标比较

3.4.1两组血粘度比较

3.4.1.1两组治疗前后全血粘度值比较

表7两组治疗前后全血粘度值(高切)比较(mPas，

)

注：*与同组治疗前比较P<0.01，▲组间比较P<0.01。

表8两组治疗前后全血粘度值(低切)比较(mPas，

)

注：*与同组治疗前比较P<0.01，▲组间比较P<0.01。

治疗前两组全血粘度值(高切、低切)比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；中药组治疗后全血粘度值(高切、低切)与治疗前比较下降(P<0.01)，西药组治疗前后全血粘度值(高切、低切)差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后全血粘度值(高切、低切)变化组间比较差异有统计学意义(P<0.01)(见表7、8，图6、7)。

3.4.1.2两组治疗前后血浆粘度值比较

表9两组治疗前后血浆粘度值比较(mPas，

)

注：*与同组治疗前比较P<0.01，▲组间比较P<0.01。

治疗前两组血浆粘度值比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；中药组治疗后血浆粘度值与治疗前比较下降(P<0.01)，西药组治疗前后血浆粘度值差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后血浆粘度值变化组间比较差异有统计学意义(P<0.01)(见表9，图8)。

3.4.1.3两组治疗前后红细胞压积比较

表10两组治疗前后红细胞压积比较(L/L，

)

治疗前两组红细胞压积比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；两组治疗前后红细胞压积组内或组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(见表10)

3.4.1.4两组治疗前后红细胞聚集指数比较

表11两组治疗前后红细胞聚集指数比较

注：*与同组治疗前比较P<0.01，▲组间比较P<0.01。

治疗前两组红细胞聚集指数比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；中药组治疗后红细胞聚集指数与治疗前比较下降(P<0.01)，西药组治疗前后红细胞聚集指数差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后血浆粘度值变化组间比较差异有统计学意义(P<0.01)(见表11，图9)。

3.4.1.5两组治疗前后血沉方程K值比较

表12两组治疗前后血沉方程K值比较

注：*与同组治疗前比较P<0.01，▲组间比较P<0.05。

治疗前两组血沉方程K值比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；中药组治疗后血沉方程K值与治疗前比较下降(P<0.01)，西药组治疗前后血沉方程K值差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后血浆粘度值变化组间比较差异有统计学意义(P<0.05)(见表12，图10)。

3.4.2两组治疗前后外周血ET-1水平比较

表13两组治疗前后外周血ET-1水平比较(ng/L，

)

注：*与同组治疗前比较P<0.05。

治疗前两组外周血ET-1比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；中药组治疗后外周血ET-1与治疗前比较下降(P<0.05)，西药组治疗前后外周血ET-1有下降趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后外周血ET-1水平变化组间比较差异无统计学意义(P>0.05)(见表13，图11)。

3.4.3两组治疗前后外周血t-PA水平比较

表14两组治疗前后外周血t-PA水平比较(pg/ml，

)

注：*与同组治疗前比较P<0.01。

治疗前两组外周血t-PA比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；中药组治疗后外周血t-PA与治疗前比较上升(P<0.01)，西药组治疗前后外周血t-PA有上升趋势，但差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后外周血t-PA水平变化组间比较差异无统计学意义(P>0.05)(见表14，图12)。

3.4.4两组治疗前后外周血TNF-α水平比较

表15两组治疗前后外周血TNF-α水平比较(pg/ml，

)

治疗前两组外周血TNF-α水平差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；两组治疗后外周血TNF-α水平与治疗前比较无明显差异(P>0.05)；两组治疗后外周血TNF-α水平组间比较无明显差异(P>0.05)，并且两组患者药物治疗前后外周血TNF-α多集中在20pg/ml以下(见表15，图13)。

3.4.5两组治疗前后外周血sICAM-1水平比较

表16两组治疗前后外周血sICAM-1水平比较(pg/ml，

)

注：*与同组治疗前比较P<0.01。

治疗前两组外周血sICAM-1水平比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；两组治疗后外周血sICAM-1水平与治疗前比较下降(P<0.05)；两组治疗后外周血sICAM-1水平变化组间比较差异无统计学意义(P>0.05)(见表16，图14)。

实施例14动物模型研究

1实验材料

1.1实验动物及分组

健康成熟未交配过的清洁级雌性SD大鼠30只，质量200±20g，由上海西普尔－必凯实验动物有限公司提供。按清洁级动物要求饲养，自由取水，室温(25±1)℃，相对湿度50％±10％，光照黑暗各12h，适应性饲养1周。将大鼠随机分为空白组、模型组、米非司酮组、低剂量中药组、高剂量中药组，每组6只。

1.2药物准备

中药组：实施例1中制得的中药组合物，由上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院中药制剂室制备，含中药1g/ml。

米非司酮片(25mg/片)由北京紫竹药业有限公司提供。

1.3仪器和试剂

氯化钠注射液，由安徽双鹤药业有限责任公司生产；戊巴比妥钠溶液(蒸馏水配成30g/L)，由Sigma公司提供；兔抗VEGF抗体、兔抗GAPDH抗体，购自Proteintech公司；兔抗SPARC抗体，购自Santa Cruz公司；DAB显色剂，由Vector Laboratories公司提供；苏木素溶液，购自上海虹桥乐翔医用试剂技术有限公司；ECL化学发光检测试剂盒，由北京康为世纪生物科技有限公司提供；DM750光学显微镜，Leica公司；Tanon 4100数码凝胶图像处理系统，上海天能仪器有限公司。

2实验方法

2.1造模

对模型组、米非司酮组、低剂量中药组、高剂量中药组大鼠进行造模。对大鼠腹腔注射3％戊巴比妥钠溶液(30mg/kg)麻醉后，无菌条件下剖腹，切口长约2cm，取出左侧子宫，结扎子宫两端血管，剪下一段子宫，放入生理盐水中将子宫段纵向切开，分离子宫内膜和肌层，将2块大小约5mm×5mm的子宫内膜块缝合于右侧腹腔内壁血管丰富处，缝合肌肉层和皮肤。手术后3周，再次开腹查看造模情况，见到异位内膜体积增大，呈透明囊泡状，且囊泡内可见淡黄色澄清积液，异位内膜周围可见血管形成为造膜成功。

2.2给药及取材

空白组和模型组：给予生理盐水5mg/kg灌胃；米非司酮组：给予1.2g/L米非司酮5mg/kg灌胃；低剂量中药组：给予实施例1制得的中药1.5ml/100g灌胃；高剂量中药组：给予实施例1制得的中药6ml/100g灌胃。连续灌胃给药21d后，麻醉状态下打开腹腔，腹主动脉取血并处死大鼠，取下异位内膜组织和右侧子宫，空白对照组取下子宫。组织标本分两部分，部分置4％多聚甲醛固定液中，待行组织学观察；部分放入－80℃冰箱冻存，待行蛋白定量检测。

2.3检测指标和方法

免疫组化染色:取在位和异位内膜组织常规石蜡包埋，连续切片，厚度为5μm。采用SABC法，实验步骤严格按照试剂盒说明书要求进行，VEGF一抗按1:200稀释，SPARC一抗按1:100稀释，DAB显色，光镜下观察VEGF和SPARC的定位和表达情况。切片组织或细胞中呈现棕黄色即为阳性信号。

Westernblotting:取在位和异位内膜组织约100mg，加入细胞裂解液1ml和蛋白酶抑制剂10μl，充分匀浆，4℃下12000r/min离心20min，取上清液加入Buffer缓冲液，沸水浴中加热5min。取等量蛋白进行SDS-PAGE电泳，转移蛋白至NC膜，7％脱脂奶粉封闭后，加入VEGF、SPARC和内参GAPDH一抗4℃孵育过夜，TBST洗涤4遍，加入相应的辣根过氧化物酶标记的二抗，37℃与膜孵育1h，TBST洗膜后，加入ECL试剂，显影，定影，分析条带光密度值。以目的条带与GAPDH条带的光密度值的比值作为衡量参数，分析VEGF和SPARC蛋白的表达量。

2.4统计学方法

采用SPSS 18.0软件对数据进行统计分析并作图。实验数据均用x±s表示，符合正态分布和方差齐性的数据采用单因素方差分析，组间两两比较用LSD-t检验；不符合正态分布和(或)方差齐性的数据采用Kruskal-Wallis H检验分析，组间两两比较用Wilcoxon检验。检验水准α＝0.05。

3实验结果

3.1对大鼠在位内膜VEGF和SPARC表达的影响

免疫组化结果显示，VEGF在正常大鼠子宫内膜和EMs模型大鼠在位内膜中主要定位于腔上皮和腺体，散在于周围间质细胞中。VEGF阳性细胞在模型组中数量多且密集，颜色深，表达强烈；米非司酮组、中药低、高剂量组中，VEGF阳性表达均有不同程度的降低，除中药低剂量组外，其余各组累积光密度值均显著低于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)。SPARC在正常大鼠子宫内膜和EMs模型大鼠在位内膜中主要定位于腔上皮和腺体，少量分散存在于周围间质细胞中。SPARC在正常大鼠子宫内膜中少量表达，在内异症模型大鼠在位内膜中高表达，中药低、高剂量组中，SPARC阳性表达均有不同程度的降低，各治疗组累积光密度值与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。

3.2对大鼠异位内膜VEGF和SPARC表达的影响

免疫组化结果显示，VEGF和SPARC在EMs模型大鼠异位内膜组织中主要定位于腺上皮和间质细胞中，为局灶性或弥散性分布，VEGF在血管内皮细胞的胞浆中亦有少许表达。模型组异位内膜中VEGF和SPARC阳性表达强烈，除中药低剂量组外，其余各治疗组累积光密度值与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。SPARC阳性细胞在模型组异位内膜中数量多且密集。各治疗组累积光密度值均明显低于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)。

3.3对大鼠在位和异位内膜VEGF和SPARC蛋白表达量的影响

Western blot检测结果显示，模型组在位和异位内膜VEGF和SPARC蛋白表达量高，中药中、高剂量组在位内膜VEGF蛋白表达量明显低于模型组(P<0.05)，米非司酮组及中药高剂量组在位内膜SPARC蛋白表达量与模型组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。用药后，大鼠异位内膜中VEGF和SPARC蛋白表达量均有不同程度的降低，中药高剂量组VEGF和SPARC蛋白表达量下降显著，与模型组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

表17各组大鼠在位和异位内膜VEGF和SPARC蛋白表达量的比较

注：*与模型组比较P<0.05，▲与空白组比较P<0.05。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种治疗子宫内膜异位症的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物由下列重量份的原料药制成：红藤12-18份、丹皮6-12份、丹参6-12份、米仁6-12份、牡蛎27-33份、延胡索17-23份、川楝子6-12份、续断6-12份、菟丝子12-18份、仙灵脾9-15份、巴戟天6-12份、路路通6-12份、紫石英12-18份、石楠叶3-9份、皂角刺9-15份、桑寄生12-18份、砂仁1-5份。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物由下列重量份的原料药制成：红藤14-16份、丹皮8-10份、丹参8-10份、米仁8-10份、牡蛎29-31份、延胡索19-21份、川楝子8-10份、续断8-10份、菟丝子14-16份、仙灵脾11-13份、巴戟天8-10份、路路通8-10份、紫石英14-16份、石楠叶5-7份、皂角刺11-13份、桑寄生14-16份、砂仁2-4份。

3.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物由下列重量份的原料药制成：红藤15份、丹皮9份、丹参9份、米仁9份、牡蛎30份、延胡索20份、川楝子9份、续断9份、菟丝子15份、仙灵脾12份、巴戟天9份、路路通9份、紫石英15份、石楠叶6份、皂角刺12份、桑寄生15份、砂仁3份。

4.权利要求1-3任一所述的中药组合物在制备治疗子宫内膜异位症药物中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物还包括药学上常规的辅料。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的药学上的常规辅料包括乳化剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、调味剂、着色剂或助溶剂。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物为口服制剂，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、汤剂、合剂、丸剂、口服液或糖浆剂。