CN109055567A - 一种利用基因表达情况快速检测海水或海洋沉积物中重金属的方法 - Google Patents

一种利用基因表达情况快速检测海水或海洋沉积物中重金属的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109055567A
CN109055567A CN201810776465.4A CN201810776465A CN109055567A CN 109055567 A CN109055567 A CN 109055567A CN 201810776465 A CN201810776465 A CN 201810776465A CN 109055567 A CN109055567 A CN 109055567A
Authority
CN
China
Prior art keywords
detection
heavy metal
hsc70
seawater
zhu shi
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810776465.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109055567B (zh
Inventor
黄韧
苗宗余
蔡磊
李建军
魏远征
余露军
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute
Original Assignee
Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute filed Critical Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute
Priority to CN201810776465.4A priority Critical patent/CN109055567B/zh
Publication of CN109055567A publication Critical patent/CN109055567A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109055567B publication Critical patent/CN109055567B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种利用基因表达变化快速检测海水或海洋沉积物中重金属的方法。本发明检测方法是以诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因作为生物标志物，检测海水或海洋沉积物中的重金属变化。本发明方法首次使用标准化的生物作为实验动物并通过筛选出一个新型的生物标志物用于快速检测重金属，具有可信度高、重复性好、无本底污染风险、检测周期短、灵敏度高且成本低等优点，对当前海洋重金属污染检测技术起到重大的提升作用，具有良好的推广应用前景。

Description

一种利用基因表达情况快速检测海水或海洋沉积物中重金属 的方法
技术领域
本发明属于海洋重金属生物检测技术领域，更具体地说，本发明涉及一种应用诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因快速检测海水或海洋沉积物中重金属污染的方法。
背景技术
重金属污染对生态系统的影响是当今世界上普遍关注的环境问题。Cu2+，Cd2+，Hg2 +， Pb2+，Fe2+和Zn2+等是河口、港湾和近岸海域的重要污染物，或直接危害海洋生物的生存，或积累在海洋生物体内影响其利用价值。为了防止污染的加剧，需要在污染早期就能对污染进行预警预报，同时采取必要的措施，防止污染恶化。利用生物标记物在污染早期对环境作出预警预报，是被环境科学家认为重要有效的方法之一。HSC70分子对重金属污染物具有快速反应性及高灵敏性，可开发为早期污染综合预警分子。
目前，基于传统理化的检测方法较难反映毒物对生物的综合效应，基于致死效应的生物毒性检测方法存在周期长、灵敏度不高等问题。
发明内容
为了解决现有海洋重金属检测中存在的周期长、灵敏度不高等问题，提供一种海水或海洋沉积物中重金属的快速检测方法，以实现重金属的快速、灵敏、准确检测。
本发明的目的在于提供一种诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因在监控、检测或辅助检测海水或海洋沉积物中重金属污染程度中的应用。
本发明所采取的技术方案是：
诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因在监控、检测或辅助检测海水或海洋沉积物中重金属污染程度中的应用，所述重金属为Cu、Cd、Hg和/或Pb。
定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的试剂在检测或辅助检测海水或海洋沉积物中重金属污染程度中的应用，所述重金属为Cu、Cd、Hg和/或Pb。
进一步的，所述定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的试剂包括定量检测诸氏鲻虾虎鱼 HSC70基因的引物或/和探针。
进一步的，所述定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的引物如SEQ ID NO:1～2所示。
一种监控、检测或辅助检测海水或海洋沉积物中重金属污染程度的方法，检测生存在该环境中诸氏鲻虾虎鱼的HSC70基因表达量，若HSC70基因表达上调，提示该海水或海洋沉积物中存在重金属污染，且重金属污染程度与HSC70基因表达上调程度呈正比；所述重金属为Cu、Cd、Hg和/或Pb。
进一步的，检测HSC70基因表达量所用的试剂为定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的引物或/和探针。
进一步的，所述定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的引物如SEQ ID NO:1～2所示。
一种监控、检测或辅助检测海水或海洋沉积物中重金属污染程度的产品，该产品中含有定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的试剂；所述重金属为Cu、Cd、Hg和/或Pb。
进一步的，所述定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的试剂为定量检测诸氏鲻虾虎鱼 HSC70基因的引物或/和探针。
进一步的，所述定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的引物如SEQ ID NO:1～2所示。
本发明的有益效果是：
(1)本发明方法使用的诸氏鲻虾虎鱼为我国本土海水鱼类，现已完成实验动物化研究，标准化的诸氏鲻虾虎鱼具有遗传背景清晰、质量稳定可靠的优点，用于重金属毒性测试时的实验结果可信度高、重复性好，且无本底污染的风险，便于大规模推广应用；
(2)本发明首次筛选出了对海洋重金属污染敏感的新型生物标志物-诸氏鲻虾虎鱼 HSC70基因；当超微量污染物进入鱼体内后，不会导致鱼死亡，但可在6h内迅速诱导鱼体内解毒、免疫和代谢等相关基因的表达；本发明利用对HSC70基因的检测，可大大缩短检测周期(6h内)、增加检测灵敏度(超微量)并降低检测成本，对当前海洋重金属Cu2+，Cd2+， Hg2+和Pb2+污染程度的监控、检测或辅助检测起到重大的提升和补充作用。
(3)本发明方法首次使用标准化的生物作为实验动物并通过筛选出一个新型的生物标志物用于快速检测重金属，具有可信度高、重复性好、无本底污染风险、检测周期短、灵敏度高且成本低等优点，对当前海洋重金属污染检测技术起到重大的提升作用，具有良好的推广应用前景。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的实施例仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明，实施例的参数、比例等可因地制宜做出选择而对结果并无实质性影响。
实施例1
1、实验生物
采用诸氏鲻虾虎鱼成鱼作为实验生物，为120日龄个体。实验鱼于循环水养殖系统中养殖，水温26℃，盐度30±1‰，每天投喂卤虫无节幼体和配合饲料各1次，每周换水1/2。实验开始前24h挑选实验鱼于静水中暂养，暂养期间温度控制在26±0.5℃，盐度30±1‰，溶解氧在60％饱和度以上。
2、样品制备
试验用水为无污染天然海水，盐度30±1‰。按照表1.1，利用金属离子标准品分别配制 1个对照组和3浓度组，每组各设3个重复。
3、毒性试验
试验容器为2L玻璃烧杯，试验液1L，每杯放置实验鱼3尾。试验时间为6h，期间不投喂，不换水。试验期间环境因子同暂养条件。
表1.1毒性试验各组金属离子浓度
组别 对照组 浓度1 浓度2 浓度3
Cu<sup>2+</sup> 0μg/L 50μg/L 100μg/L 300μg/L
Cd<sup>2+</sup> 0μg/L 5mg/L 10mg/L 30mg/L
Hg<sup>2+</sup> 0μg/L 10μg/L 50μg/L 100μg/L
Pb<sup>2+</sup> 0mg/L 50mg/L 100mg/L 300mg/L
Fe<sup>2+</sup> 0μg/L 50μg/L 100μg/L 300μg/L
Zn<sup>2+</sup> 0μg/L 50μg/L 100μg/L 300μg/L
4、总RNA提取
试验期间实验鱼无死亡。试验结束后分别取每组实验鱼新鲜肝脏适量，每个平行组3尾鱼的肝脏样本混合，合计72个样本。按照常规方法提取总RNA，检测浓度和纯度，用RNAfree水将各组RNA浓度调为一致。
5、反转录
利用反转录试剂对72个样本总RNA分别进行反转录。
6、荧光定量PCR
以actin为内参基因，首链cDNA为模板，利用SYBR荧光定量PCR法检测HSC70基因(HSC70基因的cDNA序列如SEQ ID NO:5所示)在对照组和试验组中表达量。
其中，内参β-actin、HSC70基因的特异性引物为：
HSC70上游引物：5'-CCACCATTCCTACCAAGCAGACC-3'(SEQ ID NO:1)；
HSC70下游引物：5'-TGGCACGCTCACCTTCATACA-3'(SEQ ID NO:2)；
内参β-actin上游引物：5'-TCCACGAAACCACCTACAACAG-3'(SEQ ID NO:3)；
内参β-actin下游引物：5'-CAGAGTATTTACGCTCAGGTGGG-3'(SEQ ID NO:4)。
(1)PCR扩增
采用含有SYBR green染色的PCR试剂，在ABI 7500荧光定量仪进行PCR扩增，PCR扩增程序为：95℃预变性30s；95℃ 5s，60℃ 34s；40个循环。
7、相对表达量计算
采用2-△△Ct法计算HSC70和β-actin基因在各浓度组的相对表达量，数据见表1.2。
表1.2基因相对表达量
8、结果判定
上述表1.2中，HSC70基因相对表达量与Cu2+，Cd2+，Hg2+和Pb2+重金属呈正相关，与Fe2+和Zn2+无必然关系。说明受Cu2+，Cd2+，Hg2+和Pb2+重金属污染的海水或沉积物会显著促进诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的上调表达，说明诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的表达情况可用于监控、检测或辅助检测海水或海洋沉积物中重金属Cu2+，Cd2+，Hg2+和Pb2+的污染程度。
实施例2
1、实验生物
采用诸氏鲻虾虎鱼成鱼作为实验生物，为120日龄个体。实验鱼于循环水养殖系统中养殖，水温26℃，盐度30‰，每天投喂卤虫无节幼体和配合饲料各1次，每周换水1/2。实验开始前24h挑选实验鱼于静水中暂养，暂养期间温度控制在26±0.5℃，盐度30±1‰，溶解氧在60％饱和度以上。
2、样品制备
试验样品采集自南海不同海域的已知受不同重金属污染的海水，分别为：海水1号(Cu2+污染)、海水2号(Cd2+污染)、海水3号(Hg2+污染)、海水4号(Pb2+污染)、海水5号(Fe2+污染)和海水6号(Zn2+污染)，括号内的金属表示海水受重金属污染的主要种类，对照组为无污染的天然海水。配制1个对照组和1浓度组，每组各设3个重复(见表2.1)。
3、毒性试验
试验容器为2L玻璃烧杯，试验液1L，每杯放置实验鱼3尾。试验持续时间为6h，期间不投喂，不换水，试验期间环境因子同暂养条件。
4、总RNA提取
试验期间实验鱼无死亡。试验结束后分别取每组实验鱼新鲜肝脏适量，每个平行组3尾鱼的肝脏样本混合，合计36个样本。按照常规方法提取总RNA，检测浓度和纯度，用RNAfree水将各组RNA浓度调为一致。
5、反转录
利用反转录试剂对36个样本总RNA分别进行反转录。
6、荧光定量PCR
以β-actin为内参基因，首链cDNA为模板，利用SYBR荧光定量PCR法检测HSC70基因在对照组和试验组中表达量。
其中，内参β-actin和HSC70基因的特异性引物为：
HSC70上游引物：如SEQ ID NO:1所示；
HSC70下游引物：如SEQ ID NO:2所示；
β-actin上游引物：如SEQ ID NO:3所示；
β-actin下游引物：如SEQ ID NO:4所示。
(1)PCR扩增
采用含有SYBR green染色的PCR试剂，在ABI 7500荧光定量仪进行PCR扩增，PCR扩增程序为：95℃预变性30s；95℃ 5s，68℃ 34s；40个循环。
7、相对表达量计算
采用2-△△Ct法计算HSC70和β-actin基因在各浓度组的相对表达量，数据见表2.1。
表2.1基因相对表达量
8、结果判定
上述表1.2中，HSC70基因相对表达量与Cu2+，Cd2+，Hg2+和Pb2+重金属呈正相关，与Fe2+和Zn2+无必然关系。受Cu2+，Cd2+，Hg2+和Pb2+重金属污染的海水会显著促进HSC70 基因上调表达；说明诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的表达情况可用于监控、检测或辅助检测海水中重金属Cu2+，Cd2+，Hg2+和Pb2+的污染程度。
实施例3
1、实验生物
采用诸氏鲻虾虎鱼成鱼作为实验生物，为120日龄个体。实验鱼于循环水养殖系统中养殖，水温26℃，盐度30±1‰，每天投喂卤虫无节幼体和配合饲料各1次，每周换水1/2。实验开始前24h挑选实验鱼于静水中暂养，暂养期间温度控制在26±0.5℃，盐度30±1‰，溶解氧在60％饱和度以上。
2、样品制备
试验样品采集自南海不同海域的已知受不同重金属污染的海底沉积物，分别为：沉积物 1号(Cu2+污染)、沉积物2号(Cd2+污染)、沉积物3号(Hg2+污染)、沉积物4号(Pb2+污染)、沉积物5号(Fe2+污染)和沉积物6号(Zn2+污染)，括号内的金属表示沉积物中重金属污染的主要种类，对照组为无污染的天然海水。配制1个对照组和1浓度组，每组各设3 个重复(见表3.1)。
3、毒性试验
试验容器为2L玻璃烧杯，试验液1L，每杯放置实验鱼3尾。试验时间为6h，期间不投喂，不换水，试验期间环境因子同暂养条件。
4、总RNA提取
试验期间实验鱼无死亡。试验结束后分别取每组实验鱼新鲜肝脏适量，每个平行组3尾鱼的肝脏样本混合，合计36个样本。按照常规方法提取总RNA，检测浓度和纯度，用RNAfree水将各组RNA浓度调为一致。
5、反转录
利用反转录试剂对36个样本总RNA分别进行反转录。
6、荧光定量PCR
以β-actin为内参基因，首链cDNA为模板，利用SYBR荧光定量PCR法检测HSC70基因在对照组和试验组中表达量。
其中，HSC70和β-actin基因的特异性引物为：
HSC70上游引物：SEQ ID NO:1；
HSC70下游引物：SEQ ID NO:2；
内参β-actin上游引物：SEQ ID NO:3；
内参β-actin下游引物：SEQ ID NO:4。
(1)PCR扩增
采用含有SYBR green染色的PCR试剂，在ABI 7500荧光定量仪进行PCR扩增，PCR扩增程序为：95℃预变性30s；95℃ 5s，60℃ 34s；40个循环。
7、相对表达量计算
采用2-△△Ct法计算HSC70和β-actin基因在各浓度组的相对表达量，数据见表3.1。
表3.1基因相对表达量
8、结果判定
HSC70基因相对表达量与Cu2+，Cd2+，Hg2+和Pb2+重金属呈正相关，与Fe2+和Zn2+无必然关系。受Cu2+，Cd2+，Hg2+和Pb2+重金属污染的沉积物会显著促进HSC70基因上调表达。说明诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的表达情况可用于监控、检测或辅助检测海洋沉积物中重金属Cu2+，Cd2+，Hg2+和Pb2+的污染程度。
上述结果说明本发明首次筛选了出对海洋重金属污染敏感的新型生物标志物——诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因；当超微量污染物进入鱼体内后，虽短期不会导致鱼死亡，但可在6h内迅速诱导鱼体内解毒、免疫和代谢等相关基因的表达；本发明筛选的诸氏鲻虾虎鱼HSC70作为基因表达层面的生物标志物，可大大缩短检测周期(6h内)、增加检测灵敏度(超微量) 并降低检测成本，对当前海洋重金属检测技术起到重大的提升和补充作用。另外，本发明方法使用的诸氏鲻虾虎鱼为我国本土海水鱼类，现已完成实验动物化研究，标准化的诸氏鲻虾虎鱼具有遗传背景清晰、质量稳定可靠的优点，用于重金属毒性测试时的实验结果可信度高、重复性好，且无本底污染的风险，便于大规模推广应用；
根据上述说明书的揭示和教导，本发明所属领域的技术人员还可以对上述实施方式进行适当的变更和修改。因此，本发明并不局限于上面揭示和描述的具体实施方式，对本发明的一些修改和变更也应当落入本发明的权利要求的保护范围内。此外，尽管本说明书中使用了一些特定的术语，但这些术语只是为了方便说明，并不对本发明构成任何限制。
SEQUENCE LISTING
&lt;110&gt; 广东省实验动物监测所
&lt;120&gt; 一种利用基因表达情况快速检测海水或海洋沉积物中重金属的方法
&lt;130&gt;
&lt;160&gt; 5
&lt;170&gt; PatentIn version 3.5
&lt;210&gt; 1
&lt;211&gt; 23
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;400&gt; 1
ccaccattcc taccaagcag acc 23
&lt;210&gt; 2
&lt;211&gt; 21
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;400&gt; 2
tggcacgctc accttcatac a 21
&lt;210&gt; 3
&lt;211&gt; 22
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;400&gt; 3
tccacgaaac cacctacaac ag 22
&lt;210&gt; 4
&lt;211&gt; 23
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;400&gt; 4
cagagtattt acgctcaggt ggg 23
&lt;210&gt; 5
&lt;211&gt; 2290
&lt;212&gt; DNA
&lt;213&gt; 人工序列
&lt;400&gt; 5
acatggggcc ctttcccttc tctaaccggc aaggacacaa catcgtcctc tttgtactgc 60
gattcaccac caaattcatc ttctttagta aaaaatatct gtaaccatgt cgaagggcca 120
agcagtcggc atcgatctgg ggaccaccta ctcttgtgtg ggggtctttc aacatggcaa 180
agttgaaatt attgccaatg accagggcaa caggaccaca cccagctatg ttgccttcac 240
agacacagaa aggctgatcg gagatgcagc caaaaatcag gttgccatga atccaacaaa 300
cacagttttt gatgccaagc gcctcattgg cagaagattt gatgactctg tagtacaatc 360
tgacatgaaa cactggccgt ttgaagtaat aaacgacagt actcgcccaa aagttcaggt 420
tgagtacaag ggtgaaacaa aaacttttta tccagaggaa atctcttcaa tggtgctgac 480
aaagatgaaa gagattgctg aagcctacct cggaaaaaat gtctccaatg ctgtaatcac 540
tgtacctgcc tacttcaatg actcccagcg tcaggctaca aaggatgctg gcaccatctc 600
tggccttaat gtccttcgta tcatcaatga gccaactgct gcagctattg cttatggctt 660
ggacaagaag gttggcgctg agaggaatgt cctcatcttc gatcttggtg gtggcacttt 720
tgatgtgtcc attttaacaa ttgaagacgg catctttgag gtcaaatcta ccgctggtga 780
cactcatctc ggaggggaag atttcgacaa ccgtatggtg aaccacttta ttgcagagtt 840
caagcgcaag tacaagaaag acatcagcga caacaagagg gcagtgcgtc gtctgcgtac 900
ggcctgcgag agggcaaagc gcacgctatc ttccagcacc caagccagta ttgaaatcga 960
ctccctctat gaaggagtgg acttttacac ctccatcacc agggctcgat ttgaggagct 1020
caacgctgac ctcttccgcg gaaccctcga cccagtggag aagtccctgc gtgacgccaa 1080
gatggacaag gcggcgatcc acgacattgt gttggtcgga ggctccactc gtatccccaa 1140
gatccagaaa ctgctccagg acttcttcaa tggcaaagag ctcaacaaaa gcatcaaccc 1200
agatgaagct gtggcctatg gagcagctgt ccaggctgct atcctctgtg gggacaagtc 1260
cgagaacgtc caggatcttc tgcttctgga tgtcacccct ctgtctctgg gcattgagac 1320
cgctggcggc gtcatgaccg tactgatcaa gcgtaacacc accattccta ccaagcagac 1380
ccagacgttc accacatact ctgataacca gcctggagta ctcattcagg tgtatgaagg 1440
tgagcgtgcc atgacaaagg acaacaatct gcttggcaag tttgagctga ccggcatccc 1500
accagctcct cgaggtgttc ctcagattga ggtgacattt gatattgatg ccaacggtat 1560
catgaatgtg tctgctgcgg acaagagcac tggaaaggag aataagatca caatcacaaa 1620
cgacaaaggt cgtctcagca aagaagacat tgagcgtatg gtccaggagg ctgaaaaata 1680
caaggccgaa gatgatgtac aacgtgacaa agtgtctgca aagaatgggc ttgagtcgta 1740
tgctttcaac atgaaagcta ctgtagagga tgagaaactt gctggcaaaa tcagtgatga 1800
agacaaacag aagattctgg acaaatgcac tgaggtcatc agctggctgg acaagaacca 1860
gactgccgag aaggatgaat atgaacatca acagaaggag ctggagaagg tgtgcaatcc 1920
tataatcaca aagttgtacc agagtgctgg gggaatgcct ggtggaatgc ctgagggtat 1980
gccaggaggt ttccctggag ctggtggtgc tgctcccgga ggtggatcct ctggaccaac 2040
catcgaggag gttgattaaa cattccaatg atgatgccac tacctccaat cttcttaaga 2100
aattaaccct cttgggtgca agttcgacct aagagtgttt aagggttcag ggatcacgtt 2160
gcattgttca caacttgtat gtgcacttga gttaaagttt caattaccaa aagttgttta 2220
aagaattttt gctttggcaa taaaactgtc ttttgaccct taaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2280
aaaaaaaaaa 2290

Claims (10)

1.诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因在监控、检测或辅助检测海水或海洋沉积物中重金属污染程度中的应用，所述重金属为Cu、Cd、Hg和/或Pb。
2.定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的试剂在检测或辅助检测海水或海洋沉积物中重金属污染程度中的应用，所述重金属为Cu、Cd、Hg和/或Pb。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的试剂包括定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的引物或/和探针。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的引物如SEQ ID NO:1～2所示。
5.一种监控、检测或辅助检测海水或海洋沉积物中重金属污染程度的方法，其特征在于，检测生存在该环境中诸氏鲻虾虎鱼的HSC70基因表达量，若HSC70基因表达上调，提示该海水或海洋沉积物中存在重金属污染，且重金属污染程度与HSC70基因表达上调程度呈正比；所述重金属为Cu、Cd、Hg和/或Pb。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，检测HSC70基因表达量所用的试剂为定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的引物或/和探针。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的引物如SEQ ID NO:1～2所示。
8.一种监控、检测或辅助检测海水或海洋沉积物中重金属污染程度的产品，其特征在于，该产品中含有定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的试剂；所述重金属为Cu、Cd、Hg和/或Pb。
9.根据权利要求8所述的产品，其特征在于，所述定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的试剂为定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的引物或/和探针。
10.根据权利要求9所述的产品，其特征在于，所述定量检测诸氏鲻虾虎鱼HSC70基因的引物如SEQ ID NO:1～2所示。
CN201810776465.4A 2018-07-10 2018-07-10 一种利用基因表达情况快速检测海水或海洋沉积物中重金属的方法 Active CN109055567B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810776465.4A CN109055567B (zh) 2018-07-10 2018-07-10 一种利用基因表达情况快速检测海水或海洋沉积物中重金属的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810776465.4A CN109055567B (zh) 2018-07-10 2018-07-10 一种利用基因表达情况快速检测海水或海洋沉积物中重金属的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109055567A true CN109055567A (zh) 2018-12-21
CN109055567B CN109055567B (zh) 2021-09-14

Family

ID=64816585

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810776465.4A Active CN109055567B (zh) 2018-07-10 2018-07-10 一种利用基因表达情况快速检测海水或海洋沉积物中重金属的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109055567B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102808036A (zh) * 2012-08-31 2012-12-05 天津师范大学 一种海水中重金属镉污染的生物学灵敏检测方法
CN107460240A (zh) * 2017-08-03 2017-12-12 广东省实验动物监测所 一种利用基因表达变化快速检测海水或海洋沉积物中多环芳烃的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102808036A (zh) * 2012-08-31 2012-12-05 天津师范大学 一种海水中重金属镉污染的生物学灵敏检测方法
CN107460240A (zh) * 2017-08-03 2017-12-12 广东省实验动物监测所 一种利用基因表达变化快速检测海水或海洋沉积物中多环芳烃的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZONGYU MIAO等: "Cloning and characterization of a heat shock protein 70 gene from the yellowstripe goby, Mugilogobius chulae: Evidence for its significance in biomonitoring of environmental pollution", 《GENE REPORTS》 *
张占会等: ""Cu2+诱导不同大小近江牡蛎HSC70基因表达差异及临界诱导浓度研究", 《海洋环境科学》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109055567B (zh) 2021-09-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Pernthaler et al. Fluorescence in situ hybridization (FISH) with rRNA-targeted oligonucleotide probes
Bååth Measurement of heavy metal tolerance of soil bacteria using thymidine incorporation into bacteria extracted after homogenization-centrifugation
Nielsen et al. Microorganisms as indicators of soil health
Bouvier et al. Compositional changes in free‐living bacterial communities along a salinity gradient in two temperate estuaries
CN103993007B (zh) 一种从土壤样品中高效提取dna的简易方法
CN107460240B (zh) 一种利用基因表达变化快速检测海水或海洋沉积物中多环芳烃的方法
CN102925581B (zh) 一种对水产养殖环境沉积物中厌氧氨氧化细菌进行定量的方法
Vicari et al. Genotoxic evaluation of different doses of methylmercury (CH3Hg+) in Hoplias malabaricus
Savvichev et al. Microbial processes of the carbon and sulfur cycles in the Chukchi Sea
Pan et al. Species, spatial-temporal distribution, and contamination assessment of trace metals in typical mariculture area of North China
CN115290615A (zh) 一种检测海洋生物体内微塑料含量的高通量方法
CN109022580B (zh) 一种作为犬乳腺肿瘤诊断标志物的犬环状rna基因
CN111544604B (zh) 一种利用海水青鱂幼鱼评价化合物神经毒性的方法
CN109055567A (zh) 一种利用基因表达情况快速检测海水或海洋沉积物中重金属的方法
RU2758337C1 (ru) Способ проведения экологического мониторинга с помощью аквакультуры
CN109913463A (zh) 一种新型海洋生物污染检测标记物
CN116970719B (zh) 一种间接检测水中镉污染的方法
Prast et al. Effect of ciliates on nitrification and nitrifying bacteria in Baltic Sea sediments
CN110760600A (zh) 近海水域中肠球菌的快速检测方法
Ikuta et al. Effects of a long-term rearing system for deep-sea vesicomyid clams on host survival and endosymbiont retention
CN113234748B (zh) Rxr酵母转录激活系统及其加标沉积物毒理实验方法
CN103911450B (zh) 一种检测肉牛a-fabp基因单核苷酸多态性的方法
CN108823219A (zh) 毛蚶过氧化氢酶--一种新型海洋生物污染检测标记物
CN117265080B (zh) 一组斑马鱼基因标志物及其在评估环境污染物致神经损伤风险中的应用
CN109762913B (zh) 一种检测海洋食品中汞和铜的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant