CN107462719A - 一种肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明具体公开了一种肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒，包括胶体金试纸，所述试纸由样品层1、胶体金标记层2、检测反应层3、吸水层4和背衬板B组成，所述胶体金标记层上包被有抗食源性沙门氏菌抗体，所述检测反应层上设置有检测线M和质控线N。本发明首次将试纸做成圆形状，其中圆心用于加入待测样品，该设计方案可以保证在圆心处的样品可以360度向四周自由扩散，最后的结果读取可视范围更大，不管是后续使用机器收集实验结果或者是肉眼读取结果，都可以最大限度减少因为显色范围太小而导致读取的失误，保证结果的准确性。

Description

一种肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒
技术领域
本发明涉及生物技术快速检测技术领域，具体地，涉及一种肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒。
背景技术
食品安全问题应该是我们监管部门和消费者时刻保持紧绷的一根弦，对于食品安全问题，我们关注比较多的是农产品来源的农药残留问题，食品加工过程添加剂的问题。除了以上这些问题，我们往往会忽视的一个就是食品加工过程和保存的微生物的污染问题，微生物污染问题的发生主要是由于保存条件不符合要求或者保存方式不当。
过去的几十年，世界各地细菌性食物中毒频发，成为危害人类健康甚至造成死亡的一种严重问题。作为最为普遍且发病率最高的食源性细菌，沙门氏菌成为食品卫生检验领域的目标菌之一。在我国细菌性食物中毒中，有70％～80％是由沙门氏菌引起的，而引起沙门氏菌中毒的食品中，超过90％是畜禽产品，有报道称，我国每年至少有200万人感染沙门氏菌，造成成千上万人住院，数百人因此而死亡。
国标法(GB4789.4-2010)是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行。这种常规的生化试验检测方法，不仅步骤繁琐，耗时间长，可能因为某一个培养步骤的污染或者失误，都会导致试验结果发生较大的偏差，可信度不高。
如果利用抗原抗体的特异性反应进行检测，既可以避免上述的问题。
发明内容
针对现有技术的上述不足，本发明提供一种肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒，以解决上述的技术问题：
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒，包括胶体金试纸，所述试纸由样品层1、胶体金标记层2、检测反应层3、吸水层4和背衬板B组成，所述胶体金标记层上包被有抗食源性沙门氏菌抗体，所述检测反应层上设置有检测线M和质控线N，所述检测线上包被有食源性沙门氏菌抗原，所述质控线包被有羊抗兔IgG，所述检测用金标抗体可以与检测用包被抗原结合反应并显色，且检测用金标抗体上只有一个与抗原特异结合的位点；所述样品层、胶体金标记层和检测反应层按照从里到外、从上至下的顺序依次结合在背衬板同一面上，胶体金标记层和检测反应层的端部重叠；所述吸水层结合在检测反应层的另一端。
附图说明
图1是本发明的结构示意图。
其中：其中：试纸由样品层1、胶体金标记层2、检测反应层3、吸水层4。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
一种肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒，包括胶体金试纸，如图1所示，所述试纸由样品层1、胶体金标记层2、检测反应层3、吸水层4和背衬板B组成，所述胶体金标记层上包被有抗食源性沙门氏菌抗体，所述检测反应层上设置有检测线M和质控线N，所述检测线上包被有食源性沙门氏菌抗原，所述质控线包被有羊抗兔IgG，所述检测用金标抗体可以与检测用包被抗原结合反应并显色，且检测用金标抗体上只有一个与抗原特异结合的位点；所述样品层、胶体金标记层和检测反应层按照从里到外、从上至下的顺序依次结合在背衬板同一面上，胶体金标记层和检测反应层的端部重叠；所述吸水层结合在检测反应层的另一端。
优选地，所述检测线为1～5条，质控线为1～5条。
更优选地，所述检测线为1～3条，质控线为1～3条。
优选地，所述胶体金标记层上包被有抗食源性沙门氏菌抗体，是以食源性沙门氏菌外膜蛋白作为抗原免疫动物后制备获得的。
优选地，所述样品层为吸水性良好的材料制成；所述背衬板为塑料制成。
优选地，所述胶体金标记层和检测反应层的材料为禽类蛋壳膜制备的生物膜。
更优选地，所述禽类蛋壳膜为鸭蛋壳膜制备的生物膜。
更优选地，所述胶体金标记层为鸭蛋壳膜的内膜制备的生物膜，所述检测反应层为鸭蛋壳膜外模制备的生物膜。
本发明首次将试纸做成圆形状，其中圆心用于加入待测样品，该设计方案可以保证在圆心处的样品可以360度向四周自由扩散，最后的结果读取可视范围更大，不管是后续使用机器收集实验结果或者是肉眼读取结果，都可以最大限度减少因为显色范围太小而导致读取的失误，保证结果的准确性。
当两条检测线M1和M2均显红色时，则样品为阴性(即不含食源性沙门氏菌)；当检测线M1显色，检测线M2不显色时，则样品中含有食源性沙门氏菌，但其浓度不高；当两条检测线均不显色时，则样品中食源性沙门氏菌的浓度很高，以此进行半定量检测。
当检测线M颜色深于参考线N3时，则样品为阴性(不含食源性沙门氏菌或极微量)；当检测线M颜色深于N3浅于参考线N2时，则样品含有食源性沙门氏菌，浓度比较低；当检测线M颜色深于N2浅于N1时，则样品中含有食源性沙门氏菌，浓度比较高；当检测线M不显色时，则样品中含有食源性沙门氏菌，浓度非常高，以此进行半定量检测。
结果判断标准：
质控线的作用是：无论样品溶液中是否含有食源性沙门氏菌，胶体金标记层包被的金标抗体上移到达质控线时都可以与质控线上的IgG结合，聚集形成肉眼可见的红色颗粒，质控线始终显色，如果质控线不显色，表示本次测试无效。
作为优选地实施例，以下将详细介绍鸭蛋壳膜应用于生物膜的方法，包括以下步骤：
S1.将收集到的鸭蛋壳膜保湿，具体为定期喷淋37℃去离子水，后续操作过程保持鸭蛋壳膜保持湿润的状态；
S2.轻轻地将半球状鸭蛋壳膜沿着经线切开、摊平，即将鸭蛋壳膜平面化；
S3.将上述步骤的鸭蛋壳膜置于烧杯中，加入适量去离子水，将烧杯置于振荡器上，46℃，100～120rpm，振荡1～2h，振荡结束后，将蛋壳膜置于流动缓慢的水中漂洗，清除膜表面杂质；
S4.将上述步骤的鸭蛋壳膜置于平面上，使用镊子将鸭蛋壳膜分层外膜和内膜；
S5.将外膜置于50mMTris-HCl(pH7.5)，10mM CaCl2溶液中，置于磁力搅拌器上，孵育40～55℃，30min，每100ml上述溶液加入20mg/ml的蛋白酶K 100ul，继续孵育10～20min；
S6.将内膜置于50mMTris-HCl(pH7.0)，10mM CaCl2溶液中，置于磁力搅拌器上，孵育40～55℃，10min，每100ml上述溶液加入20mg/ml的蛋白酶K 10ul，继续孵育5～10min；
S7.步骤S5和S6反应结束后，快速取出，置于流动的自来水中冲洗3～5min，之后使用75％酒精清洗3～5次，每次5min；
S8.上述步骤的膜使用去离子水清洗3～5次，每次3min，结束后4℃，保湿保存备用。
本发明的免疫层析试剂盒，金标抗体上只有一个与抗原特异结合的位点，具有特异性强；灵敏度高，阳性率基本达到100％，检测速度快、通量大、操作简单方便、颜色稳定、检测温度适宜范围宽、试纸保质期长和成本低廉等优点，并能够实现半定量检测。该快速检测试纸条在4～40℃都可使用，5～15min以后便可观察结果，适合于食品药品、环保、检验检疫等部门对样品中的食源性沙门氏菌的进行快速检测。
实验例稳定性试验
为了检验本试剂盒对于不同来源的沙门氏菌的检出情况，本实验通过模拟不同食物来源的待测样品，利用本试剂盒进行检测。实验设计如下：将等量的0.1ml 100CFU的沙门氏菌，接种到等体积(100ml)以下几种样品中，包括新鲜牛奶、新鲜鸡蛋液、新鲜鸭蛋液；对照组为接种等量的LB液体培养基的无菌水，室温下放置1、8和16小时，培养结束后进行检测，每个处理取10个样品进行检测，检测结果的阳性率如表1所示：
表1
综合表1数据表明，本发明的试剂盒适用于不同食品来源的沙门氏菌的检测，在培养1小时时候阳性率较低，可能是因为1小时的时候样品中的沙门氏菌的含量还较少，所以没有检出。到8小时的时候，不同样品的检出率均达到了100％，说明本发明的试剂盒稳定性较好。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (8)

1.一种肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒，其特征在于，包括胶体金试纸，所述试纸由样品层1、胶体金标记层2、检测反应层3、吸水层4和背衬板B组成，所述胶体金标记层上包被有抗食源性沙门氏菌抗体，所述检测反应层上设置有检测线M和质控线N，所述检测线上包被有食源性沙门氏菌抗原，所述质控线包被有羊抗兔IgG，所述检测用金标抗体可以与检测用包被抗原结合反应并显色，且检测用金标抗体上只有一个与抗原特异结合的位点；所述样品层、胶体金标记层和检测反应层按照从里到外、从上至下的顺序依次结合在背衬板同一面上，胶体金标记层和检测反应层的端部重叠；所述吸水层结合在检测反应层的另一端。
2.根据权利要求1所述的肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒，其特征在于，所述检测线为1～5条，质控线为1～5条。
3.根据权利要求2所述的肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒，其特征在于，所述检测线为1～3条，质控线为1～3条。
4.根据权利要求3所述的肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金标记层上包被有抗食源性沙门氏菌抗体，是以食源性沙门氏菌外膜蛋白作为抗原免疫动物后制备获得的。
5.根据权利要求4所述的肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒，其特征在于，所述样品层为吸水性良好的材料制成；所述背衬板为塑料制成。
6.根据权利要求5所述的肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金标记层和检测反应层的材料为禽类蛋壳膜制备的生物膜。
7.根据权利要求6所述的肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒，其特征在于，所述禽类蛋壳膜为鸭蛋壳膜制备的生物膜。
8.根据权利要求7所述的肉蛋类产品中沙门氏菌快速检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金标记层为鸭蛋壳膜的内膜制备的生物膜，所述检测反应层为鸭蛋壳膜外模制备的生物膜。
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