CN108968038A - 一种樱桃酵素及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种樱桃酵素及制备方法,即将樱桃用自来水洗净后经吹干、去核、榨汁后用100目纱布过滤,得到纯樱桃汁与纯净水进行混合,所得纯樱桃汁水溶液中加入为其总量3%的葡萄糖后调pH为6.0‑7.0,再经杀菌后得到发酵原料液,接种干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009后在30‑40℃下发酵24‑80h,得到的发酵液中,按每升发酵液计算,依次添加蔗糖40‑80g,柠檬酸5‑10g,羧甲基纤维钠2‑4g,混匀后121℃杀菌20min即得樱桃酵素。所得樱桃酵素与自然发酵所得樱桃酵素相比,其SOD比酶活含量提高至少35%,抗氧化活性提高至少50%。

Description

一种樱桃酵素及其制备方法
技术领域
本发明涉及果蔬酵素的生产方法,尤其涉及一种樱桃酵素及其制备方法,属于生物工程技术领域。
背景技术
根据中国生物发酵协会的定义,酵素是指以果蔬或其他动、植物等为原料,采用自然或人工接种微生物发酵工艺,后经提取所制得的具有某些特定功能的发酵制品。酵素不仅保存了发酵原料中原有的营养物质,如多酚类、黄酮类、花青素等,而且通过有益菌的发酵代谢产生了一些生物活性成分,如有机酸、氨基酸等。与发酵前相比,微生物的转化使得这些小分子物质更易于人体吸收。
酵素产品根据生产方式为自然发酵和纯种发酵两种方式,由于纯种微生物作为优势菌的大量存在使得发酵时间大为缩短并且避免了有害微生物的繁殖,保证了产品的安全与稳定,提供了生产效率。因而纯种发酵是适合酵素的产业化生产的发酵工艺。但是为使发酵顺利进行,要求人工扩大的菌种不得被污染。因而对发酵设备和环境要求较高,要有严格的灭菌措施和空气净化系统,因此建立单位主材发酵制备酵素的方法十分必要。
樱桃是阿西罗拉樱桃的中文名称,属于蔷薇科樱属,外表色泽鲜艳、晶莹美丽、红如玛瑙,黄如凝脂。营养成分十分丰富,其中以富含维生素C而闻名于世,而且铁元素的含量居于水果首位,是世界公认的“天然VC之王”和“生命之果”,深受消费者喜爱。樱桃收获期短,上市又非常集中,果实容易因破损或感染细菌而腐烂,即使在冷藏条件下储存,也最多只能储存4天左右,因此发展樱桃的深加工变得非常迫切。但目前的果蔬酵素中天然制作主要存在:发酵时间长,影响水果原料稳定性;发酵菌种性能和稳定性差,影响酵素中天然的活性物质等问题。截至目前,关于樱桃酵素的研究很少,专利号为CN 104686958 B的专利文献中公开的一种樱桃酵素的制备方法,采用的是樱桃残渣作为原料,分别在不同时间添加不同量的生物酶进行酶解后通过乳酸菌发酵,再经均质和冻干等工艺制备而成,因此存在制备工艺繁琐复杂,选材片面等技术问题。
相关文献
[1]勾明玥,刘梁,张春枝.采用DPPH法测定26种植物的抗氧化活性[J].食品与发酵工业,2010(03):148-150.
发明内容
本发明的目的之一是为了解决上述的樱桃酵素发酵时间长、果蔬原料不稳定、发酵菌种性能差及制备工艺繁琐复杂等技术问题而提供一种樱桃酵素的制备方法,该樱桃酵素的制备方法仅以樱桃为原料,利用干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei)SITCCNo.10009进行发酵制备所得的樱桃酵素,因此该制备方法具有制备工艺简单,制备过程时间短等优点。
本发明的目的之二是提供上述的一种樱桃酵素制备方法所得的樱桃酵素,该樱桃酵素不仅保持了樱桃原初营养和风味,而且具有高SOD活力和高抗氧化活性。可用于饮料或化妆品生产中,以提高饮料或化妆品的抗氧化能力,具有延缓衰老等作用。
本发明的技术方案
一种樱桃酵素的制备方法,即以新鲜、成熟度好、外表无破损的樱桃为主要原料,通过干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009通过发酵,所得的发酵液再按每升发酵液计算,依次添加蔗糖40-80g,柠檬酸5-10g,羧甲基纤维钠2-4g,混匀后121℃杀菌20min,即得樱桃酵素,其制备过程具体包括以下步骤:
(1)、菌种的选取
所用的菌种,是2017年6月23日于武汉大学中国典型培养物保藏中心的,保藏编号为CCTCC NO:M2017364的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009冷冻干燥管;
(2)、发酵原料液的制备
将新鲜、成熟度好、外表无破损的樱桃用自来水清洗干净后经吹干、去核、用榨汁机进行榨汁、用100目纱布过滤得到纯樱桃汁,然后将所得的纯樱桃汁与纯净水混合,得到纯樱桃汁水溶液,所得的纯樱桃汁水溶液中纯樱桃汁与纯净水的量,按体积百分比计算,纯樱桃汁:纯净水为10-20%:80-90%;
在上述所得的纯樱桃汁水溶液中再加入为纯樱桃汁水溶液总重量3%的葡萄糖,然后用浓度为1mol/L的食用碳酸钠水溶液调pH值至6.0-7.0,然后105℃灭菌10min得到发酵原料液;
(3)、菌种活化
用接种环取无菌水溶解的冷冻干燥管保存的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009菌种一环在乳酸菌琼脂培养基平板上划线,在37℃培养箱中培养24h,得到干酪乳杆菌的平板活化菌种;
(4)、种子培养
用接种环分别挑取步骤(3)所得的干酪乳杆菌的平板活化菌种一环接入装有50mL乳酸菌液体培养基的250mL规格的锥形瓶中,置于37℃的恒温培养箱中培养36h,得到培养液;
将上述所得的培养液在9000rpm转速下室温离心10min,离心所得的沉淀用0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液清洗3次,然后在清洗后的沉淀中加入0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液经400rpm下漩涡震荡重悬菌体,得到种子液;
上述清洗后的沉淀中加入的0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液的量,以保证所得的种子液中,按每毫升计算含干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCC No.10009为1×108~1×1010CFU(CFU,Colony-Forming Units,菌落形成单位,是指单位体积中的细菌群落总数,且只计算活菌数)为准;
(5)、发酵培养
按体积百分比计算,在步骤(2)所得的发酵原料液中接入2-5%的步骤(4)得到的种子液,然后控制温度为30-40℃进行发酵24-80h,得到发酵液;
(6)、综合调配
在步骤(5)所得的发酵液中,按每升发酵液计算,依次添加蔗糖40-80g,柠檬酸5-10g,羧甲基纤维钠2-4g,混匀后121℃杀菌20min,即得樱桃酵素,该樱桃酵素是经干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCC No.10009发酵所得,罐装后即得樱桃酵素成品。
上述所得的一种樱桃酵素,由于具有高的SOD比酶活和高的抗氧化活性,因此适合应用于饮料和化妆品,以提高饮料或化妆品的抗氧化能力,具有延缓衰老等作用。
本发明的有益效果
本发明的一种樱桃酵素的制备方法,仅以樱桃为原料,利用干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009进行发酵制备所得的樱桃酵素,因此该制备方法具有制备工艺简单,制备过程时间短等优点。
进一步,本发明的一种樱桃酵素的制备方法,由于采用的原料樱桃是纯天然的,制备过程中利用低温杀菌、严格控制发酵温度,有效的降低了樱桃酵素营养成分的损失,最大限度保留了樱桃酵素活性。
进一步,本发明的一种樱桃酵素的制备方法,由于制备过程所有的发酵时间控制在80h以内,因此该制备方法具有制备时间短的特点,并且由于制备时间短,相对的避免了樱桃本身含有的风味物质和酵素物质的损失,即保持了樱桃原初营养和风味。
进一步,本发明的一种樱桃酵素,由于制备过程中接入了干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009,所得的樱桃酵素与自然发酵所得的樱桃酵素相比,其SOD比酶活含量至少提高了35%,抗氧化活性至少提高50%,因此可应用于饮料和化妆品领域。
具体实施方式
以下所述仅为本发明的较佳实例而已,并用以限制本发明。凡在本发明的思路和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
本发明的各实施例中所用的樱桃购自上海联华超市。
以下各实施例中所用的乳酸菌液体培养基和乳酸菌固体琼脂培养基是本技术领域的技术人员熟知的,均购自北京陆桥技术股份有限公司。
以下各实施例中所用的0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液溶液是本技术领域的技术人员熟知的,具体配置方法为:称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800mL蒸馏水中,用盐酸调节溶液的pH值至7.4,最后用蒸馏水定容至1L,121℃灭菌20min。
各实施例中所用的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009冷冻干燥管,保藏编号为CCTCC NO:M2017364,是2017年6月23日保存于武汉大学中国典型培养物保藏中心,保藏机构地址:武汉市武昌珞珈山武汉大学中国典型培养物保藏中心,邮编:430072。
实施例1
一种樱桃酵素的制备方法,即以新鲜、成熟度好、外表无破损的樱桃为主要原料,通过干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009通过发酵,所得的发酵液再按每升发酵液计算,依次添加蔗糖40g,柠檬酸5g,羧甲基纤维钠2g,混匀后121℃杀菌20min,即得樱桃酵素,其制备过程具体包括以下步骤:
(1)、菌种的选取
所用的菌种,是2017年6月23日于武汉大学中国典型培养物保藏中心的,保藏编号为CCTCC NO:M2017364的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009冷冻干燥管;
(2)、发酵原料液的制备
将新鲜、成熟度好、外表无破损的樱桃用自来水清洗干净后经吹干、去核、用榨汁机进行榨汁、用100目纱布过滤得到纯樱桃汁,然后将所得的纯樱桃汁与纯净水混合,得到纯樱桃汁水溶液,所得的纯樱桃汁水溶液中纯樱桃汁与纯净水的量,按体积百分比计算,纯樱桃汁:纯净水为10%:90%;
在上述所得的纯樱桃汁水溶液中再加入为纯樱桃汁水溶液总重量3%的葡萄糖,然后用浓度为1mol/L的食用碳酸钠水溶液调pH值至6.0,然后105℃灭菌10min得到发酵原料液;
(3)、菌种活化
用接种环取无菌水溶解的冷冻干燥管保存的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009菌种一环在乳酸菌琼脂培养基平板上划线,在37℃培养箱中培养24h,得到干酪乳杆菌的平板活化菌种;
(4)、种子培养
用接种环分别挑取步骤(3)所得的干酪乳杆菌的平板活化菌种一环接入装有50mL乳酸菌液体培养基的250mL规格的锥形瓶中,置于37℃的恒温培养箱中培养36h,得到培养液;
将上述所得的培养液在9000rpm转速下室温离心10min,离心所得的沉淀用0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液清洗3次,然后在清洗后的沉淀中加入0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液经400rpm下漩涡震荡重悬菌体,得到种子液;
上述清洗后的沉淀中加入的0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液的量,以保证所得的种子液中,按每毫升计算含干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCC No.10009为1×108~1×1010CFU为准;
(5)、发酵培养
按体积百分比计算,在步骤(2)所得的发酵原料液中接入2%的步骤(4)得到的种子液,然后控制温度为30℃进行发酵24h,得到发酵液;
(6)、综合调配
在步骤(5)所得的发酵液中,按每升发酵液计算,依次添加蔗糖40g,柠檬酸5g,羧甲基纤维钠2g,混匀后121℃杀菌20min,即得樱桃酵素,该樱桃酵素是经干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCC No.10009发酵所得,罐装后即得樱桃酵素成品。
实施例2
一种樱桃酵素的制备方法,即以新鲜、成熟度好、外表无破损的樱桃为主要原料,通过干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009通过发酵,所得的发酵液再按每升发酵液计算,依次添加蔗糖40-80g,柠檬酸5-10g,羧甲基纤维钠2-4g,混匀后121℃杀菌20min,即得樱桃酵素,其制备过程具体包括以下步骤:
(1)、菌种的选取
所用的菌种,是2017年6月23日于武汉大学中国典型培养物保藏中心的,保藏编号为CCTCC NO:M2017364的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009冷冻干燥管;
(2)、发酵原料液的制备
将新鲜、成熟度好、外表无破损的樱桃用自来水清洗干净后经吹干、去核、用榨汁机进行榨汁、用100目纱布过滤得到纯樱桃汁,然后将所得的纯樱桃汁与纯净水混合,得到纯樱桃汁水溶液,所得的纯樱桃汁水溶液中纯樱桃汁与纯净水的量,按体积百分比计算,纯樱桃汁:纯净水为20%:80%;
在上述所得的纯樱桃汁水溶液中再加入为纯樱桃汁水溶液总重量3%的葡萄糖,然后用浓度为1mol/L的食用碳酸钠水溶液调pH值至7.0,然后105℃灭菌10min得到发酵原料液;
(3)、菌种活化
用接种环取无菌水溶解的冷冻干燥管保存的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009菌种一环在乳酸菌琼脂培养基平板上划线,在37℃培养箱中培养24h,
得到干酪乳杆菌的平板活化菌种;
(4)、种子培养
用接种环分别挑取步骤(3)所得的干酪乳杆菌的平板活化菌种一环接入装有50mL乳酸菌液体培养基的250mL规格的锥形瓶中,置于37℃的恒温培养箱中培养36h,得到培养液;
将上述所得的培养液在9000rpm转速下室温离心10min,离心所得的沉淀用0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液清洗3次,然后在清洗后的沉淀中加入0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液经400rpm下漩涡震荡重悬菌体,得到种子液;
上述清洗后的沉淀中加入的0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液的量,以保证所得的种子液中,按每毫升计算含干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCC No.10009为1×108~1×1010CFU为准;
(5)、发酵培养
按体积百分比计算,在步骤(2)所得的发酵原料液中接入5%的步骤(4)得到的种子液,然后控制温度为40℃进行发酵80h,得到发酵液;
(6)、综合调配
在步骤(5)所得的发酵液中,按每升发酵液计算,依次添加蔗糖80g,柠檬酸10g,羧甲基纤维钠4g,混匀后121℃杀菌20min,即得樱桃酵素,该樱桃酵素是经干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCC No.10009发酵所得,罐装后即得樱桃酵素成品。
实施例3
一种樱桃酵素的制备方法,即以新鲜、成熟度好、外表无破损的樱桃为主要原料,通过干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009通过发酵,所得的发酵液再按每升发酵液计算,依次添加蔗糖60g,柠檬酸6g,羧甲基纤维钠3g,混匀后121℃杀菌20min,即得樱桃酵素,其制备过程具体包括以下步骤:
(1)、菌种的选取
所用的菌种,是2017年6月23日于武汉大学中国典型培养物保藏中心的,保藏编号为CCTCC NO:M2017364的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009冷冻干燥管;
(2)、发酵原料液的制备
将新鲜、成熟度好、外表无破损的樱桃用自来水清洗干净后经吹干、去核、用榨汁机进行榨汁、用100目纱布过滤得到纯樱桃汁,然后将所得的纯樱桃汁与纯净水混合,得到纯樱桃汁水溶液,所得的纯樱桃汁水溶液中纯樱桃汁与纯净水的量,按体积百分比计算,纯樱桃汁:纯净水为15%:85%;
在上述所得的纯樱桃汁水溶液中再加入为纯樱桃汁水溶液总重量3%的葡萄糖,然后用浓度为1mol/L的食用碳酸钠水溶液调pH值至6.5,然后105℃灭菌10min得到发酵原料液;
(3)、菌种活化
用接种环取无菌水溶解的冷冻干燥管保存的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009菌种一环在乳酸菌琼脂培养基平板上划线,在37℃培养箱中培养24h,得到干酪乳杆菌的平板活化菌种;
(4)、种子培养
用接种环分别挑取步骤(3)所得的干酪乳杆菌的平板活化菌种一环接入装有50mL乳酸菌液体培养基的250mL规格的锥形瓶中,置于37℃的恒温培养箱中培养36h,得到培养液;
将上述所得的培养液在9000rpm转速下室温离心10min,离心所得的沉淀用0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液清洗3次,然后在清洗后的沉淀中加入0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液经400rpm下漩涡震荡重悬菌体,得到种子液;
上述清洗后的沉淀中加入的0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液的量,以保证所得的种子液中,按每毫升计算含干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCC No.10009为1×108~1×1010CFU为准;
(5)、发酵培养
按体积百分比计算,在步骤(2)所得的发酵原料液中接入4%的步骤(4)得到的种子液,然后控制温度为37℃进行发酵60h,得到发酵液;
(6)、综合调配
在步骤(5)所得的发酵液中,按每升发酵液计算,依次添加蔗糖60g,柠檬酸6g,羧甲基纤维钠3g,混匀后121℃杀菌20min,即得樱桃酵素,该樱桃酵素是经干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCC No.10009发酵所得,罐装后即得樱桃酵素成品。
上述所得的含有樱桃酵素的饮料和不含有樱桃酵素的饮料进行对比,在SOD比酶活和抗氧化方面的指标都显著提高,由此表明了该樱桃酵素饮料都具有高的SOD比酶活和抗氧化性。
对比实施例1
一种采用自然发酵法制备樱桃酵素,具体包括以下步骤:
(1)、发酵原料液的制备
将新鲜、成熟度好、外表无破损的樱桃用自来水清洗干净后经吹干、去核、用榨汁机进行榨汁、用100目纱布过滤得到纯樱桃汁,然后将所得的纯樱桃汁与纯净水混合,得到纯樱桃汁水溶液,混合所用的纯樱桃汁与纯净水的量,按体积百分比计算,纯樱桃汁:纯净水为20%:80%;
(2)、发酵培养
将步骤(1)所得的纯樱桃汁水溶液分装到玻璃瓶中,加上专用盖子,室温放置20天进行自然发酵,得到发酵液;
(3)、杀菌
将步骤(2)所得的发酵液控制温度为121℃杀菌20min,即得樱桃酵素,该樱桃酵素是经自然发酵所得,罐装后即得樱桃酵素成品。
效果实施例1
通过南京建成生物工程研究所的总超氧化物歧化酶(T-SOD)测试盒测量实施例1,2,3经干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCC No.10009发酵所得的樱桃酵素和对比实施例1自然发酵所得的樱桃酵素的SOD比酶活情况,每个样品测定3次取平均值,检测结果显示,实施例1,2,3经干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCC No.10009发酵所得的樱桃酵素的SOD比酶活分别为110U/mg、88U/mg、100U/mg,而自然发酵所得的樱桃酵素的SOD比酶活65U/mg,由此表明本发明经干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCCNo.10009发酵所得的樱桃酵素的SOD比酶活与自然发酵所得的樱桃酵素的SOD比酶活相比提高至少35%以上,表现出较好的活力。
效果实施例2
将实施例1,2,3经干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCC No.10009发酵所得的樱桃酵素和对比实施例1自然发酵所得的樱桃酵素分别作为待测样品,采用DPPH法分别测定其抗氧化活性,即以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除活力为指标进行检测,其步骤如下:
在10mL的试管中,加入2mL待测样品,然后每个试管中加入2mL 0.1mmol/L DPPH溶液,摇匀,分别放置室温下暗处静置30min,以无水乙醇为空白,分别测定各试管中样品在517nm下的吸光度,记作Asample
测定2mL DPPH溶液与2mL乙醇混合后的吸光度,记作Acontrol
测定2mL待测样品与2mL无水乙醇混合后的吸光度,记为Ablank
然后根据下述公式计算待测样品的DPPH自由基的清除能力,即DPPH自由基清除率(所述的DPPH自由基清除率即下式中的清除率),每个待测样品平行测定3次取平均值:
检测结果显示,实施例1,2,3经干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCCNo.10009发酵所得的樱桃酵素的DPPH自由基清除率分别是45%、53%、60%,而自然发酵所得的樱桃酵素的DPPH自由基清除率为30%,由此表明本发明经干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)TCS SITCC No.10009发酵所得的樱桃酵素的DPPH自由基清除率与自然发酵所得的樱桃酵素的DPPH自由基清除率相比,其对DPPH自由基清除率至少提高50%以上,由于DPPH自由基清除率越大表明自由基的清除能力越强,抗氧化能力越强,因此,本发明的经干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCC No.10009发酵所得的樱桃酵素具有较好的抗氧化活力。
综上所述,本发明的一种樱桃酵素的制备方法,具有制备工艺简单,制备过程时间短等优点。所得的樱桃酵素最大限度保留了樱桃酵素活性、保持了樱桃原初营养和风味。与自然发酵所得的樱桃酵素相比,不仅SOD比酶活含量至少提高35%,而且抗氧化活性即DPPH自由基清除率至少提高50%。
以上所述仅是本发明的实施方式的举例,并不用以限制本发明,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明技术原理的前提下,还可以做出若干改进和变型,这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种樱桃酵素的制备方法,其特征在于具体包括以下步骤:
(1)、菌种的选取
所用的菌种为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009冷冻干燥管;
(2)、发酵原料液的制备
将新鲜、成熟度好、外表无破损的樱桃用自来水清洗干净后经吹干、去核、用榨汁机进行榨汁、用100目纱布过滤得到纯樱桃汁,然后将所得的纯樱桃汁与纯净水混合,得到纯樱桃汁水溶液,所得的纯樱桃汁水溶液中纯樱桃汁与纯净水的量,按体积百分比计算,纯樱桃汁:纯净水为10-20%:80-90%;
在上述所得的纯樱桃汁水溶液中再加入为纯樱桃汁水溶液总重量3%的葡萄糖,然后用浓度为1mol/L的食用碳酸钠水溶液调pH值至6.0-7.0,然后105℃灭菌10min得到发酵原料液;
(3)、菌种活化
用接种环取无菌水溶解的冷冻干燥管保存的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)SITCC No.10009菌种一环在乳酸菌琼脂培养基平板上划线,在37℃培养箱中培养24h,得到干酪乳杆菌的平板活化菌种;
(4)、种子培养
用接种环分别挑取步骤(3)所得的干酪乳杆菌的平板活化菌种一环接入装有50mL乳酸菌液体培养基的250mL规格的锥形瓶中,置于37℃的恒温培养箱中培养36h,得到培养液;
将上述所得的培养液在9000rpm转速下室温离心10min,离心所得的沉淀用0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液清洗3次,然后在清洗后的沉淀中加入0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液经400rpm下漩涡震荡重悬菌体,得到种子液;
上述清洗后的沉淀中加入的0.01mol/L无菌磷酸盐缓冲液的量,以保证所得的种子液中,按每毫升计算含干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)TCS SITCC No.10009为1×108~1×1010CFU为准;
(5)、发酵培养
按体积百分比计算,在步骤(2)所得的发酵原料液中接入2-5%的步骤(4)得到的种子液,然后控制温度为30-40℃进行发酵24-80h,得到发酵液;
(6)、综合调配
在步骤(5)所得的发酵液中,按每升发酵液计算,依次添加蔗糖40-80g,柠檬酸5-10g,羧甲基纤维钠2-4g,混匀后121℃杀菌20min,即得樱桃酵素。
2.如权利要求1所述的樱桃酵素的制备方法,其特征在于:
步骤(2)中:所得的纯樱桃汁水溶液中纯樱桃汁与纯净水的量,按体积百分比计算,纯樱桃汁:纯净水为10%:90%;
所得的纯樱桃汁水溶液中加入为纯樱桃汁水溶液总重量3%的葡萄糖后用浓度为1mol/L的食用碳酸钠水溶液调pH值至6.0;
步骤(5)中:在步骤(2)所得的发酵原料液中接入2%的步骤(4)得到的种子液,然后控制温度为30℃进行发酵24h;
步骤(6)中:按每升发酵液计算,在步骤(5)所得的发酵液中依次添加蔗糖40g,柠檬酸5g,羧甲基纤维钠2g。
3.如权利要求1所述的樱桃酵素的制备方法,其特征在于:
步骤(2)中:所得的纯樱桃汁水溶液中纯樱桃汁与纯净水的量,按体积百分比计算,纯樱桃汁:纯净水为20%:80%;
所得的纯樱桃汁水溶液中加入为纯樱桃汁水溶液总重量3%的葡萄糖后用浓度为1mol/L的食用碳酸钠水溶液调pH值至7.0;
步骤(5)中:在步骤(2)所得的发酵原料液中接入5%的步骤(4)得到的种子液,然后控制温度为40℃进行发酵80h;
步骤(6)中:按每升发酵液计算,在步骤(5)所得的发酵液中依次添加蔗糖80g,柠檬酸10g,羧甲基纤维钠4g。
4.如权利要求1所述的樱桃酵素的制备方法,其特征在于:
步骤(2)中:所得的纯樱桃汁水溶液中纯樱桃汁与纯净水的量,按体积百分比计算,纯樱桃汁:纯净水为15%:85%;
所得的纯樱桃汁水溶液中加入为纯樱桃汁水溶液总重量3%的葡萄糖后用浓度为1mol/L的食用碳酸钠水溶液调pH值至6.5;
步骤(5)中:在步骤(2)所得的发酵原料液中接入4%的步骤(4)得到的种子液,然后控制温度为37℃进行发酵60h;
步骤(6)中:按每升发酵液计算,在步骤(5)所得的发酵液中依次添加蔗糖60g,柠檬酸6g,羧甲基纤维钠3g。
5.如权利要求1、2、3或4所述的制备方法所得的一种樱桃酵素。
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