CN109055520A - 一种半滑舌鳎外泌体性别差异表达标签及试剂盒 - Google Patents

一种半滑舌鳎外泌体性别差异表达标签及试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN109055520A
CN109055520A CN201811019139.5A CN201811019139A CN109055520A CN 109055520 A CN109055520 A CN 109055520A CN 201811019139 A CN201811019139 A CN 201811019139A CN 109055520 A CN109055520 A CN 109055520A
Authority
CN
China
Prior art keywords
label
milter
microrna
sequence
excretion body
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201811019139.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109055520B (zh
Inventor
张博
贾磊
赵娜
李仰真
刘克奉
高磊
高燕
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
TIANJIN BOHAI AQUATIC PRODUCT RESEARCH INSTITUTE
Original Assignee
TIANJIN BOHAI AQUATIC PRODUCT RESEARCH INSTITUTE
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by TIANJIN BOHAI AQUATIC PRODUCT RESEARCH INSTITUTE filed Critical TIANJIN BOHAI AQUATIC PRODUCT RESEARCH INSTITUTE
Priority to CN201811019139.5A priority Critical patent/CN109055520B/zh
Publication of CN109055520A publication Critical patent/CN109055520A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109055520B publication Critical patent/CN109055520B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6879—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for sex determination
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种半滑舌鳎外泌体性别差异表达标签及试剂盒，属于鱼类生物技术领域，所述microRNA性别标签为dre‑miR‑10d‑5p，序列为TACCCTGTAGAACCGAATGTGTG；以解决半滑舌鳎雄鱼及伪雄鱼在生殖遗传差异的区分问题。本标志miRNAs具有在雄鱼和伪雄鱼中显著差异表达的特点，是特异的分子识别标记。

Description

一种半滑舌鳎外泌体性别差异表达标签及试剂盒
技术领域
本发明属于鱼类生物技术领域，特别是海水鱼精液外泌体标志物应用领域，具体地为一种半滑舌鳎外泌体性别差异表达标签及试剂盒。
背景技术
半滑舌鳎雌、雄鱼生长速度差异巨大，无论是自然界还是养殖环境都不同程度的存在着伪雄鱼。伪雄鱼的染色体是ZW型，而它的生殖器官则和雄鱼一样，也可以产生精子且繁育后代。伪雄鱼还可通过遗传逐代积累，就导致了半滑舌鳎雌雄比例的失衡。因此开发鉴别半滑舌鳎伪雄鱼的方法不仅具有理论意义，而且也具有生产价值和市场价值。
鱼类性别鉴定有多种方法：生理解剖观察、性腺切片、性腺细胞观察、雌性特异分子标记等。有些方法虽然简单易行，但是结果可能不准确，有些方法则需要剖杀鱼。外泌体内含物microRNAs，其在进化上高度保守，性质稳定，易于定量检测，具有生物标签的特性，对于鱼类性别鉴定的具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是针对半滑舌鳎雄鱼及伪雄鱼识别问题，提出一种半滑舌鳎精液来源的外泌体microRNAs作为生物标记物识别雄鱼及伪雄鱼的方法。
本发明是采取以下技术方案实现的：
半滑舌鳎精浆外泌体microRNA在性别鉴定中的应用，microRNA性别标签为dre-miR-10d-5p，其序列为TACCCTGTAGAACCGAATGTGTG。
本发明还提供一种所述microRNA性别标签的筛选方法如下：
1)精浆外泌体分离鉴定后，对精浆外泌体smallRNA进行测序分析，将clean reads依次和Rfam数据库、cDNA序列、物种重复序列库、miRBase数据库对测序结果中的smallRNA进行分类注释；将分类注释后的序列和miRBase数据库比对，进行已知microRNA的统计；使用未注释上的序列进行新的microRNA预测，microRNA差异表达分析，差异表达miRNA靶基因的通路富集分析和功能富集分析，最后与样品进行相关性匹配，筛选出一种或者多种，对两种样品具有指示作用的microRNA作为候选microRNAs生物标记物；
2)将候选标签microRNAs按照以下四个标准进行过滤：(1)在两种样品中表达有极显著差异，即p值小于0.01；(2)与已知数据库进行比对确认存在的microRNAs；(3)两样品中至少有一个的TPM值大于10；(4)foldChange值大于4，所述foldChange值＝TPMSample_ZZ./TPMSample_ZW；最终筛到了23个micro RNA作为候选标签进行验证。
3)提取两组验证样本：经外周血染色体鉴定后的雄鱼及伪雄鱼精浆来源外泌体总RNA，利用Micro RNA定量分析试剂盒定量检测步骤2)过滤后的microRNAs的差异表达情况，筛选出最具标签指示作用的miRNAs作为最终的标签microRNAs；根据统计学分析原理，P值小于0.05为显著差异，最终筛选到dre-miR-10d-5p，序列为TACCCTGTAGAACCGAATGTGTG，此种标签在雄鱼样本中有高表达，而在伪雄鱼样本中表达量极低。依据MicroRNA定量分析结果，进行雄鱼和伪雄鱼的判定。
本发明还提供了一种半滑舌鳎性别鉴定试剂盒，所述试剂盒包括dre-miR-10d-5p定量检测引物，所述引物序列为F1：CGGTTACCCTGTAGAACCG；反向引物R1：TCGTATCCAGTGCAGGGTC，逆转录引物dre-miR-10d-5p-RT:GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACACACATT；内参基因为U6，以及其它逆转录试剂和PCR荧光定量试剂。
进一步，U6的引物为：U6-F：CTCGCTTCGGCAGCACATATACT；U6-R：ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC。
进一步，引物探针序列的5’端标记了荧光基团，3’端标记淬灭基团，以适合Taqmanprobe-based qRT-PCR方法检测。
本发明与现有技术相比的有益效果：
本发明运用精液外泌体microRNAs进行半滑舌鳎雄鱼和伪雄鱼的判定，准确率达90％以上，且鉴定结果可靠，不会对鱼体造成创伤。
本发明同时利用该鉴别标签开发了检测的试剂盒，设计了针对该标签的扩增引物，方便快捷，简单高效。
附图说明
图1是本发明提出的标志microRNA经20个验证样本验证后的qRT-PCR表达量；
图2本发明20个验证样本验证后在两组样本的qRT-PCR表达量均值。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明做进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
实施例1
一种半滑舌鳎精浆外泌体miRNAs作为生物标记物的筛选确定
1、精液样本的收集收集半滑舌鳎性成熟雄鱼及伪雄鱼精液各50尾，每尾取0.5ml精液于离心管中用于外泌体分离鉴定。
2、外泌体的提取
(1)精液样本取0.5ml转移1.5mlEP管，放置于4℃，1200g离心15min去除精子细胞，4℃，15000g离心20min去除小细胞杂质和碎片，用PBS稀释1倍后，使用0.45um滤膜进行预过滤，过滤液再经0.22um滤膜过滤。
(2)样品用SBI ExoQuick-TC for Tissue Culture Media and Urine试剂盒提取外泌体。
(3)离心后去上清，收集溶解样并完全转移至一个无RNA酶的2ml管中。
3、外泌体的鉴定：日立H600IV型透射电镜观察，透射电镜分析鉴定后，剩余样品用于RNA提取和测序分析。
4、外泌体的microRNA测序分析
TRizol法提取外泌体的RNA，质检后构建小RNA文库并基于illumina平台测序，完成测序后进行数据过滤分析，将clean reads依次和Rfam数据库、cDNA序列、物种重复序列库、miRBase数据库进行比对注释。将注释后的序列和miRBase数据库比对，进行已知microRNA的统计。使用未注释上的序列进行新的microRNA预测，microRNA差异表达分析，差异表达miRNA靶基因的通路富集分析和功能富集分析，最后与雄鱼、伪雄鱼两个样品进行相关性匹配，筛选出一种或者多种，对雄鱼、伪雄鱼两种样品具有指示作用的miRNA作为候选标签micro RNAs。
5、将候选标签micro RNAs按照以下四个标准进行过滤：(1)在两种样品中表达有极显著差异，即p值小于0.01；(2)与已知数据库进行比对确认存在的microRNAs；(3)两样品中至少有一个的TPM值大于10；(4)foldChange值大于4，所述foldChange值＝TPMSample_ZZ./TPMSample_ZW；最终获得23个候选的microRNA进行验证。
6、提取两组验证样本：经外周血染色体鉴定后的雄鱼及伪雄鱼精浆来源外泌体总RNA，利用Micro RNA定量分析试剂盒定量检测步骤5)过滤后的micro RNAs差异表达情况，选取2-ΔΔCt进行计算分析，筛选出最具标签指示作用的microRNAs作为最终的标签microRNAs；根据统计学分析原理，P值小于0.05为显著差异，最终筛选到dre－miR－10d－5p，序列为TACCCTGTAGAACCGAATGTGTG，此种标签在雄鱼样本中有高表达，而在伪雄鱼样本中表达量极低。
实施例2
利用半滑舌鳎精浆外泌体microRNA标志物鉴定雄鱼和伪雄鱼
基于精液外泌体microRNA标志物dre－miR－10d－5p的鉴定试剂盒包括dre－miR－10d－5p的检测引物；所述引物序列为F1：CGGTTACCCTGTAGAACCG；反向引物R1：TCGTATCCAGTGCAGGGTC，引物包含逆转引物dre-miR-10d-5p-RT:GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACACACATT；内参基因为U6，U6的引物为：U6-F：CTCGCTTCGGCAGCACATATACT；U6-R：ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC,此外试剂盒包含定量PCR反映的其它常规试剂：逆转录酶，Taq酶，dNTP，缓冲液，Mgcl2，DEPC水及对照品。引物探针序列的5’端标记了荧光基团，3’端标记淬灭基团，以适合Taqman probe-based qRT-PCR方法检测。
该试剂盒应用的反应体系为10ul体系，即0.5ul 10*microRNA引物探针、5ul 2*Master mix、2.5ul ddH2O、2ulcDNA模版。使用Thermo fisher的Q6实时荧光定量PCR检测，反应的程序为：95℃2min；95℃10s,59℃60s,循环40次。样品检测设3个平行。利用特异引物检测经染色体确认的10尾半滑舌鳎伪雄鱼和10尾半滑舌鳎雄鱼的标签microRNA，即dre－miR－10d－5p的表达情况，结果如表1、图1、图2所示。该标签在两组样本中的表达差异极为显著(p＜0.01)，验证标签mcroiRNA的检测准确率达90％以上.
对于本领域的技术人员，对本发明针对的构思及技术要点进行变形，相应的改变应属于本发明所请求的权利要求。
表1 20个验证样本qRT-PCR表达数据
序列表
<110> 天津渤海水产研究所
<120> 一种半滑舌鳎外泌体性别差异表达标签及试剂盒
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213> 半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Gunther)
<400> 4
taccctgtag aaccgaatgt gtg 23
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cggttaccct gtagaaccg 19
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tcgtatccag tgcagggtc 19
<210> 4
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gtcgtatcca gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgacacacat t 51
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
ctcgcttcgg cagcacatat act 23
<210> 6
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
acgcttcacg aatttgcgtg tc 22

Claims (3)

1.半滑舌鳎精浆外泌体microRNA在性别鉴定中的应用，其特征在于所述microRNA性别标签为dre-miR-10d-5p，其序列为TACCCTGTAGAACCGAATGTGTG。
2.权利要求1所述microRNA性别标签的筛选方法如下：
1)精浆外泌体分离鉴定后，对精浆外泌体smallRNA进行测序分析，将clean reads依次和Rfam数据库、cDNA序列、物种重复序列库、miRBase数据库对测序结果中的smallRNA进行分类注释；将分类注释后的序列和miRBase数据库比对，进行已知microRNA的统计；使用未注释上的序列进行新的microRNA预测，microRNA差异表达分析，差异表达miRNA靶基因的通路富集分析和功能富集分析，最后与样品进行相关性匹配，筛选出一种或者多种，对两种样品具有指示作用的microRNA作为候选microRNAs生物标记物；
2)将候选标签microRNAs按照以下四个标准进行过滤：(1)在两种样品中表达有极显著差异，即p值小于0.01；(2)与已知数据库进行比对确认存在的microRNAs；(3)两样品中至少有一个的TPM值大于10；(4)foldChange值大于4，所述foldChange值＝TPMSample_ZZ./TPMSample_ZW；
3)提取随机两组验证样本：经外周血染色体鉴定后的雄鱼及伪雄鱼精浆来源外泌体总RNA，利用Micro RNA定量分析试剂盒定量检测步骤2)过滤后的microRNAs的差异表达情况，筛选出最具标签指示作用的miRNAs作为最终的标签microRNAs；根据统计学分析原理，P值小于0.05为显著差异，最终筛选到dre-miR-10d-5p，序列为TACCCTGTAGAACCGAATGTGTG，此种标签在雄鱼样本中有高表达，而在伪雄鱼样本中表达量极低。
3.一种半滑舌鳎性别鉴定试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1所述dre-miR-10d-5p的定量检测引物，所述引物序列为F1：CGGTTACCCTGTAGAACCG；反向引物R1：TCGTATCCAGTGCAGGGTC，逆转录引物dre-miR-10d-5p-RT：GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACACACATT；内参基因为U6，以及其它逆转录试剂和PCR荧光定量试剂。
CN201811019139.5A 2018-09-03 2018-09-03 一种半滑舌鳎外泌体性别差异表达标签及试剂盒 Expired - Fee Related CN109055520B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811019139.5A CN109055520B (zh) 2018-09-03 2018-09-03 一种半滑舌鳎外泌体性别差异表达标签及试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811019139.5A CN109055520B (zh) 2018-09-03 2018-09-03 一种半滑舌鳎外泌体性别差异表达标签及试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109055520A true CN109055520A (zh) 2018-12-21
CN109055520B CN109055520B (zh) 2021-04-27

Family

ID=64759274

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811019139.5A Expired - Fee Related CN109055520B (zh) 2018-09-03 2018-09-03 一种半滑舌鳎外泌体性别差异表达标签及试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109055520B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111206107A (zh) * 2020-04-21 2020-05-29 广东省生物资源应用研究所 鉴定鲟鱼性别的microRNA血清标志物、引物组、试剂盒及其应用
CN115094148A (zh) * 2022-05-31 2022-09-23 广东海洋大学 一种高体鰤外泌体microRNAs性别标签、引物、试剂盒和应用
CN115161320A (zh) * 2022-06-20 2022-10-11 南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 一种用于高体鰤性别检测的miRNA及试剂盒与应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1814793A (zh) * 2005-12-15 2006-08-09 中国水产科学研究院黄海水产研究所 半滑舌鳎性别特异分子标记及遗传性别鉴定方法
CN101240348A (zh) * 2008-01-23 2008-08-13 中国水产科学研究院黄海水产研究所 半滑舌鳎遗传性别快速鉴定方法
CN102134593A (zh) * 2010-12-23 2011-07-27 中国水产科学研究院黄海水产研究所 半滑舌鳎性别特异微卫星标记及其在超雌鱼鉴定中的应用
CN102181554A (zh) * 2011-04-21 2011-09-14 中国海洋大学 半滑舌鳎雌性特异的基因组dna片段及其应用
CN103525814A (zh) * 2013-10-28 2014-01-22 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一种半滑舌鳎性别特异scar标记及应用方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1814793A (zh) * 2005-12-15 2006-08-09 中国水产科学研究院黄海水产研究所 半滑舌鳎性别特异分子标记及遗传性别鉴定方法
CN101240348A (zh) * 2008-01-23 2008-08-13 中国水产科学研究院黄海水产研究所 半滑舌鳎遗传性别快速鉴定方法
CN102134593A (zh) * 2010-12-23 2011-07-27 中国水产科学研究院黄海水产研究所 半滑舌鳎性别特异微卫星标记及其在超雌鱼鉴定中的应用
CN102181554A (zh) * 2011-04-21 2011-09-14 中国海洋大学 半滑舌鳎雌性特异的基因组dna片段及其应用
CN103525814A (zh) * 2013-10-28 2014-01-22 中国水产科学研究院黄海水产研究所 一种半滑舌鳎性别特异scar标记及应用方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CANDIDA VAZ等: "Deep sequencing of small RNA facilitates tissue and sex associated microRNA discovery in zebrafish", 《BMC GENOMICS》 *
SUN ZHANPENG等: "Identification of exosomes and its signature miRNAs of male and female Cynoglossus semilaevis", 《SCIENTIFIC REPORTS》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111206107A (zh) * 2020-04-21 2020-05-29 广东省生物资源应用研究所 鉴定鲟鱼性别的microRNA血清标志物、引物组、试剂盒及其应用
CN115094148A (zh) * 2022-05-31 2022-09-23 广东海洋大学 一种高体鰤外泌体microRNAs性别标签、引物、试剂盒和应用
CN115161320A (zh) * 2022-06-20 2022-10-11 南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 一种用于高体鰤性别检测的miRNA及试剂盒与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN109055520B (zh) 2021-04-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109055520A (zh) 一种半滑舌鳎外泌体性别差异表达标签及试剂盒
CN111778326B (zh) 用于子宫内膜容受性评估的基因标志物组合及其应用
CN105154564A (zh) 基于环境dna技术对鱼类dna丰度估算的联合分析法
CN109136388A (zh) 半滑舌鳎差异表达的microRNA标签及应用
CN115161320B (zh) 一种用于高体鰤性别检测的miRNA及试剂盒与应用
CN105143466A (zh) 通过大规模平行rna测序分析母亲血浆转录组
CN104293914A (zh) 用于检测原发性肝细胞癌的血清miRNA标志物组合及应用
CN116287173B (zh) 高体鰤外泌体microRNAs性别标签、引物和试剂盒的应用
WO2020034583A1 (zh) 一组用于膀胱癌检测的基因及其应用
CN114934121B (zh) 高体鰤性别差异指示标签microRNA及试剂盒与应用
JP7090357B2 (ja) チョウザメの性別を同定するための、プライマーセット、キット、ならびにマイクロｒｎａ血清マーカー及びプライマーセットの使用
EP3452613A1 (en) Profiling microvesicle nucleic acids and uses thereof as signatures in diagnosis of renal transplant rejection
CN112680533B (zh) 一种快速准确鉴定鲟鱼性别的方法
CN109082463A (zh) 指示性别的半滑舌鳎外泌体microRNA及试剂盒
CN109055521B (zh) 一种半滑舌鳎性别差异指示标签microRNA的应用
CN115679004B (zh) 鉴定瓦氏黄颡鱼、长吻鮠和杂交种的引物、方法和试剂盒
CN109112194B (zh) 半滑舌鳎性别标签piR-mmu-72274的应用
CN108998545B (zh) 半滑舌鳎外泌体piR-mmu-31018127应用
CN116356006A (zh) 一种鉴定青鱼遗传性别的分子标记及其应用
CN114774561A (zh) atp1b1b基因在海淡水养殖花鲈鉴定中的应用及应用方法
CN109971863B (zh) 半滑舌鳎性别标签piR-mmu-29271668的应用
CN108998510B (zh) 半滑舌鳎性别标签piR-xtr-979116的应用
CN102864219A (zh) 一种用多重pcr矩阵法进行高通量基因表达谱检测的方法
CN112458179A (zh) 基于RNAseq技术的驴肌肉发育相关基因挖掘调控方法
CN104774965B (zh) 用于胚胎发育质量评估的精子长非编码rna检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20210427

Termination date: 20210903

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee