CN108893495B - 一种Pdzd7基因突变动物模型的构建方法 - Google Patents

一种Pdzd7基因突变动物模型的构建方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9技术的Pdzd7基因突变动物模型的构建方法，步骤是(1)设计并选择合适的靶向小鼠Pdzd7基因的Guide RNA；(2)体外合成Cas9 mRNA和Guide RNA；(3)将Guide RNA和Cas9 mRNA等摩尔比共同配制成注射样品对受精卵注射；(4)对获得的F0代小鼠进行鉴定；(5)阳性F0代小鼠传代及F1代小鼠的获得与鉴定。本方法可以成功获得与人类中p.C732LfsX18致病突变相近的Pdzd7基因突变小鼠模型，为研究人类中PDZD7致病突变的相关因素和诊断治疗提供了基础。

Description

一种Pdzd7基因突变动物模型的构建方法
技术领域
本发明属于利用基因修饰技术制作基因突变动物模型技术领域，具体涉及一种基于CRISPR/Cas9技术的Pdzd7基因突变动物模型的构建方法。
背景技术
CRISPR/Cas(Clustered Regularly Interspaced Shot Palindromic repeats/CRISPR-associated)系统是原核生物中一种抵抗外源基因侵入的获得性免疫系统，在细菌和古生菌中CRISPR系统整合侵入宿主的噬菌体或者质粒DNA的片段到CRISPR位点，然后通过相应的CRISPR RNAs(cr RNAs)引导Cas核酸内切酶对外源DNA序列进行切割，从而抵抗病毒或者噬菌体的入侵。CRISPR/Cas系统分为3种类型(TypeⅠ、TypeⅡ和TypeⅢ)，其中TypeⅡ系统因其简单、高效以及功能多样化等优点，自2013在哺乳动物细胞中成功实现基因编辑后，现已被广泛用于多种模式生物的基因组修饰技术应用中。Ⅱ型系统可以通过cr RNA的引导利用单个Cas9核酸酶对DNA靶位点进行精确充分地切割。CRISPR/Cas9系统相关载体构建简单快速，便于操作，实验周期较短，且广泛适用于多个物种。在基因编辑的过程中，CRISPR/Cas9系统需要一段特殊的引导RNA，即sgRNA(single guide RNA)，sgRNA的序列选择限制性较小，只需要基因组序列中出现PAM(NGG)区即可。在sgRNA的引导下，Cas9蛋白可以对基因组实现定点切割，引起DNA双链断裂，继而引发细胞的自主修复，修复的过程可以是随机的片段缺失或插入，也可以利用特定的模板修复，从而实现对基因组的永久性修饰。
Usher综合征(Usher syndrome,USH)是一种能够引起视觉和听觉双重感官障碍的遗传性疾病，在目前已知的超过50种的视力下降合并听力受损的综合征中，以Usher综合征最为常见，该病的全球发病率为1/6000～1/10000。USH为常染色体隐性遗传病，其特征表现为视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)和感音神经性耳聋(sensorineuralhearing loss,SNHL)。USH在临床上分为3种类型，都存在因视网膜色素变性而引起的进行性视力下降，区别在于听力和前庭功能的变现各不相同。其中USH1型最为严重，临床变现有先天性耳聋、严重的听力损失，因听力障碍导致的语言发育迟缓；此类患者还经常伴有前庭功能障碍，患儿学会独立行走的时间较同龄儿童晚。Usher2型患者听力损失较轻，为中到重度耳聋，但前庭功能正常。USH3型以渐进性听力损失为特点，伴随不同程度的前庭功能失调。此外，部分Usher综合征患者还可能伴有智力衰退、嗅觉丧失、癫痫等神经系统病变。
PDZD7作为一个重要的耳聋基因，其编码蛋白是听觉感受细胞顶端听纤毛踝连接的组成成分，突变能够引起综合征型或非综合征型听力丧失。PDZD7基因有多个转录剪切本，编码不同的PDZD7蛋白亚型，其中长型PDZD7蛋白包含有三个重要的、能够介导蛋白质之间相互作用的结构域，即PDZ结构域，短型PDZD7只含有前两个PDZ结构域。目前常见的PDZD7突变大多影响长型PDZD7。在小鼠中模拟相关耳聋突变，构建Pdzd7基因突变小鼠模型，对PDZD7突变致聋机制进行深入探讨，并利用这一模型进行药物筛选，具有重要的临床意义。但检索发现目前虽有Pdzd7基因敲除小鼠，但没有仿真模拟人相关耳聋突变的、只影响长型PDZD7的小鼠模型，因此建立一种构建只影响长型PDZD7的基因突变动物模型的方法意义重大。
发明内容
本发明的目的是提供一种基于CRISPR/Cas9技术的Pdzd7基因突变动物模型的构建方法。
本发明所述基于CRISPR/Cas9技术的Pdzd7基因突变动物模型的构建方法，步骤是：
(1)在小鼠Pdzd7基因11号外显子上p.C728LfsX18致病突变位点附近设计合适的Guide RNA；其中引物Guide RNAtarget site 1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，引物Guide RNAtarget site 2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
(2)体外合成Guide RNA和Cas9 mRNA；
(3)将合成后的Guide RNA和Cas9 mRNA等摩尔比配制成100 ul注射样品，将样品注射到取自C57BL/6J母鼠受精卵的雄原核中，培养恢复后移植入假孕受体小鼠，等待获得F0代小鼠；
(4)利用PCR反应体系对获得的F0代小鼠进行鉴定；
(5)将阳性F0代小鼠与野生型C57BL/6J交配获得F1代小鼠，即为Pdzd7基因突变小鼠模型。
上述基于CRISPR/Cas9技术的Pdzd7基因突变动物模型的构建方法中：步骤(2)所述Guide RNA和Cas9 mRNA体外合成由生工生物工程(上海)股份有限公司完成。
上述基于CRISPR/Cas9技术的Pdzd7基因突变动物模型的构建方法中：步骤(4)所述PCR反应体系的引物为Pdzd7-test-F3和Pdzd7-test-R3；其中Pdzd7-test-F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，Pdzd7-test-R3的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
本发明公开的基于CRISPR/Cas9技术的Pdzd7基因突变动物模型的构建方法能够成功获得与人类中p.C732LfsX18致病突变相近的Pdzd7基因突变小鼠模型。方法中涉及的设计并挑选合适的靶向小鼠Pdzd7基因的Guide RNA，难点在于寻找728位Cysteine附近合适的sgRNA以实现能够模拟人类p.C732LfsX18突变的效果。本发明的构建方法为获得与人类Pdzd7基因p.C732LfsX18致病突变相近的小鼠模型提供了便利，为研究人类中PDZD7耳聋突变的相关因素和诊断治疗提供了基础。
附图说明
图1、Pdzd7基因突变小鼠构建策略图及基因鉴定引物设计。
图2、F0代阳性小鼠PCR产物测序结果比对。
具体实施方式
如下实施例使用的Taq酶及PCR相关试剂购自TaKaRa公司。化学试剂主要购自Sigma和上海化学试剂公司。胶回收Kit，质粒抽提Kit购于Qiagen公司。RNA合成自生工生物工程(上海)股份有限公司。引物合成自英潍捷基(上海)贸易有限公司。
实施例1：基于CRISPR/Cas9技术构建Pdzd7基因突变动物模型的构建方法通过以下步骤实现：
(1)靶向小鼠Pdzd7基因的Guide RNA的选择和设计
设计Pdzd7基因突变小鼠构建策略，如图1所示。
根据构建策略，在Pdzd7基因相应的位置设计合适的Guide RNA，其中Guide RNAtarget site1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，Guide RNA target site2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，具体序列如下：
sgRNA名称 序列 PAM
Guide RNA target site1 ACAGGAGGTGGCTGGGGAGG AGG
Guide RNA target site2 GAGGAGGTGCGCATGCGCCT GCC
(2)体外合成Guide RNA和Cas9 mRNA
Guide RNA和Cas9 mRNA由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。
(3)受精卵显微注射制备F0代小鼠
1)单细胞受精卵的获得
小鼠超排：第一天，为C57BL/6J小鼠腹腔注射马绒毛膜促性腺激素5IU/只，46-48小时后注射人绒毛膜促性腺激素，注射完人绒毛膜促性腺激素后将2只雌鼠与单放雄鼠1只合笼。第四天上午检栓，见栓的记为0.5天。
获取受精卵：将见栓0.5天后的小鼠脱颈处死，取出输卵管，在解剖镜下小心取出成团的卵子并用透明质酸酶消化，挑取形态饱满且胞质均匀的胚胎放置于M16培养液中培养。
2)显微注射受精卵
将挑选后的受精卵转移入M2条带中依次排列(30-50枚左右)。提前将合成后的Guide RNA和Cas9 mRNA等摩尔比共同配制成100ul注射样品，待注射管刺入受精卵后匀速将样品注入，见到胞质松散后迅速退针。注射结束后，将受精卵移入M16培养液中，并于37℃、5％二氧化碳培养箱中恢复0.5-1小时。将注射后的受精卵移植到E0.5天假孕小鼠体内。
移植后大约19-21天生出F0代小鼠。
(4)利用PCR反应体系对获得的F0代小鼠进行鉴定
1)F0代小鼠基因组制备
F0代小鼠出生14天剪取鼠尾0.3cm，加400ul裂解液及40ul蛋白酶K(10mg/ml)，56℃消化过夜。离心取上清，两倍体积无水乙醇沉淀，75％乙醇洗涤，稍晾干后溶解于100ul纯水中，50℃烘箱助溶1小时。
2)F0代小鼠基因型鉴定
以制取的F0代小鼠基因组为模板使用TaKaRa Lataq扩增鉴定片段，引物为Pdzd7-test-F3和Pdzd7-test-R3，如图1所示，可扩增出1.5kb条带。其中，Pdzd7-test-F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，Pdzd7-test-R3的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
Pdzd7-test-F3：5’-GGGGCGGGCGGGGACTT-3’
Pdzd7-test-R3：5’-CATGGGCTGCACCTTGGACTCG-3’
反应条件为98℃2min变性后，98℃10s，68℃60s，进行34个循环，68℃延伸2min，PCR体系参见TaKaRa说明书。
1％琼脂糖凝胶电泳后割胶回收1.5kb条带，分别连接pGEM-T载体(Promega)，转化，每个平板挑取6个单克隆测序鉴定，引物为Pdzd7-test-F3。测序结果显示有2bp碱基缺失，如图2所示。
(5)将阳性F0代小鼠与野生型C57BL/6J交配获得F1代小鼠，筛选出的阳性F1代小鼠即为Pdzd7基因突变动物模型小鼠。
阳性F0代小鼠在8周龄左右性成熟后和野生型C57BL/6J回交进行配繁，得到F1小鼠。同F0代相似，待小鼠出生14天后，剪尾进行PCR鉴定，得到F1代杂合子。
筛选出的阳性F1代小鼠即为Pdzd7基因突变动物模型小鼠。
序列表
<110> 山东大学
<120> 一种Pdzd7基因突变动物模型的构建方法
<141> 2018-6-9
<160> 4
<170> PatentIn Version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 小鼠
<222>（1）…（20）
<223> Guide RNA target site1的核苷酸序列
<400> 1
acaggaggtg gctggggagg 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 小鼠
<222>（1）…（20）
<223> Guide RNA target site2的核苷酸序列
<400> 2
gaggaggtgc gcatgcgcct 20
<210> 3
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 小鼠
<222>（1）…（17）
<223> 引物Pdzd7-test-F3的核苷酸序列
<400> 3
ggggcgggcg gggactt 17
<210> 4
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 小鼠
<222>（1）…（22）
<223> 引物Pdzd7-test-R3的核苷酸序列
<400> 4
catgggctgc accttggact cg 22

Claims (1)

1.一种基于CRISPR/Cas9技术的Pdzd7基因突变动物模型的构建方法，步骤是：
(1)设计合适的Guide RNA；
(2)体外合成Guide RNA和Cas9 mRNA；
(3)将合成后Guide RNA和Cas9 mRNA等摩尔比配制成100μl注射样品，将样品注射到取自C57BL/6J母鼠受精卵的雄原核中，培养恢复后移植入假孕受体小鼠，等待获得F0代小鼠；
(4)利用PCR反应体系对获得的F0代小鼠进行鉴定；
(5)将阳性F0代小鼠与野生型C57BL/6J交配获得F1代小鼠，即为Pdzd7基因突变小鼠模型；
其特征在于：
步骤(1)所述设计合适的Guide RNA的策略是：在小鼠Pdzd7基因11号外显子上p.C728LfsX18致病突变位点附近设计合适的Guide RNA；其中引物Guide RNA targetsite1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，引物Guide RNA target site 2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
步骤(4)所述PCR反应体系的引物为Pdzd7-test-F3和Pdzd7-test-R3；其中Pdzd7-test-F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，Pdzd7-test-R3的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110055285A (zh) * 2019-05-30 2019-07-26 首都医科大学附属北京朝阳医院 与恶性胸腔积液相关的靶点myo9b及其应用
CN112458086B (zh) * 2020-10-19 2022-10-11 中国人民解放军总医院第一医学中心 Hspg2基因敲入小鼠动物模型的构建方法和应用
CN112779286B (zh) * 2020-12-31 2023-04-07 中国人民解放军东部战区总医院 一种Alport综合征小鼠模型的构建方法及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106929533A (zh) * 2017-03-10 2017-07-07 上海交通大学医学院附属新华医院 Kars基因点突变小鼠模型的构建方法及其应用
CN107475300A (zh) * 2017-09-18 2017-12-15 上海市同济医院 Ifit3‑eKO1基因敲除小鼠动物模型的构建方法和应用
WO2018045727A1 (zh) * 2016-09-06 2018-03-15 陕西慧康生物科技有限责任公司 粘多糖贮积症ii型动物模型的构建方法及应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018045727A1 (zh) * 2016-09-06 2018-03-15 陕西慧康生物科技有限责任公司 粘多糖贮积症ii型动物模型的构建方法及应用
CN106929533A (zh) * 2017-03-10 2017-07-07 上海交通大学医学院附属新华医院 Kars基因点突变小鼠模型的构建方法及其应用
CN107475300A (zh) * 2017-09-18 2017-12-15 上海市同济医院 Ifit3‑eKO1基因敲除小鼠动物模型的构建方法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Constitutive Gαi Coupling Activity of Very Large G Protein-coupled Receptor 1 (VLGR1) and Its Regulation by PDZD7 Protein;Qiao-Xia Hu等;《THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY》;20140624;第289卷(第35期);第24215-24225页 *

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