CN108893489A - 一种重组病毒及其在制备用于预防或治疗肾脏纤维化的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种重组病毒及其在制备用于预防或治疗肾脏纤维化的药物中的应用。本发明所提供的技术方案是基于转录因子YY1负性调控于TGFβ1进而缓解肾脏纤维化进展，找到了导致TGFβ1及其靶标基因转录水平下调的关键因子，并提供了一系列包含SEQ ID NO.1序列的重组病毒，尤其是转录因子YY1过表达重组病毒(AAV‑YY1病毒)，其可用于制备预防或治疗肾脏纤维化的药物；因此，本发明所提供的靶标基因序列、重组病毒以及药物在预防或治疗肾脏纤维化方面具有广阔的临床应用前景。

Description

一种重组病毒及其在制备用于预防或治疗肾脏纤维化的药物 中的应用
技术领域
本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种重组病毒及其在制备用于预防或治疗肾脏纤维化的药物中的应用。
背景技术
肾脏纤维化以及硬化是导致终末期肾衰竭病人死亡的常见原因之一，而多种疾病均可以引起肾脏纤维化，包括但不限于糖尿病肾病、肾炎及肾脏肿瘤。肾脏纤维化的主要病理改变是毛细血管基底膜的增厚及基底膜区基质的增加，最终导致弥漫性或结节性肾小球硬化；在其发病过程中都伴随着复杂的机体代谢紊乱性改变，其发病机制错综复杂，包括血流动力学、晚期糖基化终末产物、氧化应激、多元醇通路、蛋白激酶C及各种细胞因子的激活等多个方面的相互作用。
近年来，大量的研究表明，多种细胞因子分泌增多和细胞外基质(ECM)代谢异常在糖尿病肾病(DN)发病的各个环节起着重要作用，其中转化生长因子β1(TGFβ1)是引起DN的复杂网络中的关键病理因素，被认为是最重要的促纤维化因子之一。转化生长因子β1(TGFβ1)能增加ECM的合成、抑制ECM的降解，并最终导致ECM在肾小球的异常沉积，从而引起肾小球硬化。并且，已有的研究发现TGFβ1是众多促纤维化因子中最重要的因子之一，在肾脏疾病患者中，TGFβ1可以调节炎症反应，并可通过自我诱生作用，在损伤部位释放更多的TGFβ1以产生放大反应。
众所周知，ECM在肾小球的异常沉积是导致肾小球硬化和肾间质纤维化的重要原因之一。因此，进一步研究TGFβ1对肾脏纤维化的确切发病机制对缓解肾脏纤维化具有重要意义。
然而，目前临床上并没有特异性靶向肾脏纤维化治疗的药物。在基础医学研究中，研究者们往往更多地去关注TGFβ1中和抗体或者小分子抑制剂，但是，中和抗体由于分子量太大，不易达到目标部位；而小分子抑制剂大多会产生细胞毒性，并对机体产生严重的毒副作用。已有研究证明，血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)抑制剂，即ACEI/ARB可以减少尿TGFβ1水平，但是两者联用并未显示相加作用，不能完全阻断TGFβ1的过表达，故只能延缓而不能完全阻滞肾衰竭的进展。此外，也有临床研究表明，将针对TGFβ1的特异性人源性单克隆抗体在临床上用于肾脏纤维化患者，未能延缓肾脏纤维化的进展。
因此，寻找潜在的肾脏纤维化治疗靶点并研发出有效的防治药物具有重大意义。
发明内容
本发明旨在提供一种全新的用于预防或治疗肾脏纤维化的药物。本发明的发明人致力于研究引起TGFβ1转录水平下调的关键因子，以寻找潜在的肾脏纤维化的治疗靶点及有效的防治方法。
具体地，本发明第一方面提供了一种重组病毒，其包含能够使哺乳动物细胞表达外源基因的病毒载体和编码转录因子YY1的核苷酸序列，其中，所述编码转录因子YY1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：
ATGGCCTCGGGCGACACCCTCTACATCGCCACGGACGGCTCGGAGATGCCGGCCGAGATCGTGGAGCTGCATGAGATCGAGGTGGAGACCATCCCGGTGGAGACCATCGAGACCACGGTGGTGGGCGAGGAGGAGGAGGAGGACGACGACGACGAGGACGGCGGCGGCGGCGACCACGGCGGCGGCGGGGGCGGCCACGGGCACGCCGGCCACCACCATCACCACCACCACCACCACCACCACCACCCGCCCATGATCGCGCTGCAGCCGCTGGTGACGGACGACCCGACCCAAGTGCACCACCACCAGGAGGTGATCCTGGTGCAGACGCGCGAGGAGGTGGTCGGCGGGGACGACTCGGACGGGCTGCGCGCCGAGGACGGCTTCGAGGACCAGATCCTCATCCCGGTGCCCGCGCCGGCCGGCGGCGACGACGACTACATAGAGCAGACGCTGGTCACCGTGGCGGCGGCCGGCAAGAGCGGCGGCGGGGCCTCGTCGGGCGGCGGTCGCGTGAAGAAGGGCGGCGGCAAGAAGAGCGGCAAGAAGAGTTACCTGGGCGGCGGGGCCGGCGCGGCGGGCGGCGGCGGCGCCGACCCGGGGAATAAGAAGTGGGAGCAGAAGCAGGTGCAGATCAAGACCCTGGAGGGCGAGTTCTCGGTCACCATGTGGTCCTCGGATGAAAAAAAAGATATTGACCATGAAACAGTGGTTGAAGAGCAGATCATTGGAGAGAACTCACCTCCTGATTATTCTGAATATATGACAGGCAAGAAACTCCCTCCTGGAGGGATACCTGGCATTGACCTCTCAGACCCTAAGCAACTGGCAGAATTTGCCAGAATGAAGCCAAGAAAAATTAAAGAAGATGATGCTCCAAGAACAATAGCTTGCCCTCATAAAGGCTGCACAAAGATGTTCAGGGATAACTCTGCTATGAGAAAGCATCTGCACACCCACGGTCCCAGAGTCCACGTCTGTGCAGAGTGTGGCAAAGCGTTCGTTGAGAGCTCAAAGCTAAAACGACACCAGCTGGTTCATACTGGAGAAAAGCCCTTTCAGTGCACATTCGAAGGCTGCGGGAAGCGCTTTTCACTGGACTTCAATTTGCGCACACATGTGCGAATCCATACCGGAGACAGGCCCTATGTGTGCCCCTTCGACGGTTGTAATAAGAAGTTTGCTCAGTCAACTAACCTGAAATCTCACATCTTAACACACGCTAAAGCCAAAAACAACCAGTGA。
优选地，上述重组病毒中的所述病毒载体选自逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体以及慢病毒载体中的任一种。
进一步优选地，所述腺相关病毒载体选自以下任一种：pHBAAV-CMV-MCS-T2A-ZsGreen，pHBAAV-CMV-MCS-EF1-ZsGreen，pHBAAV-CAG-MCS-T2A-ZsGreen，pHBAAV-CAG-MCS-T2A-mcherry，pHBAAV-CAG-DIO-MCS-T2A-ZsGreen，pHBAAV-CAG-DIO-MCS-T2A-mCherry，pHBAAV-hsyn-MCS-T2A-ZsGreen，pHBAAV-hsyn-MCS-T2A-mCherry，pHBAAV-CamkII-MCS-T2A-ZsGreen，pHBAAV-CamkII-MCS-T2A-mCherry，pHBAAV-GFAP-T2A-EGFP。
同时，本发明第二方面提供了第一方面所述的重组病毒在制备用于预防或治疗肾脏纤维化的药物中的应用。
此外，本发明第三方面提供了一种缓解肾脏纤维化的药物，其包含作为活性成分的第一方面所述的重组病毒和一种或多种药学上可接受的载体。
本发明第四方面还提供了一种转录因子YY1过表达重组病毒，所述转录因子YY1过表达重组病毒的核苷酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。
其中，SEQ ID NO.2为(含3flag标签序列)：
GTCAGATCGCCTGGAGACGCCATCCACGCTGTTTTGACCTCCATAGAAGACACCGACTTTACTAGAGGATCTATTTCCGGTGAATTCGCCACCATGGCCTCGGGCGACACCCTCTACATCGCCACGGACGGCTCGGAGATGCCGGCCGAGATCGTGGAGCTGCATGAGATCGAGGTGGAGACCATCCCGGTGGAGACCATCGAGACCACGGTGGTGGGCGAGGAGGAGGAGGAGGACGACGACGACGAGGACGGCGGCGGCGGCGACCACGGCGGCGGCGGGGGCGGCCACGGGCACGCCGGCCACCACCATCACCACCACCACCACCACCACCACCACCCGCCCATGATCGCGCTGCAGCCGCTGGTGACGGACGACCCGACCCAAGTGCACCACCACCAGGAGGTGATCCTGGTGCAGACGCGCGAGGAGGTGGTCGGCGGGGACGACTCGGACGGGCTGCGCGCCGAGGACGGCTTCGAGGACCAGATCCTCATCCCGGTGCCCGCGCCGGCCGGCGGCGACGACGACTACATAGAGCAGACGCTGGTCACCGTGGCGGCGGCCGGCAAGAGCGGCGGCGGGGCCTCGTCGGGCGGCGGTCGCGTGAAGAAGGGCGGCGGCAAGAAGAGCGGCAAGAAGAGTTACCTGGGCGGCGGGGCCGGCGCGGCGGGCGGCGGCGGCGCCGACCCGGGGAATAAGAAGTGGGAGCAGAAGCAGGTGCAGATCAAGACCCTGGAGGGCGAGTTCTCGGTCACCATGTGGTCCTCGGATGAAAAAAAAGATATTGACCATGAAACAGTGGTTGAAGAGCAGATCATTGGAGAGAACTCACCTCCTGATTATTCTGAATATATGACAGGCAAGAAACTCCCTCCTGGAGGGATACCTGGCATTGACCTCTCAGACCCTAAGCAACTGGCAGAATTTGCCAGAATGAAGCCAAGAAAAATTAAAGAAGATGATGCTCCAAGAACAATAGCTTGCCCTCATAAAGGCTGCACAAAGATGTTCAGGGATAACTCTGCTATGAGAAAGCATCTGCACACCCACGGTCCCAGAGTCCACGTCTGTGCAGAGTGTGGCAAAGCGTTCGTTGAGAGCTCAAAGCTAAAACGACACCAGCTGGTTCATACTGGAGAAAAGCCCTTTCAGTGCACATTCGAAGGCTGCGGGAAGCGCTTTTCACTGGACTTCAATTTGCGCACACATGTGCGAATCCATACCGGAGACAGGCCCTATGTGTGCCCCTTCGACGGTTGTAATAAGAAGTTTGCTCAGTCAACTAACCTGAAATCTCACATCTTAACACCGCTAAAGCCAAAAACAACCAGTGAGACTACAAGGATGACGATGACAAGGATTACAAAGACGACGATGATAAGGACTATAAGGATGATGACGACAAAGGATCCGCAACAAACTTCTCACTACTCAAACAAGCAGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGGCCCA；
其中，SEQ ID NO.3为(不含标签序列)：
GTCAGATCGCCTGGAGACGCCATCCACGCTGTTTTGACCTCCATAGAAGACACCGACTTTACTAGAGGATCTATTTCCGGTGAATTCGCCACCATGGCCTCGGGCGACACCCTCTACATCGCCACGGACGGCTCGGAGATGCCGGCCGAGATCGTGGAGCTGCATGAGATCGAGGTGGAGACCATCCCGGTGGAGACCATCGAGACCACGGTGGTGGGCGAGGAGGAGGAGGAGGACGACGACGACGAGGACGGCGGCGGCGGCGACCACGGCGGCGGCGGGGGCGGCCACGGGCACGCCGGCCACCACCATCACCACCACCACCACCACCACCACCACCCGCCCATGATCGCGCTGCAGCCGCTGGTGACGGACGACCCGACCCAAGTGCACCACCACCAGGAGGTGATCCTGGTGCAGACGCGCGAGGAGGTGGTCGGCGGGGACGACTCGGACGGGCTGCGCGCCGAGGACGGCTTCGAGGACCAGATCCTCATCCCGGTGCCCGCGCCGGCCGGCGGCGACGACGACTACATAGAGCAGACGCTGGTCACCGTGGCGGCGGCCGGCAAGAGCGGCGGCGGGGCCTCGTCGGGCGGCGGTCGCGTGAAGAAGGGCGGCGGCAAGAAGAGCGGCAAGAAGAGTTACCTGGGCGGCGGGGCCGGCGCGGCGGGCGGCGGCGGCGCCGACCCGGGGAATAAGAAGTGGGAGCAGAAGCAGGTGCAGATCAAGACCCTGGAGGGCGAGTTCTCGGTCACCATGTGGTCCTCGGATGAAAAAAAAGATATTGACCATGAAACAGTGGTTGAAGAGCAGATCATTGGAGAGAACTCACCTCCTGATTATTCTGAATATATGACAGGCAAGAAACTCCCTCCTGGAGGGATACCTGGCATTGACCTCTCAGACCCTAAGCAACTGGCAGAATTTGCCAGAATGAAGCCAAGAAAAATTAAAGAAGATGATGCTCCAAGAACAATAGCTTGCCCTCATAAAGGCTGCACAAAGATGTTCAGGGATAACTCTGCTATGAGAAAGCATCTGCACACCCACGGTCCCAGAGTCCACGTCTGTGCAGAGTGTGGCAAAGCGTTCGTTGAGAGCTCAAAGCTAAAACGACACCAGCTGGTTCATACTGGAGAAAAGCCCTTTCAGTGCACATTCGAAGGCTGCGGGAAGCGCTTTTCACTGGACTTCAATTTGCGCACACATGTGCGAATCCATACCGGAGACAGGCCCTATGTGTGCCCCTTCGACGGTTGTAATAAGAAGTTTGCTCAGTCAACTAACCTGAAATCTCACATCTTAACACCGCTAAAGCCAAAAACAACCAGTGAGGATCCGCAACAAACTTCTCACTACTCAAACAAGCAGGTGACGTGGAGGAGAATCCCGGCCCTATGGCCCA。
当然，基于本领域技术人员的已知专业知识，还可用其它已知的常用标签序列替代3flag标签序列，且在以上3flag标签序列相同的位置插入该重组病毒，例如，可以分别使用编码标签蛋白His，MBP，GST，HA，c-myc，eGFP/eCFP/eYFP/mcherry，SUMO的核苷酸序列作为该标签序列。
另外，本发明第五方面提供了第四方面所述的转录因子YY1过表达重组病毒在制备用于预防或治疗肾脏纤维化的药物中的应用。
最后，本发明第六方面提供了一种缓解肾脏纤维化的药物，其包含作为活性成分的第四方面所述的转录因子YY1过表达重组病毒和一种或多种药学上可接受的载体。
发明人采用临床人体肾穿组织样本进行免疫组织化学染色法以及临床数据统计，分析发现，转录因子YY1的表达量在早期肾脏纤维化模型中上升，其表达量与肾小球滤过率(eGFR)、尿胱抑素C和尿白蛋白肌酐比(UACR)、血尿素氮(BUN)相关性明显。此外，转录因子YY1的表达量与致纤维化因子TGFβ1及其下游基因FN、COL4(即Col IV)的表达量呈现显著的线性相关性。
发明人通过实验证实，在小鼠肾脏上敲除转录因子YY1的表达后，小鼠肾脏纤维化进程加速：HE、PAS及Masson染色均显示YY1敲除后的小鼠，肾脏纤维化水平升高，电镜显示肾脏足突融合、细胞外基质沉积，且蛋白尿、胱抑素C水平上升；另一方面，YY1水平下降后，TGFβ1及其下游基因的表达量明显上升，从而促进了肾脏纤维化的进程。
并且，发明人通过实验证实，在小鼠肾脏特异性过表达YY1后，能够缓解小鼠肾脏纤维化的进程：HE、PAS及Masson染色均显示YY1肾脏特异性上调后的小鼠，肾脏纤维化水平缓解，电镜显示肾脏足突融合、细胞外基质沉积均减少，且蛋白尿、胱抑素C水平等肾脏损伤的指标均得到缓解；另一方面，YY1水平升高后，TGFβ1及其下游基因的表达量明显下降，从而缓解了肾脏纤维化的进程。
因此，通过转录因子YY1调控TGFβ1及其直接靶标FN和Col IV的表达，从而抑制肾小球系膜细胞的纤维化及细胞外基质在肾小球的沉积，成为有效治疗肾脏纤维化的关键靶标。
因此，本发明提供的一系列包含SEQ ID NO.1序列的重组病毒，例如转录因子YY1过表达重组病毒(AAV-YY1病毒，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示)，都能够用于制备预防或治疗肾脏纤维化的各类药物。患者用药后，患者的肾脏系膜细胞中的转录因子YY1表达得到增强，进而TGFβ1表达被明显地抑制，最终使得肾脏纤维化的进程得到缓解。
综上所述，本发明所提供的技术方案是基于转录因子YY1负性调控于TGFβ1进而缓解肾脏纤维化进展，找到了导致TGFβ1及其靶标基因转录水平下调的关键因子，并提供了一系列包含SEQ ID NO.1序列的重组病毒，尤其是转录因子YY1过表达重组病毒(AAV-YY1病毒)，其可用于制备预防或治疗肾脏纤维化的药物；因此，本发明所提供的靶标基因序列、重组病毒以及药物在预防或治疗肾脏纤维化方面具有广阔的临床应用前景。
附图说明
图1示出了转录因子YY1在临床肾脏纤维化病人中的表达水平与致纤维化因子TGFβ1的表达水平呈现出相反趋势，并且与肾小球滤过率呈正相关性；其中，图1A为免疫组化染色结果图，图1B为YY1的表达量与肾小球滤过率(eGFR)的关系曲线图，图1C为YY1的表达量与肾小球中FN的表达量的关系曲线图。
图2示出了，在肾脏纤维化模型小鼠中，肾脏特异性敲除YY1的实验组小鼠肾脏纤维化的进程加剧，TGFβ1及其下游信号通路的表达上调；其中，图2A示出了苏木精——伊红染色(hematoxylin-eosin staining，H&E)、糖原染色(Periodic Acid-Schiff stain，PSA)以及masson染色的结果图，图2B为免疫组化染色结果图，图2C为电镜检测肾小球基底膜厚度检测结果图，图2D为电镜检测肾小球基底膜微孔密度检测结果图，图2E为尿白蛋白肌酐比检测结果图(其中，尿蛋白购自Ablumin ELISA kit，Wako，Japan；尿肌酐(肌酐Cr试剂盒)，购自南京建成生物工程研究所)，图2F为胱抑素C检测结果图(Mouse Cystain C ELISAKit，Abcom)，图2G为血尿素氮检测结果图(尿素氮BUN试剂盒，南京建成生物工程研究所)；其中，YY1-KD表示肾脏特异性下敲YY1的实验组小鼠。
图3示出了，在肾脏纤维化模型小鼠中，肾脏特异性过表达YY1可缓解肾脏纤维化的进程，抑制TGFβ1及其下游信号通路的表达；其中，图3A示出了苏木精——伊红染色、糖原染色以及masson染色的结果图，图3B为尿白蛋白肌酐比检测结果图，图3C为胱抑素C检测结果图，图3D为血尿素氮检测结果图，图3E为肾脏重量的检测结果图，图3F为电镜检测肾小球基底膜微孔密度检测结果图，图3G为电镜检测肾小球基底膜厚度检测结果图，图3H为免疫组化染色结果图；其中，YY1-OE表示肾脏特异性过表达YY1的实验组小鼠。
图4为腺相关病毒载体pHBAAV-CMV-MCS-3flag-T2A-ZsGreen的图谱，其示出了YY1的CDS区将克隆在酶切位点BamHI和KpnI之间。
图5为YY1过表达重组病毒(AAV-YY1病毒)的核苷酸序列SEQ ID NO.2；其中，黄色区域部分为目的序列，紫色区域为3*flag序列(原图有颜色)。
图6为AAV-YY1病毒测序结果比对图；其中，绿色区域部分为与目的序列匹配部分，紫色方框内为3*flag序列(原图有颜色)。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施方式。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从公开商业途径获得。
实施例1
上海市第六人民医院标本库收集了2015-2017年之间的签署了知情同意书的肾脏穿刺且被病理诊断为肾脏纤维化的病人的肾脏标本，利用肾穿组织石蜡切片进行免疫组织化学染色，具体步骤如下：进行石蜡切片，二甲苯和95％酒精脱蜡至水；接着，用蒸馏水冲洗，再用3％的过氧化氢水溶液去除内源性过氧化物酶(37℃放置30min)；然后，用双蒸水和TBST清洗，再用柠檬酸钠溶液进行微波修复；待溶液冷却后，正常羊血清封闭20min，加一抗，37℃孵育一个小时后，4℃下过夜；第二天，将切片室温平衡后，TBST洗三次，加二抗并于37℃下孵育一个小时，用DAB法显色后，采用苏木素衬染细胞核。然后，实施中性树胶封片，最后显微镜下成像，并用Image J软件进行定量统计，结果如图1所示。
实验结果表明，在肾脏纤维化过程中，随着纤维化指标TGFβ1，FN，COL4水平的增强，YY1的表达量亦增加；同时，统计学分析也证实，YY1的表达量与肾小球滤过率(eGFR)呈现正性的线性相关，与肾小球中FN的表达量呈现出负性的线性相关。
实施例2
YY1过表达重组病毒的构建
参见图4，发明人利用pHBAAV-CMV-MCS-3flag-T2A-ZsGreen这种腺相关病毒载体，并采用BamH I及Kpn I这两种限制性内切酶，用CutSmart缓冲液在37℃酶切1h后进行切胶回收，进一步得到纯化的线性载体。同时，对YY1(SEQ ID NO.1)进行PCR扩增，所采用的正向引物为5'-CCATAGAAGACACCGGGATCCGCCACCATGGCCTCGGGCGACACC-3'(SEQ ID NO.4)，所采用的反向引物为5'-GTAGTCGTTAATTAAGGTACCCTGGTTGTTTTTGGCCTTAGCATGT-3'(SEQ IDNO.5)；PCR结束后进行DNA回收，得到纯化的线性YY1的CDS片段。接着，将制得的线性载体与所述线性YY1的CDS片段连接起来(LigationHigh酶，16℃进行1h)，然后进行转化，具体包括如下步骤：将连接产物10ul加入北京全式金生物技术有限公司的Stable3感受态细胞，冰上孵育30min后，在水浴锅中42℃热激活45s，然后在冰上静置3min，加入500ul LB溶液，并于220rpm摇床上孵育1h，进行涂板，16h后挑单克隆摇菌，抽重组病毒，进行测序，以得到正确的YY1过表达重组病毒(即AAV-YY1病毒，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，参见图5)。
进一步地，参见图6，发明人还对AAV-YY1病毒进行了测序结果比对；即利用pubmedblast引物，对小鼠的全基因组进行blast比对；结果表明，成功构建了YY1过表达重组病毒。
实施例3
肾脏特异性敲除YY1实验
将4周龄的C57BL6/J YY1flox/flox雄鼠，高脂饮食喂养6周后进行腹腔注射链脲佐菌素(STZ，40mg/kg)，隔天注射，共进行三次后测定空腹血糖，大于16.7mmol/L的雄鼠随机分为两组，每组12只；一周后进行肾脏原位注射AAV-cre病毒：用戊巴比妥钠麻醉小鼠后，开腹，小心分离出左侧肾脏，在左肾皮质下缘取三点进行注射(每点10ul 1*1012的AAV-cre病毒)；对照组做相同处理，注射等剂量的AAV-GFP对照病毒后缝合伤口，继续饲养12周后处死小鼠。在小鼠饲养期间，每周监测体重血糖，每两周收一次尿，比较对照组和实验组小鼠之间肾脏损伤情况。
实验结果表明，在肾脏纤维化小鼠模型中将YY1肾脏特异性敲除之后，肾脏损伤的程度更加明显，具体表现为更严重的糖原沉积和细胞外基质的沉积(图2A)。通过免疫组织化学染色的方法，发明人还发现在肾小球中YY1的表达被显著性下降，体现了YY1下敲效率之高；与此同时，纤维化程度加剧，表现为TGFβ1及FN的蛋白水平上升(图2B)。另外，通过电镜观察，发现YY1敲除的小鼠表现为基底膜增厚(图2C)以及足突融合(图2D)。收集两组小鼠的尿液进行生化分析，我们发现YY1敲除的小鼠的尿蛋白、胱抑素C以及BUN的水平均升高，这提示其肾脏损伤程度加剧(图2E-G)。
实施例4
肾脏特异性过表达YY1实验
将4周龄的C57BL6/J雄鼠，高脂饮食喂养6周后进行腹腔注射STZ(40mg/kg)，隔天注射，共进行三次后测定空腹血糖，大于16.7mmol/L的雄鼠随机分为两组，每组12只；一周后进行肾脏原位注射AAV-YY1病毒：用戊巴比妥钠麻醉小鼠后，开腹，小心分离出左侧肾脏，在左肾皮质下缘取三点进行注射(每点10ul 1*1012的AAV-YY1病毒)；对照组做相同处理，注射等剂量的AAV-GFP对照病毒后缝合伤口，继续饲养12周后处死小鼠。在小鼠饲养期间，每周监测体重血糖，每两周收一次尿，比较对照组和实验组小鼠之间肾脏损伤情况。
实验结果表明，在肾脏纤维化小鼠模型中将YY1肾脏特异性过表达之后，肾脏损伤的程度明显得以改善，具体表现为较少的糖原沉积和细胞外基质的沉积(图3A)。收集两组小鼠的尿液进行生化分析，发明人发现YY1过表达的小鼠的尿蛋白、胱抑素C以及BUN的水平均下降，这提示肾脏的损伤程度得到缓解(图3B-3E)。通过电镜观察发现，相对于对照组小鼠，YY1过表达的小鼠的基底膜的厚度(图3C)以及足突融合程度都趋近正常水平(图3F-3G)。通过免疫组织化学染色的方法，发明人还发现在肾小球中YY1的表达被明显提升，这表明通过YY1过表达重组病毒在肾脏原位注射的方法能够有效上调YY1在肾脏中的表达水平；与此同时，纤维化程度得到缓解，具体表现为TGFβ1蛋白水平下降(图3H)。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
序列表
<110> 上海市第六人民医院
<120> 一种重组病毒及其在制备用于预防或治疗肾脏纤维化的药物中的应用
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1245
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atggcctcgg gcgacaccct ctacatcgcc acggacggct cggagatgcc ggccgagatc 60
gtggagctgc atgagatcga ggtggagacc atcccggtgg agaccatcga gaccacggtg 120
gtgggcgagg aggaggagga ggacgacgac gacgaggacg gcggcggcgg cgaccacggc 180
ggcggcgggg gcggccacgg gcacgccggc caccaccatc accaccacca ccaccaccac 240
caccacccgc ccatgatcgc gctgcagccg ctggtgacgg acgacccgac ccaagtgcac 300
caccaccagg aggtgatcct ggtgcagacg cgcgaggagg tggtcggcgg ggacgactcg 360
gacgggctgc gcgccgagga cggcttcgag gaccagatcc tcatcccggt gcccgcgccg 420
gccggcggcg acgacgacta catagagcag acgctggtca ccgtggcggc ggccggcaag 480
agcggcggcg gggcctcgtc gggcggcggt cgcgtgaaga agggcggcgg caagaagagc 540
ggcaagaaga gttacctggg cggcggggcc ggcgcggcgg gcggcggcgg cgccgacccg 600
gggaataaga agtgggagca gaagcaggtg cagatcaaga ccctggaggg cgagttctcg 660
gtcaccatgt ggtcctcgga tgaaaaaaaa gatattgacc atgaaacagt ggttgaagag 720
cagatcattg gagagaactc acctcctgat tattctgaat atatgacagg caagaaactc 780
cctcctggag ggatacctgg cattgacctc tcagacccta agcaactggc agaatttgcc 840
agaatgaagc caagaaaaat taaagaagat gatgctccaa gaacaatagc ttgccctcat 900
aaaggctgca caaagatgtt cagggataac tctgctatga gaaagcatct gcacacccac 960
ggtcccagag tccacgtctg tgcagagtgt ggcaaagcgt tcgttgagag ctcaaagcta 1020
aaacgacacc agctggttca tactggagaa aagccctttc agtgcacatt cgaaggctgc 1080
gggaagcgct tttcactgga cttcaatttg cgcacacatg tgcgaatcca taccggagac 1140
aggccctatg tgtgcccctt cgacggttgt aataagaagt ttgctcagtc aactaacctg 1200
aaatctcaca tcttaacaca cgctaaagcc aaaaacaacc agtga 1245
<210> 2
<211> 1480
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gtcagatcgc ctggagacgc catccacgct gttttgacct ccatagaaga caccgacttt 60
actagaggat ctatttccgg tgaattcgcc accatggcct cgggcgacac cctctacatc 120
gccacggacg gctcggagat gccggccgag atcgtggagc tgcatgagat cgaggtggag 180
accatcccgg tggagaccat cgagaccacg gtggtgggcg aggaggagga ggaggacgac 240
gacgacgagg acggcggcgg cggcgaccac ggcggcggcg ggggcggcca cgggcacgcc 300
ggccaccacc atcaccacca ccaccaccac caccaccacc cgcccatgat cgcgctgcag 360
ccgctggtga cggacgaccc gacccaagtg caccaccacc aggaggtgat cctggtgcag 420
acgcgcgagg aggtggtcgg cggggacgac tcggacgggc tgcgcgccga ggacggcttc 480
gaggaccaga tcctcatccc ggtgcccgcg ccggccggcg gcgacgacga ctacatagag 540
cagacgctgg tcaccgtggc ggcggccggc aagagcggcg gcggggcctc gtcgggcggc 600
ggtcgcgtga agaagggcgg cggcaagaag agcggcaaga agagttacct gggcggcggg 660
gccggcgcgg cgggcggcgg cggcgccgac ccggggaata agaagtggga gcagaagcag 720
gtgcagatca agaccctgga gggcgagttc tcggtcacca tgtggtcctc ggatgaaaaa 780
aaagatattg accatgaaac agtggttgaa gagcagatca ttggagagaa ctcacctcct 840
gattattctg aatatatgac aggcaagaaa ctccctcctg gagggatacc tggcattgac 900
ctctcagacc ctaagcaact ggcagaattt gccagaatga agccaagaaa aattaaagaa 960
gatgatgctc caagaacaat agcttgccct cataaaggct gcacaaagat gttcagggat 1020
aactctgcta tgagaaagca tctgcacacc cacggtccca gagtccacgt ctgtgcagag 1080
tgtggcaaag cgttcgttga gagctcaaag ctaaaacgac accagctggt tcatactgga 1140
gaaaagccct ttcagtgcac attcgaaggc tgcgggaagc gcttttcact ggacttcaat 1200
ttgcgcacac atgtgcgaat ccataccgga gacaggccct atgtgtgccc cttcgacggt 1260
tgtaataaga agtttgctca gtcaactaac ctgaaatctc acatcttaac accgctaaag 1320
ccaaaaacaa ccagtgagac tacaaggatg acgatgacaa ggattacaaa gacgacgatg 1380
ataaggacta taaggatgat gacgacaaag gatccgcaac aaacttctca ctactcaaac 1440
aagcaggtga cgtggaggag aatcccggcc ctatggccca 1480
<210> 3
<211> 1408
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gtcagatcgc ctggagacgc catccacgct gttttgacct ccatagaaga caccgacttt 60
actagaggat ctatttccgg tgaattcgcc accatggcct cgggcgacac cctctacatc 120
gccacggacg gctcggagat gccggccgag atcgtggagc tgcatgagat cgaggtggag 180
accatcccgg tggagaccat cgagaccacg gtggtgggcg aggaggagga ggaggacgac 240
gacgacgagg acggcggcgg cggcgaccac ggcggcggcg ggggcggcca cgggcacgcc 300
ggccaccacc atcaccacca ccaccaccac caccaccacc cgcccatgat cgcgctgcag 360
ccgctggtga cggacgaccc gacccaagtg caccaccacc aggaggtgat cctggtgcag 420
acgcgcgagg aggtggtcgg cggggacgac tcggacgggc tgcgcgccga ggacggcttc 480
gaggaccaga tcctcatccc ggtgcccgcg ccggccggcg gcgacgacga ctacatagag 540
cagacgctgg tcaccgtggc ggcggccggc aagagcggcg gcggggcctc gtcgggcggc 600
ggtcgcgtga agaagggcgg cggcaagaag agcggcaaga agagttacct gggcggcggg 660
gccggcgcgg cgggcggcgg cggcgccgac ccggggaata agaagtggga gcagaagcag 720
gtgcagatca agaccctgga gggcgagttc tcggtcacca tgtggtcctc ggatgaaaaa 780
aaagatattg accatgaaac agtggttgaa gagcagatca ttggagagaa ctcacctcct 840
gattattctg aatatatgac aggcaagaaa ctccctcctg gagggatacc tggcattgac 900
ctctcagacc ctaagcaact ggcagaattt gccagaatga agccaagaaa aattaaagaa 960
gatgatgctc caagaacaat agcttgccct cataaaggct gcacaaagat gttcagggat 1020
aactctgcta tgagaaagca tctgcacacc cacggtccca gagtccacgt ctgtgcagag 1080
tgtggcaaag cgttcgttga gagctcaaag ctaaaacgac accagctggt tcatactgga 1140
gaaaagccct ttcagtgcac attcgaaggc tgcgggaagc gcttttcact ggacttcaat 1200
ttgcgcacac atgtgcgaat ccataccgga gacaggccct atgtgtgccc cttcgacggt 1260
tgtaataaga agtttgctca gtcaactaac ctgaaatctc acatcttaac accgctaaag 1320
ccaaaaacaa ccagtgagga tccgcaacaa acttctcact actcaaacaa gcaggtgacg 1380
tggaggagaa tcccggccct atggccca 1408
<210> 4
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ccatagaaga caccgggatc cgccaccatg gcctcgggcg acacc 45
<210> 5
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gtagtcgtta attaaggtac cctggttgtt tttggcctta gcatgt 46

Claims (8)

1.一种重组病毒，其特征在于，包含能够使哺乳动物细胞表达外源基因的病毒载体和编码转录因子YY1的核苷酸序列，其中，所述编码转录因子YY1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的重组病毒，其特征在于，所述病毒载体选自逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体以及慢病毒载体中的任一种。
3.根据权利要求2所述的重组病毒，其特征在于，所述腺相关病毒载体选自以下任一种：pHBAAV-CMV-MCS-T2A-ZsGreen，pHBAAV-CMV-MCS-EF1-ZsGreen，pHBAAV-CAG-MCS-T2A-ZsGreen，pHBAAV-CAG-MCS-T2A-mcherry，pHBAAV-CAG-DIO-MCS-T2A-ZsGreen，pHBAAV-CAG-DIO-MCS-T2A-mCherry，pHBAAV-hsyn-MCS-T2A-ZsGreen，pHBAAV-hsyn-MCS-T2A-mCherry，pHBAAV-CamkII-MCS-T2A-ZsGreen，pHBAAV-CamkII-MCS-T2A-mCherry，pHBAAV-GFAP-T2A-EGFP。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组病毒在制备用于预防或治疗肾脏纤维化的药物中的应用。
5.一种缓解肾脏纤维化的药物，其特征在于，包含作为活性成分的根据权利要求1-3中任一项所述的重组病毒和一种或多种药学上可接受的载体。
6.一种转录因子YY1过表达重组病毒，其特征在于，所述转录因子YY1过表达重组病毒的核苷酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示。
7.根据权利要求6所述的转录因子YY1过表达重组病毒在制备用于预防或治疗肾脏纤维化的药物中的应用。
8.一种缓解肾脏纤维化的药物，其特征在于，包含作为活性成分的根据权利要求6所述的转录因子YY1过表达重组病毒和一种或多种药学上可接受的载体。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114703280A (zh) * 2022-05-25 2022-07-05 中国医学科学院医学实验动物研究所 Emcn在诊断和治疗糖尿病肾病中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005012490A2 (en) * 2003-08-01 2005-02-10 Elan Pharmaceuticals, Inc. Neuroprotective effects of atf6
US20060014286A1 (en) * 1999-01-12 2006-01-19 Cox George N Iii Ligand-controlled regulation of endogenous gene expression
JP2006187215A (ja) * 2004-12-28 2006-07-20 Univ Of Tsukuba ベクターによる遺伝子改変型樹状細胞を用いた抗体作製方法
CN106543272A (zh) * 2015-09-18 2017-03-29 江苏众红生物工程创药研究院有限公司 多功能标签融合蛋白及其表达方法和应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060014286A1 (en) * 1999-01-12 2006-01-19 Cox George N Iii Ligand-controlled regulation of endogenous gene expression
WO2005012490A2 (en) * 2003-08-01 2005-02-10 Elan Pharmaceuticals, Inc. Neuroprotective effects of atf6
JP2006187215A (ja) * 2004-12-28 2006-07-20 Univ Of Tsukuba ベクターによる遺伝子改変型樹状細胞を用いた抗体作製方法
CN106543272A (zh) * 2015-09-18 2017-03-29 江苏众红生物工程创药研究院有限公司 多功能标签融合蛋白及其表达方法和应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
STRAUSBERG,R.L.等: "ACCESSION:BC055899，Mus musculus YY1 transcription factor,mRNA", 《GENBANK》 *
中国科学院生物与化学交叉研究中心: "刘军力教授应邀在交叉中心举办学术报告", 《百度》 *
朱帆: "《病毒生物工程实验》", 31 May 2011, 武汉大学出版社 *
汪建云等: "糖尿病肾病中转化生长因子-β1信号转导与肾纤维化", 《中国临床药理学与治疗学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114703280A (zh) * 2022-05-25 2022-07-05 中国医学科学院医学实验动物研究所 Emcn在诊断和治疗糖尿病肾病中的应用

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