CN109030838A - 一种用于检测地塞米松的胶体金试纸 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于检测地塞米松的胶体金试纸。该胶体金试纸中，金标垫上包被有地塞米松抗体标记的胶体金，反应膜上的质控线位置包被所述地塞米松抗体的抗体，检测线位置包被所述地塞米松抗体的抗原；所述地塞米松抗体为由杂交瘤细胞株2D53D12分泌产生的单克隆抗体；杂交瘤细胞株2D53D12在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.15195。实验证明，使用本发明所提供的胶体金试纸可以检测化妆品中是否含有地塞米松，操作简单，耗时短，准确率高，且灵敏度高，最小检出限可达200ng/mL。本发明所提供的胶体金试纸在现场快速检测地塞米松中具有重要的应用价值。

Description

一种用于检测地塞米松的胶体金试纸

技术领域

本发明属于生物技术与领域，具体涉及一种用于检测地塞米松的胶体金试纸。

背景技术

地塞米松(别名为氟美松、氟甲强地松龙或德沙美松)的化学名称为16α-甲基-11β，17α，21-三羟基-9α-氟孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮，CAS登录号为24916-90-3，分子式为C₂₂H₂₈O₅，相对分子量为392，化学结构式见式(I)。

地塞米松对皮肤疾病(如湿疹)有良好的疗效，甚至对由皮肤炎症引起的严重斑块牛皮癣也能起到缓解作用。因此，地塞米松被用于进行临床治疗。但是长期大剂量使用或者长期局部使用强效地塞米松，会引发依赖性，使血管扩张，皮肤形成红色斑点，副作用很多。有不良商家在化妆品(如面膜、面霜、药膏、乳液)中添加地塞米松以代替成本较高的功效添加物，使消费者在使用后的皮肤状态能在短期内有明显改善，但是容易造成依赖性，还可能引发皮炎或其它更严重的疾病，因此地塞米松已被列为化妆品禁用物质。目前，已有相关规定禁止地塞米松等41种糖皮质激素在化妆品中添加。但近几年来的抽检活动中，仍然有大量违禁添加的化妆品被检出。为净化市场，保障消费者的合法权益，有必要建立高效、灵敏的检测地塞米松的方法。

化妆品中地塞米松的常用检测方法以质谱等仪器分析为主，这类方法使用时存在诸多不便，也不能用于大量样品的实时实地检测。ELISA检测方法虽然样品前处理和操作简单且能快速有效地分析大量样品，但仍然不适用于实地检测。胶体金试纸检测方法，操作简单易行，结果便于直接观察，尤其适合现场快速检测，方便消费者自行辨别真伪。目前胶体金免疫检测试纸在疾病和药物检测等各个领域均有应用，但在护肤品中的快速检测中还未有报道。

发明内容

本发明的目的是快速检测化妆品中是否含有地塞米松。

本发明首先保护一种用于检测地塞米松的胶体金试纸，其金标垫上包被有地塞米松抗体标记的胶体金，反应膜上的质控线位置包被所述地塞米松抗体的抗体，检测线位置包被所述地塞米松抗体的抗原；所述地塞米松抗体为以式(II)所示的化合物与载体蛋白的偶联物作为免疫原制备的抗体；

上述胶体金试纸中，所述地塞米松抗体可为a1)或a2)或a3)：

a1)由杂交瘤细胞株2D53D12分泌产生的单克隆抗体；杂交瘤细胞株2D53D12在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.15195；

a2)式(II)所示的化合物与载体蛋白的偶联物作为免疫原免疫动物后经体细胞杂交获得的单克隆抗体；

a3)式(II)所示的化合物与载体蛋白的偶联物作为免疫原对动物加强免疫所获得的多克隆抗体。

所述动物可为小鼠、兔、山羊、绵羊或马中的任一种。

上述胶体金试纸中，所述地塞米松抗体的抗体可为羊抗鼠的IgG抗体。所述羊抗鼠的IgG抗体具体可为美国sigma公司的产品。

上述胶体金试纸中，所述地塞米松抗体的抗原可为式(II)所示的化合物与载体蛋白的偶联物。

上述任一所述载体蛋白可为牛血清白蛋白或卵清白蛋白。

上述方法中，式(II)所示的化合物与载体蛋白通过酰胺键连接。所述酰胺键是式(II)所示的化合物的羧基通过活泼酯与载体蛋白上的氨基形成的。所述偶联物可为地塞米松-卵清白蛋白偶联物(式(III)所示化合物)或地塞米松-牛血清白蛋白偶联物(式(IV)所示化合物)。

地塞米松-卵清白蛋白偶联物的制备方法可如下：(1)将式(II)所示的化合物、N-羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺用有机溶剂溶解，室温搅拌至出现白色沉淀后，离心，收集上清液；(2)向含卵清白蛋白的磷酸盐缓冲液中滴加步骤(1)收集的上清液，4℃搅拌12h，离心，收集上清液；该上清液即为地塞米松-卵清白蛋白偶联物。

地塞米松-卵清白蛋白偶联物的制备方法具体可如下：(1)将9.8mg式(II)所示的化合物、9.0mg N-羟基琥珀酰亚胺和16mg二环己基碳二亚胺用0.4mL二甲基亚砜溶解，室温搅拌至出现白色沉淀后，离心，收集上清液；(2)取18mg卵清白蛋白，加入5mL pH7.5、0.01M的磷酸盐缓冲液，充分溶解；然后逐滴滴加步骤(1)收集的上清液，4℃搅拌12h，离心，收集上清液；该上清液即为地塞米松-卵清白蛋白偶联物。

地塞米松-牛血清白蛋白偶联物的制备方法可如下：(1)将式(II)所示的化合物、N-羟基琥珀酰亚胺和二环己基碳二亚胺用有机溶剂溶解，室温搅拌至出现白色沉淀后，离心，收集上清液；(2)向含牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液中滴加步骤(1)收集的上清液，4℃搅拌12h，离心，收集上清液；该上清液即为地塞米松-牛血清白蛋白偶联物。

地塞米松-牛血清白蛋白偶联物的制备方法具体可如下：(1)将9.8mg式(II)所示的化合物、9.0mg N-羟基琥珀酰亚胺和16mg二环己基碳二亚胺用0.4mL二甲基亚砜溶解，室温搅拌至出现白色沉淀后，离心，收集上清液；(2)取26mg牛血清白蛋白，加入5mL pH7.5、0.01M的磷酸盐缓冲液，充分溶解；然后逐滴滴加步骤(1)收集的上清液，4℃搅拌12h，离心，收集上清液；该上清液即为地塞米松-牛血清白蛋白偶联物。

上述胶体金试纸中，所述反应膜可为硝酸纤维素膜。

上述胶体金试纸中，所述金标垫的材质可为聚酯纤维素膜。

上述胶体金试纸中，所述质控线位置，包被所述地塞米松抗体的抗体的浓度可为0.05μg/cm²以上(如0.5μg/cm²)，包被面积为0.01-0.03cm²(如0.01cm²、0.02cm²、0.03cm²)。所述检测线位置，包被所述地塞米松抗体的抗原的浓度可为0.03μg/cm²以上(如0.03μg/cm²)，包被面积为0.01-0.03cm²(如0.01cm²、0.02cm²、0.03cm²)。所述金标垫上，包被所述地塞米松抗体的浓度为0.015μg/cm²(如0.015μg/cm²)，包被面积为0.01-0.03cm²(如0.01cm²、0.02cm²、0.03cm²)。如果金标垫上的包被的地塞米松抗体除了与待测溶液中的地塞米松结合形成复合物以外，还有多余的地塞米松抗体，则检测线和质控线处均显出红色反应线条，即无论待测溶液中是否含有地塞米松，检测线和质控线处均显出红色反应线条。因此，为提高检测的灵敏度，金标垫上的包被的地塞米松抗体的量要少一些，包被地塞米松抗体的量越少，则检测的灵敏度越高。

采用上述任一所述的胶体金试纸检测待测样本中是否含有地塞米松的方法，可包括如下步骤：将上述任一所述的胶体金试纸的样品垫浸入待测溶液，静置10min以上(如10min、15min、20min)，然后观察反应膜上显出的红色反应线条，进行如下判断：

(1)如果反应膜上的检测线和质控线处均显出红色反应线条，则待测溶液中不含有地塞米松；

(2)如果反应膜上仅质控线处显出红色反应线条，则待测溶液中含有地塞米松；

(3)如果反应膜上质控线处不显出红色反应线条，则为无效结果(需重新测定)。

上述方法中，所述待测溶液可为化妆品处理液；制备所述化妆品处理液的步骤为a1)-a3)：

a1)向化妆品中加入乙腈，超声提取；

a2)完成步骤a1)后，离心，收集上清液；

a3)完成步骤a2)后，取所述上清液，氮气吹干，加入磷酸盐缓冲液溶解，得到化妆品处理液。

所述步骤a1)中，化妆品和乙腈的比例具体可为1g：1-3mL(如1-2mL、2-3mL、1mL、2mL或3mL)。

所述步骤a1)中，超声提取的时间可为5-15min(如5-10min、10-15min、5min、10min或15min)。超声提取的参数可为频率50Hz，温度16-25℃。

所述步骤a1)中，还可加入饱和NaCl溶液。所述化妆品、饱和NaCl溶液和乙腈的比例具体可为1g：2-4mL(如2-3mL、3-4mL、2mL、3mL或4mL)：1-3mL(如1-2mL、2-3mL、1mL、2mL或3mL)。

所述步骤a3)中，磷酸盐缓冲液可为磷酸盐缓冲液(pH7.4，0.01M)。

上述方法中，所述化妆品可为面膜、面霜或润肤水。

实验证明，使用本发明所提供的胶体金试纸可以检测化妆品中是否含有地塞米松，操作简单，耗时短，准确率高，且灵敏度高，最小检出限可达200ng/mL。本发明所提供的胶体金试纸在现场快速检测地塞米松中具有重要的应用价值。

附图说明

图1为制备式(II)所示化合物的路线图。

图2为制备式(IV)所示化合物的路线图。

图3为检测地塞米松的胶体金试纸的结构示意图。

图4为检测地塞米松的胶体金试纸的最小检出限。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

下述实施例中的磷酸盐缓冲液为磷酸盐缓冲液(pH7.4，0.01M)。

实施例1、抗原的制备

一、式(II)所示化合物(即地塞米松半抗原)的制备

制备式(II)所示化合物(即地塞米松半抗原)的路线图如图1所示。

制备地塞米松半抗原的具体步骤如下：

1、取100mg地塞米松标准品，先加入5mL无水吡啶，充分溶解；再加入31mg丁二酸酐，混匀，得到反应体系。

2、取步骤1得到的反应体系，置于室温搅拌过夜，然后用旋转蒸发仪除去溶剂，收集残留物。

3、取步骤2收集的残留物，加入展开剂(石油醚和乙酸乙酯等体积混合而成)进行柱色谱分离，得到的浅黄色液体化合物即为地塞米松半抗原。

二、地塞米松完全抗原的制备

1、地塞米松-卵清白蛋白偶联物的制备

制备地塞米松-卵清白蛋白偶联物(式(III)所示化合物)的具体步骤如下：

(1)取9.8mg地塞米松半抗原，先加入0.4mL二甲基亚砜，充分溶解；再加入9.0mgN-羟基琥珀酰亚胺和16mg二环己基碳二亚胺，混匀，得到体系1。

(2)取步骤(1)得到的体系1，室温条件下搅拌，待出现白色沉淀后，离心，收集上清液。

(3)取18mg卵清白蛋白，加入5mL pH7.5、0.01M的磷酸盐缓冲液，充分溶解；然后逐滴滴加步骤(2)收集的上清液，得到体系2。

(4)取步骤(3)得到的体系2，4℃搅拌过夜，然后离心，收集上清液。该上清液即为地塞米松-卵清白蛋白偶联物。

在下文中，地塞米松-卵清白蛋白偶联物简称DSMS-H₂-OVA。

2、地塞米松-牛血清白蛋白偶联物的制备

制备式(IV)所示化合物(即地塞米松-牛血清白蛋白偶联物)的路线图如图2所示。

制备地塞米松-牛血清白蛋白偶联物(式(IV)所示化合物)的具体步骤如下：

(1)取9.8mg地塞米松半抗原，先加入0.4mL二甲基亚砜，充分溶解；再加入9.0mgN-羟基琥珀酰亚胺和16mg二环己基碳二亚胺，混匀，得到体系1。

(2)取步骤(1)得到的体系1，室温条件下搅拌，待出现白色沉淀后，离心，收集上清液。

(3)取26mg牛血清白蛋白，加入5mL pH7.5、0.01M的磷酸盐缓冲液，充分溶解；然后逐滴滴加步骤(2)收集的上清液，得到体系2。

(4)取步骤(3)得到的体系2，4℃搅拌过夜，然后离心，收集上清液。该上清液即为地塞米松-牛血清白蛋白偶联物。

在下文中，地塞米松-牛血清白蛋白偶联物简称DSMS-H₂-BSA。

实施例2、地塞米松单克隆抗体的制备

本实施例中的Bal b/c小鼠为6只6-7周龄的健康Bal b/c雌性小鼠(北京维通利华实验动物有限公司的产品)。

采用pH7.5、0.1M的PBS缓冲液稀释DSMS-H₂-BSA，得到浓度为1.0mg/mL(以BSA计)的DSMS-H₂-BSA溶液。

一、基础免疫

1、将1mLDSMS-H₂-BSA溶液和1mL完全佐剂(美国sigma公司的产品)混合，4℃搅拌至充分乳化(混合物滴入水中不会分散即视为充分乳化)，得到乳化的完全抗原。

2、取乳化的完全抗原，腹腔及背部皮下多点注射Bal b/c小鼠，每只Bal b/c小鼠的注射剂量为0.2mL(其中腹腔0.1mL，背部皮下多点共0.1mL)。

二、加强免疫

1、将1mLDSMS-H₂-BSA溶液和1mL不完全佐剂(美国sigma公司的产品)混合，4℃搅拌至充分乳化(混合物滴入水中不会分散即视为充分乳化)，得到乳化的不完全抗原。

2、取乳化的不完全抗原，对完成步骤一两周后的Bal b/c小鼠进行3次免疫，每次免疫间隔两周。每次免疫的步骤如下：取乳化的不完全抗原，腹腔及背部皮下多点注射Balb/c小鼠，每只Bal b/c小鼠的注射剂量为0.2mL(其中腹腔0.1mL，背部皮下多点共0.1mL)。

3、完成步骤2第6天，用毛细玻璃管(直径为0.9-1.1mm)从每只Bal b/c小鼠眼角采血，先室温静置30min，再4℃放置2h，最后4000rpm离心10min，收集上清液；收集的上清液即为Bal b/c小鼠血清。

4、取步骤3收集的上清液，以实施例1二中1制备的DSMS-H₂-OVA作为包被抗原，采用棋盘格实验间接非竞争ELISA方法通过计算抑制率来评价抗体效价。抗体效价定义为OD_492nm为1.0时Bal b/c小鼠血清的最大稀释倍数。

挑选抗体效价最高的Bal b/c小鼠进行后续实验。抗体效价最高的Bal b/c小鼠的抑制率为86.6％，血清效价高于8×10³。

5、取1mLDSMS-H₂-BSA溶液，腹腔及背部皮下多点注射步骤4中抗体效价最高的Balb/c小鼠，注射剂量为0.2mL(其中腹腔0.1mL，背部皮下多点共0.1mL)。

6、完成步骤5第4天，将Bal b/c小鼠摘除眼球放血至死，然后取Bal b/c小鼠的脾细胞。

7、完成步骤6后，将Bal b/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(北京勤邦生物技术公司的产品)进行细胞融合，得到若干融合细胞。

三、杂交瘤细胞的克隆

对步骤二得到的融合细胞进行阳性和抑制率检测，筛选出其中的三株杂交瘤细胞，分别命名为2D5细胞株、4A9细胞株和4G6细胞株。

采用有限稀释法对这三株杂交瘤细胞进行克隆，通过对阳性和抑制率的检测，2D5细胞株克隆得到的单克隆细胞株效果更好，再从2D5细胞株中筛选两株阳性和特异性最强的单克隆细胞株，分别命名为2D53D12细胞株和2D53F7细胞株。将这两株细胞进行扩大培养后冻存。其中2D53D12细胞株阳性和抑制率最好。2D53D12细胞株即杂交瘤细胞株2D53D12，已于2017年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.15195。

用杂交瘤细胞株2D53D12制备腹水，将收集到的腹水纯化后冻干得到地塞米松单克隆抗体2D5(以下简称单克隆抗体2D5)。

四、单克隆抗体2D5的大量制备与纯化

采用诱导动物体内分泌单克隆抗体的方法大量制备单克隆抗体2D5。

五、单克隆抗体2D5性质的鉴定

1、单克隆抗体2D5的效价

采用间接非竞争ELISA方法检测单克隆抗体2D5的效价。

实验结果表明，单克隆抗体2D5的效价高于8×10³。

2、单克隆抗体2D5的性质检测

采用单抗类型检测试剂盒(美国sigma公司的产品)检测单克隆抗体2D5的亚型。

实验结果见表1。结果表明，单克隆抗体2D5的类型为IgG2a。

表1

实施例3、检测地塞米松的胶体金试纸的制备

胶体金溶液为上海杰一生物技术有限公司的产品；该胶体金溶液中胶体金颗粒直径约为40nm。

1、金标垫的制备

(1)胶体金包单克隆抗体2D5溶液的制备

经过大量实验，胶体金包单克隆抗体2D5溶液的制备方法如下：取1mL胶体金溶液，加入50μL硼酸钾水溶液(浓度为0.2mol/L)，混匀；然后加入10μg单克隆抗体2D5，轻轻摇晃10min；再加入40μL10％(v/v)BSA水溶液，颠倒均匀10min；4℃、10000rpm离心15min，收集沉淀并用200μL pH7.5、0.01M的磷酸盐缓冲液悬浮，得到胶体金包单克隆抗体2D5溶液。

(2)金标垫的制备

取胶体金包单克隆抗体2D5溶液，均匀喷涂在聚酯纤维素膜上(单克隆抗体2D5的喷样量为0.015μg/cm²，喷涂面积为0.01cm²)，然后自然晾干，得到金标垫。

2、包被质控线和检测线的硝酸纤维素膜的制备

(1)用pH7.5、0.01M的磷酸盐缓冲液稀释DSMS-H₂-BSA，得到浓度为0.3mg/mL的检测线溶液，用于包被检测线。

(2)pH7.5、0.01M的磷酸盐缓冲液稀释羊抗鼠的IgG抗体(美国sigma公司的产品)，得到浓度为0.5mg/mL的质控线溶液，用于包被质控线。

(3)取质控线溶液和检测线溶液，分别均匀喷涂在硝酸纤维素膜上(喷样量均为10μL/cm²，喷涂面积为0.01cm²)，形成相互分离的质控线(C)和检测线(T)，室温自然晾干，得到包被质控线和检测线的硝酸纤维素膜。包被质控线和检测线的硝酸纤维素膜上，质控线和检测线的间距为0.5cm。

3、检测地塞米松的胶体金试纸的组装

检测地塞米松的胶体金试纸由吸水垫(如滤纸)、包被质控线和检测线的硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫(材质为玻璃纤维素膜)四部分组成。

检测地塞米松的胶体金试纸的组装步骤如下：将吸水垫用双面胶粘贴在包被质控线和检测线的硝酸纤维素膜的一端(重叠长度为0.2cm)，然后在包被质控线和检测线的硝酸纤维素膜的另一端上用双面胶粘贴金标垫的一端(重叠长度为0.2cm)，将金标垫的另一端上用双面胶粘贴样品垫(重叠长度为0.2cm)，最后将它们用双面胶粘贴在塑料背板(如PVC底板)上，切成宽度为3mm的检测地塞米松的胶体金试纸。将该胶体金试纸用塑封袋密封后放干燥盒保存备用。

检测地塞米松的胶体金试纸的结构示意图见图3。根据需要，还可以在样品垫上设置加样孔(S)。

4、检测地塞米松的胶体金试纸的使用方法和判断标准

取检测地塞米松的胶体金试纸，向加样孔中加入70μL待测溶液，待测溶液被样品垫吸取后继续向上端移动，流经金标垫时与单克隆抗体2D5发生作用，然后向包被质控线和检测线的硝酸纤维素膜渗移，根据硝酸纤维素膜上显出的红色反应线条情况进行如下判断：

①如果在硝酸纤维素膜上的检测线和质控线处均显出红色反应线条，则待测溶液中不含有地塞米松；其原理为待测溶液中不含有地塞米松，所以不能与金标垫上的单克隆抗体2D5结合形成复合物，单克隆抗体2D5流经检测线能与DSMS-H₂-BSA结合、因而检测线处显出红色反应线条，胶体金包单克隆抗体2D5流经质控线能与羊抗鼠的IgG抗体结合、因而质控线处显出红色反应线条；

②如果仅在硝酸纤维素膜上的质控线处显出红色反应线条，则待测溶液中含有地塞米松；其原理为待测溶液中的地塞米松与金标垫上的单克隆抗体2D5结合形成复合物，此复合物流经检测线不能与DSMS-H₂-BSA结合、因而检测线处不显出红色反应线条，此复合物流经质控线能与羊抗鼠的IgG抗体结合、因而质控线处显出红色反应线条；

③如果硝酸纤维素膜上的质控线处不显出红色反应线条，则为无效实验结果，需重新测定。

实施例4、检测地塞米松的胶体金试纸的最小检出限

1、地塞米松标准品稀释液的制备

取地塞米松标准品(北京百灵威科技有限公司的产品)，用磷酸盐缓冲液溶解并稀释，得到地塞米松标准品稀释液；地塞米松标准品稀释液的浓度为0ng/mL、12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL或200ng/mL。

2、测定

取检测地塞米松的胶体金试纸，向加样孔中加入70μL地塞米松标准品稀释液，静置15min后，观察硝酸纤维素膜上显出的红色反应线条情况。

实验结果见图4。结果表明，当地塞米松标准品稀释液的浓度为200ng/mL以上，仅在硝酸纤维素膜上的质控线处显出红色反应线条；当地塞米松标准品稀释液的浓度小于200ng/mL，硝酸纤维素膜上的检测线和质控线处均显出红色反应线条。结果表明，检测地塞米松的胶体金试纸的最小检出限为200ng/mL。

实施例5、检测地塞米松的胶体金试纸在检测化妆品中是否含有地塞米松中的应用

超声提取的参数为频率50Hz，温度16-25℃。

一、化妆品前处理

1、面膜化妆品前处理

随机选取46个市售面膜化妆品进行前处理，得到面膜样品。每个面膜化妆品进行前处理的步骤如下：

(1)取离心管(规格为10mL)，加入1g面膜化妆品和3mL饱和NaCl溶液，振荡均匀；然后加入2mL乙腈，超声提取10min。

(2)完成步骤(1)后，5000rpmin离心10min，收集上清液(约1mL)。

(3)完成步骤(2)后，取上清液(约1mL)，用氮气吹干；然后加入1mL磷酸盐缓冲液溶解，得到面膜样品。

2、膏霜化妆品前处理

随机选取16个市售面霜化妆品进行前处理，得到面霜样品。每个面霜化妆品进行前处理的步骤如下：

(1)取离心管(规格为10mL)，加入1g面霜化妆品和2mL乙腈，振荡均匀，然后超声提取10min。

(2)完成步骤(1)后，5000rpmin离心10min，收集上清液(约1mL)。

(3)完成步骤(2)后，取上清液(约1mL)，用氮气吹干；然后加入1mL磷酸盐缓冲液溶解，得到面霜样品。

3、润肤水化妆品前处理

随机选取20个市售润肤水化妆品进行前处理，得到润肤水样品。每个润肤水化妆品进行前处理的步骤如下：

(1)取离心管(规格为10mL)，加入1g润肤水化妆品和3mL饱和NaCl溶液，振荡均匀；然后加入2mL乙腈，超声提取10min。

(2)完成步骤(1)后，5000rpmin离心10min，收集上清液(约1mL)。

(3)完成步骤(2)后，取上清液(约1mL)，用氮气吹干；然后加入1mL磷酸盐缓冲液溶解，得到润肤水样品。

二、检测化妆品中是否含有地塞米松

待测化妆品样品为46个面膜样品、16个面霜样品和20个润肤水样品。

A、采用检测地塞米松的胶体金试纸检测化妆品中是否含有地塞米松

取检测地塞米松的胶体金试纸，向加样孔中加入70μL待测化妆品样品，静置15min后，观察硝酸纤维素膜上显出的红色反应线条情况。

B、采用LC-MS方法检测各个待测化妆品样品中地塞米松的含量。

部分检测结果见表2。结果表明，采用实施例3制备的检测地塞米松的胶体金试纸可以检测化妆品中是否含有地塞米松，准确性较高。

表2

注：ND表示未检测到地塞米松。

Claims (10)

1.一种用于检测地塞米松的胶体金试纸，其特征在于：金标垫上包被有地塞米松抗体标记的胶体金，反应膜上的质控线位置包被所述地塞米松抗体的抗体，检测线位置包被所述地塞米松抗体的抗原；

所述地塞米松抗体为以式(II)所示的化合物与载体蛋白的偶联物作为免疫原制备的抗体；

2.如权利要求1所述的胶体金试纸，其特征在于：所述地塞米松抗体为a1)或a2)或a3)：

a1)由杂交瘤细胞株2D53D12分泌产生的单克隆抗体；杂交瘤细胞株2D53D12在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.15195；

a2)式(II)所示的化合物与载体蛋白的偶联物作为免疫原免疫动物后经体细胞杂交获得的单克隆抗体；

a3)式(II)所示的化合物与载体蛋白的偶联物作为免疫原对动物加强免疫所获得的多克隆抗体。

3.如权利要求1所述的胶体金试纸，其特征在于：所述地塞米松抗体的抗体为羊抗鼠的IgG抗体。

4.如权利要求1所述的胶体金试纸，其特征在于：所述地塞米松抗体的抗原为权利要求1中式(II)所示的化合物与载体蛋白的偶联物。

5.如权利要求1至4任一所述的胶体金试纸，其特征在于：所述载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清白蛋白。

6.如权利要求1所述的胶体金试纸，其特征在于：所述反应膜为硝酸纤维素膜。

7.如权利要求1所述的胶体金试纸，其特征在于：所述金标垫的材质为聚酯纤维素膜。

8.采用权利要求1至7任一所述的胶体金试纸检测待测样本中是否含有地塞米松的方法，包括如下步骤：将权利要求1至7任一所述的胶体金试纸的样品垫浸入待测溶液，静置10min以上，然后观察反应膜上显出的红色反应线条，进行如下判断：

(1)如果反应膜上的检测线和质控线处均显出红色反应线条，则待测溶液中不含有地塞米松；

(2)如果反应膜上仅质控线处显出红色反应线条，则待测溶液中含有地塞米松；

(3)如果反应膜上质控线处不显出红色反应线条，则为无效结果。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于：所述待测溶液为化妆品处理液；制备所述化妆品处理液的步骤为a1)-a3)：

a1)向化妆品中加入乙腈，超声提取；

a2)完成步骤a1)后，离心，收集上清液；

a3)完成步骤a2)后，取所述上清液，氮气吹干，加入磷酸盐缓冲液溶解，得到化妆品处理液。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于：所述步骤a1)中，还可加入饱和NaCl溶液。