CN109061015A - 检测烟草制品和/或烟用香精香料中苔黑醛类化合物的方法、试剂盒及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于检测分析领域，涉及检测烟草制品和/或烟用香精香料中苔黑醛类化合物的方法、试剂盒及其应用。本发明的检测方法包括对样品进行预处理，所述预处理包括：将乙酸乙酯、饱和食盐水与样品混合，得到混合物；将所述混合物固液分离，得到液相物。本发明方法检测的准确度高、重复性好。

Description

检测烟草制品和/或烟用香精香料中苔黑醛类化合物的方法、 试剂盒及其应用

技术领域

本发明属于检测分析领域，具体涉及一种检测烟草制品和/或烟用香精香料中苔黑醛类化合物的方法，还涉及一种检测烟草制品和/或烟用香精香料中苔黑醛类化合物的试剂盒及其应用。

背景技术

近年来，食品安全问题日益受到重视，虽然烟草不被直接食用，但很多国家把烟草列为食品类或准食品类，因此其安全性也同样备受关注。烟草的安全性问题一部分来自烟草自身热解燃烧所产生的焦油、一氧化碳、羰基化合物、亚硝胺等物质。此外，为了增强或改善烟草口味所添加的香精香料也可能带来安全性问题。FDA及欧盟对烟用添加剂的种类及在卷烟中最高用量已做了相应规定。因此，对烟用添加剂的定性定量检测对于烟草制品的安全性评价很有意义。

地衣类香料如树苔和橡苔的天然提取物具有独特的清香香韵，可调配素心兰、馥奇、熏衣草、百花、苔香等香精，应用于卷烟中，能掩盖烟草杂气和泥土气息，明显增加烟气浓度，并且能改善口腔和喉部的舒适感。然而，此类香料中的苔黑醛(Atranol，CAS 526-37-4)和氯代苔黑醛(Chloroatranol,CAS 57074-21-2)却是已被确认的致敏源。经重复性暴露测试，氯代苔黑醛引起过敏反应的量(level)为ppm级0.005％ (Contact Dermatitis,2003,49(4):180-184)。2017年1月5日，欧盟委员会发布G/TBT/N/EU/436通报世贸组织，消费者安全科学委员会 (SCCS/1459/11)研究发现，苔黑醛和氯代苔黑醛在化妆品中使用是不安全的，因此禁止以上物质用于化妆品。2017年8月2日，欧盟委员会发布(EU)2017/1410号法规，修订化妆品法规(EC)No 1223/2009的附录II“禁用物质清单”和附录III“限用物质清单”，并规定2019年8 月23日起不再允许添加苔黑醛或氯代苔黑醛的化妆品进入欧盟市场， 2021年8月23日起，添加这些物质的化妆品将不得在欧盟市场销售。

鉴于日趋严格的食品药品安全监管，为了保护烟草消费安全，有必要建立相应的检测手段，对烟草制品中苔黑醛类化合物的使用加以关注。现有技术中使用液相色谱法或衍生化-气相色谱法对化妆品中的苔黑醛类化合物进行测试。但是，化妆品的组成相对明确，而烟草制品的组成非常复杂，含成千上万种成分，如糖、生物碱、氨基酸、多酚、色素等等，并且烟草制品中所添加的香精香料含量极低。因此，烟草制品中的复杂成分很容易对苔黑醛类化合物的检测造成干扰。目前还未出现能准确测定烟草制品或烟用香精香料中苔黑醛类化合物含量的方法。

发明内容

本申请提供了一种检测烟草制品和/或烟用香精香料中苔黑醛类化合物的方法，该方法的准确度高、重复性好。在此基础上，本申请还提供了一种试剂盒及其在检测烟草制品和/或烟用香精香料中苔黑醛类化合物中的应用。

在一个方面，本申请提供了一种检测烟草制品和/或烟用香精香料中苔黑醛类化合物的方法，包括对样品进行预处理，所述预处理包括：将乙酸乙酯、饱和食盐水与样品混合，得到混合物；将所述混合物固液分离，得到液相物。

在某些实施方案中，所述苔黑醛类化合物选自苔黑醛和氯代苔黑醛。

在某些实施方案中，所述样品为烟草制品样品(例如卷烟样品，例如卷烟烟丝样品)或烟用香精香料样品。

在某些实施方案中，所述样品为烟草制品样品，样品质量：乙酸乙酯体积：饱和食盐水体积的比例为1:(10～40):(5～20)(g/mL/mL)，例如1:(20～40):(10～20)(g/mL/mL)，例如1:20:10(g/mL/mL)。

在某些实施方案中，所述样品为烟用香精香料样品，样品质量：乙酸乙酯体积：饱和食盐水体积的比例为0.2:(10～40):(5～20)(g/mL/mL)，例如0.2:(20～40):(10～20)(g/mL/mL)，例如0.2:20:10(g/mL/mL)。

在某些实施方案中，混合时间为1～60分钟，例如10分钟、20分钟、 30分钟、40分钟、50分钟或55分钟。

在某些实施方案中，混合在超声条件下进行。

在某些实施方案中，所述预处理还包括：从所述液相物中分离出有机相(例如分离出上层的有机相)。

任选地，所述预处理还包括：对分离出的有机相除水和/或除杂。

在某些实施方案中，所述样品为烟草制品样品，将混合物固液分离的方式为：将混合物过滤，得到滤液，再对滤液离心，收集液相物。优选地，离心转速为5000～8000rpm，例如6000rpm、6500rpm、7000rpm 或7500rpm。优选地，离心时间为5～15分钟，例如8分钟、10分钟、 12分钟或14分钟。

在某些实施方案中，所述样品为烟用香精香料样品，将混合物固液分离的方式为：对混合物离心，收集液相物。优选地，离心转速为 5000～8000rpm，例如6000rpm、6500rpm、7000rpm或7500rpm。优选地，离心时间为5～15分钟，例如8分钟、10分钟、12分钟或14分钟。

在某些实施方案中，分离之前，将所述液相物静置。

在某些实施方案中，对所述有机相除水的方式为使用干燥剂干燥。优选地，所述干燥剂为无水硫酸钠。

在某些实施方案中，对所述有机相除杂的方式为采用PTFE滤膜过滤。优选地，PTFE滤膜的孔径为0.1～0.8μm，例如0.45μm。

在某些实施方案中，所述方法还包括：采用气相色谱-质谱联用仪进行检测，得到检测结果；根据得到的检测结果定性或定量计算样品中的苔黑醛类化合物。

在某些实施方案中，检测时气相色谱的升温程序为：在55℃～65℃ (例如58℃、60℃或63℃)下保持1～3分钟(例如1.5分钟、2分钟或 2.5分钟)，然后以3℃/分钟～6℃/分钟(例如4℃/分钟或5℃/分钟)的速率升至215℃～225℃(例如216℃、218℃、220℃或223℃)，保持 1～3分钟(例如1.5分钟、2分钟或2.5分钟)，然后以17℃/分钟～25℃ /分钟(例如18℃/分钟、20℃/分钟、22℃/分钟或24℃/分钟)速率升温至295℃～305℃(例如297℃、300℃或302℃)，保持1～8分钟(例如 3分钟、5分钟或7分钟)。

在某些实施方案中，通过内标法定量。在某些实施方案中，内标物为乙酸苯乙酯。

在某些实施方案中，气相色谱的操作条件包括如下A至F中的一项或者多项：

A.色谱柱为石英毛细管柱(例如Agilent DB-17ms石英毛细管柱)；

B.色谱柱的规格为60m×0.25mm×0.25μm；

C.进样口温度为230℃～280℃，例如240℃、250℃、260℃或270℃；

D.进样量为0.5～6μL例如1μL、2μL、3μL、4μL或5μL；

E.载气流速为0.3mL/min～4mL/min，例如1mL/min、2mL/min 或3mL/min；

F.载体为氦气。

在某些实施方案中，质谱的操作条件包括如下a至n中的一项或者多项：

a.离子源为EI；

b.电子能为50～90eV，例如55eV、60eV、65eV、70eV、75eV、 80eV或85eV；

c.传输线温度为250℃～300℃，例如260℃、270℃、280℃或290℃；

d.离子源温度为200℃～260℃，例如210℃、220℃、230℃、240℃或250℃；

e.四级杆温度为120℃～180℃，例如130℃、140℃、150℃、160℃或170℃；

f.溶剂延迟时间为4～15分钟，例如5分钟、7分钟、9分钟、10 分钟、12分钟、13分钟或14分钟；

g.采用SCAN和SIM同时扫描；

h.质量扫描范围(m/z)为35～250；

i.苔黑醛的定量离子(m/z)为151；

j.苔黑醛的定性离子(m/z)为104、151和/或152；

k.氯代苔黑醛的定量离子(m/z)为185；

l.氯代苔黑醛的定性离子(m/z)为140、185和/或186；

m.乙酸苯乙酯的定量离子(m/z)为104；

n.乙酸苯乙酯的定性离子(m/z)为43、91和/或104。

在某些实施方案中，检测时气相色谱采用分流进样，分流比为 (8～13):1，优选为(9～11):1，例如10:1。

在某些实施方案中，所述苔黑醛类化合物选自苔黑醛和氯代苔黑醛，所述样品为卷烟烟丝样品或烟用香精香料样品；所述方法包括以下步骤：

(1)将乙酸乙酯、饱和食盐水与样品在超声条件下混合1～60分钟，得到混合物；将所述混合物固液分离，得到液相物；

优选地，所述样品为烟草制品样品，样品质量：乙酸乙酯体积：饱和食盐水体积的比例为1:(10～40):(5～20)(g/mL/mL)；优选地，将混合物固液分离的方式为：将混合物过滤，得到滤液，再对滤液以 5000～8000rpm的转速离心5～15分钟，收集液相物；

优选地，所述样品为烟用香精香料样品，样品质量：乙酸乙酯体积：饱和食盐水体积的比例为0.2:(10～40):(5～20)(g/mL/mL)；优选地，将混合物固液分离的方式为：对混合物以5000～8000rpm的转速离心5～15分钟，收集液相物；

(2)将步骤(1)得到的液相物静置，并从中分离出有机相；

(3)对步骤(2)得到的有机相使用干燥剂进行除水，并采用PTFE 滤膜过滤除杂，得到待测液；

(4)采用气相色谱-质谱联用仪检测步骤(3)得到的待测液，得到检测结果；

其中，气相色谱的升温程序为：在55℃～65℃下保持1～3分钟，然后以3℃/分钟～6℃/分钟的速率升至215℃～225℃，保持1～3分钟，然后以17℃/分钟～25℃/分钟速率升温至295℃～305℃，保持1～8分钟；

气相色谱采用Agilent DB-17ms石英毛细管柱，规格为60m× 0.25mm×0.25μm；载气为氦气，载气流速为0.3mL/min～4mL/min；进样口温度为230℃～280℃；进样量为0.5～6μL；分流进样，分流比为 (8～13):1；

质谱采用EI离子源，电子能为50～90eV；传输线温度为250℃～300℃；离子源温度为200℃～260℃；四级杆温度为120℃～180℃；溶剂延迟时间为4～15分钟；采用SCAN和SIM同时扫描；质量扫描范围(m/z) 为35～250；苔黑醛的定量离子(m/z)为151；苔黑醛的定性离子(m/z) 为104、151和/或152；氯代苔黑醛的定量离子(m/z)为185；氯代苔黑醛的定性离子(m/z)为140、185和/或186；乙酸苯乙酯的定量离子(m/z) 为104；乙酸苯乙酯的定性离子(m/z)为43、91和/或104；

(5)根据步骤(4)得到的检测结果定性或定量计算样品中的苔黑醛类化合物；其中，通过内标法定量，内标物为乙酸苯乙酯。

在某些实施方案中，本发明的方法可以按照如下过程进行：

1、标准溶液的配制

称取乙酸苯乙酯的标准品，加入乙酸乙酯定容，配成内标储备溶液。称取苔黑醛标准品，加入乙酸乙酯定容，配成标准储备溶液。移取系列体积标准储备溶液和适量内标储备溶液，配制成系列浓度标准溶液。

2、样品前处理

在萃取溶剂乙酸乙酯中加入适量的内标储备溶液，得到内标萃取溶液。

向一定质量的样品中加入内标萃取溶液和饱和食盐水，混合溶液超声后过滤。滤液静置后离心分层，移除水相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤得到待测溶液。

3、样品的定性检测

绘制样品的GC-MS总离子流图，通过标准品或色谱峰谱图检索，确定待测组分的保留时间，以及待测组分的定性离子和定量离子。

4、样品的定量检测

4.1绘制标准工作曲线：将步骤1中的标准溶液进行GC-MS选择离子测定，以苔黑醛与内标的定量离子峰面积之比为纵坐标，以苔黑醛与内标的质量浓度之比为横坐标，绘制标准工作曲线，得到线性回归方程。

4.2样品的测定：将步骤2中的待测溶液进行GC-MS选择离子测定，将获得的待测溶液中目标成分与内标的定量离子峰面积比代入4.1中的线性回归方程，计算得到目标成分的质量浓度，进而换算得到在样品中的苔黑醛类化合物含量。

在另一个方面，本申请提供了一种试剂盒，包含乙酸乙酯、饱和食盐水、干燥剂、PTFE滤膜、内标物(例如乙酸苯乙酯)和石英毛细管柱。

在某些实施方案中，所述试剂盒的特征在于如下1)至4)中的一项或者多项：

1)干燥剂为无水硫酸钠；

2)PTFE滤膜孔径为0.1～0.8μm，例如0.45μm；

3)所述石英毛细管柱为Agilent DB-17ms石英毛细管柱；

4)所述石英毛细管柱的规格为60m×0.25mm×0.25μm。

本申请还提供了本发明的试剂盒在检测烟草制品和/或烟用香精香料中苔黑醛类化合物中的应用。

在某些实施方案中，所述苔黑醛类化合物选自苔黑醛和氯代苔黑醛。

在某些实施方案中，所述烟草制品为卷烟或卷烟烟丝。

在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所涉及的实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。

术语“烟草制品”是指用烟叶制造而成的嗜好性商品。根据不同类型烟叶特点，应用不同加工制造方法，生产出种类繁多的烟草制品，以满足不同消费者的嗜好要求。

术语“饱和食盐水”是指一定温度下，一定剂量水里不能继续溶解食盐所形成的饱和溶液。

术语“分流比”是指毛细管气相色谱分析中，进样器出口处进入色谱柱和放空两部份气化样品的流量之比。

术语“烟用香精香料”涵盖香精和香料两类。其中，香料又称香原料，是一种能被嗅感嗅出的气味或被味感品出香味的物质，一般作为调制香精的原料。香料可分为天然香料、单离香料和合成香料等。香精是由两种或两种以上的香料按一定比例混合调配出来的混合物，也称为调和香料。

术语“超声”是指频率高于20000赫兹的声波。

术语“过滤”是指推动力或者其他外力作用下悬浮液中的液体透过介质，固体颗粒及其他物质被过滤介质截留，从而使固体及其他物质与液体分离的操作。

术语“内标物”是指采用内标法定量分析时，加入到已知量试样中的已知量标准物质。

术语“色谱柱”是指装填有固定相用以分离混合组分的柱管。

术语“离子源”是指质谱分析粒子加速器中，使样品分子发生离解产生快速运动的离子的部件。

术语“试剂盒”是指用于盛放所需要的化学试剂及实验室用品的盒子。

有益效果

1.本发明首次提供采用气相色谱-质谱联用法检测烟草制品和烟用香精香料中的苔黑醛类化合物的方法，对烟草制品的质量控制和产品安全性监督提供必要的技术支持。

2.本发明使用直接溶剂提取的方式，避免了复杂前处理过程所带来的烟草中微量成分的损失，同时大大提高了检测效率；采用选择离子法进行分析，避免了烟草复杂基质的干扰。

3.本发明的检测方法准确度高、重复性好，能够满足实际烟草制品和烟用香精香料检测的需求。

下面将结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是，本领域技术人员将理解，下列附图和实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的范围的限定。根据附图和优选实施方案的下列详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得显然。

附图说明

图1为本申请实施例一中苔黑醛标准工作曲线溶液(2.0μg/mL)的总离子流色谱图。

图2为本申请实施例一中树苔提取物溶液的总离子流色谱图。

图3为本申请实施例一中苔黑醛的质谱图。

图4为本申请实施例一中氯代苔黑醛的质谱图。

图5为本申请实施例一中苔黑醛的标准工作曲线。

图6为本申请实施例二中烟用香精测试溶液的选择离子色谱图。

图7为本申请实施例三中卷烟烟丝测试溶液的选择离子色谱图。

图8为本申请实施例四中添加含苔黑醛香料的烟丝的测试溶液的选择离子色谱图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。

材料：

苔黑醛标准品：Sigma-Aldrich公司，纯度≥97％

乙酸苯乙酯标准品：JKChemical公司，纯度98％

树苔提取物：广州日化化工有限公司(只含有苔黑醛和氯代苔黑醛两个苔黑醛类化合物)

烟用香精：福建中烟工业有限责任公司

卷烟烟丝：福建中烟工业有限责任公司

实施例一苔黑醛类化合物定性定量方法的建立

将10mg苔黑醛标准品溶于乙酸乙酯配制成浓度200μg/mL的标准储备液。将220mg乙酸苯乙酯标准品溶于乙酸乙酯配制成浓度2200 μg/mL的内标储备液。移取一定体积的标准储备液和内标储备液，用乙酸乙酯配制成浓度分别为0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0和20.0μg/mL 共7个浓度的标准工作曲线溶液，内标浓度2.2μg/mL。

取0.01g的树苔提取物用含内标物2.2μg/mL的乙酸乙酯溶解，用 0.45μm PTFE滤膜过滤后得到待测的树苔提取物溶液。

使用安捷伦气相色谱-质谱联用仪(Agilent 7890A GC–5975C MSD) 进行检测。

色谱条件：色谱柱：Agilent DB-17ms石英毛细管柱(60m×0.25mm ×0.25μm)；升温程序：60℃保持2min，先以4℃/min升温至220℃，保持2min，再以20℃/min升温至300℃，保持5min；载气(He) 流速1.0mL/min，进样口温度250℃，进样量1μL；分流进样，分流比10:1。

质谱条件：离子源：EI；电子能：70eV；传输线温度：280℃；离子源温度：230℃；四级杆温度150℃；溶剂延迟：10min；采用 SCAN和SIM同时扫描，质量扫描范围m/z 35–250。

浓度为2.0μg/mL的标准工作曲线溶液的总离子流色谱图如图1所示；树苔提取物溶液的总离子流色谱图如图2所示；苔黑醛和氯代苔黑醛的质谱分别如图3和图4所示。由此确定苔黑醛和氯代苔黑醛的选择离子参数如表1所示。

表1苔黑醛、氯代苔黑醛和内标物的选择离子参数

以苔黑醛与内标物的选择离子峰面积之比为纵坐标，与对应的苔黑醛与内标物的质量浓度之比为横坐标作图，绘制标准工作曲线(如图5 所示)，求得回归方程为y＝0.01313x²+0.02088x–0.002307，r²＝1.000。

由于氯代苔黑醛的结构与苔黑醛相近，性质也接近，保留时间也相近，因此参照苔黑醛的标准工作曲线进行定量。

实施例二烟用香精中苔黑醛类化合物的检测

称取待测烟用香精样品0.20g，置于50mL锥形瓶中，加20mL含内标物2.2g/mL的乙酸乙酯萃取液和10mL饱和食盐水，超声提取20 min后静置。将超声后的混合物以6000rpm转速离心10min，移除水相，有机相用无水硫酸钠干燥后，用0.45μm PTFE滤膜过滤得到待测溶液，按照实施例一中所建立的方法进行定量分析，图6为选择离子色谱图。如图所示，本实施例的烟用香精样品中没有检测到苔黑醛和氯代苔黑醛。

实施例三卷烟烟丝中苔黑醛类化合物的检测

称取待测卷烟烟丝样品1.0g，置于50mL锥形瓶中，加20mL含内标物2.2g/mL的乙酸乙酯萃取液和10mL饱和食盐水，超声提取20 min后静置并滤除去烟丝。将滤液以6000rpm转速离心10min，移除水相，有机相用无水硫酸钠干燥后，用0.45μm PTFE滤膜过滤得到待测溶液，按照实施例一中所建立的方法进行定量分析，图7为选择离子色谱图。如图所示，本实施例的卷烟烟丝样品中没有检测到苔黑醛和氯代苔黑醛。

实施例四添加含苔黑醛香料的卷烟烟丝中苔黑醛类化合物的检测

称取约0.01g树苔提取物，用1mL乙醇溶解，均匀喷洒于1.0g卷烟烟丝上，然后将卷烟烟丝置于50mL锥形瓶中。加20mL含内标物 2.2g/mL的乙酸乙酯萃取液和10mL饱和食盐水，超声提取20min后静置并滤除去烟丝。将滤液以6000rpm转速离心10min，移除水相，有机相用无水硫酸钠干燥后，用0.45μm PTFE滤膜过滤得到待测溶液。按照实施例一中所建立的方法进行定量分析，得到待测溶液中苔黑醛类化合物的质量浓度。图8为溶液的选择离子色谱图。

将质量浓度按照以下公式计算加香烟丝中苔黑醛类化合物含量：

式中：

W(苔黑醛或氯代苔黑醛)-烟丝中苔黑醛或氯代苔黑醛的质量分数，mg/g；

c-待测溶液中苔黑醛或氯代苔黑醛的质量浓度，μg/mL；

V-萃取溶液体积，为20mL；

m-样品质量，g。

经计算，本实施例的烟丝样品中，苔黑醛的实际测得值为0.082mg/g，氯代苔黑醛的实际测得值为0.059mg/g。

实施例五方法的检出限、回收率和精密度

按照加标样品的3倍信噪比计算，本方法对苔黑醛的检出限为15.1 ng/mL。

采用标准加入法，在烟用香精和卷烟烟丝中添加3个不同水平浓度的苔黑醛进行回收率实验，每个加标水平重复测定6次。回收率和精密度参见表2。检测方法参照实施例二至实施例四。

表2烟用香精和卷烟烟丝中苔黑醛的回收率和重复性(n＝6)

本发明的方法对烟用香精和卷烟烟丝中苔黑醛的检出限低至15.1 ng/mL，加标回收率在90％以上，相对标准偏差(RSD)不超过6％，能够满足实际烟草样品中苔黑醛类化合物的检测要求。

尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，但本领域技术人员将理解：根据已经公开的所有教导，可以对细节进行各种修改和变动，并且这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims (10)

1.一种检测烟草制品和/或烟用香精香料中苔黑醛类化合物的方法，包括对样品进行预处理，所述预处理包括：将乙酸乙酯、饱和食盐水与样品混合，得到混合物；将所述混合物固液分离，得到液相物。

优选地，所述苔黑醛类化合物选自苔黑醛和氯代苔黑醛；

优选地，所述样品为烟草制品样品(例如卷烟样品，例如卷烟烟丝样品)或烟用香精香料样品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于如下1)至4)中的一项或者多项：

1)所述样品为烟草制品样品，所述预处理中，样品质量：乙酸乙酯体积：饱和食盐水体积的比例为1:(10～40):(5～20)(g/mL/mL)；

2)所述样品为烟用香精香料样品，所述预处理中，样品质量：乙酸乙酯体积：饱和食盐水体积的比例为0.2:(10～40):(5～20)(g/mL/mL)；

3)所述预处理中，混合时间为1～60分钟；

4)所述预处理中，混合在超声条件下进行。

3.根据权利要求1或2所述的方法，所述预处理还包括：从所述液相物中分离出有机相；

任选地，所述预处理还包括：对分离出的有机相除水和/或除杂；

优选地，所述方法的特征在于如下1)至4)中的一项或者多项：

1)所述样品为烟草制品样品，所述预处理中，将混合物固液分离的方式为：将混合物过滤，得到滤液，再对滤液离心，收集液相物；优选地，离心转速为5000～8000rpm；优选地，离心时间为5～15分钟；

2)所述样品为烟用香精香料样品，所述预处理中，将混合物固液分离的方式为：对混合物离心，收集液相物；优选地，离心转速为5000～8000rpm；优选地，离心时间为5～15分钟；

3)分离之前，将所述液相物静置；

4)对所述有机相除水的方式为使用干燥剂干燥；优选地，所述干燥剂为无水硫酸钠；

5)对所述有机相除杂的方式为采用PTFE滤膜过滤；优选地，所述PTFE滤膜的孔径为0.1～0.8μm。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，所述方法还包括：采用气相色谱-质谱联用仪进行检测，得到检测结果；根据得到的检测结果定性或定量计算样品中的苔黑醛类化合物；

优选地，检测时气相色谱的升温程序为：在55℃～65℃下保持1～3分钟，然后以3℃/分钟～6℃/分钟的速率升至215℃～225℃，保持1～3分钟，然后以17℃/分钟～25℃/分钟速率升温至295℃～305℃，保持1～8分钟；

优选地，通过内标法定量；优选地，内标物为乙酸苯乙酯。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，气相色谱的操作条件包括如下A至F中的一项或者多项：

A.色谱柱为Agilent DB-17ms石英毛细管柱；

B.色谱柱的规格为60m×0.25mm×0.25μm；

C.进样口温度为230℃～280℃；

D.进样量为0.5～6μL；

E.载气流速为0.3mL/min～4mL/min；

F.载体为氦气。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其中，质谱的操作条件包括如下a至n中的一项或者多项：

a.离子源为EI；

b.电子能为50～90eV；

c.传输线温度为250℃～300℃；

d.离子源温度为200℃～260℃；

e.四级杆温度为120℃～180℃；

f.溶剂延迟时间为4～15分钟；

g.采用SCAN和SIM同时扫描；

h.质量扫描范围(m/z)为35～250；

i.苔黑醛的定量离子(m/z)为151；

j.苔黑醛的定性离子(m/z)为104、151和/或152；

k.氯代苔黑醛的定量离子(m/z)为185；

l.氯代苔黑醛的定性离子(m/z)为140、185和/或186；

m.乙酸苯乙酯的定量离子(m/z)为104；

n.乙酸苯乙酯的定性离子(m/z)为43、91和/或104。

7.根据权利要求4-6任一项所述的方法，其中，检测时气相色谱采用分流进样，分流比为(8～13):1，优选为(9～11):1。

8.根据权利要求1所述的方法，所述苔黑醛类化合物选自苔黑醛和氯代苔黑醛，所述样品为卷烟烟丝样品或烟用香精香料样品；所述方法包括以下步骤：

(1)将乙酸乙酯、饱和食盐水与样品在超声条件下混合1～60分钟，得到混合物；将所述混合物固液分离，得到液相物；

优选地，所述样品为烟草制品样品，样品质量：乙酸乙酯体积：饱和食盐水体积的比例为1:(10～40):(5～20)(g/mL/mL)；优选地，将混合物固液分离的方式为：将混合物过滤，得到滤液，再对滤液以5000～8000rpm的转速离心5～15分钟，收集液相物；

优选地，所述样品为烟用香精香料样品，样品质量：乙酸乙酯体积：饱和食盐水体积的比例为0.2:(10～40):(5～20)(g/mL/mL)；优选地，将混合物固液分离的方式为：对混合物以5000～8000rpm的转速离心5～15分钟，收集液相物；

(2)将步骤(1)得到的液相物静置，并从中分离出有机相；

(3)对步骤(2)得到的有机相使用干燥剂进行除水，并采用PTFE滤膜过滤除杂，得到待测液；

(4)采用气相色谱-质谱联用仪检测步骤(3)得到的待测液，得到检测结果；

其中，气相色谱的升温程序为：在55℃～65℃下保持1～3分钟，然后以3℃/分钟～6℃/分钟的速率升至215℃～225℃，保持1～3分钟，然后以17℃/分钟～25℃/分钟速率升温至295℃～305℃，保持1～8分钟；

气相色谱采用Agilent DB-17ms石英毛细管柱，规格为60m×0.25mm×0.25μm；载气为氦气，载气流速为0.3mL/min～4mL/min；进样口温度为230℃～280℃；进样量为0.5～6μL；分流进样，分流比为(8～13):1；

质谱采用EI离子源，电子能为50～90eV；传输线温度为250℃～300℃；离子源温度为200℃～260℃；四级杆温度为120℃～180℃；溶剂延迟时间为4～15分钟；采用SCAN和SIM同时扫描；质量扫描范围(m/z)为35～250；苔黑醛的定量离子(m/z)为151；苔黑醛的定性离子(m/z)为104、151和/或152；氯代苔黑醛的定量离子(m/z)为185；氯代苔黑醛的定性离子(m/z)为140、185和/或186；乙酸苯乙酯的定量离子(m/z)为104；乙酸苯乙酯的定性离子(m/z)为43、91和/或104；

(5)根据步骤(4)得到的检测结果定性或定量计算样品中的苔黑醛类化合物；其中，通过内标法定量，内标物为乙酸苯乙酯。

9.一种试剂盒，包含乙酸乙酯、饱和食盐水、干燥剂、PTFE滤膜、内标物(例如乙酸苯乙酯)和石英毛细管柱；

优选地，所述试剂盒的特征在于如下1)至4)中的一项或者多项：

1)干燥剂为无水硫酸钠；

2)PTFE滤膜孔径为0.1～0.8μm；

3)所述石英毛细管柱为Agilent DB-17ms石英毛细管柱；

4)所述石英毛细管柱的规格为60m×0.25mm×0.25μm。

10.权利要求9所述的试剂盒在检测烟草制品和/或烟用香精香料中苔黑醛类化合物中的应用；

优选地，所述苔黑醛类化合物选自苔黑醛和氯代苔黑醛；

优选地，所述烟草制品为卷烟或卷烟烟丝。