CN106771183A - 一种检测餐具中肠炎沙门氏菌的检测卡 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种检测餐具中肠炎沙门氏菌的检测卡，包括样液吸收部分、底板、金标沙门氏菌抗体层、检测反应部分和吸水部分，在底板的背衬上从左往右依次贴有样液吸收部分、金标沙门氏菌抗体层、检测反应部分和吸水部分。本发明采用检测卡的方式对肠炎沙门氏菌在餐具中的残留情况进行检测，具有较高的特异性和灵敏性，且操作简便，无需专门设施。具有较高的特异性和灵敏性，检测过程操作迅速、快捷、方便，适用于临床检验、流行病学调查和场地检疫等多种场合。制备方法简便、稳定性好、重复性好。

Description

一种检测餐具中肠炎沙门氏菌的检测卡
技术领域
本发明涉及一种检测试纸，具体是一种检测餐具中肠炎沙门氏菌的检测卡。
背景技术
肠炎沙门氏菌（Salmonellaenteritidis，SE）是引起食物中毒的常见致病菌，在公共卫生学上具有重要意义，家禽、蛋及肉类产品是SE的主要传播媒介，严重影响着养殖业的发展和人类健康，因此对易受SE污染的食品在流入市场前应进行严格的检测。
动物性食品安全问题被作为一个社会健康问题受到广泛的关注，与之相应的检测能力也正在不断提高，安全检测技术朝准确、快速、便捷的方向研发。检测工具，新的设备和检测卡层出不穷，尤其是在免疫学、生物化学和分子生物学等方面更是研制出了各种新型的快速检测检测卡，在提高沙门氏菌的检测速度，简化样品处理的繁杂步骤的同时降低了检测人员的操作要求，使其对检测卡的利用产生依赖性。然而检测用检测卡被广泛应用于市场，却没有统一的管理系统和规范的参照标准对其进行评估，造成这些检测卡在质量上出现参差不齐的状况，表现在灵敏度、特异性和稳定性有所差异，使得各实验室间/各检测人员间检测结果在真实性上得不到保障，难免出现动物性食品中肠炎沙门氏菌的错检或漏检，不仅有可能导致我国进出口在国际贸易中发生重大经济损失，还有可能对人类的健康造成威胁。而目前，我国在动物性食品安全检测检测卡上的管理基本处于空白，为了在提高肠炎沙门氏菌检测效率的同时保障实验室间以及检测人员间的检测能力，确保检测结果的有效性，必须规范对检测卡产品的使用，填补管理上的空白，因此，研发可用于检测卡和日常检测质量控制的标准物质势在必行。
然而，目前无论国内外对食品安全检测领域中的标准物质研究甚少，对于微生物标准物质的研究制备还是处于起步阶段，我国标准值的研制开始于20世纪80年代，研究至今我国标准物质虽已基本满足经济建设的需要，但随着科学技术的发展和新型材料设备的不断涌现，现有的标准物质品种已不能完全满足需求，尤其是在生物标准物质范围，我国研制的与食品分析有关的有证标准物质约390种，这些标准物质均为生物成分分析标准物质，主要用在食品安全、营养评价、环境卫生评价等方面。虽然我国在标准物质的研究上经过了20多年的研究，但是依然存在以下问题：种类少、重复研制现象多，在与微生物、畜禽等相关的成分标准物质的研究上还相对空白，研制的标准物质准确度不高，且很多标准物质不能提供出不确定度的参考信息。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测餐具中肠炎沙门氏菌的检测卡及其检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种检测餐具中肠炎沙门氏菌的检测卡，包括样液吸收部分、底板、金标沙门氏菌抗体层、检测反应部分和吸水部分，在底板的背衬上从左往右依次贴有样液吸收部分、金标沙门氏菌抗体层、检测反应部分和吸水部分，与金标沙门氏菌抗体层相连的检测反应部分上包被有抗肠炎沙门氏菌抗体(多抗或单抗)形成的检测线和由兔抗鼠IgG抗体形成的控制线。
作为本发明进一步的方案：金标沙门氏菌抗体层的制备方法包括下述步骤：A胶体金的制备，在浓度为0.004～0.012％的氯金酸中加入其体积的1.2～2％、浓度为1～3％的柠檬酸三钠，煮沸10～20分钟，可得到15～50纳米的胶体金溶液；B胶体金标记抗沙门氏菌单克隆抗体，在胶体金溶液中用0.2m碳酸钾溶液调pH7.8～8.8，按1～6mg/100ml加入抗沙门氏菌单克隆抗体，搅拌后，再在溶液中按0.1～0.6g/100ml加入动物血清蛋白，4℃静置2-4小时；C将上述胶体金溶液经2000转/分钟离心10～15分钟，弃沉淀物，得上清液；D将上清液经10000转/分钟离心60～80分钟离心得沉淀物；E将沉淀物按4-10ml/100ml溶于0.02M、pH7.4Tris-HCI缓冲液得胶体金溶液，该缓冲液中含0.2-0.6％的动物血清蛋白和0.01-0.06％叠氮钠；F将上述胶体金溶液浸入玻璃纤维或无纺布至液体开始渗出为止，37℃干燥过滤形成金标抗体层。
作为本发明进一步的方案：所述检测线和控制线的制备方法包括下述步骤，取出抗沙门氏菌抗体，调浓度至1mg/ml，加入2％的甲醛，用喷膜机在纤维素膜中段喷检测线7；再取羊或兔抗鼠IgG调浓度为2mg/ml，加入2％的甲醛，用喷膜机在纤维素膜中段，距检测线0.5cm处，喷控制线6，按20ul/10cm设置喷膜量，喷膜。37℃干燥，2小时，再用0.01ml，pH7.0含10％小牛血清的PBS，在37℃下封闭30分钟，0.01mlpH7.0的PBS漂洗，37℃干燥。
作为本发明进一步的方案：所述的反应膜为硝酸纤维素膜，所述检测反应部分是在纤维素膜上设有羊或兔沙门氏菌抗体或沙门氏菌单克隆抗体构成的检测线(7)和由羊或兔抗鼠IgG抗体形成的控制线。
作为本发明再进一步的方案：所述的固定剂为甲醛或丙酮。
作为本发明再进一步的方案：其检测方法是：将胶体金标记的沙门氏菌抗体(多抗和单抗)在于玻璃纤维或无纺布载体上，与胶体金标记抗体载体相连的检测载体上包被抗沙门氏菌抗体(多抗或单抗)形成的检测线和由羊或兔抗鼠IgG抗体形成的控制线；(2)取检测样本稀释液滴于胶体金标记抗体的载体上，如上述样品稀释液含有沙门氏菌，则在检测载体上会形成紫红色的检测线和控制线两条线，则检测结果判定为阳性；若仅有控制线显色，则结果判定为阴性。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明采用检测卡的方式对肠炎沙门氏菌在餐具中的残留情况进行检测，具有较高的特异性和灵敏性，且操作简便，无需专门设施。具有较高的特异性和灵敏性，检测过程操作迅速、快捷、方便，适用于临床检验、流行病学调查和场地检疫等多种场合。制备方法简便、稳定性好、重复性好。
附图说明
图1是本发明的整体结构图。
图中：1-底板、2-液吸收部分、3-金标沙门氏菌抗体层、4-检测反应部分、5-检测线、6-控制线、7-吸水部分。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
请参阅图1，一种检测餐具中肠炎沙门氏菌的检测卡，包括样液吸收部分2、底板1、金标沙门氏菌抗体层3、检测反应部分4和吸水部分7，在底板1的背衬上从左往右依次贴有样液吸收部分2、金标沙门氏菌抗体层3、检测反应部分4和吸水部分7，与金标沙门氏菌抗体层3相连的检测反应部分4上包被有抗肠炎沙门氏菌抗体(多抗或单抗)形成的检测线5和由兔抗鼠IgG抗体形成的控制线6。
金标沙门氏菌抗体层3的制备方法包括下述步骤：A胶体金的制备，在浓度为0.004～0.012％的氯金酸中加入其体积的1.2～2％、浓度为1～3％的柠檬酸三钠，煮沸10～20分钟，可得到15～50纳米的胶体金溶液；B胶体金标记抗沙门氏菌单克隆抗体，在胶体金溶液中用0.2m碳酸钾溶液调pH7.8～8.8，按1～6mg/100ml加入抗沙门氏菌单克隆抗体，搅拌后，再在溶液中按0.1～0.6g/100ml加入动物血清蛋白，4℃静置2-4小时；C将上述胶体金溶液经2000转/分钟离心10～15分钟，弃沉淀物，得上清液；D将上清液经10000转/分钟离心60～80分钟离心得沉淀物；E将沉淀物按4-10ml/100ml溶于0.02M、pH7.4Tris-HCI缓冲液得胶体金溶液，该缓冲液中含0.2-0.6％的动物血清蛋白和0.01-0.06％叠氮钠；F将上述胶体金溶液浸入玻璃纤维或无纺布至液体开始渗出为止，37℃干燥过滤形成金标抗体层。
检测线和控制线的制备方法包括下述步骤，取出抗沙门氏菌抗体，调浓度至1mg/ml，加入2％的甲醛，用喷膜机在纤维素膜中段喷检测线7；再取羊或兔抗鼠IgG调浓度为2mg/ml，加入2％的甲醛，用喷膜机在纤维素膜中段，距检测线0.5cm处，喷控制线6，按20ul/10cm设置喷膜量，喷膜。37℃干燥，2小时，再用0.01ml，pH7.0含10％小牛血清的PBS，在37℃下封闭30分钟，0.01mlpH7.0的PBS漂洗，37℃干燥。
反应膜为硝酸纤维素膜，所述检测反应部分是在纤维素膜上设有羊或兔沙门氏菌抗体或沙门氏菌单克隆抗体构成的检测线(7)和由羊或兔抗鼠IgG抗体形成的控制线。固定剂为甲醛或丙酮。
本发明的工作原理是：其检测方法是：将胶体金标记的沙门氏菌抗体(多抗和单抗)在于玻璃纤维或无纺布载体上，与胶体金标记抗体载体相连的检测载体上包被抗沙门氏菌抗体(多抗或单抗)形成的检测线和由羊或兔抗鼠IgG抗体形成的控制线；(2)取检测样本稀释液滴于胶体金标记抗体的载体上，如上述样品稀释液含有沙门氏菌，则在检测载体上会形成紫红色的检测线和控制线两条线，则检测结果判定为阳性；若仅有控制线显色，则结果判定为阴性。
其检测方法是：将胶体金标记的沙门氏菌抗体(多抗和单抗)在于玻璃纤维或无纺布载体上，与胶体金标记抗体载体相连的检测载体上包被抗沙门氏菌抗体(多抗或单抗)形成的检测线和由羊或兔抗鼠IgG抗体形成的控制线；(2)取检测样本稀释液滴于胶体金标记抗体的载体上，如上述样品稀释液含有沙门氏菌，则在检测载体上会形成紫红色的检测线和控制线两条线，则检测结果判定为阳性；若仅有控制线显色，则结果判定为阴性。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (6)

1.一种检测餐具中肠炎沙门氏菌的检测卡，包括样液吸收部分、底板、金标沙门氏菌抗体层、检测反应部分和吸水部分，其特征在于，在底板的背衬上从左往右依次贴有样液吸收部分、金标沙门氏菌抗体层、检测反应部分和吸水部分，与金标沙门氏菌抗体层相连的检测反应部分上包被有抗肠炎沙门氏菌抗体(多抗或单抗)形成的检测线和由兔抗鼠IgG抗体形成的控制线。
2.根据权利要求1所述的一种检测餐具中肠炎沙门氏菌的检测卡，其特征在于，金标沙门氏菌抗体层的制备方法包括下述步骤：A胶体金的制备，在浓度为0.004～0.012％的氯金酸中加入其体积的1.2～2％、浓度为1～3％的柠檬酸三钠，煮沸10～20分钟，可得到15～50纳米的胶体金溶液；B胶体金标记抗沙门氏菌单克隆抗体，在胶体金溶液中用0.2m碳酸钾溶液调pH7.8～8.8，按1～6mg/100ml加入抗沙门氏菌单克隆抗体，搅拌后，再在溶液中按0.1～0.6g/100ml加入动物血清蛋白，4℃静置2-4小时；C将上述胶体金溶液经2000转/分钟离心10～15分钟，弃沉淀物，得上清液；D将上清液经10000转/分钟离心60～80分钟离心得沉淀物；E将沉淀物按4-10ml/100ml溶于0.02M、pH7.4Tris-HCI缓冲液得胶体金溶液，该缓冲液中含0.2-0.6％的动物血清蛋白和0.01-0.06％叠氮钠；F将上述胶体金溶液浸入玻璃纤维或无纺布至液体开始渗出为止，37℃干燥过滤形成金标抗体层。
3.根据权利要求1所述的一种检测餐具中肠炎沙门氏菌的检测卡，其特征在于，所述检测线和控制线的制备方法包括下述步骤，取出抗沙门氏菌抗体，调浓度至1mg/ml，加入2％的甲醛，用喷膜机在纤维素膜中段喷检测线7；再取羊或兔抗鼠IgG调浓度为2mg/ml，加入2％的甲醛，用喷膜机在纤维素膜中段，距检测线0.5cm处，喷控制线6，按20ul/10cm设置喷膜量，喷膜；
37℃干燥，2小时，再用0.01ml，pH7.0含10％小牛血清的PBS，在37℃下封闭30分钟，0.01mlpH7.0的PBS漂洗，37℃干燥。
4.根据权利要求1所述的一种检测餐具中肠炎沙门氏菌的检测卡，其特征在于，所述检测反应部分是在纤维素膜上设有羊或兔沙门氏菌抗体或沙门氏菌单克隆抗体构成的检测线(7)和由羊或兔抗鼠IgG抗体形成的控制线。
5.根据权利要求3所述的一种检测餐具中肠炎沙门氏菌的检测卡，其特征在于，所述的固定剂为甲醛或丙酮。
6.根据权利要求1所述的一种检测餐具中肠炎沙门氏菌的检测卡，其特征在于，其检测方法是：将胶体金标记的沙门氏菌抗体(多抗和单抗)在于玻璃纤维或无纺布载体上，与胶体金标记抗体载体相连的检测载体上包被抗沙门氏菌抗体(多抗或单抗)形成的检测线和由羊或兔抗鼠IgG抗体形成的控制线；(2)取检测样本稀释液滴于胶体金标记抗体的载体上，如上述样品稀释液含有沙门氏菌，则在检测载体上会形成紫红色的检测线和控制线两条线，则检测结果判定为阳性；若仅有控制线显色，则结果判定为阴性。
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