CN108977400A - 一种短小芽孢杆菌培养基 - Google Patents

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张晓佳
张文晋
王建寰
余建强
李明
付雪艳
高晓娟
赵云生
吴秀丽
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract

本发明公开了一种短小芽孢杆菌培养基，其以重量百分比计各组分为：麦芽糖4.0～5.0％，大豆蛋白胨3.0～4.0％，磷酸氢二钾0.01～0.03％，其余为水。该培养基可促使短小芽孢杆菌生物量增加，较现有技术的培养基，菌落形成的数量和比例以及发酵时间整体显著增加85％以上，从而更大幅度地提高了产品质量，降低了生产成本。

Description

一种短小芽孢杆菌培养基
技术领域：
本发明涉及一种微生物培养基，具体涉及一种短小芽孢杆菌培养基。
背景技术：
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)为芽孢杆菌目、芽孢杆菌科、短小芽孢杆菌属，菌体细杆状，一般为0.6～0.7μm×2.0～3.0μm，革兰氏阳性。是一种饲用微生物菌种，适用于猪、禽类、反刍动物，也适用于鱼、虾等水产动物。可防治小麦根腐病、草莓灰霉病，具有开发为农用菌剂的潜力。
目前，对于芽孢杆菌的工业化液体深层发酵工艺，普遍存在着发酵水平偏低，芽孢形成不一致，产品质量不稳定等缺陷。一般多采取调整发酵过程中的温度、压力、通气搅拌等工艺条件来提高有效活菌数量，或对菌种的芽胞采用高温处理，使之在工业发酵过程中能同步形成芽孢，从而提高芽孢形成的数量和比例，来缩短发酵时间，但这些方法实际操作起来甚为麻烦，而且增加了生产成本。现有技术中已有芽孢杆菌培养基，如发明专利CN102391964B公开的一种芽孢杆菌培养基，其组分含有玉米浆、葡萄糖、磷酸氢二钾、硫酸铵、硫酸镁、酵母膏、蛋白胨、碳酸钙、红糖、豆芽汁、水；该培养基可促使短小芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌快速进入对数生长期，发酵液菌数平均可提高20％以上，芽孢比例大于90％；可使发酵周期缩短4-6小时，从而大大提高产品质量，降低生产成本。鉴于此，针对于短小芽孢杆菌的特征，提供一种专门用于培养短小芽孢杆菌的培养基。
发明内容：
本发明的目的旨在提供一种适合短小芽孢杆菌快速生长的培养基，提高菌落形成的数量和比例，缩短发酵时间。
本发明采取以下技术方案：
一种短小芽孢杆菌培养基，以重量百分比计其各组分为：麦芽糖4.0～5.0％，大豆蛋白胨3.0～4.0％，磷酸氢二钾0.01～0.03％，其余为水。
本发明的有益效果是该培养基可促使短小芽孢杆菌生物量增加，较现有技术的培养基，菌落形成的数量和比例以及发酵时间整体显著增加85％以上，从而更大幅度地提高了产品质量，降低了生产成本。
附图说明：
图1是本发明具体实施方式中初始培养基与优化培养基效果比较图。
具体实施方式：
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案进行进一步地说明。
实施例1
(1)用短小芽孢杆菌发酵。用不同碳源培养基发酵如下：
碳源分别为葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、山梨醇、D-聚糖、D-木糖和可溶性蛋白，重量百分比为1.5％；其余氮源固定均为牛肉膏0.5％，胰蛋白胨1.5％；无机盐均为NaCl0.5％；水96％。
采用常规的发酵工艺在250mL的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定OD275值，麦芽糖培养基较其他培养基OD275值明显增加，最高可增加112.03％。
(2)用短小芽孢杆菌发酵。用不同氮源培养基发酵如下：
氮源分别为酵母浸粉、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、牛肉膏，重量百分比为1.5％；碳源固定均为葡萄糖1.5％；无机盐均为NaCl 0.5％；水96.5％。
采用常规的发酵工艺在250mL的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定OD275值，大豆蛋白胨培养基较其他培养基OD275值明显增加，最高可增加145.54％。
(3)用短小芽孢杆菌发酵。用不同无机盐培养基发酵如下：
无机盐分别为Na2HPO4、KCl、K2HPO4、MgSO4·7H20、KH2PO4、NaCl，重量百分比为0.5％，碳源固定均为葡萄糖1.5％；氮源固定均为胰蛋白胨1.5％；水96.5％。
采用常规的发酵工艺在250mL的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定OD275值，KH2PO4培养基较其他培养基OD275值明显增加，最高可增加63.03％。
实施例2
(1)用短小芽孢杆菌发酵。用不同重量百分比的麦芽糖做如下培养基：
麦芽糖重量百分比分别为：0.5％，1.0％，1.5％，2.0％，2.5％，3.0％，3.5％，4.0％，4.5％，5.0％；氮源固定均为胰蛋白胨5.0％；无机盐均为NaCl 1.67％。
采用常规的发酵工艺在250mL的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定OD275值，4.5％麦芽糖培养基较其他培养基OD275值明显增加，最高可增加83.09％。
(2)用短小芽孢杆菌发酵。用不同重量百分比的大豆蛋白胨做如下培养基：
大豆蛋白胨重量百分比分别为：0.5％，1.0％，1.5％，2.0％，2.5％，3.0％，3.5％，4.0％，4.5％，5.0％；碳源固定均为葡萄糖5.0％；无机盐均为NaCl 1.67％，其他为水。
采用常规的发酵工艺在250mL的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定OD275值，3.5％大豆蛋白胨培养基较其他培养基OD值明显增加，最高可增加757.63％。
(3)用短小芽孢杆菌发酵。用不同重量百分比的KH2PO4做如下培养基：
KH2PO4重量百分比分别为：0.01％，0.02％，0.03％，0.04％，0.05％，0.06％，0.07％，0.08％；碳源固定均为葡萄糖5.0％；氮源固定均为胰蛋白胨5.0％。采用常规的发酵工艺在250mL的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定OD值，0.02％KH2PO4培养基较其他培养基OD275值明显增加，最高可增加121.1％。
实施例3
用短小芽孢杆菌发酵。在单因素试验的基础上，选择麦芽糖用量(A)、大豆蛋白胨用量(B)、无机盐KH2PO4用量(C)为考察因素，以OD275值为评价指标，选择L9(33)正交设计试验优化短小芽孢杆菌培养基成分。
结果表明：三个因素对OD275值的影响大小依次为C无机盐KH2PO4用量>A麦芽糖用量>B大豆蛋白胨用量，三个因素A、B、C对短小芽孢杆菌的发酵均有显著影响。取各因素较高水平的组合，得短小芽孢杆菌发酵培养基组分为A2B3C1。A2B3C1组合培养基较其他组合培养基OD275值明显增加，最高可增加166.6％。
实施例4
用短小芽孢杆菌发酵。进行优化前后对比试验，结果可参见图1：初始培养基与优化培养基效果比较。短小芽孢杆菌分别在优化后的培养基(A2B3C1)与优化前的培养基即基础培养基(葡萄糖1.5％，牛肉膏0.5％，胰蛋白胨1.5％，无机盐NaCl 0.5％，水96％)采用常规的发酵工艺在250mL的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定OD275值，优化后的培养基较优化前OD275值显著增加86.51％。

Claims (1)

1.一种短小芽孢杆菌培养基，其特征在于：其组分以重量百分比计为：麦芽糖4.0～5.0％，大豆蛋白胨3.0～4.0％，磷酸氢二钾0.01～0.03％，其余为水。
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