CN108956602A - 一种布鲁氏菌病检测卡及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种布鲁氏菌病检测卡及其制备方法，属于布鲁氏菌病检测技术领域。所述布鲁氏菌病检测卡包括2‑10个微管，微管中含有抗原溶液和玻璃微珠，所述抗原溶液由布鲁氏菌菌体液、石碳酸、BSA、酪蛋白钠、曙红和生理盐水制备而成。本发明还提供了检测卡的制备方法。本发明的检测卡结构简单，操作简便，检测周期短，不需要外源加热，且易于判断试验结果，结果判定不受主观因素影响；检验结果便于存储，具备极高的推广价值。
Description
技术领域
本发明涉及布鲁氏菌病检测技术领域，具体是一种布鲁氏菌病检测卡及其制备方法。
背景技术
布鲁氏菌病（又称布鲁菌病，简称布病）是由布鲁氏菌感染引起的一种人畜共患疾病。患病的羊、牛等疫畜是布病的主要传染源，布鲁氏菌可以通过破损的皮肤黏膜、消化道和呼吸道等途径传播。布鲁氏菌病广泛流行于世界许多国家，全世界每年新发病例约500000。新中国成立前本病流行严重，新中国成立后成立了专门防治机构，发病率已明显减少，但自1994年以来，我国人畜布病又有回升，又有新的人畜布病流行，产生疫情回升的主要原因是“不经检疫家畜的自由贸易，交换和流动”。因此，必须加强对布病的防治以期达到在全国范围内长期基本控制的目标。
布鲁氏菌病的实验室初筛一般采用平板凝集试验或虎红平板凝集试验，进一步检验需采用试管凝集试验。试管凝集试验虽然一直被作为血清学检验布鲁氏菌病的重要方法，但存在操作繁琐、试验耗费时间长、需要恒温箱加热、判定结果受主观因素影响较大、检验结果不便于存储等缺点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种布鲁氏菌病检测卡及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种布鲁氏菌病检测卡，所述检测卡包括2-10个微管，微管中含有抗原溶液和玻璃微珠，所述抗原溶液由布鲁氏菌菌体液、石碳酸、BSA、酪蛋白钠、曙红和生理盐水制备而成。
优选的，所述抗原溶液的配方为：布鲁氏菌菌体液0.01-0.08wt%、石碳酸0.5-1wt%、BSA 0.6-1.2wt%、酪蛋白钠0.2-0.5wt%、曙红0.001-0.01wt%，余量为生理盐水。
进一步优选的，所述微管中含有抗原溶液15-25µL、玻璃微珠20-50mg。
进一步优选的，所述检测卡包括4-8个微管。
本发明还提供了上述布鲁氏菌病检测卡的制备方法，包括下述步骤：
（1）在生理盐水中依次加入酪蛋白钠、BSA、石碳酸、曙红，搅拌至各组分充分溶解并混合均匀，得到抗原保存液：
（2）除菌过滤抗原保存液；
（3）向过滤的抗原保存液中加入灭活的布鲁氏菌菌体液，混合均匀，即得布鲁氏菌病抗原溶液；
（4）向空白检测卡的微管中灌注布鲁氏菌病抗原溶液；所述检测卡包括2-10个微管；
（5）向灌注了布鲁氏菌病抗原溶液的微管中灌注玻璃微珠；
（6）封装。
优选的，所述微管中含有抗原溶液15-25µL、玻璃微珠20-50mg。
进一步优选的，所述抗原溶液的配方为：布鲁氏菌菌体液0.01-0.08wt%、石碳酸0.5-1wt%、BSA 0.6-1.2wt%、酪蛋白钠0.2-0.5wt%、曙红0.001-0.01wt%，余量为生理盐水。
进一步优选的，所述检测卡包括4-8个微管。
本发明采用石碳酸为抑菌防腐剂，防止溶液滋生杂菌而变质；BSA(牛血清白蛋白)为布鲁氏菌菌体的保护剂；酪蛋白钠防止待检血清中其他抗体干扰，更利于布鲁氏菌抗原与抗布鲁氏菌抗体发生特异性凝集反应；曙红为指示剂，便于观察反应结果；生理盐水可以保证溶液的渗透压，为抗原抗体发生凝集反应提供最适合的条件。
本发明中使用的玻璃微珠粒径为50-130微米（µm），材质为硼硅酸盐，圆球形，大小均匀，表面光滑，白色，无杂质。玻璃微珠使凝集反应的敏感性更好，检测精确性更高，可检测到微弱的布鲁氏菌病抗原与相应抗体的凝集。
该检测卡采用玻璃微珠排阻技术、离心技术、抗原与抗体的凝集反应原理相结合原理而设计。将被检测血清20µL加入到检测卡的微管中，经过600-1000rpm、1.5-2.5min,1500-3000rpm、1.5-2.5min两相离心，假如被检测血清中含有抗布鲁氏菌病抗体，则与布鲁氏菌病抗原发生特异性的免疫反应，形成抗原-抗体复合物，大量的抗原-抗体复合物聚集成红色的团块，在离心力的作用下，聚集的抗原-抗体复合物不能通过玻璃微珠的间隙而留在柱状的玻璃微珠上面，可以看到红色的条带状或圆饼状物；假如被检测血清中不含抗布鲁氏菌病抗体，则不会形成抗原-抗体复合物，在离心力的作用下，布鲁氏菌病抗原会穿过玻璃微珠的间隙被甩到柱的底部，形成红色沉淀物。
所以通过观察离心后检测卡微管中红色团块的位置，即可判断结果：在柱状的玻璃微珠上面形成红色条带状或圆饼状物（有时会有少量红色沉淀物进入到柱中），即提示被检者已患病或已经感染布鲁氏菌；在柱状的玻璃微珠底部形成红色沉淀物，即提示被检者未患布鲁氏菌病。
试管凝集法通常需要在恒温箱中反应24小时，本检测卡在加入血清后离心3-5分钟即可读取检测结果，检测时间大大缩短，为布鲁氏菌病的检测提供了一种方便快捷的方法，具有极高的推广价值。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的检测卡结构简单，操作简便，加入血清之后只需离心反应3-5分钟，大大缩短了布鲁氏菌病的检测周期，具备极高的推广价值。
本发明的检测卡不需要外源加热，整个实验在室温进行即可；易于判断试验结果，实验室人员稍加培训即可操作，结果判定几乎不受主观因素影响；检验结果便于存储等。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
一种布鲁氏菌病检测卡，所述检测卡包括2-10个微管，微管中含有抗原溶液和玻璃微珠，所述抗原溶液由布鲁氏菌菌体液、石碳酸、BSA、酪蛋白钠、曙红和生理盐水制备而成。
优选的方案为，所述抗原溶液的配方为：布鲁氏菌菌体液0.01-0.08wt%、石碳酸0.5-1wt%、BSA 0.6-1.2wt%、酪蛋白钠0.2-0.5wt%、曙红0.001-0.01wt%，余量为生理盐水。
进一步优选的技术方案为，所述微管中含有抗原溶液15-25µL、玻璃微珠20-50mg。
进一步优选的技术方案为，所述检测卡包括4-8个微管。
本发明的布鲁氏菌病检测卡制备方法如下：
（1）配制抗原保存液：在生理盐水中依次加入酪蛋白钠、BSA、石碳酸、曙红，搅拌至各组分充分溶解并混合均匀；
（2）除菌过滤抗原保存液；
（3）向过滤的抗原保存液中加入灭活的布鲁氏菌菌体液，混合均匀，即得布鲁氏菌病抗原溶液；
（4）向空白检测卡的微管中灌注布鲁氏菌病抗原溶液；所述检测卡包括2-10个微管；
（5）向灌注了布鲁氏菌病抗原溶液的微管中灌注玻璃微珠；
（6）封装。
采用上述方法进行布鲁氏菌病检测卡的制备，表1为实施例1-4中抗原溶液的配方：
表1 实施例1-4中抗原溶液原料配比
将被检测血清20µL加入到检测卡的微管中，经过600-1000rpm、1.5-2.5min, 1500-3000rpm、1.5-2.5min两相离心，假如被检测血清中含有抗布鲁氏菌病抗体，则与布鲁氏菌病抗原发生特异性的免疫反应，形成抗原-抗体复合物，大量的抗原-抗体复合物聚集成红色的团块，在离心力的作用下，聚集的抗原-抗体复合物不能通过玻璃微珠的间隙而留在柱状的玻璃微珠上面，可以看到红色的条带状或圆饼状物；假如被检测血清中不含抗布鲁氏菌病抗体，则不会形成抗原-抗体复合物，在离心力的作用下，布鲁氏菌病抗原会穿过玻璃微珠的间隙被甩到柱的底部，形成红色沉淀物。
通过观察离心后检测卡微管中红色团块的位置，即可判断结果：在柱状的玻璃微珠上面形成红色条带状或圆饼状物（有时会有少量红色沉淀物进入到柱中），即提示被检者已患病或已经感染布鲁氏菌；在柱状的玻璃微珠底部形成红色沉淀物，即提示被检者未患布鲁氏菌病。
上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下作出各种变化。
Claims (8)
1.一种布鲁氏菌病检测卡，其特征在于：所述检测卡包括2-10个微管，微管中含有抗原溶液和玻璃微珠，所述抗原溶液由布鲁氏菌菌体液、石碳酸、BSA、酪蛋白钠、曙红和生理盐水制备而成。
2.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌病检测卡，其特征在于：所述抗原溶液的配方为：布鲁氏菌菌体液0.01-0.08wt%、石碳酸0.5-1wt%、BSA 0.6-1.2wt%、酪蛋白钠0.2-0.5wt%、曙红0.001-0.01wt%，余量为生理盐水。
3.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌病检测卡，其特征在于：所述微管中含有抗原溶液15-25µL、玻璃微珠20-50mg。
4.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌病检测卡，其特征在于：所述检测卡包括4-8个微管。
5.如权利要求1所述的布鲁氏菌病检测卡的制备方法，其特征在于包括下述步骤：
（1）在生理盐水中依次加入酪蛋白钠、BSA、石碳酸、曙红，搅拌至各组分充分溶解并混合均匀，得到抗原保存液；
（2）除菌过滤抗原保存液；
（3）向过滤的抗原保存液中加入灭活的布鲁氏菌菌体液，混合均匀，即得布鲁氏菌病抗原溶液；
（4）向空白检测卡的微管中灌注布鲁氏菌病抗原溶液；所述检测卡包括2-10个微管；
（5）向灌注了布鲁氏菌病抗原溶液的微管中灌注玻璃微珠；
（6）封装。
6.根据权利要求5所述的布鲁氏菌病检测卡的制备方法，其特征在于：所述微管中含有抗原溶液15-25µL、玻璃微珠20-50mg。
7.根据权利要求5所述的布鲁氏菌病检测卡的制备方法，其特征在于：所述抗原溶液的配方为：布鲁氏菌菌体液0.01-0.08wt%、石碳酸0.5-1wt%、BSA 0.6-1.2wt%、酪蛋白钠0.2-0.5wt%、曙红0.001-0.01wt%，余量为生理盐水。
8.根据权利要求5所述的布鲁氏菌病检测卡的制备方法，其特征在于：所述检测卡包括4-8个微管。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1621837A (zh) * | 2003-11-28 | 2005-06-01 | 长春博迅生物技术有限责任公司 | 特异性指示红细胞制备及其在微柱凝胶免疫实验技术中的应用 |
| CN102288771A (zh) * | 2011-05-10 | 2011-12-21 | 中国兽医药品监察所 | 牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品及其制备方法 |
| CN102445549A (zh) * | 2010-10-08 | 2012-05-09 | 上海博冠生物技术有限公司 | 新型柱凝集玻璃微珠卡式血型检测试剂 |
| CN106053782A (zh) * | 2016-05-24 | 2016-10-26 | 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 布氏杆菌病试管凝集实验质量控制图的建立方法与应用 |
-
2018
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1621837A (zh) * | 2003-11-28 | 2005-06-01 | 长春博迅生物技术有限责任公司 | 特异性指示红细胞制备及其在微柱凝胶免疫实验技术中的应用 |
| CN102445549A (zh) * | 2010-10-08 | 2012-05-09 | 上海博冠生物技术有限公司 | 新型柱凝集玻璃微珠卡式血型检测试剂 |
| CN102288771A (zh) * | 2011-05-10 | 2011-12-21 | 中国兽医药品监察所 | 牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品及其制备方法 |
| CN106053782A (zh) * | 2016-05-24 | 2016-10-26 | 北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 布氏杆菌病试管凝集实验质量控制图的建立方法与应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 等: "《中华人民共和国国家标准GB/T18646-2018 动物布鲁氏菌病诊断技术》", 6 February 2018, 中国标准出版社 * |
| 国家药典委员会: "《中华人民共和国药典 三部 注释》", 31 March 2016, 中国医药科技出版社 * |
| 王真 等: "《动物病原菌检测技术指南》", 31 July 2016, 中国农业大学出版社 * |
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