CN108883075A - 一种肿瘤治疗性单抗纳米微囊及其制备方法和应用 - Google Patents

一种肿瘤治疗性单抗纳米微囊及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108883075A
CN108883075A CN201780014862.1A CN201780014862A CN108883075A CN 108883075 A CN108883075 A CN 108883075A CN 201780014862 A CN201780014862 A CN 201780014862A CN 108883075 A CN108883075 A CN 108883075A
Authority
CN
China
Prior art keywords
trastuzumab
buddhist nun
nano
microcapsule
crosslinking agent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201780014862.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108883075B (zh
Inventor
原续波
康春生
卢云峰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tianjin Nanuo Bio Technology Co ltd
Original Assignee
Tianjin Nanuo Bio Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tianjin Nanuo Bio Technology Co ltd filed Critical Tianjin Nanuo Bio Technology Co ltd
Publication of CN108883075A publication Critical patent/CN108883075A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108883075B publication Critical patent/CN108883075B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5138—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5192—Processes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

一种肿瘤治疗性单抗纳米微囊，由聚2‑甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱与尼妥珠单抗聚合而成的表面圆滑，粒径均一，具有肿瘤靶向投递作用的纳米微囊，具有抑制肿瘤，尤其是神经胶质瘤和胃部肿瘤增殖的作用。制备方法为取0.1‑100mg尼妥珠单抗溶液，分别按照尼妥珠单抗溶液与含碳碳双键的单体、交联剂、引发剂的摩尔比为1:100‑1:100000、1:100‑1:10000、1:100‑1:10000的比例依次加入含碳碳双键的单体、交联剂、引发剂，通过原位聚合的方法获得。

Description

一种肿瘤治疗性单抗纳米微囊及其制备方法和应用
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年3月3日递交的中国专利申请号为201610120570.3的专利申请的权益，在此将其全部内容引入作为参考。
技术领域
本发明属于含有抗原或抗体的医药配制品领域，具体是一种聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊及其制备方法和用途。
背景技术
胶质母细胞瘤是最常见的颅内原发性恶性肿瘤，具有高度的侵袭性，目前其治疗方式包括手术切除，及辅助性术后放射及替莫唑胺化学治疗，但生存期通常不足15个月。
近年来，随着对肿瘤发生发展机制的认识和分子生物学技术的进步，目前临床已经开始针对细胞受体、关键基因和调控分子为靶点的分子靶向治疗。而其中的热点，主要是针对表皮生长因子受体(EGFR)为靶点的治疗。EGFR是一跨膜糖蛋白受体，由细胞外的配体结合区，跨膜区及细胞内酪氨酸激酶活性区组成，当配体于胞外的配体结合区结合后，受体可发生同二聚或异二聚作用，激活胞内酪氨酸激酶的活性，并进一步激活下游的信号传导通路。因EGFR的信号传导机制和肿瘤的恶性表型，正常细胞凋亡的抑制，血管生成，以及肿瘤的转移均有密切的联系，提示它可以作为药物的治疗靶向。目前，全球已经有三种针对EGFR的单克隆抗体上市，已经取得了明显的效果。此三种抗体为尼妥珠单抗(Nimotuzumab)，西妥昔单抗(Cetuximab)，帕尼单抗(Panitumumab)。尼妥珠单抗是针对EGFR的人源化IgG1型单克隆抗体药物，通过与EGFR胞外区域3A表位结合，竞争性抑制配体与EGFR的结合，使受体失去活性，从而达到抑制肿瘤细胞的作用。但是，治疗抗体存在着分子量大、跨血脑屏障效率低、血液中稳定性差和循环时间短等问题。
随着纳米技术的发展和不断成熟，众多纳米级载体应用于肿瘤靶向给药，如纳米微囊、脂质体、纳米乳、高分子胶束、树枝状聚合物等。其中， 纳米微囊是指固态或液态药物被药用辅料包封成的粒径在10～1000nm的微小胶囊。纳米微囊通过被动靶向和/或主动靶向实现将药物选择性地释放到肿瘤部位。以肿瘤细胞表面特异性受体或细胞特异性表达酶为靶点的主动靶向的纳米微囊，可以增加抗肿瘤药物在肿瘤细胞内的浓度，从而发挥比被动靶向的纳米微囊更好的活性。
金属基质蛋白酶(MMP)是锌依赖性肽链内切酶，以金属离子作为辅酶因子来降解各种细胞外基质蛋白和加工一些生物活性分子。自1962年发现第一个MMP，即胶原酶MMP-1开始，迄今已经发现了26个成员。在众多的MMP家族成员中，MMP-2和MMP-9是已知的与癌症转移和侵袭密切相关的重要成员。在转移瘤细胞和肿瘤组织血管的内皮细胞中MMP-2和MMP-9呈现高表达。因此，MMP-2和MMP-9作为肿瘤治疗和抗肿瘤递药系统的靶点，已经引起了研究者的注意。
一般纳米微囊的制备，多通过聚合物分散法和单体聚合反应法。近年来，从纳米复合材料中发展出原位聚合法。该方法的反应机制是把反应单体通过静电作用吸附到大分子药物表面，在催化剂作用下让单体在药物表面发生聚合反应。
发明内容
本发明就是为了解决目前肿瘤治疗性抗体药物血药半衰期短，免疫源性，分子量大，不易透过血脑屏障的问题，所提出的一种尼妥珠单抗纳米微囊及其制备方法和用途。
本发明是按照以下技术方案实现的。
一种尼妥珠单抗纳米微囊，是由聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱与尼妥珠单抗聚合而成的表面圆滑，粒径均一，粒径为30±5nm，表面电荷为2.3mV，具有脑肿瘤靶向高效投递作用的纳米微囊。
一种尼妥珠单抗纳米微囊的制备方法，包括以下步骤：
a.取0.1-100mg尼妥珠单抗溶液；
b.按照尼妥珠单抗溶液与含碳碳双键的单体的摩尔比为1:100-1:100000的比例加入含碳碳双键的单体；
c.按照尼妥珠单抗溶液与交联剂的摩尔比为1:100-1:10000的比例加入酶可降解的多肽交联剂，利用静电和氢键作用，在尼妥珠单抗的周围富集碳碳双键单体以及交联剂；
d.按照尼妥珠单抗溶液与引发剂的摩尔比为1:100-1:10000的比例加入引发剂，在4℃，引发剂的引发下，通过原位聚合的方法获得聚2-甲基 丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊，反应时间为0.1-24小时。
优选的，步骤b中所述的含碳碳双键的单体为N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐和2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱，两种单体的摩尔比为0.0001:1-1:10000。
更优选的，N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐和2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的摩尔比为1:5～20。
进一步优选的，N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐和2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的摩尔比为1:10～15。
优选的，步骤c中所述交联剂为酶敏感交联剂、pH敏感交联剂、或氧化还原敏感交联剂。
所述酶敏感交联剂为基质金属蛋白酶-2可降解的多肽交联剂；pH敏感交联剂为二甲基丙烯酸乙二醇酯；氧化还原敏感交联剂为含二硫键交联剂。
更优选的，步骤c中，所述交联剂为基质金属蛋白酶-2可降解的多肽交联剂。
进一步优选的，步骤c中，尼妥珠单抗与基质金属蛋白酶-2可降解的多肽交联剂的摩尔比为1:400～600，更优选为1:450～550。
步骤d中所述的引发剂为过硫酸铵和四甲基乙二胺，两者的摩尔比为0.01:1-1:100。
进一步优选的，步骤d中，过硫酸铵和四甲基乙二胺的摩尔比为1:1～5，更优选为1:1.5～2.5。
优选的，本发明提供一种尼妥珠单抗纳米微囊的制备方法，包括以下步骤：
a.取1mg尼妥珠单抗溶液；
b.加入正电性单体N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐，尼妥珠单抗与N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐的摩尔比是1:300，再加入2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱，尼妥珠单抗与2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的摩尔比是1:4000；
c.按照尼妥珠单抗溶液与基质金属蛋白酶-2可降解的多肽交联剂的摩尔比为1:500的比例加入基质金属蛋白酶-2可降解的多肽交联剂，静置10min，利用静电和氢键作用，在尼妥珠单抗的周围富集N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐单体、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱单体以及酶可降解多肽交联剂；
d.然后加入过硫酸铵和四甲基乙二胺，尼妥珠单抗与过硫酸铵、四甲基乙二胺的摩尔比为1:500:1000,在4℃反应2小时，制备得到聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊。
本发明还提供一种通过上述制备方法制备得到的尼妥珠单抗纳米微囊，所述尼妥珠单抗包载在由含碳碳双键的单体和酶可降解的交联剂聚合成的囊壳中。
优选的，本发明提供一种通过上述制备方法制备得到的尼妥珠单抗纳米微囊，所述尼妥珠单抗包载在由N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和基质金属蛋白酶-2可降解的多肽交联剂聚合而成的囊壳中。
上述尼妥珠单抗纳米微囊在制备肿瘤靶向治疗药物中的应用。
上述尼妥珠单抗纳米微囊在制备治疗脑肿瘤的药物中的应用。
上述尼妥珠单抗纳米微囊在制备治疗神经胶质瘤，特别是胶质母细胞瘤的药物中的应用。
上述尼妥珠单抗纳米微囊在制备治疗胃癌的药物中的应用。
本发明获得了如下的有益效果。
本发明通过原位聚合法制备了大小均一，表面圆滑，具有肿瘤靶向、酶降解释放和血液中长循环功能(血液中半衰期时间为48h)的聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊，极大改善了尼妥珠单抗通过血脑屏障效率低的缺陷，同时实现了尼妥珠单抗的脑肿瘤和胃部肿瘤靶向高效投递，避免了尼妥珠单抗对正常器官的毒副作用，并利用尼妥珠单抗具有的一定抗肿瘤作用，有效的抑制神经胶质瘤细胞和胃部肿瘤的增殖，提高了尼妥珠单抗治疗肿瘤，特别是脑部恶性肿瘤的疗效。本发明采用的原位聚合法类似于本体聚合，操作简单，聚合物纯净，而且反应发生在水相中，又克服了本体聚合散热困难的问题。本发明成本较低，操作简单，稳定性好，缓释效果好，易于实现大规模工业化生产，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1是本发明聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊透射电镜图；
图2是本发明聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊粒径分布图；
图3是本发明聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米 微囊zeta电位分布图；
图4是本发明聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊对U87胶质瘤裸鼠原位模型脑靶向功能的检测图；
图5是本发明聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊对U87胶质瘤裸鼠原位模型治疗效果评价图；
图6是本发明聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊对MGC803胃癌裸鼠皮下模型治疗效果评价图。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明做进一步说明。
实施例1聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊的制备及表征
取含1mg尼妥珠单抗(百泰生物药业有限公司)的溶液，加入正电性单体N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐，尼妥珠单抗与N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐的摩尔比是1:300，再加入2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱，尼妥珠单抗与2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的摩尔比是1:4000；然后再按尼妥珠单抗与交联剂的摩尔比为1:500的比例加入基质金属蛋白酶-2可降解的多肽交联剂，静置10min，利用静电和氢键作用，在单抗的周围富集反应单体以及酶可降解多肽交联剂；然后加入过硫酸铵和四甲基乙二胺，尼妥珠单抗与过硫酸铵、四甲基乙二胺的摩尔比为1:500:1000,在4℃条件下反应2h，制备聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊。
对聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊进行透射电镜图观察，如图1所示，可见纳米微囊表面圆滑，粒径均一；进一步使用粒径分析仪(BI-90Plus,布鲁克海文仪器公司,美国)对所得产物进行粒径分布检测和表面电荷测试，可见纳米微囊表面圆滑，粒径均一，粒径(nm)为30±5(如图2所示)；表面电荷(mV)为2.3(如图3所示)。
实施例2聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊对U87胶质瘤裸鼠原位模型治疗效果评价
病毒侵染前一天将U87细胞(ATCC，USA，HTB-14)铺于24孔板，密度为1×105-1×106，在5％CO2，37℃下恒温培养，培养基为DMEM培养基(GBICO,USA,11965-092)，血清选用进口小牛血清(HyClone，SH30071.03)。24h后加入编码荧光素酶的病毒液10-500μl(上海吉玛制药技术有限公司)，并加入海10-50μl美溴铵(polybrene)增加侵染效率；12h 后更换为DMEM培养基；48h后加入筛选药物10-100μl嘌呤霉素(Puromycin)，加压筛选2周后，获得阳性克隆，并扩大培养，以备移植入裸鼠颅内建立原位模型。
裸鼠麻醉稳定后，于头顶部开手术切口，并于颅骨上打孔，至于立体定向仪(美国Stoelting，lab standard TM)上放置好；将上述两种细胞消化后，重悬于适量培养基中，用注射器缓慢注射于鼠脑中，之后手术缝线缝合皮肤。接种肿瘤10天后活体成像观察肿瘤成瘤率，将动物随机分组，每组10只，尾静脉注射尼妥珠单抗和聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊，剂量为每公斤体重5mg，隔天注射，共计注射10次。每隔10天对动物颅内肿瘤大小采取活体成像仪(Xenogen,Waltham,MA,USA，200)进行监测，同时对动物生存期进行统计，统计结果为：对照组vs纯抗体治疗组，p＝0.1745；对照组vs纳米胶囊治疗组，p＝0.0385；纯抗体治疗组vs纳米胶囊治疗组，p＝0.0061。
如图4、5所示，与纯抗体治疗组的动物脑部肿瘤生长速率相比，聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊治疗组动物脑部肿瘤生长速度明显减慢，对治疗开始后的5个时间观察点(10,20,30,40,50天)进行肿瘤大小的定量检测结果也进一步证实了上述结果。
实施例3聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊对MGC803胃癌裸鼠皮下模型治疗效果评价
利用100μl微量进样器将稳定表达荧光素酶的MGC803胃癌细胞按每注射点5×105个细胞接种于4周龄裸鼠皮下，从而建立瘤源。待皮下肿瘤达到长径3cm时，取下瘤块，均匀切碎，并植入各实验组(n＝6)裸鼠皮下，继续喂养，当长径达到5mm左右，各实验组开始治疗。治疗方式为尾静脉注射，治疗剂量为每公斤体重5mg，治疗次数为一次。同时开始观察治疗效果，每两天通过活体成像仪采集肿瘤细胞的荧光素酶活性值，持续监测30天，然后将各处理组裸鼠处死，剥下瘤块。如图6所示，与纯尼妥珠单抗治疗组相比，聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊治疗组肿瘤增殖速率明显降低。。

Claims (10)

  1. 一种尼妥珠单抗纳米微囊，是由聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱与尼妥珠单抗聚合而成的表面圆滑，粒径均一，粒径为30±5nm，表面电荷为2.3mV，具有脑肿瘤靶向高效投递作用的纳米微囊。
  2. 一种尼妥珠单抗纳米微囊的制备方法，包括以下步骤：
    a.取0.1-100mg尼妥珠单抗溶液；
    b.按照尼妥珠单抗溶液与含碳碳双键的单体的摩尔比为1:100-1:100000的比例加入含碳碳双键的单体；
    c.按照尼妥珠单抗溶液与交联剂的摩尔比为1:100-1:10000的比例加入酶可降解的多肽交联剂，利用静电和氢键作用，在尼妥珠单抗的周围富集碳碳双键单体以及交联剂；
    d.按照尼妥珠单抗溶液与引发剂的摩尔比为1:100-1:10000的比例加入引发剂，在4℃，引发剂的引发下，通过原位聚合的方法获得聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊，反应时间为0.1-24小时。
  3. 根据权利要求2所述的尼妥珠单抗纳米微囊的制备方法，其特征在于：步骤b中所述的含碳碳双键的单体为N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐和2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱，两种单体的摩尔比为0.0001:1-1:10000；
    优选的，N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐和2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的摩尔比为1:5～20；
    更优选的，N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐和2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的摩尔比为1:10～15。
  4. 根据权利要求2所述的尼妥珠单抗纳米微囊的制备方法，其特征在于：步骤c中所述交联剂为酶敏感交联剂、pH敏感交联剂、或氧化还原敏感交联剂；
    优选的，所述酶敏感交联剂为基质金属蛋白酶-2可降解的多肽交联剂；pH敏感交联剂为二甲基丙烯酸乙二醇酯；氧化还原敏感交联剂为含二硫键交联剂。
  5. 根据权利要求4所述的尼妥珠单抗纳米微囊的制备方法，其特征在于：步骤c中，所述交联剂为基质金属蛋白酶-2可降解的多肽交联剂；
    优选的，尼妥珠单抗与基质金属蛋白酶-2可降解的多肽交联剂的摩尔比为1:400～600，更优选为1:450～550。
  6. 根据权利要求2所述的尼妥珠单抗纳米微囊的制备方法，其特征在 于：步骤d中所述的引发剂为过硫酸铵和四甲基乙二胺，两者的摩尔比为0.01:1-1:100；
    优选的，硫酸铵和四甲基乙二胺的摩尔比为1:1～5，更优选为1:1.5～2.5。
  7. 一种尼妥珠单抗纳米微囊的制备方法，包括以下步骤：
    a.取1mg尼妥珠单抗溶液；
    b.加入正电性单体N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐，尼妥珠单抗与N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐的摩尔比是1:300，再加入2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱，尼妥珠单抗与2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱的摩尔比是1:4000；
    c.按照尼妥珠单抗溶液与基质金属蛋白酶-2可降解的多肽交联剂的摩尔比为1:500的比例加入基质金属蛋白酶-2可降解的多肽交联剂，静置10min，利用静电和氢键作用，在尼妥珠单抗的周围富集N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐单体、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱单体以及酶可降解多肽交联剂；
    d.然后加入过硫酸铵和四甲基乙二胺，尼妥珠单抗与过硫酸铵、四甲基乙二胺的摩尔比为1:500:1000,在4℃反应2小时，制备得到聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊。
  8. 一种通过权利要求2至7中任一所述的制备方法制备得到的尼妥珠单抗纳米微囊，尼妥珠单抗包载在由含碳碳双键的单体和酶可降解的交联剂聚合成的囊壳中。
  9. 根据权利要求8所述的尼妥珠单抗纳米微囊，其特征在于所述尼妥珠单抗包载在由N-(3-氨基丙基)甲基丙烯酸盐、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱和基质金属蛋白酶-2可降解的多肽交联剂聚合而成的囊壳中。
  10. 一种权利要求1、8或9所述的尼妥珠单抗纳米微囊在制备肿瘤靶向治疗药物中的应用；
    优选的，所述尼妥珠单抗纳米微囊在制备治疗脑瘤的药物中的应用；
    更优选的，所述尼妥珠单抗纳米微囊在制备治疗神经胶质瘤，特别是胶质母细胞瘤的药物中的应用；
    还优选的，所述尼妥珠单抗纳米微囊在制备治疗胃癌的药物中的应用。
CN201780014862.1A 2016-03-03 2017-02-28 一种肿瘤治疗性单抗纳米微囊及其制备方法和应用 Active CN108883075B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610120570.3A CN105663084A (zh) 2016-03-03 2016-03-03 聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊及其制备方法和用途
CN2016101205703 2016-03-03
PCT/CN2017/075103 WO2017148358A1 (zh) 2016-03-03 2017-02-28 一种肿瘤治疗性单抗纳米微囊及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108883075A true CN108883075A (zh) 2018-11-23
CN108883075B CN108883075B (zh) 2021-10-22

Family

ID=56306566

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610120570.3A Withdrawn CN105663084A (zh) 2016-03-03 2016-03-03 聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊及其制备方法和用途
CN201780014862.1A Active CN108883075B (zh) 2016-03-03 2017-02-28 一种肿瘤治疗性单抗纳米微囊及其制备方法和应用

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610120570.3A Withdrawn CN105663084A (zh) 2016-03-03 2016-03-03 聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊及其制备方法和用途

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20210169817A1 (zh)
EP (1) EP3424498B1 (zh)
CN (2) CN105663084A (zh)
WO (1) WO2017148358A1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112451503A (zh) * 2019-09-09 2021-03-09 天津大学 一种细胞外释放单克隆抗体载体及其制备方法
CN112494457A (zh) * 2019-09-16 2021-03-16 天津大学 一种血液中长循环两性离子纳米药物载体及制备方法
CN114515277A (zh) * 2022-02-14 2022-05-20 中国科学技术大学 钙离子纳米螯合剂及其制备方法和应用

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105663084A (zh) * 2016-03-03 2016-06-15 天津医科大学总医院 聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊及其制备方法和用途
CN109078009A (zh) * 2017-06-14 2018-12-25 天津纳诺生物科技有限公司 一种肿瘤靶向的纳米微囊及其制备方法和应用
US20190351068A1 (en) * 2017-11-29 2019-11-21 Shen Pang Compositions and methods for drug delivery
CN110934849B (zh) * 2018-09-20 2021-12-10 天津大学 聚羧基甜菜碱包载的蛋白纳米微囊及其制备方法
CN110917171B (zh) * 2018-09-20 2022-04-01 天津大学 聚磺基甜菜碱包载的蛋白纳米微囊及其制备方法
US20220175957A1 (en) * 2019-02-19 2022-06-09 The Regents Of The University Of California Delivery of macromolecules into the central nervous system via the bloodstream
CN112587667A (zh) * 2019-09-16 2021-04-02 天津大学 一种长循环的cbma构建的纳米载体及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104208684A (zh) * 2013-05-31 2014-12-17 上海市第六人民医院 一种用于增强聚焦超声疗效的靶向egfr氟碳纳米粒的制备方法
CN105663084A (zh) * 2016-03-03 2016-06-15 天津医科大学总医院 聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊及其制备方法和用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104208684A (zh) * 2013-05-31 2014-12-17 上海市第六人民医院 一种用于增强聚焦超声疗效的靶向egfr氟碳纳米粒的制备方法
CN105663084A (zh) * 2016-03-03 2016-06-15 天津医科大学总医院 聚2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱包载的尼妥珠单抗纳米微囊及其制备方法和用途

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JING WEN等: "Controlled Protein Delivery Based on Enzyme-Responsive Nanocapsules", 《ADVANCED MATERIALS》 *
SHENG LIANG等: "Phosphorylcholine polymer nanocapsules prolong the circulation time and reduce the immunogenicity of therapeutic proteins", 《NANO RESEARCH》 *
金鑫等: "pMPC 长循环蛋白纳米胶囊的构筑", 《2015 年全国高分子学术论文报告会》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112451503A (zh) * 2019-09-09 2021-03-09 天津大学 一种细胞外释放单克隆抗体载体及其制备方法
CN112494457A (zh) * 2019-09-16 2021-03-16 天津大学 一种血液中长循环两性离子纳米药物载体及制备方法
CN114515277A (zh) * 2022-02-14 2022-05-20 中国科学技术大学 钙离子纳米螯合剂及其制备方法和应用
CN114515277B (zh) * 2022-02-14 2022-10-28 中国科学技术大学 钙离子纳米螯合剂及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20210169817A1 (en) 2021-06-10
WO2017148358A1 (zh) 2017-09-08
CN105663084A (zh) 2016-06-15
CN108883075B (zh) 2021-10-22
EP3424498A4 (en) 2019-11-27
EP3424498A1 (en) 2019-01-09
EP3424498B1 (en) 2021-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108883075A (zh) 一种肿瘤治疗性单抗纳米微囊及其制备方法和应用
CN106572993B (zh) Ep4拮抗剂在制备治疗癌症的药物中的应用
KR20150064097A (ko) 암을 치료하는 방법
Su et al. Dual-sensitive PEG-sheddable nanodrug hierarchically incorporating PD-L1 antibody and zinc phthalocyanine for improved immuno-photodynamic therapy
TW201002312A (en) Induction of tumor hypoxia for cancer therapy
Hashemzadeh et al. Recent advances in breast cancer immunotherapy: The promising impact of nanomedicines
CN108289966A (zh) 用于减少转移的方法和组合物
JP2022188159A (ja) 二本鎖ポリリボヌクレオチドとポリアルキレンイミンとの複合体を含む粒子を含む新規な医薬組成物
Sawant et al. Cancer research and therapy: Where are we today
CN109475636A (zh) 药物-递送纳米颗粒和耐药癌症的治疗
Fan et al. Engineering MMP-2 activated nanoparticles carrying B7-H3 bispecific antibodies for ferroptosis-enhanced glioblastoma immunotherapy
JP2017512840A (ja) 癌治療のためのターゲティングされた重合ナノ粒子
Dong et al. pH-Sensitive Shell–Core Platform Block DNA Repair Pathway To Amplify Irreversible DNA Damage of Triple Negative Breast Cancer
WO2018228464A1 (zh) 一种肿瘤靶向的纳米微囊及其制备方法和应用
Hagan IV et al. Enhancing combined immunotherapy and radiotherapy through nanomedicine
US20240141056A1 (en) Methods and compositions for activation of t cells using nanoparticles conjugated with multiple ligands for binding receptors on t cells
WO2023109704A1 (zh) 一种抗体合成菌-纳米刺激剂杂合体及其抗肿瘤应用
Costa da Silva et al. Stimulation and suppression of the innate immune system through nanotechnology
CN108379562B (zh) 一种聚合物纳米佐剂及其制备方法和用途
Aggarwal et al. Designing personalized and innovative novel drug therapies for cancer treatment
Ma et al. Systemic and Local Administration of a Dual-siRNA Complex Efficiently Inhibits Tumor Growth and Bone Invasion in Oral Squamous Cell Carcinoma
CN105560214B (zh) 抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体结合纳米胶束及其制备与应用
CN110177552A (zh) 用于调节pd-1信号转导的组合物
EP4122446A1 (en) Deformable hydrogel particles and pharmaceutical composition for cancer treatment comprising same
CN108699128A (zh) 恶性病变的组合治疗

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant