CN108982680A - 一种硫酸氢氯吡格雷中硫酸二甲酯含量的测定方法 - Google Patents

一种硫酸氢氯吡格雷中硫酸二甲酯含量的测定方法 Download PDF

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张芳
陈敏佳
邱学艳
胡素招
安建国
黄鲁宁
陈茜
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Shanghai Aobo Bio Pharmaceutical Technology Co Ltd
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography

Abstract

本发明公开了一种硫酸氢氯吡格雷中硫酸二甲酯含量的测定方法，该方法用挥发性胺作为衍生试剂与硫酸氢氯吡格雷中硫酸二甲酯形成衍生物，然后用高效液相色谱质谱联用仪测定衍生物的含量，从而得出硫酸氢氯吡格雷中硫酸二甲酯的含量。该分析方法与现有技术相比具有专一性好,重现性好，灵敏度极高，适合做痕量分析等特点。

Description

一种硫酸氢氯吡格雷中硫酸二甲酯含量的测定方法
技术领域
本发明涉及用挥发性胺衍生硫酸二甲酯，用高效液相色谱质谱联用仪测定衍生物的含量，从而计算出硫酸氢氯吡格雷中硫酸二甲酯的含量。此方法能较好的控制原料药中硫酸二甲酯含量，为患者的健康安全用药提供保障，属于医药技术领域。
技术背景
硫酸氢氯吡格雷，化学名Clopidogrel sμlfate。
为一种用于预防和治疗因血小板高聚集引起的心、脑及其他动脉循环障碍疾病的药物。硫酸氢氯吡格雷结构如下：
硫酸氢氯吡格雷中含有反应残留的硫酸二甲酯，结构如下：
准确定量地测定硫酸氢氯吡格雷中的硫酸二甲酯含量极具挑战性。硫酸二甲酯极性很大,不具备敏感的紫外吸收基团,并且易水解。因此,很难采用气相、液相色谱和其他分析手段对其进行痕量直接测定。
目前，没有测定硫酸氢氯吡格雷中硫酸二甲酯含量的方法，本发明采用挥发性胺作为衍生试剂与硫酸二甲酯形成稳定的衍生物。形成的衍生物具备优异的液相色谱分离和质谱检测等特征。该分析方法具有专一性好、灵敏度高、重现性好等特点。
发明内容
如上所述，直接定量测定痕量硫酸二甲酯存在各种缺陷。然而,利用硫酸二甲酯带有甲氧基基团这一特征，可改造其特性使之转化为适合定量分析的分子结构。利用二乙胺能快速定量地同甲氧基基团发生化学反应的性质，而衍生试剂与硫酸二甲酯形成的衍生物具有稳定性强和非常适合反相液相色谱分离的特征。除此之外,该衍生物在质谱检测器有灵敏的吸收这一特征使本方法的灵敏度和专一性大大提高。衍生化学反应式如下：
通过试验发现硫酸氢氯吡格雷在乙腈(Acetonitrile)中有非常好的溶解性。本发明将用乙腈(Acetonitrile)作为稀释剂。该分析方法的关键点是对稀释剂中水份进行严格控制。由于稀释剂中含有不确定量的水，这些水将使硫酸二甲酯水解产生不确定量的硫酸，从而使测定结果偏低、重现性较差。为了确保系统中水份含量恒定，并低于可接受的实验误差，本发明使用色谱级的乙腈。
在色谱级的乙腈溶剂中进行衍生反应能准确的定量硫酸氢氯吡格雷中的硫酸二甲酯。
本发明采用的技术方案如下：
样品前处理：
稀释液，采用色谱级的乙腈。衍生液，用稀释液配制成约0.2％的挥发性胺溶液。标准硫酸二甲酯溶液，用衍生液精密配制约150ng/mL的标准硫酸二甲酯溶液。标准品衍生：精密加入1000μL的标准硫酸二甲酯溶液于1.5mL的HPLC进样瓶中，放入恒温烘箱中，60℃放置180min，进样。样品衍生：精密称取10mg样品于1.5mL的HPLC进样瓶中，然后精密加入1000μL衍生液，放入恒温烘箱中，60℃放置180min，进样。
本发明使用色谱柱为：离子色谱柱。流速1mL/min。柱温35℃。流动相A：经过过滤的50mmoL甲酸胺溶于1L的0.1％甲酸水溶液，流动相B：乙腈，梯度如下：
A B
0min 5％ 95％
18min 5％ 95％
质谱检测器：负离子模式，[M-H]-:111
附图说明：
附图1：根据本发明实施例1得到的硫酸二甲酯标准品衍生物质谱图；
附图2：根据本发明实施例1得到的硫酸二甲酯标准品衍生物总离子流图；
附图3：根据本发明实施例2得到的硫酸氢氯吡格雷样品衍生物总离子流图；
附图4：根据本发明实施例3得到的硫酸氢氯吡格雷样品加样回收率总离子流图。
具体实施例
为了更好的理解本发明的技术方案，下面结合本发明的具体实施例作进一步说明，但其不限制于本发明。
实施例一
仪器与条件：
高效液相色谱质谱联用仪：Agilent 1260infinity，MS检测器。
色谱柱：离子色谱柱
流动相：A：水B:乙腈。
等度如下：0～15min，有机相比例保持90％。
柱温：35℃。
进样体积：5μL。
实验步骤：
(1)稀释液A：乙腈
(2)衍生液B:1mL挥发性胺于1000ml容量瓶中，加入A定容。
(3)标准溶液C:精密称取约60mg硫酸二甲酯于10mL容量瓶中，加A定容，摇匀，精密吸取100μL于另一10mL容量瓶中，加A定容，即得C(标准溶液浓度约60μg/mL)。
(4)标准品溶液：分别精密取500μL C和500μL B于2mL HPLC进样瓶中，盖好盖子，60℃烘箱中放置180min，进样。记录硫酸二甲酯标准品衍生物总离子流图，典型图谱见图2。抽取衍生物质谱图，典型图谱见图1。
实施例二
仪器与条件：
高效液相色谱仪：Agilent 1260 infinity，MS检测器。
色谱柱：离子色谱柱
流动相：A：水B:乙腈。
等度如下：0～15min，有机相比例保持90％。
柱温：35℃。
进样体积：5μL。
实验步骤：
(1)稀释液A：乙腈
(2)衍生液B:1mL挥发性胺于1000mL容量瓶中，加入A定容。
(3)样品溶液D:精密称取约20.0mg硫酸氢氯吡格雷样品，分别精密取500μL A和500μL B于2mL HPLC进样瓶中，盖好盖子，60℃烘箱中放置180min，进样。记录硫酸二甲酯标准品衍生物总离子流图，典型图谱见图3。
实施例三
仪器与条件：
高效液相色谱仪：Agilent 1260 infinity，MS检测器。
色谱柱：离子色谱柱
流动相：A：水 B:乙腈。
等度如下：0～15min，有机相比例保持90％。
柱温：35℃。
进样体积：5μL。
实验步骤：
(1)稀释液A：乙腈
(2)衍生液B:1mL挥发性胺于1000mL容量瓶中，加入A定容。
(3)标准溶液C:精密称取约60mg硫酸二甲酯于10ml容量瓶中，加A定容，摇匀，精密吸取100μL于另一10mL容量瓶中，加A定容，即得C约60μg/mL。
(4)样品溶液E:精密称取约20.0mg硫酸氢氯吡格雷样品，分别精密取500μL C和500μL B于2mL HPLC进样瓶中，盖好盖子，60℃烘箱中放置180min，进样。记录硫酸二甲酯标准品衍生物总离子流图，典型图谱见图4。

Claims (4)

1.一种硫酸氢氯吡格雷中硫酸二甲酯含量的测定方法，其特征在于用挥发性胺类作为衍生试剂与硫酸氢氯吡格雷中硫酸二甲酯形成衍生物，然后用高效液相色谱质谱联用仪测定衍生物的含量，从而得出硫酸氢氯吡格雷中硫酸二甲酯的含量。
2.根据权利要求1所述，其特征在于硫酸二甲酯衍生的反应中用挥发性胺类的乙腈作为衍生剂。
3.根据权利要求2所述，其特征在于采用高效液相色谱质谱联用仪，负离子选择离子模式。
4.根据权利要求1所述，其特征在于该方法包括以下几个步骤：
(1)取硫酸氢氯吡格雷原料或制剂粉末，以含有挥发性胺类的乙腈溶液作为衍生剂制备得到样品衍生溶液；
(2)采用离子色谱柱，流动相为5mM-80mM挥发性铵盐0.03％-0.15％挥发性酸水溶液和乙腈，进行洗脱。
(3)柱温控制在25℃-40℃之间，取(1)的样品衍生溶液进样，记录质谱图。
(4)采用质谱检测器，离子选择负离子模式，取(1)的样品衍生溶液进样，记录质谱图。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109696509A (zh) * 2019-01-15 2019-04-30 山东省食品药品检验研究院 一种液质联用检测药品中硫酸二甲酯残留的方法
CN111579689A (zh) * 2020-06-11 2020-08-25 江苏联环药业股份有限公司 一种测定硫酸氢氯吡格雷中硫酸二甲酯含量的方法

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