CN108977499A - 一种人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法及试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法及试剂盒。所述检测方法包括针对乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点设计特异性引物，利用特异性PCR扩增出目的片段，再经酶切消化、单碱基延伸、脱盐纯化处理后通过核酸质谱仪检测分析序列。上述人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，检测准确性高、实验可重性高、通量大、成本低。本发明还提供了一种人类酒精代谢能力基因突变位点的检测试剂盒，包括用于扩增乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点基因的特异性引物对。上述人类酒精代谢能力基因突变位点的检测试剂盒，简化了实验流程，人员操作时间短、难度小，实验自动化程度高。

Description

一种人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法及试剂盒
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，特别是涉及一种人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法及试剂盒。
背景技术
酒精化学名乙醇，饮酒后乙醇经肠胃吸收进入血液。进入体内的乙醇90％-95％通过肝脏进行代谢，其余随尿液、汗液和呼吸排出。乙醇在肝脏内主要需经过两步代谢反应：从乙醇氧化为乙醛；从乙醛再氧化为乙酸。这两步代谢反应都是在酶的催化下进行的，前者的酶叫乙醇脱氢酶(ADH)，后者的酶叫乙醛脱氢酶(ALDH)。基因科学家的研究表明，乙醇脱氢酶主要由ADH1B基因编码，乙醛脱氢酶主要由ALDH2基因编码。ADH1B基因编码乙醇脱氢酶，能够把乙醇迅速降解为乙醛，乙醇脱氢酶是人体内重要的代谢酶，它与乙醛脱氢酶(ALDH2)构成了乙醇脱氢酶系统，参与体内乙醇代谢。其中，ADH1B基因在编码48位置发生了从精氨酸(ADH1B*1，Arg)到组氨酸(ADH1B*2，His)的非同义替换。具有该突变的ADH1B活性大为增强，使得摄入的酒精迅速转化成乙醛，容易导致酗酒。同时，携带ADH1B*1基因型者，上消化道肿瘤高风险。携带ADH1B*2基因型，易产生酒精依赖、酒精中毒；与早发冠心病也有一定关系。因此检测ADH1B具有重要意义。ALDH2有两个等位基因：野生型(ALDH2*1,*504Glu)，突变型(ALDH2*2,*504Lys)。研究证实，ALDH2这一突变导致酶活性发生显著改变，会严重影响酒精、硝酸甘油等的代谢，且这一突变存在明显的种族差异,其在欧美白种人中少见,而在中、日、韩等东亚黄种人中突变率高达30％-50％。检测ALDH2的基因型，对揭示个体酒精代谢解毒能力以及正确使用硝酸甘油，具有重要意义。
目前测定ADH1B和ALDH2基因型的方法主要采用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)、手工或自动测序、序列特异性引物PCR等方法，操作繁琐，检测周期长，检测结果不易准确，难以满足临床检验的要求。
发明内容
基于此，有必要针对上述现有技术中的不足，提供一种人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法及试剂盒。
一种人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：
(1)针对乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点设计特异性引物；
(2)利用特异性PCR扩增出包含乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的目的片段；
(3)利用限制性内切酶消化PCR产物片段；
(4)进行单碱基延伸反应；
(5)进行脱盐纯化处理；
(6)通过核酸质谱仪检测分析目标基因乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的序列。
上述人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，检测准确性高，同金标准Sanger测序法的结果相比，准确率超过99.7％，同时可以直接检测DNA质谱，能检测出样本中的三等位SNP位点的存在，实验可重性高。该方法在检测通量上面比起传统的SNP位点其他检测技术要大很多，一张芯片上可以完成384个生物样本的多重实验，成本折算后单位点成本比其他同类检测SNP位点的技术方法花费少，适合多种用户和批量检测的需求，是检测SNP位点的理想工具。
在其中一个实施例中，所述步骤(1)中设计的特异性引物包括用于扩增乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点基因的特异性引物对，所述特异性引物对包含一条乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的正向引物SEQID Nos：1，和一条乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的反向引物SEQ ID Nos：2，以及包含一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的正向引物SEQ ID Nos：3，和一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的反向引物SEQ ID Nos：4，
乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的正向引物SEQ ID Nos：1的序列为：CTGAATCTGAACAGCTTCTCTT，
乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的反向引物SEQ ID Nos：2的序列为：CAGGTTGCCACTAACCACGTG，
乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的正向引物SEQ ID Nos：3的序列为：ACCCTTTGGTGGCTACAAGATGTCG，
乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的反向引物SEQ ID Nos：4的序列为：AGCAGGTCCCACACTCACAG。
在其中一个实施例中，所述步骤(2)中特异性PCR扩增的反应程序为：98℃热启动，10分钟；95℃变性，30秒；55℃退火，30秒；72℃延伸，30秒；扩增40个循环；72℃终延伸，5分钟。
在其中一个实施例中，所述步骤(3)中的限制性内切酶进行消化处理条件为：37℃消化处理45分钟，85℃加热变性5分钟，冰浴10分钟。
在其中一个实施例中，所述步骤(3)中的限制性内切酶为虾碱性磷酸酶。
在其中一个实施例中，所述步骤(4)中单碱基延伸反应包括乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物，所述乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：5，乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的单碱基延伸引物SEQ ID Nos：5的序列为：ATGGTGGCTGTAGGAATCTGTC，所述乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：6，乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物SEQID Nos：6的序列为：TACGGGCTGCAGGCATACACT。
在其中一个实施例中，所述步骤(4)中单碱基延伸反应的反应程序为：95℃热启动，1分钟；95℃变性，5秒；56℃退火，5秒；80℃延伸，5秒；扩增40个循环；72℃终延伸，3分钟。
在其中一个实施例中，所述步骤(6)的核酸质谱检测的具体步骤为：
(1)在树脂板上铺好待用树脂，风干5-10分钟；
(2)向样本板的反应孔中加入待测的样本，补充25ul ddH2O，用封口膜密封，3000转/分钟瞬时离心；
(3)除去封口膜，将样本板倒扣在步骤(1)的树脂板上固定，然后将样本板和树脂板一起翻转，使风干的树脂落入样本板的反应孔内，用封口膜密封，3000转/分钟瞬时离心；
(4)将样本板置于旋转器上慢速旋转20分钟，再3000转/分钟离心5分钟，然后点样上机，用核酸质谱仪进行检测。
本发明还提供了一种人类酒精代谢能力基因突变位点的检测试剂盒，包括用于扩增乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点基因的特异性引物对，所述特异性引物对包含一条乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的正向引物SEQ ID Nos：1，和一条乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的反向引物SEQ IDNos：2，以及包含一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的正向引物SEQ ID Nos：3，和一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的反向引物SEQ ID Nos：4，
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乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的反向引物SEQ ID Nos：4的序列为：AGCAGGTCCCACACTCACAG。
上述人类酒精代谢能力基因突变位点的检测试剂盒，简化了实验流程，人员操作时间短、难度小，实验自动化程度高。
在其中一个实施例中，所述试剂盒还包括乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物，所述乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：5，乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的单碱基延伸引物SEQ ID Nos：5的序列为：ATGGTGGCTGTAGGAATCTGTC，所述乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：6，乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物SEQ ID Nos：6的序列为：TACGGGCTGCAGGCATACACT。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果；
(1)本发明所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法在检测通量上面比起传统的SNP位点其他检测技术要大很多，一张芯片上可以完成384个生物样本的多重实验，是检测SNP位点的理想工具；
(2)本发明所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法检测准确性高，同金标准Sanger测序法的结果相比，准确率超过99.7％，同时可以直接检测DNA质谱，能检测出样本中的三等位SNP位点的存在，实验可重性高。
(3)本发明所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法低成本、性价比高，一张芯片上可以完成384个生物样本的多重实验，成本折算后单位点成本比其他同类检测SNP位点的技术方法花费少，适合多种用户和批量检测的需求。
(4)本发明所述的基因序列SNP位点核酸质谱检测方法实验流程简单、人员操作时间短、难度小，实验自动化程度高，数据处理软件处理方便，报告结果清晰易懂。
附图说明
图1为本发明一实施例的核酸质谱分析图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
一种人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：
(1)针对乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点设计特异性引物；
(2)利用特异性PCR扩增出包含乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的目的片段；
(3)利用限制性内切酶消化PCR产物片段；
(4)进行单碱基延伸反应；
(5)进行脱盐纯化处理；
(6)通过核酸质谱仪检测分析目标基因乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的序列。
本发明所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法主要基于PCR和单碱基延伸技术，其原理是首先通过PCR引物对含待检SNP的目标片段进行扩增，PCR结束后加入限制性内切酶去除反应液中的dNTP。然后在反应液中加入SNP延伸引物及ddNTP等相关组分并进行单碱基延伸反应，反应过程中SNP延伸引物可与待检测SNP的5’端序列结合并延伸一个碱基，根据不同SNP模板可得到不同的延伸产物。
优选地，所述步骤(1)中设计的特异性引物包括用于扩增乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点基因的特异性引物对，所述特异性引物对包含一条乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的正向引物SEQ ID Nos：1，和一条乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的反向引物SEQ ID Nos：2，以及包含一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的正向引物SEQ ID Nos：3，和一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的反向引物SEQ ID Nos：4，
乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的正向引物SEQ ID Nos：1的序列为：CTGAATCTGAACAGCTTCTCTT，
乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的反向引物SEQ ID Nos：2的序列为：CAGGTTGCCACTAACCACGTG，
乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的正向引物SEQ ID Nos：3的序列为：ACCCTTTGGTGGCTACAAGATGTCG，
乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的反向引物SEQ ID Nos：4的序列为：AGCAGGTCCCACACTCACAG。
相比于其他传统的检测乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点基因的技术手段，本发明经检测乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点基因区域的SNP位点，这一点就与传统的荧光定量PCR、或Sanger测序法较为不同。正如上述核酸质谱的原理，利用核酸质谱检测方法仅在目的区域SNP位点延伸一个具有多态性的碱基，不需要检测整个特异性扩增的基因片段。整体检测的通量、实验时间、反应成本、结果进度均较传统方法有很大的提升及优化，具有很好的市场应该价值。
优选地，所述步骤(2)中特异性PCR扩增的反应程序为：98℃热启动，10分钟；95℃变性，30秒；55℃退火，30秒；72℃延伸，30秒；扩增40个循环；72℃终延伸，5分钟。
优选地，所述步骤(3)中的限制性内切酶进行消化处理条件为：37℃消化处理45分钟，85℃加热变性5分钟，冰浴10分钟。
优选地，所述步骤(3)中的限制性内切酶为虾碱性磷酸酶。
优选地，所述步骤(4)中单碱基延伸反应包括乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物，所述乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：5，乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的单碱基延伸引物SEQ ID Nos：5的序列为：ATGGTGGCTGTAGGAATCTGTC，所述乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：6，乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物SEQID Nos：6的序列为：TACGGGCTGCAGGCATACACT。
优选地，所述步骤(4)中单碱基延伸反应的反应程序为：95℃热启动，1分钟；95℃变性，5秒；56℃退火，5秒；80℃延伸，5秒；扩增40个循环；72℃终延伸，3分钟。
优选地，所述步骤(6)的核酸质谱检测的具体步骤为：
(1)在树脂板上铺好待用树脂，风干5-10分钟；
(2)向样本板的反应孔中加入待测的样本，补充25ul ddH2O，用封口膜密封，3000转/分钟瞬时离心；
(3)除去封口膜，将样本板倒扣在步骤(1)的树脂板上固定，然后将样本板和树脂板一起翻转，使风干的树脂落入样本板的反应孔内，用封口膜密封，3000转/分钟瞬时离心；
(4)将样本板置于旋转器上慢速旋转20分钟，再3000转/分钟离心5分钟，然后点样上机，用核酸质谱仪进行检测。
核酸质谱检测时通过将反应液与树脂混合进行离子交换，用于去除液体中吸附于DNA片段上的K+、Na+、Mg2+等离子，防止其干扰质谱检测结果。
反应液与基质在靶板上结晶，进行质谱检测并得到图谱。由于各延伸产物分子量不同，因此可以在各自的分子量位置查看是否出现检测峰，然后判断该样品的SNP分型。核酸质谱平台特异性良好，使用国际通用标准品能达到30ppm，最低检测限为5ng基因组DNA,对比试验选择的金标准验证技术为Sanger测序技术和同类型获批的检测产品，符合性均为100％。
一种HLA-B*5801基因的检测试剂盒，包括用于扩增乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点基因的特异性引物对，所述特异性引物对包含一条乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的正向引物SEQ ID Nos：1，和一条乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的反向引物SEQ ID Nos：2，以及包含一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的正向引物SEQ ID Nos：3，和一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的反向引物SEQ ID Nos：4，
乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的正向引物SEQ ID Nos：1的序列为：CTGAATCTGAACAGCTTCTCTT，
乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的反向引物SEQ ID Nos：2的序列为：CAGGTTGCCACTAACCACGTG，
乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的正向引物SEQ ID Nos：3的序列为：ACCCTTTGGTGGCTACAAGATGTCG，
乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的反向引物SEQ ID Nos：4的序列为：AGCAGGTCCCACACTCACAG。
优选地，所述试剂盒还包括乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物，所述乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：5，乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的单碱基延伸引物SEQ ID Nos：5的序列为：ATGGTGGCTGTAGGAATCTGTC，所述乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：6，乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物SEQ ID Nos：6的序列为：TACGGGCTGCAGGCATACACT。
以下结合具体实施例对本发明作进一步阐述。
实施例1：利用核酸质谱检测方法对人乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的检测
1.人基因组DNA提取
(1)在生物安全柜中对病人的血液样本进行基因组DNA提取操作。采用Blood&CellCulture DNA Mini Kit(Qiagen Cat No:13323)进行提取实验。
(2)引物设计
针对人乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点进行SNP位点引物设计，分别针对这个SNP设计特异性的PCR引物和单碱基延伸引物，所设计的PCR引物序列如表1所示。
表1
(3)特异性PCR反应
利用特异性PCR技术扩增出包含乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的目的片段，按照表2的反应体系配制扩增反应，反应体系配制完成后按照表3的反应程序进行扩增。
表2
5ul体系/ul
10*PCR buffer 0.5
2.5mmol/L MgCl2 0.2
2.5mmol/L Dntp 0.25
ADH1B(rs1229984)F(10uM) 0.5
ADH1B(rs1229984)R(10uM) 0.5
ALDH2(rs671)F(10uM) 0.5
ALDH2(rs671)R(10uM) 0.5
Hot start PCR Taq(5U/ul) 0.5
DNA(10ng/ul) 1
ddH2O 0.55
表3
(4)碱式磷酸酶消化处理
利用虾碱式磷酸酶对多重PCR反应产物进行消化，去除体系内多余的dNTP。每个反应体系中加入0.5U的碱式磷酸酶，用配套的10*Tris-Buffer调节缓冲液浓度，每个反应加入10*Tris-Buffer 0.5ul。然后在预热的水浴锅内进行37℃消化处理45分钟，然后85℃加热变性5分钟，最后冰浴10分钟。
(5)进行单碱基延伸反应
配制单碱基延伸反应体系，按照表4的反应体系配置。取2ul配制好的单碱基延伸反应的反应液加入到前步消化反应的体系内，然后按照表5的反应程序进行单碱基延伸反应。
表4
表5
(6)产物脱盐纯化及核酸质谱上机前处理
(a)在树脂板上铺好待用树脂，风干5-10分钟；
(b)向样本板的反应孔中加入待测的样本，补充25ul ddH2O，用封口膜密封，3000转/分钟瞬时离心；
(c)除去封口膜，将样本板倒扣在步骤(1)的树脂板上固定，然后将样本板和树脂板一起翻转，使风干的树脂落入样本板的反应孔内，用封口膜密封，3000转/分钟瞬时离心；
(d)将样本板置于旋转器上慢速旋转20分钟，再3000转/分钟离心5分钟，然后点样上机，用核酸质谱仪进行检测。
(7)核酸质谱仪上机及软件数据分析
按照仪器的操作规程进行上机检测操作，待样品检测完毕，对检测结果进行软件处理分析，最终得到检测结果，核酸质谱分析图具体见图1。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims (10)

1.一种人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：
(1)针对乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点设计特异性引物；
(2)利用特异性PCR扩增出包含乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的目的片段；
(3)利用限制性内切酶消化PCR产物片段；
(4)进行单碱基延伸反应；
(5)进行脱盐纯化处理；
(6)通过核酸质谱仪检测分析目标基因乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的序列。
2.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中设计的特异性引物包括用于扩增乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点基因的特异性引物对，所述特异性引物对包含一条乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的正向引物SEQ ID Nos：1，和一条乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的反向引物SEQ ID Nos：2，以及包含一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的正向引物SEQ ID Nos：3，和一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的反向引物SEQ IDNos：4。
3.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中特异性PCR扩增的反应程序为：98℃热启动，10分钟；95℃变性，30秒；55℃退火，30秒；72℃延伸，30秒；扩增40个循环；72℃终延伸，5分钟。
4.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中的限制性内切酶进行消化处理条件为：37℃消化处理45分钟，85℃加热变性5分钟，冰浴10分钟。
5.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中的限制性内切酶为虾碱性磷酸酶。
6.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中单碱基延伸反应包括乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物，所述乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：5，所述乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：6。
7.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中单碱基延伸反应的反应程序为：95℃热启动，1分钟；95℃变性，5秒；56℃退火，5秒；80℃延伸，5秒；扩增40个循环；72℃终延伸，3分钟。
8.根据权利要求1所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测方法，其特征在于，所述步骤(6)的核酸质谱检测的具体步骤为：
(1)在树脂板上铺好待用树脂，风干5-10分钟；
(2)向样本板的反应孔中加入待测的样本，补充25ul ddH2O，用封口膜密封，3000转/分钟瞬时离心；
(3)除去封口膜，将样本板倒扣在步骤(1)的树脂板上固定，然后将样本板和树脂板一起翻转，使风干的树脂落入样本板的反应孔内，用封口膜密封，3000转/分钟瞬时离心；
(4)将样本板置于旋转器上慢速旋转20分钟，再3000转/分钟离心5分钟，然后点样上机，用核酸质谱仪进行检测。
9.一种人类酒精代谢能力基因突变位点的检测试剂盒，其特征在于，包括用于扩增乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点基因的特异性引物对，所述特异性引物对包含一条乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的正向引物SEQ ID Nos：1，和一条乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的反向引物SEQ ID Nos：2，以及包含一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的正向引物SEQ ID Nos：3，和一条乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的反向引物SEQ ID Nos：4。
10.根据权利要求9所述的人类酒精代谢能力基因突变位点的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点和乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物，所述乙醇脱氢酶ADH1B基因rs1229984位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：5，所述乙醛脱氢酶ALDH2基因rs671位点的单碱基延伸引物包含一条单碱基延伸引物SEQ ID Nos：6。
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