CN109475636A - 药物-递送纳米颗粒和耐药癌症的治疗 - Google Patents

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Abstract

本文公开了包括纳米颗粒的组合物以及制备和使用这种纳米颗粒的方法，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸，其中载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；并且其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1。进一步描述了治疗患有癌症比如耐化疗药癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的组合物，纳米颗粒包括包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段的载体多肽；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸；和与双链寡核苷酸结合的化疗药。还描述了药物组合物、制造品以及包括所描述的纳米颗粒的试剂盒。

Description

药物-递送纳米颗粒和耐药癌症的治疗
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年5月27日提交的、名称为“药物-递送纳米颗粒和耐药癌症的治疗”的美国临时申请No.62/342,829的优先权权益，其出于各种目的通过引用方式并入本文。
关于联邦资助研究的声明
本发明在国立卫生研究院(National Institute of Health)授予的资助号CA129822的政府支持下作出的。政府在本发明中享有一定权利。
作为ASCII文本文件提交序列表
下述提交的以ASCII文本文件的内容通过引用以其整体并入本文：计算机可读的形式(CRF)的序列表(文件名：761542000740SEQLIST.txt，记录日期：2017年5月26日，大小：19KB)。
技术领域
本发明涉及用于治疗癌症，包括耐化疗药癌症的方法和组合物。
背景技术
对于化疗药治疗比如小分子化疗剂或抗体化疗剂的癌症耐性，可由于癌症的类型而出现或可在药物暴露之后产生。药物耐性可例如通过药物代谢的改变或药物靶比如细胞表面受体的表达的变化而产生。增加剂量的药物仅仅在一定限度上是有效的，并且在许多情况下增加了药物不期望的副作用。因此，在许多情况下，药物疗法如果有效的话，仅仅在某些时间段对于患者或特定的癌症类型有效，然后药物丧失了其效力。
多柔比星(Doxorubicin)为一种示例性小分子化疗药，其通过插入复制细胞的DNA并且防止它们分裂而产生其疗效。但是，多柔比星具有数个不利结果，最突出的是心性(cardiac nature)和手足综合症，这限制了其使用和/或用于人施用的最大剂量。已经进行了许多尝试，以使得多柔比星对于患者更加友好。一种最成功的多柔比星制剂为脂质体制剂，商业名的制剂或通用脂质体多柔比星“LipoDox”。但是，该制剂具有的缺点限制了多柔比星在治疗应对于其施用应答的疾病中的使用。
作为销售的曲妥珠单抗(Trastuzumab)为抗体化疗剂，其结合在许多(但不是所有)乳腺癌细胞类型的表面上存在的HER2。但是，在开始治疗之后，也可产生耐曲妥珠单抗癌症，从而限制了治疗的效力。
本文提到的所有公开、专利和专利申请的内容在此通过引用方式全部并入本文中。
发明内容
本文描述了一种包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸，其中载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；和其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1至小于约6:1。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1。
在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1。在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1至小于约6:1。在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1或约5:1。在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1。
在一些实施方式中，双链寡核苷酸为DNA。在一些实施方式中，双链寡核苷酸为RNA。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度为约10个碱基对至约100个碱基对。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度为约20个碱基对至约50个碱基对。
在一些实施方式中，双链寡核苷酸与小分子药物结合。在一些实施方式中，小分子药物插入双链寡核苷酸。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中双链寡核苷酸与小分子药物的摩尔比为约1:1至约1:60。在一些实施方式中，小分子药物为化疗剂。在一些实施方式中，小分子药物为蒽环类药物(anthracycline)。在一些实施方式中，小分子药物为多柔比星。
在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合哺乳动物细胞。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合患病的细胞。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合在细胞表面上表达的HER3。在一些实施方式中，靶向细胞的区段包括调蛋白(heregulin)序列或其变体。
在一些实施方式中，渗透细胞的区段包括五邻体基底(penton base)多肽或其变体。在一些实施方式中，五邻体基底区段包括突变体五邻体基底多肽。在一些实施方式中，五邻体基底区段包括截短的五邻体基底多肽。
在一些实施方式中，结合寡核苷酸的区段为带正电的。在一些实施方式中，结合寡核苷酸的区段包括聚赖氨酸。在一些实施方式中，结合寡核苷酸的区段包括十赖氨酸(decalysine)。
在一些实施方式中，组合物为无菌的。在一些实施方式中，组合物为液体组合物。在一些实施方式中，组合物为干性组合物。在一些实施方式中为冷冻干燥的。
在一些实施方式中，提供了制造品，其在小瓶中包括任何一种描述的组合物。在一些实施方式中，小瓶为密封的。
在一些实施方式中，提供了包括任何一种描述的组合物和使用说明书的试剂盒。
在一些实施方式中，提供了治疗受试者中癌症的方法，其包括向受试者施用本文所描述的组合物。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为耐药癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌、神经胶质癌、卵巢癌或前列腺癌。在一些实施方式中，癌症为三阴性乳腺癌。在一些实施方式中，癌症为转移性的。在一些实施方式中，癌症耐HER2+抗体化疗剂、拉帕替尼(lapatinib)或蒽环类药物。在一些实施方式中，癌症耐多柔比星或脂质体多柔比星。在一些实施方式中，癌症耐曲妥珠单抗或培妥珠单抗(pertuzumab)。在一些实施方式中，癌症耐拉帕替尼。
本文也提供了杀死耐化疗药癌细胞的方法，其包括使耐化疗药癌细胞接触多个纳米颗粒，所述纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸；和与双链寡核苷酸结合的化疗药。
在另一方面中，本文提供了治疗患有耐化疗药癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸；和与双链寡核苷酸结合的化疗药。
在一些实施方式中，化疗药插入双链寡核苷酸。
在一些实施方式中，耐化疗药癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，耐化疗药癌症为乳腺癌、神经胶质癌、卵巢癌或前列腺癌。在一些实施方式中，耐化疗药癌症为三阴性乳腺癌。在一些实施方式中，耐化疗药癌症为转移性的。在一些实施方式中，耐化疗药癌症是耐蒽环类药物或拉帕替尼的。在一些实施方式中，耐化疗药癌症是耐多柔比星或脂质体多柔比星的。在一些实施方式中，耐化疗药癌细胞是耐HER2+抗体化疗剂的。在一些实施方式中，耐化疗药癌细胞是耐曲妥珠单抗或培妥珠单抗的。
在一些实施方式中，化疗剂为蒽环类药物。在一些实施方式中，化疗剂为多柔比星。
在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，双链寡核苷酸为DNA。在一些实施方式中，双链寡核苷酸为RNA。
在另一方面，提供制备纳米颗粒组合物的方法，其包括将载体多肽和双链寡核苷酸以小于约6:1的摩尔比组合，从而形成多个纳米颗粒；其中载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段。在一些实施方式中，载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1至小于约6:1。在一些实施方式中，载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1。
在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，方法进一步包括在将双链寡核苷酸和载体多肽组合之前，将双链寡核苷酸和小分子药物组合。在一些实施方式中，小分子药物插入双链寡核苷酸。在一些实施方式中，双链寡核苷酸和小分子药物以约1:1至约1:60的摩尔比组合。在一些实施方式中，双链寡核苷酸和小分子药物以约1:10或约1:40的摩尔比组合。
在一些实施方式中，方法进一步包括在将双链寡核苷酸和载体多肽组合之前，将未结合的小分子药物与双链寡核苷酸分开。
在一些实施方式中，方法进一步包括将未结合的载体多肽或未结合的双链寡核苷酸与多个纳米颗粒分开。
在一些实施方式中，方法进一步包括使纳米颗粒组合物浓缩。
在一些实施方式中，双链寡核苷酸为DNA。在一些实施方式中，双链寡核苷酸为RNA。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度为约10个碱基对至约100个碱基对。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度为约20个碱基对至约50个碱基对。
在一些实施方式中，小分子药物为化疗剂。在一些实施方式中，小分子药物为蒽环类药物。在一些实施方式中，小分子药物为多柔比星。
在一些实施方式中，靶向细胞的区段包括调蛋白序列或其变体。在一些实施方式中，渗透细胞的区段包括五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，五邻体基底区段包括突变体五邻体基底。在一些实施方式中，五邻体基底区段包括截短的五邻体基底。在一些实施方式中，结合寡核苷酸的区段为带正电的。在一些实施方式中，结合寡核苷酸的区段包括聚赖氨酸。在一些实施方式中，结合寡核苷酸的区段包括十赖氨酸。
进一步提供了根据本文所述的任一方法制备的纳米颗粒组合物。
附图说明
图1示出包括靶向细胞的结构域、渗透细胞的结构域和结合寡核苷酸的结构域的载体多肽的示意图。当载体多肽与双链寡核苷酸组合时，形成了纳米颗粒。任选地，双链寡核苷酸与小分子药物预先结合。
图2呈现在示例性HerPBK10载体多肽与双链DNA寡核苷酸(与多柔比星结合)以2:1、3:1、4:1、5:1或6:1的摩尔比组合之后的平均颗粒尺寸(如通过动态光散射确定的)。单独的HerPBK10和单独的结合多柔比星的双链寡核苷酸作为比较而显示。
图3显示将结合多柔比星的双链DNA寡核苷酸与示例性HerPBK10载体多肽以4:1:10、4:1:40和6:1:10(HerPBK10:dsDNA:多柔比星)的摩尔比组合之后形成的纳米颗粒的冷冻电子显微镜(“cryoEM”)图像。形成的颗粒具有大致相同的尺寸和形态。
图4显示在暴露于没有多柔比星的纳米颗粒(HerPBK10:dsDNA的摩尔比为4:1，称为“空曙核蛋白体(Empty Eosome)”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为4:1:40的纳米颗粒(称为“Eos-001(4:1:40)”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为6:1:10的纳米颗粒(称为“Eos-001(6:1:10)”)或LipoDox之后，对MDA-MB-435人癌细胞存活的影响。药物的浓度指多柔比星的浓度。在各种EOS-001治疗浓度下，基于EOS-001(4:1:40)中的相对蛋白质含量，将“空曙核蛋白体”的输入归一化。插图呈现了MDA-MB-435细胞的表面上HER1、HER2、HER3和HER4的相对量。
图5A显示在暴露于没有多柔比星的纳米颗粒(HerPBK10:dsDNA的摩尔比为4:1，称为“空曙核蛋白体”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为4:1:40的纳米颗粒(称为“Eos-001(4:1:40)”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为6:1:10的纳米颗粒(称为“Eos-001(6:1:10)”)或LipoDox之后，对于BT474人乳腺癌细胞存活的影响。药物的浓度指多柔比星的浓度(或，在“空曙核蛋白体”的情况下指对于相同量的HerPBK10载体多肽，在Eos-001(4:1:40)中存在的等量的多柔比星)。插图呈现了BT474细胞的表面上HER1、HER2、HER3和HER4的相对量。
图5B显示在暴露于没有多柔比星的纳米颗粒(HerPBK10:dsDNA的摩尔比为4:1，称为“空曙核蛋白体(4:1)”；或HerPBK10:dsDNA的摩尔比为6:1，称为“空曙核蛋白体(6:1)”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为4:1:40的纳米颗粒(称为“Eos-001(4:1:40)”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为6:1:10的纳米颗粒(称为“Eos-001(6:1:10)”)或LipoDox之后，对于BT474-R耐曲妥珠单抗的人乳腺癌细胞存活的影响。药物的浓度指多柔比星的浓度(或，在“空曙核蛋白体(4:1)”的情况下，指对于相同量的HerPBK10载体多肽，在Eos-001(4:1:40)中存在的等量的多柔比星，以及在“空曙核蛋白体(6:1)”的情况下，指对于相同量的HerPBK10载体多肽，在Eos-001(6:1:10)中存在的等量的多柔比星)。插图呈现了BT474细胞和BT474-R细胞的表面上HER1、HER2、HER3和HER4的相对量。
图6显示在暴露于没有多柔比星的纳米颗粒(HerPBK10:dsDNA的摩尔比为4:1，称为“空曙核蛋白体(4:1)”；或HerPBK10:dsDNA的摩尔比为6:1，称为“空曙核蛋白体(6:1)”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为4:1:40的纳米颗粒(称为“Eos-001(4:1:40)”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为6:1:10的纳米颗粒(称为“Eos-001(6:1:10)”)或LipoDox之后，对于JIMT1人乳腺癌细胞存活的影响。药物的浓度指多柔比星的浓度(或，在“空曙核蛋白体(4:1)”的情况下，指对于相同量的HerPBK10载体多肽，在Eos-001(4:1:40)中存在的等量的多柔比星，以及在“空曙核蛋白体(6:1)”的情况下，对于相同量的HerPBK10载体多肽，在Eos-001(6:1:10)中存在的等量的多柔比星)。插图呈现了JIMT1细胞的表面上HER1、HER2、HER3和HER4的相对量。
图7显示在暴露于没有多柔比星的纳米颗粒(HerPBK10:dsDNA的摩尔比为4:1，称为“空曙核蛋白体(4:1)”；或HerPBK10:dsDNA的摩尔比为6:1，称为“空曙核蛋白体(6:1)”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为4:1:40的纳米颗粒(称为“Eos-001(4:1:40)”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为6:1:10的纳米颗粒(称为“Eos-001(6:1:10)”)或LipoDox之后，对于U251人神经胶质瘤细胞存活的影响。药物的浓度指多柔比星的浓度(或，在“空曙核蛋白体(4:1)”的情况下，指对于相同量的HerPBK10载体多肽，在Eos-001(4:1:40)中存在的等量的多柔比星，和在“空曙核蛋白体(6:1)”的情况下，指对于相同量的HerPBK10载体多肽，在Eos-001(6:1:10)中存在的等量的多柔比星)。插图呈现了U251细胞的表面上HER1、HER2、HER3和HER4的相对量。
图8显示在暴露于没有多柔比星的纳米颗粒(HerPBK10:dsDNA的摩尔比为4:1，称为“空曙核蛋白体”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为4:1:40的纳米颗粒(称为“Eos-001(4:1:40)”)或LipoDox之后，对于A2780-ADR耐多柔比星的人卵巢癌细胞存活的影响。药物的浓度指多柔比星的浓度(或，在“空曙核蛋白体”的情况下，指对于相同量的HerPBK10载体多肽，在Eos-001(4:1:40)中存在的等量的多柔比星)。
图9显示在暴露于没有多柔比星的纳米颗粒(HerPBK10:dsDNA的摩尔比为4:1，称为“空曙核蛋白体”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为4:1:40的纳米颗粒(称为“Eos-001(4:1:40)”)，或LipoDox之后，对于4T1小鼠三阴性乳腺的癌细胞存活的影响。药物的浓度指多柔比星的浓度(或，在“空曙核蛋白体”的情况下，指对于相同量的HerPBK10载体多肽，Eos-001(4:1:40)中存在的等量的多柔比星)。
图10显示在暴露于没有多柔比星的纳米颗粒(HerPBK10:dsDNA的摩尔比为4:1，称为“空曙核蛋白体”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为4:1:40的纳米颗粒(称为“Eos-001(4:1:40)”)，或LipoDox之后，对于SKOV3人卵巢癌细胞存活的影响。药物的浓度指多柔比星的浓度(或，在“空曙核蛋白体”的情况下，指对于相同量的HerPBK10载体多肽，Eos-001(4:1:40)中存在的等量的多柔比星)。
图11A显示在暴露于没有多柔比星的纳米颗粒(HerPBK10:dsDNA的摩尔比为4:1，称为“空曙核蛋白体”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为4:1:40的纳米颗粒(称为“Eos-001(4:1:40)”)，或LipoDox之后，对于LNCaP-GFP人前列腺癌细胞存活的影响。药物的浓度指多柔比星的浓度(或，在“空曙核蛋白体”的情况下，指对于相同量的HerPBK10载体多肽，Eos-001(4:1:40)中存在的等量的多柔比星)。
图11B显示在暴露于没有多柔比星的纳米颗粒(HerPBK10:dsDNA的摩尔比为4:1，称为“空曙核蛋白体”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为4:1:40的纳米颗粒(称为“Eos-001(4:1:40)”)，或LipoDox之后，对于RANKL人骨转移性前列腺癌细胞存活的影响。药物的浓度指多柔比星的浓度(或，在“空曙核蛋白体”的情况下，指对于相同量的HerPBK10载体多肽，Eos-001(4:1:40)中存在的等量的多柔比星)。
图11C显示LNCaP-GFP人前列腺癌细胞和RANKL人骨转移性前列腺癌细胞的表面上表达的HER1、HER2、HER3和HER4的相对量。
图12A显示在暴露于没有多柔比星的纳米颗粒(HerPBK10:dsDNA的摩尔比为4:1，称为“空曙核蛋白体”)、Eos-001的纳米颗粒(4:1:40的HerPBK10:dsDNA:多柔比星)，或LipoDox之后，对于BT549人三阴性乳腺癌细胞存活的影响。药物的浓度指多柔比星的浓度(或，在“空曙核蛋白体”的情况下，基于在各种Eos-001治疗下的Eos-001(4:1:40)中的相对蛋白质含量，将输入归一化。
图12B显示BT549细胞中HER1、HER 2、HER3和HER4的相对表达。
图13显示Eos-001纳米颗粒(HerPBK10、dsDNA和多柔比星)、曲妥珠单抗，或曲妥珠单抗和培妥珠单抗的组合对于BT474或BT474-TR细胞的影响。
图14显示用培妥珠单抗处理、曲妥珠单抗处理、Eos-001纳米颗粒(HerPBK10、dsDNA和多柔比星)处理、Eos-001纳米颗粒和培妥珠单抗的组合处理、或用培妥珠单抗预处理4小时之后用Eos-001纳米颗粒处理后，耐曲妥珠单抗的BT474-TR细胞的相对细胞存活。
图15A显示对于BT474和SKBR 3细胞系，亲本(即，非耐曲妥珠单抗)细胞和耐曲妥珠单抗细胞中HER3的相对细胞表面水平。相对于亲本细胞系，HER3在耐曲妥珠单抗细胞系中过表达。
图15B显示HER3对于Eos-001纳米颗粒(HerPBK10、dsDNA和多柔比星)靶向毒性的贡献。耐曲妥珠单抗或非耐曲妥珠单抗的BT474或SKBR3细胞用Eos-001纳米颗粒(有或没有人HER3阻断肽(Prospec))处理。
图16图解响应于用曲妥珠单抗、Eos-001纳米颗粒(HerPBK10、dsDNA和多柔比星)，或在用曲妥珠单抗预处理4或24小时之后Eos-001纳米颗粒处理，非耐曲妥珠单抗细胞系(SKBR3(图16A)、BT474(图16B)、或MDA-MB-435(图16C))和耐曲妥珠单抗细胞系(SKBR3-TR(图16D)和BT474-TR(图16E和16F))的相对细胞存活。
图17显示响应于用拉帕替尼或Eos-001纳米颗粒(HerPBK10、dsDNA和多柔比星)的处理，BT-474或SKBR3细胞，或耐曲妥珠单抗的BT474-TR、SKBR3-TR或JIMT-1细胞的相对细胞存活。
具体实施方式
本文描述了包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸，其中载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段。
在一个方面中，提供了包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸，所述载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1。任选地，小分子药物，比如化疗药，与双链寡核苷酸结合。将载体多肽和双链寡核苷酸组合使得形成稳定的纳米颗粒。如本文进一步描述的，已经发现即使当组合物(和/或纳米颗粒)中的载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于6:1时，也可形成这些稳定的纳米颗粒。纳米颗粒组合物可例如用于治疗癌症，包括耐化疗药癌症。
在另一方面中，提供了治疗患有耐化疗药癌症的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸；和与双链寡核苷酸结合的化疗药。许多癌症类型耐受某些化疗药，比如多柔比星、拉帕替尼或HER2+抗体(比如曲妥珠单抗或培妥珠单抗)。增加药物的浓度通常不能有效并且可造成明显非期望的副作用。如本文进一步描述的，纳米颗粒组合物可用于杀死耐化疗药癌细胞并且治疗患有耐化疗药癌症的患者。
多柔比星为可用于治疗各种恶性肿瘤的示例性化疗药。但是，其使用受到细胞中的药物外排机制的限制。为了克服细胞外排难题的更高剂量的多柔比星通常不合适，原因是明显的副作用，包括心肌病。脂质体多柔比星(也称为“LipoDox”)也已经用于增强细胞吸收，但是在施用之后具有明显的副作用。
已经发现本文描述的包括纳米颗粒的组合物相比脂质体多柔比星，更有效杀死靶向癌细胞。纳米颗粒也有效杀死耐化疗药的癌细胞，耐化疗药包括抗体(比如抗HER2抗体，即曲妥珠单抗)或小分子化疗剂，比如多柔比星(例如LipoDox)。因此，本文描述的纳米颗粒和组合物尤其用于治疗癌症，包括耐化疗药癌症。
定义
如本文所使用，单数形式“一(a)”、“一(an)”和“所述”包括复数提及物，除非上下文明确地另外指出。
在文中，提及“约”值或参数包括(和描述)针对该值或参数本身的变异。例如，提及“约X”的描述包括“X”的描述。
除非另外指出，否则本文使用的术语“有效”，用于描述当在其用途的背景下使用时，产生或实现期望的结果的化合物或组分的量，无论该结果是否涉及治疗感染或疾病状态或本文另外叙述的。
相对于参考多肽序列的“氨基酸序列同一性的百分数(％)”定义为在将序列比对并且如果必要引入缺口，以实现最大序列同一性百分数，并且不考虑任何保守替换作为序列同一性的一部分之后，候选序列中与参考多肽序列中氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分数。为了确定氨基酸序列同一性百分数的目的的比对可以以本领域熟知的各种方式实现，例如，使用公众可用的成对(pairwise)序列计算机软件。本领域技术人员可确定用于比对序列的适当的参数，包括需要的任何算法，以实现待比较的序列的全长的最大对齐。如下计算给定氨基酸序列A与给定氨基酸序列B的氨基酸序列同一性％(其可以可替选地表示为与给定氨基酸序列B具有或包括特定的氨基酸序列同一性％的给定氨基酸序列A)：
100乘以分数X/Y
其中X为在A和B序列的程序的比对中，被比对程序评分为相同匹配的氨基酸残基数量，并且其中Y为B中氨基酸残基的总数量。认识到，在氨基酸序列A的长度不等于氨基酸序列B的长度的情况下，A与B的氨基酸序列同一性％不等于B与A的氨基酸序列同一性％。
如本文使用的术语“药学上可接受的”，意思是化合物或组合物适于向受试者、包括人受试者施用，以实现本文所述的治疗，而从疾病的严重程度和治疗的必要性角度，没有过度不利的副作用。
术语“受试者”或“患者”在本文同义用于描述哺乳动物。受试者的例子包括人或动物(包括但不限于狗、猫、啮齿动物(比如小鼠、大鼠或仓鼠)、马、绵羊、母牛、猪、山羊、驴、兔子或灵长类(比如猴子、黑猩猩、猩猩、狒狒或猕猴))。
术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”本文同义用于指为患有疾病状态或病况的受试者提供下述益处的任何动作，包括通过减轻、抑制、压制或消除至少一种症状而改善病况、延迟疾病的进展、延迟疾病的复发，或抑制疾病。
应理解，本文所述发明的方面和变型包括“由方面和变型组成”和/或“基本上由方面和变型组成”。
应当理解，本文所述的各种实施方式的一个、一些或所有特性可被组合以形成本发明的其他实施方式。
本文使用的章节标题仅仅惯用于组织的目的而不视为限制描述的主题。
纳米颗粒组合物
本文所述的纳米颗粒组合物包括载体多肽，所述载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段。纳米颗粒进一步包括双链寡核苷酸。双链寡核苷酸可与结合寡核苷酸的区段结合。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸结合。在一些实施方式中，组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的比例小于约6:1。
靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段在单个载体多肽中融合在一起。本文描述的区段为模块化的，并且可以各种组合结合。即，载体多肽可包括任何描述的靶向细胞的区段、渗透细胞的区段或结合寡核苷酸的区段。图1图解了具有靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段的载体肽。如图1中进一步显示，将载体肽与双链寡核苷酸组合，使得形成了纳米颗粒。任选地，在形成纳米颗粒之前，双链寡核苷酸与小分子药物预先结合。
可通过将载体多肽与双链寡核苷酸组合而形成纳米颗粒。在一些实施方式中，载体多肽与双链寡核苷酸以小于约6:1(例如，约4:1至小于约6:1，比如约4:1至约4.5:1、约4.5:1至约5:1、约5:1至约5.5:1、约5.5：1至小于约6:1、约4:1、约4.5:1、约5:1，或约5.5)的摩尔比组合，从而形成纳米颗粒组合物。因此，在一些实施方式中，纳米颗粒组合物包括摩尔比为小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，比如约4:1至约4.5:1、约4.5:1至约5:1、约5:1至约5.5:1、约5.5:1至小于约6:1、约4:1、约4.5:1、约5:1，或约5.5:1)的载体多肽和双链寡核苷酸。纳米颗粒组合物中组分的比例指组合物中组分的总比例，而不管那些组分是否组装在纳米颗粒中。
在一些实施方式中，纳米颗粒组合物包括具有载体多肽与双链寡核苷酸的均一摩尔比的纳米颗粒。在一些实施方式中，纳米颗粒包括摩尔比为约6:1、约5:1、或约4:1的载体多肽和双链寡核苷酸。纳米颗粒中的组分的比例可通过从组合物的余量分离纳米颗粒(例如，通过将组合物离心并且倾析上清液)，并且测量所分离的纳米颗粒中的组分而确定。
靶向细胞的区段可结合细胞的表面上存在的分子。分子通过靶向细胞的区段的结合使得纳米颗粒被靶向细胞。因此，细胞上存在的靶向分子可取决于靶向细胞。在一些实施方式中，靶向分子为抗原，比如癌症抗原。在一些实施方式中，靶向细胞的区段为抗体、抗体片段、细胞因子或受体配体。
在一些实施方式中，靶向细胞的区段与靶向细胞的表面上的靶结合。例如，在一些实施方式中，靶向细胞的区段与细胞表面蛋白质，比如受体结合。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合下述：4-IBB、5T4、腺癌抗原、α-胎蛋白、BAFF、C242抗原、CA-125、碳酸酐酶9(CA-IX)、c-MET、CCR4、CD152、CD19、CD20、CD200、CD22、CD221、CD23(IgE受体)、CD28、CD30(TNFRSF8)、CD33、CD4、CD40、CD44v6、CD51、CD52、CD56、CD74、CD80、CEA、CNT0888、CTLA-4、DR5、EGFR、EpCAM、CD3、FAP、纤连蛋白额外的结构域-B、叶酸受体1、GD2、GD3神经节苷脂、糖蛋白75、GPNMB、肝细胞生长因子(HGF)、人散射因子受体激酶、IGF-1受体、IGF-I、IgGl、Ll-CAM、IL-13、IL-6、胰岛素样生长因子I受体、整联蛋白α5β1、整联蛋白ανβ3、MORAb-009、MS4A1、MUC1、粘蛋白CanAg、N-羟乙酸神经氨酸、NPC-1C、PDGF-R a、PDL192、磷脂酰丝氨酸、前列腺癌细胞、RANKL、RON、ROR1、SCH 900105、SDC1、SLAMF7、TAG-72、肌腱蛋白C、TGFβ2、TGF-β、TRAIL-R1、TRAIL-R2、肿瘤抗原CTAA16.88、VEGF-A、VEGFR-1、VEGFR2、波形蛋白、内化素B、细菌侵袭素(Inv)蛋白质、或其片段。
在一些实施方式中，靶向细胞的区段为调蛋白或其受体结合片段，并且可称为“Her”。调蛋白可为，例如调蛋白-α。SEQ ID NO:2为示例性野生型Her序列。在一些实施方式中，靶向细胞的区段为SEQ ID NO:2，或与SEQ ID NO:2具有约80％或更大、约85％或更大、约90％或更大、约92％或更大、约93％或更大、约94％或更大、约95％或更大、约96％或更大、约97％或更大、约98％或更大、或约99％或更大氨基酸序列同一性的多肽。在一些实施方式中，靶向细胞的区段与调蛋白受体，例如HER3结合。在一些实施方式中，靶向细胞的区段为SEQ ID NO:2的截短体，比如为SEQ ID NO:2长度的约50％或更少、约60％或更少、约70％或更少、约80％或更少、约90％或更少、或约95％或更少。在一些实施方式中，靶向细胞的区段的长度为SEQ ID NO:1的约50％和约100％之间(比如SEQ ID NO:1的约60％和约95％之间，或约70％和90％之间)。靶向细胞的区段截短体保留了HER3靶向特性。
在一些实施方式中，被靶向细胞的区段靶向的细胞为哺乳动物细胞，比如人细胞。在一些实施方式中，细胞为患病的细胞，比如癌细胞。在一些实施方式中，细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，细胞为乳腺癌细胞(例如，三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞。靶向细胞的区段可结合在靶向细胞的表面上存在的分子，其使纳米颗粒靶向至靶向细胞。
载体多肽的渗透细胞的区段促进纳米颗粒进入被靶向细胞的区段靶向的细胞中。在一些实施方式中，渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底(“PB”)蛋白质，或其突变体。作为例子，在一些实施方式中，渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)腺病毒血清型5(Ad5)五邻体基底蛋白。在一些实施方式中，渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)具有氨基酸变体或缺失的五邻体基底蛋白。氨基酸变异可为保守突变。在一些实施方式中，渗透细胞的区段为截短的五邻体基底蛋白。SEQ ID NO:1为示例性五邻体基底蛋白。在一些实施方式中，渗透细胞的区段为SEQ ID NO:1或与SEQ ID NO:1具有约80％或更大、约85％或更大、约90％或更大、约92％或更大、约93％或更大、约94％或更大、约95％或更大、约96％或更大、约97％或更大、约98％或更大，或约99％或更大氨基酸序列同一性的多肽。在一些实施方式中，渗透细胞的区段为SEQ ID NO:1的截短体，比如为SEQ ID NO:1长度的约50％或更少、约60％或更少、约70％或更少、约80％或更少、约90％或更少，或约95％或更少。在一些实施方式中，渗透细胞的区段的长度在SEQ ID NO:1的约50％和约100％之间(比如SEQ ID NO:1的约60％和约95％之间，或约70％和90％之间)。
渗透细胞的区段可包括增强载体多肽的亚细胞定位的一个或多个变异。例如，在一些实施方式中，渗透细胞的区段包括使得载体多肽优先定位在细胞质或细胞核中的一个或多个变异。在载体多肽与寡核苷酸(其本身可结合小分子药物)结合的实施方式中，变异的渗透细胞的区段优选将寡核苷酸和/或小分子药物定位至细胞质或细胞核。优先的亚细胞定位可尤其有益于某些小分子药物。例如，许多化疗剂通过结合在癌细胞核中定位的DNA而发挥功能。通过优先靶向细胞核，相关的药物在其发挥功能的地方集中。其他小分子药物可在细胞质中发挥功能，并且优先靶向至细胞质可增强药物效力。
WO 2014/022811中讨论了增强亚细胞定位的示例性渗透细胞的区段突变。已经示出五邻体基底蛋白中的Leu60Trp突变优先定位至细胞的细胞质。因此，在一些实施方式中，渗透细胞的区段为包括Leu60Trp突变的五邻体基底蛋白。已经示出，Lys375Glu、Val449Met和Pro469Ser突变优先定位至细胞的核。因此，在一些实施方式中，渗透细胞的区段为包括Lys375Glu、Val449Met或Pro469Ser突变的五邻体基底蛋白。在一些实施方式中，渗透细胞的区段为包括Lys375Glu、Val449Met和Pro469Ser突变的五邻体基底蛋白。参考SEQ ID NO:1的野生型五邻体基底多肽进行氨基酸编号。
结合寡核苷酸的区段结合纳米颗粒的双链寡核苷酸组分。结合寡核苷酸的区段可例如通过静电键合、氢键或离子键而结合双链寡核苷酸。在一些实施方式中，结合寡核苷酸的区段为DNA结合结构域或双链RNA结合结构域。在一些实施方式中，结合寡核苷酸的区段为阳离子结构域。在一些实施方式中，结合寡核苷酸的结构域包括聚赖氨酸序列。在一些实施方式中，结合寡核苷酸的区段的长度在约3个和约30个氨基酸之间，比如长度在约3个和约10个氨基酸之间、约5个和约15个氨基酸之间、约10个和约20个氨基酸之间、约15个和约25个氨基酸之间、或约20个和约30个氨基酸之间。在一个示例性实施方式中，结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸(即，十个连续的赖氨酸氨基酸，或“K10”，如SEQ ID：4中显示)。
示例性载体多肽包括Her、五邻体基底(或其变体)、和带正电的结合寡核苷酸的区段。在一些实施方式中，载体多肽包括Her、五邻体基底区段和聚赖氨酸结合寡核苷酸的区段。在一些实施方式中，载体多肽包括Her、五邻体基底区段和十赖氨酸结合寡核苷酸的区段，例如HerPBK10(SEQ ID：3)。在一些实施方式中，载体多肽为与SEQ ID NO:3具有约80％或更大、约85％或更大、约90％或更大、约92％或更大、约93％或更大、约94％或更大、约95％或更大、约96％或更大、约97％或更大、约98％或更大、或约99％或更大的氨基酸序列同一性的多肽。
载体多肽与双链寡核苷酸缔合而形成纳米颗粒。双链寡核苷酸可为RNA或DNA。在一些实施方式中，双链寡核苷酸包括siRNA、shRNA或微RNA。双链寡核苷酸可包括例如茎-环结构、或可包括两个分开的RNA链。双链寡核苷酸不需要完全碱基配对，并且在一些实施方式中包括一个或多个膨胀、环、错配或其他二级结构。在一些实施方式中，约80％或更多的碱基配对、约85％或更多的碱基配对、约90％或更多的碱基配对、约95％的碱基配对，或约100％的碱基配对。在一些实施方式中，RNA包括三磷酸5’-末端，比如T7-转录RNA。在一些实施方式中，RNA为合成产生的。
在一些实施方式中，寡核苷酸的长度为约10个碱基至约1000个碱基，比如约10个碱基至约30个碱基、约20个碱基至约40个碱基、约30个碱基至约50个碱基、约40个碱基至约60个碱基、约50个碱基至约70个碱基、约60个碱基至约80个碱基、约70个碱基至约90个碱基、约80个碱基至约100个碱基、约100个碱基至约200个碱基、约200个碱基至约300个碱基、约300个碱基至约400个碱基、约400个碱基至约500个碱基、约500个碱基至约700个碱基、或约700个碱基至约1000个碱基。在一些实施方式中，寡核苷酸的长度为约25个碱基至约35个碱基，比如约25个碱基、约26个碱基、约27个碱基、约28个碱基、约29个碱基、约30个碱基、约31个碱基、约32个碱基、约33个碱基、约34个碱基、或约35个碱基。
在一些实施方式中，小分子化合物(比如小分子药物)，例如通过静电相互作用或通过插入双链寡核苷酸中，与双链寡核苷酸结合。小分子药物可为化疗剂，比如多柔比星。其他小分子化疗剂可包括其他蒽环类(比如柔红霉素、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌、戊柔比星)，烷基化试剂或烷基化样试剂(比如卡铂、卡莫司汀、顺铂、环磷酰胺、美法仑(melphalan)、甲基苄肼或硫化三磷(thiotepa))，或紫杉烷(比如紫杉醇、多西他赛或泰索帝(taxotere))。在一些实施方式中，小分子化合物为约1000道尔顿或更低、约900道尔顿或更低、约800道尔顿或更低、约700道尔顿或更低、约600道尔顿或更低、约500道尔顿或更低、约400道尔顿或更低、或约300道尔顿或更低。
在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比为约60:1或更小，比如约50:1或更小、约40:1或更小、约30:1或更小、约20:1或更小、约10:1或更小、约5:1或更小、约4:1或更小、约3:1或更小、约2:1或更小、或约1:1或更小。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1和约60:1之间，比如约1:1和约10:1之间、约5:1和约20:1之间、约10:1和约30:1之间、约20:1和约40:1之间、约30:1和约50:1之间、或约40:1和约60:1之间、约1:1、约1:10、约1:20、约1:30、约1:40、约1:50或约1:60。
在一些实施方式中，纳米颗粒的直径通常为约50nm或更小(比如直径为约45nm或更小、约40nm或更小、约35nm或更小、约30nm或更小、约25nm至约50nm、约25nm至约30nm、约30nm至约35nm、约35nm至约40nm，或约45nm至约50nm)，如通过动态光散射测量。如果存在小分子药物，则其与双链寡核苷酸结合，所述双链寡核苷酸本身与结合寡核苷酸的区段结合。
在一些实施方式中，提供了包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸(比如DNA)，所述载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞，比如HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为耐化疗药癌细胞。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，双链寡核苷酸与小分子药物，比如蒽环类药物(例如，多柔比星)结合。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸(比如DNA)，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞，比如HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为耐化疗药癌细胞。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，双链寡核苷酸与小分子药物，比如蒽环类药物(例如，多柔比星)结合。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸(比如DNA)，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；并且其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞，比如HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为耐化疗药癌细胞。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，双链寡核苷酸结合小分子药物(例如，被小分子药物插入)，所述小分子药物比如蒽环类药物(例如，多柔比星)。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸(比如DNA)，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，约5:1或约4:1)；和其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞，比如HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为耐化疗药癌细胞。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，双链寡核苷酸结合小分子药物(例如，被小分子药物插入)，所述小分子药物比如蒽环类药物(例如，多柔比星)。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸(比如DNA)，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；并且其中结合寡核苷酸的区段为带正电的。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞，比如HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为耐化疗药癌细胞。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，双链寡核苷酸结合小分子药物(例如，被小分子药物插入)，所述小分子药物比如蒽环类药物(例如，多柔比星)。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸(比如DNA)，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；并且其中结合寡核苷酸的区段为带正电的。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞，比如HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为耐化疗药癌细胞。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，双链寡核苷酸结合小分子药物(例如，被小分子药物插入)，所述小分子药物比如蒽环类药物(例如，多柔比星)。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸(比如DNA)，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段为带正电的；和其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞，比如HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为耐化疗药癌细胞。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，双链寡核苷酸结合小分子药物(例如，被小分子药物插入)，所述小分子药物比如蒽环类药物(例如，多柔比星)。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸(比如DNA)，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段为带正电的；和其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞，比如HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为耐化疗药癌细胞。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，双链寡核苷酸结合小分子药物(例如，被小分子药物插入)，所述小分子药物比如蒽环类药物(例如，多柔比星)。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸(比如DNA)，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞，比如HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为耐化疗药癌细胞。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，双链寡核苷酸结合小分子药物(例如，被小分子药物插入)，所述小分子药物比如蒽环类药物(例如，多柔比星)。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸(比如DNA)，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞，比如HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为耐化疗药癌细胞。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，双链寡核苷酸结合小分子药物(例如，被小分子药物插入)，所述小分子药物比如蒽环类药物(例如，多柔比星)。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸(比如DNA)，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体；和其中化疗药(比如多柔比星)插入双链寡核苷酸。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞，比如HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为耐化疗药癌细胞。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，化疗药与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸(比如DNA)，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段为五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段为十赖氨酸；其中靶向细胞的区段为调蛋白或其变体；和其中化疗药(比如多柔比星)插入双链寡核苷酸。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞，比如HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为耐化疗药癌细胞。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，化疗药与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链DNA寡核苷酸，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1；其中载体多肽为HerPBK10，并且其中多柔比星插入双链寡核苷酸。在一些实施方式中，靶向细胞的区段结合癌细胞，比如HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为耐化疗药癌细胞。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，化疗药与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
纳米颗粒的生产
可通过将多个载体多肽与多个双链寡核苷酸组合而生产本文所述的纳米颗粒。在一些实施方式中，将载体多肽、双链寡核苷酸和任选地小分子药物温育以形成纳米颗粒。在一些实施方式中，在与载体多肽组合之前，寡核苷酸与小分子药物预温育。当将载体多肽和双链寡核苷酸组合时，自发地组装纳米颗粒。
在一些实施方式中，提供了制备纳米颗粒组合物的方法，其包括将载体多肽和双链寡核苷酸以小于约6:1的摩尔比组合，从而形成多个纳米颗粒；其中载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段。在一些实施方式中，该方法进一步包括在将载体多肽和双链寡核苷酸组合之前，将双链寡核苷酸和小分子药物组合。
在一些实施方式中，将单链、互补的(或部分互补的)寡核苷酸退火以形成双链寡核苷酸。例如，可将大致等摩尔量的各个单链寡核苷酸组合、加热寡核苷酸(例如，至约90℃或更高)、和冷却混合物(例如，在大约室温下)，而进行寡核苷酸的退火。
通过将小分子药物和双链寡核苷酸组合，小分子药物(比如化疗剂，例如，多柔比星)可与双链寡核苷酸结合。在一些实施方式中，小分子药物和双链寡核苷酸以约60:1或更小、约50:1或更小、约40:1或更小、约30:1或更小、约20:1或更小、约10:1或更小、约5:1或更小、约4:1或更小、约3:1或更小、约2:1或更小，或约1:1或更小的摩尔比组合。在一些实施方式中，小分子药物和双链寡核苷酸以在约1:1和约60:1之间，比如在约1:1和约10:1之间、在约5:1和约20:1之间、在约10:1和约30:1之间、在约20:1和约40:1之间、在约30:1和约50:1之间、或在约40:1和约60:1之间，约1:1、约1:10、约1:20、约1:30、约1:40、约1:50、或约1:60的摩尔比组合。一旦小分子药物和双链寡核苷酸组合，小分子药物与双链寡核苷酸结合，例如通过插入双链寡核苷酸与双链寡核苷酸结合。
任选地被小分子药物结合的双链寡核苷酸，与载体多肽组合以形成纳米颗粒。在一些实施方式中，载体肽和双链寡核苷酸以小于约6:1(例如、约4:1至小于约6:1，比如约4:1至约4.5:1、约4.5:1至约5:1、约5:1至约5.5:1、约5.5:1至小于约6:1、约4:1、约4.5:1、约5:1或约5.5)的摩尔比组合。在一些实施方式中，将载体多肽和双链寡核苷酸在约4℃至约22℃，比如在约4℃和约15℃之间，或在约4℃和约10℃之间温育。在一些实施方式中，将载体多肽和双链寡核苷酸温育小于约30分钟、约30分钟或更长、约1小时或更长、或约2小时或更长。在将载体多肽与双链寡核苷酸组合之后，自发形成纳米颗粒。
在一些实施方式中，从包括纳米颗粒的组合物中去除过多的寡核苷酸、小分子药物或载体多肽。例如，在一些实施方式中，使纳米颗粒组合物进行纯化步骤，比如尺寸排阻色谱。在一些实施方式中，通过超速离心，将未结合的组分与纳米颗粒分开。例如，在一些实施方式中，将组合物添加至截留分子量为约100kD或更小、约80kD或更小、约70kD或更小、约60kD或更小、约50kD或更小、约40kD或更小、约30kD或更小、或约20kD或更小的离心过滤器中。
任选地，将所得到的纳米颗粒组合物进行缓冲液更换，例如通过透析、超速离心、或切向流过滤。在一些实施方式中，将纳米颗粒通过例如超速离心而浓缩。
在一些实施方式中，提供了制备纳米颗粒组合物的方法，其包括将载体多肽和双链寡核苷酸(比如DNA)以小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，或约4:1)的摩尔比组合，从而形成多个纳米颗粒；其中载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段。在一些实施方式中，渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，结合寡核苷酸的结构域为带正电的(比如十赖氨酸)。在一些实施方式中，靶向细胞的结构域包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，渗透细胞的区段为五邻体基底多肽或其变体，结合寡核苷酸的结构域为带正电的(比如十赖氨酸)，并且靶向细胞的结构域为调蛋白或其变体。在一些实施方式中，组合物中所得到的纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了制备纳米颗粒组合物的方法，其包括将双链寡核苷酸(比如DNA)和小分子药物(比如化疗药，例如多柔比星)组合；和将载体多肽和双链寡核苷酸以小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，或约4:1)的摩尔比组合，从而形成多个纳米颗粒；其中载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段。在一些实施方式中，渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，结合寡核苷酸的结构域为带正电的(比如十赖氨酸)。在一些实施方式中，靶向细胞的结构域包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，渗透细胞的区段为五邻体基底多肽或其变体，结合寡核苷酸的结构域为带正电的(比如十赖氨酸)，并且靶向细胞的结构域为调蛋白或其变体。在一些实施方式中，组合物中所得到的纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了制备纳米颗粒组合物的方法，其包括将双链寡核苷酸(比如DNA)和小分子药物(比如化疗药，例如多柔比星)组合；将载体多肽和双链寡核苷酸以小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，或约4:1)的摩尔比组合，从而形成多个纳米颗粒；和将未结合的载体多肽或双链寡核苷酸与多个纳米颗粒分开；其中载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段。在一些实施方式中，渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，结合寡核苷酸的结构域为带正电的(比如十赖氨酸)。在一些实施方式中，靶向细胞的结构域包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，渗透细胞的区段为五邻体基底多肽或其变体，结合寡核苷酸的结构域为带正电的(比如十赖氨酸)，并且靶向细胞的结构域为调蛋白或其变体。在一些实施方式中，组合物中所得到的纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了制备纳米颗粒组合物的方法，其包括将双链寡核苷酸(比如DNA)和小分子药物(比如化疗药，例如多柔比星)组合；将未结合的小分子药物与双链寡核苷酸分开；将载体多肽和双链寡核苷酸以小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，或约4:1)的摩尔比组合，从而形成多个纳米颗粒；和将未结合的载体多肽或双链寡核苷酸与多个纳米颗粒分开；其中载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段。在一些实施方式中，渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，结合寡核苷酸的结构域为带正电的(比如十赖氨酸)。在一些实施方式中，靶向细胞的结构域包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，渗透细胞的区段为五邻体基底多肽或其变体，结合寡核苷酸的结构域为带正电的(比如十赖氨酸)，并且靶向细胞的结构域为调蛋白或其变体。在一些实施方式中，组合物中所得到的纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
癌症治疗
通过将有效量的包括纳米颗粒的组合物施用至受试者，从而杀死癌细胞，纳米颗粒组合物可用于治疗受试者中的癌症。载体多肽的靶向细胞的区段可靶向癌细胞表面上的分子，从而将化疗剂(其可与双链寡核苷酸结合)递送至癌细胞。在一些实施方式中，癌症为转移性的。在一些实施方式中，癌症为耐化疗药癌症，如本文所进一步描述的。
在一个方面中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸；和与双链寡核苷酸结合的化疗药；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1。
在另一方面中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段的载体多肽；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸；和与双链寡核苷酸结合的化疗药；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1。
在另一方面中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸；和与双链寡核苷酸结合的化疗药；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1。
在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。靶向Her细胞的区段，例如可结合在HER3+癌细胞表面上存在的HER3，以使纳米颗粒靶向癌细胞。
在一些实施方式中，将有效量的包括纳米颗粒的组合物施用至受试者，以治疗神经胶质瘤、乳腺癌、卵巢癌或前列腺癌。在一些实施方式中，这些癌症中的任何一种为HER3+。在一些实施方式中，癌症对于孕酮受体(PR)、雌激素受体(ER)或HER2中的一个或多个是阴性的(例如，PR-、ER-、HER2-、PR-/ER-等)。在一些实施方式中，癌症为三阴性乳腺癌。
在一些实施方式中，包括纳米颗粒的组合物用于杀死癌细胞，比如神经胶质瘤细胞、乳腺癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞。在一些实施方式中，这些癌细胞中的任何一种为HER3+。在一些实施方式中，癌细胞对于孕酮受体(PR)、雌激素受体(ER)或HER2中的一个或多个为阴性(例如，PR-、ER-、HER2-、PR-/ER-等)。在一些实施方式中，癌细胞为三阴性乳腺癌细胞。
在一些实施方式中，本文描述的纳米颗粒比脂质体多柔比星(或“LipoDox”，例如以商标名出售的组合物)更有效。示例性纳米颗粒包括平均摩尔比在4:1和小于约6:1(载体多肽对双链寡核苷酸)之间的载体多肽和双链寡核苷酸，并且包括平均摩尔比为约1:1至约60:1(小分子药物对寡核苷酸)的小分子药物(比如多柔比星)。例如，在一些实施方式中，纳米颗粒包括平均摩尔比为约4:1(载体多肽对双链寡核苷酸)的载体多肽和双链寡核苷酸，和平均摩尔比为约10:1(小分子药物对寡核苷酸)的小分子药物(比如多柔比星)。在另一例子中，在一些实施方式中，纳米颗粒包括平均摩尔比为约4:1(载体多肽对双链寡核苷酸)的载体多肽和双链寡核苷酸，和平均摩尔比为约40:1(小分子药物对寡核苷酸)的小分子药物(比如多柔比星)。
在一些实施方式中，癌细胞在存在药物的情况下增殖。在一些实施方式中，癌细胞的培养物在存在药物的情况下不缩小。在一些实施方式中，癌细胞在存在药物的情况下不被杀死。在一些实施方式中，在使得癌细胞类型的非耐药细胞系的相对细胞存活为约0.5或更低(比如约0.4或更低、约0.3或更低、或约0.2或更低)的剂量和时间长度下，相同癌细胞系的相对细胞存活为约0.7或更高(比如约0.8或更高，或约0.9或更高)。
在一些实施方式中，待治疗或待杀死的癌症或癌细胞对于化疗药，比如小分子药物或抗体无应答。在一些实施方式中，待治疗或待杀死的癌症或癌细胞对于化疗药的脂质体制剂，比如脂质体蒽环类药物无应答。在一些实施方式中，待治疗或待杀死的癌症或癌细胞对于HER2+抗体化疗剂、拉帕替尼或蒽环类药物无应答。在一些实施方式中，待治疗或待杀死的癌症或癌细胞对于多柔比星(其可为纳米颗粒多柔比星，比如脂质体多柔比星，或多柔比星的非纳米颗粒制剂形式)无应答。在一些实施方式中，待治疗或待杀死的癌症或癌细胞对于拉帕替尼无应答。在一些实施方式中，待治疗或待杀死的癌症或癌细胞对于曲妥珠单抗和/或培妥珠单抗无应答。
在一些实施方式中，描述方法包括鉴定患有对于化疗剂无应答的癌症的受试者，和施用有效量的如本文所描述的包括纳米颗粒的组合物。在一些实施方式中，癌症或癌细胞对于抗HER2治疗(比如抗HER2抗体或HER2的小分子抑制剂(例如，拉帕替尼)无应答。在一些实施方式中，癌症或癌细胞对于抗HER2抗体治疗，比如曲妥珠单抗和/或培妥珠单抗无应答。在一些实施方式中，癌症或癌细胞对于多柔比星(比如多柔比星的脂质体制剂、或多柔比星的非纳米颗粒制剂)无应答。
在一些实施方式中，本文描述的纳米颗粒比脂质体多柔比星更有效杀死HER3+癌细胞，比如MDA-MB-435细胞。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死HER3+癌细胞(比如MDA-MB-435细胞)的IC50小于约10μM，比如小于约5μM。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死HER3+癌细胞(比如MDA-MB-435细胞)的IC50在约2μM和约10μM之间。
在一些实施方式中，本文描述的纳米颗粒比脂质体多柔比星更有效杀死乳腺癌细胞，比如BT474乳腺癌细胞或JIMT1乳腺癌细胞。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死乳腺癌细胞(比如BT474乳腺癌细胞或JIMT1乳腺癌细胞)的IC50小于约10μM，比如小于约5μM、小于约1μM、或小于约0.5μM。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死乳腺癌细胞(比如BT474乳腺癌细胞或JIMT1乳腺癌细胞)的IC50在约0.1μM和约10μM之间，比如约0.5μM和约10μM之间、或约0.5μM和约1μM之间。
在一些实施方式中，本文描述的纳米颗粒比脂质体多柔比星更有效杀死三阴性乳腺癌细胞，比如4T1三阴性乳腺的癌细胞。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死三阴性乳腺癌细胞(比如4T1三阴性乳腺的癌细胞)的IC50小于约10μM，比如小于约5μM、小于约1μM、或小于约0.5μM。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死三阴性乳腺癌细胞(比如4T1三阴性乳腺的癌细胞)的IC50在约0.1μM和约10μM之间，比如约0.5μM和约10μM之间、或约0.5μM和约1μM之间。
在一些实施方式中，本文描述的纳米颗粒比脂质体多柔比星更有效杀死神经胶质瘤细胞，比如U251神经胶质瘤细胞。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死神经胶质瘤细胞(比如U251神经胶质瘤细胞)的IC50小于约10μM，比如小于约5μM、小于约1μM、或小于约0.5μM。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死神经胶质瘤细胞(比如U251神经胶质瘤细胞)的IC50在约0.1μM和约10μM之间，比如在约0.5μM和约10μM之间、或在约0.5μM和约1μM之间。
在一些实施方式中，本文描述的纳米颗粒比脂质体多柔比星更有效杀死卵巢癌细胞，比如SKOV3卵巢癌细胞。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死卵巢癌细胞(比如SKOV3卵巢癌细胞)的IC50小于约10μM，比如小于约5μM，或小于约1μM。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死卵巢癌细胞(比如SKOV3卵巢癌细胞)的IC50在约0.1μM和约10μM之间，比如在约0.5μM和约10μM之间、或在约0.5μM和约1μM之间。
在一些实施方式中，本文描述的纳米颗粒比脂质体多柔比星更有效杀死前列腺癌细胞，比如LNCaP-GFP前列腺癌细胞。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死前列腺癌细胞(比如LNCaP-GFP前列腺癌细胞)的IC50小于约10μM，比如小于约5μM、小于约1μM、或小于约0.5μM。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死前列腺癌细胞(比如LNCaP GFP前列腺癌细胞)的IC50在约0.1μM和约10μM之间，比如在约0.5μM和约10μM之间、或在约0.5μM和约1μM之间。
在一些实施方式中，本文描述的纳米颗粒比脂质体多柔比星更有效杀死转移癌细胞，比如骨转移性前列腺癌细胞(例如，RANKL人骨转移性前列腺癌细胞)。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死转移性癌细胞比如骨转移性前列腺癌细胞(例如，RANKL人骨转移性前列腺癌细胞)的IC50小于约10μM，比如小于约5μM、小于约1μM、或小于约0.5μM。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死转移性癌细胞，比如骨转移性前列腺癌细胞(例如，RANKL人骨转移性前列腺癌细胞)的IC50在约0.1μM和约10μM之间，比如约0.5μM和约10μM之间、或约0.5μM和约1μM之间。
在一些实施方式中，治疗患有癌症的受试者的方法进一步包括第二疗法，比如辐射疗法或外科手术。因此，在一些实施方式中，本文所述的包括纳米颗粒的组合物作为新辅助疗法和/或辅助疗法施用至患有癌症的受试者。例如，在一些实施方式中，曲妥珠单抗和/或培妥珠单抗用作包括施用本文所述的纳米颗粒组合物的抗癌疗法的辅助。
在一些实施方式中，在施用本文所述的纳米颗粒之前，受试者还未经历化疗或辐射疗法。在一些实施方式中，受试者已经经历化疗或辐射疗法。
在一些实施方式中，将本文所述的纳米颗粒组合物施用至受试者。在一些实施方式中，将纳米颗粒组合物施用至受试者，用于体内递送至靶向细胞。一般而言，根据标准药学实践，根据受试者的大小和状况，确定纳米颗粒组合物施用的剂量和路径。在一些实施方式中，通过任何路径将纳米颗粒组合物施用至受试者，包括口服、透皮、吸入、静脉内、动脉内、肌内、直接施用至创伤位点、施用至手术部位、腹膜内、栓剂、皮下、皮内、经皮、雾化、胸膜内、心室内、关节内、眼内或脊柱内。在一些实施方式中，将组合物静脉内施用至受试者。
在一些实施方式中，纳米颗粒组合物的剂量为单个剂量或重复剂量。在一些实施方式中，将剂量每天一次、每天两次、每天三次、或每天四次或更多次给予受试者。在一些实施方式中，一周内给予约1个或更多(比如约2个或更多、约3个或更多、约4个或更多、约5个或更多、约6个或更多、或约7个或更多)剂量。在一些实施方式中，每周一次、每2周一次、每3周一次、每4周一次、3周中的2周每周一次、或4周中的3周每周一次施用组合物。在一些实施方式中，在数天、数周、数月或数年的时期内给予多个剂量。在一些实施方式中，疗程为约1个或更多剂量(比如约2个或更多剂量、约3个或更多剂量、约4个或更多剂量、约5个或更多剂量、约7个或更多剂量、约10个或更多剂量、约15个或更多剂量、约25个或更多剂量、约40个或更多剂量、约50个或更多剂量、或约100个或更多剂量)。
在一些实施方式中，纳米颗粒组合物的施用剂量为约200mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)、约150mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)、约100mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)、约80mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)、约70mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)、约60mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)、约50mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)、约40mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)、约30mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)、约20mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)、约15mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)、约10mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)、约5mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)，或约1mg/m2或更少的小分子药物(比如多柔比星)。在一些实施方式中，对于大致相同的疗效，施用的纳米颗粒组合物的剂量小于脂质体多柔比星的剂量。在一些实施方式中，所述施用剂量的纳米颗粒组合物相对于大约相同剂量的脂质体多柔比星的疗效，提供了增加的疗效。
在一些实施方式中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；和其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)；和其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；并且其中结合寡核苷酸的区段为带正电的。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；并且其中结合寡核苷酸的区段为带正电的。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段为带正电的；和其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段的载体多肽；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段为带正电的；和其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式为)调蛋白或其变体；和其中化疗药(比如多柔比星)插入双链寡核苷酸。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体；和其中化疗药(比如多柔比星)插入双链寡核苷酸中。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽和双链DNA寡核苷酸，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1；其中载体多肽为HerPBK10，和其中多柔比星插入双链寡核苷酸中。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；和其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，约5:1或约4:1)；和其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；并且其中结合寡核苷酸的区段为带正电的。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；并且其中结合寡核苷酸的区段为带正电的。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段为带正电的；和其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段为带正电的；和其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体；和其中化疗药(比如多柔比星)插入双链寡核苷酸中。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体；和其中化疗药(比如多柔比星)插入双链寡核苷酸中。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽和双链DNA寡核苷酸，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1；其中载体多肽为HerPBK10，和其中多柔比星插入双链寡核苷酸中。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；和其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)；和其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；并且其中结合寡核苷酸的区段为带正电的。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；并且其中结合寡核苷酸的区段为带正电的。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段为带正电的；和其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段为带正电的；和其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中多个纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体；和其中化疗药(比如多柔比星)插入双链寡核苷酸中。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体；和其中化疗药(比如多柔比星)插入双链寡核苷酸中。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至癌细胞的方法，其包括使癌细胞与多个纳米颗粒接触，纳米颗粒包括载体多肽和双链DNA寡核苷酸，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1；其中载体多肽为HerPBK10，和其中多柔比星插入双链寡核苷酸中。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
治疗药物耐性癌症的方法
纳米颗粒组合物也可用于杀死耐化疗药癌症和治疗患有耐化疗药癌症的受试者。在一些实施方式中，提供了杀死耐化疗药癌细胞的方法，其包括使耐化疗药癌细胞接触多个纳米颗粒，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸；和与双链寡核苷酸结合的化疗药。
在一些实施方式中，提供了治疗患有耐化疗药癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括多个纳米颗粒的组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸；和与双链寡核苷酸结合的化疗药。
在一些实施方式中，提供了将化疗剂递送至耐化疗药癌细胞的方法，其包括使耐化疗药癌细胞接触多个纳米颗粒，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸；和与双链寡核苷酸结合的化疗药。
本文描述的方法也用于治疗在治疗时用先前的药物(比如化疗剂)疗法已经有进展的受试者。例如，受试者在用先前的疗法治疗后的约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月中的任一月内有进展。在一些实施方式中，患有癌症的受试者起初对于先前的疗法的治疗有应答，但是在停止先前的疗法后的约6、7、8、9、10、11、12、24、或36个月中的大约任一月之后，形成复发的癌症。
尽管下面的说明描述了耐受先前的疗法(比如基于多柔比星的疗法)的受试者作为示例性实施方式，但是应理解，本文的描述也适用于对先前的疗法有进展的受试者、不适于继续先前的疗法的受试者(例如由于无应答和/或由于毒性)、在先前的疗法之后具有复发的癌症的受试者、对先前的疗法无应答的受试者、呈现不太令人满意的响应程度的受试者、和/或呈现增强响应性的受试者。本文所述的方法包括涉及施用本文所述的纳米颗粒组合物的用于治疗癌症的所有二线疗法。
纳米颗粒可体内或体外杀死耐化疗药癌细胞。纳米颗粒也可体外杀死耐药癌细胞，例如通过将包括纳米颗粒的组合物与耐药癌细胞混合。载体多肽的靶向细胞的区段可与癌细胞表面上存在的分子结合。例如，在一些实施方式中，耐药癌细胞为HER3+细胞，并且靶向细胞的区段与HER3结合。纳米颗粒也可用于体内杀死耐化疗药癌症，例如通过将包括纳米颗粒的组合物施用至患有耐药癌症的受试者。在一些实施方式中，纳米颗粒用于治疗患有耐药癌症的受试者，例如通过向受试者施用有效量的包括纳米颗粒的组合物。
在一些实施方式中，耐药癌症耐抗体。例如，在一些实施方式中，耐药癌症耐抗HER2抗体，比如曲妥珠单抗(也称作商标名)。在一些实施方式中，耐药癌症耐培妥珠单抗。在许多情况下，曲妥珠单抗或培妥珠单抗在疗程期间，对于某些癌症类型丧失了其效力。这在治疗乳腺癌期间，频繁出现。然而，描述的纳米颗粒仍能够靶向耐曲妥珠单抗的癌细胞或耐培妥珠单抗的癌细胞，并且因此有效杀死这些癌细胞或治疗患有耐曲妥珠单抗癌症或耐培妥珠单抗癌症的患者。
在一些实施方式中，本文描述的纳米颗粒有效治疗耐脂质体多柔比星的癌症。在一些实施方式中，纳米颗粒有效杀死耐HER2抗体(比如曲妥珠单抗或培妥珠单抗)的癌症。在一些实施方式中，纳米颗粒比脂质体多柔比星更有效杀死耐HER2抗体(比如曲妥珠单抗或培妥珠单抗)的乳腺癌细胞，比如耐曲妥珠单抗BT474TR乳腺癌细胞。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死耐HER2抗体(比如曲妥珠单抗)的乳腺癌细胞(比如耐曲妥珠单抗BT474-TR乳腺癌细胞)的IC50小于约10μM，比如小于约5μM、小于约1μM、或小于约0.5μM。在一些实施方式中，本文所述的纳米颗粒用于杀死耐HER2抗体(比如曲妥珠单抗)的乳腺癌细胞(比如耐曲妥珠单抗BT474-TR乳腺癌细胞)的IC50在约0.01μM和约10μM之间，比如在约0.1μM和约1μM之间，或约0.5μM和约1μM之间。
在一些实施方式中，耐药癌症耐小分子化疗剂，比如蒽环类药物(例如，多柔比星，也称为商标名)或酪氨酸-激酶抑制剂(比如拉帕替尼)。在一些实施方式中，耐药癌症耐LipoDox。
本文所述的纳米颗粒以与脂质体多柔比星等量的多柔比星增加了耐多柔比星细胞系的细胞死亡，其表明纳米颗粒比脂质体多柔比星更有效治疗呈现耐多柔比星的患者。在一些实施方式中，本文描述的纳米颗粒比脂质体多柔比星更有效杀死耐小分子化疗剂比如多柔比星的癌细胞(例如，A2780-ADR耐阿霉素人卵巢癌细胞)。
在一些实施方式中，提供了治疗患有耐化疗药癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，耐化疗药癌症耐HER2+抗体(比如曲妥珠单抗或培妥珠单抗)、蒽环类药物(比如多柔比星)、或酪氨酸-激酶抑制剂(比如拉帕替尼)。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有耐化疗药癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；和其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，耐化疗药癌症耐HER2+抗体(比如曲妥珠单抗或培妥珠单抗)、蒽环类药物(比如多柔比星)，或酪氨酸-激酶抑制剂(比如拉帕替尼)。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有耐化疗药癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；并且其中结合寡核苷酸的区段为带正电的。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，耐化疗药癌症耐HER2+抗体(比如曲妥珠单抗或培妥珠单抗)、蒽环类药物(比如多柔比星)，或酪氨酸-激酶抑制剂(比如拉帕替尼)。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有耐化疗药癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段为带正电的；和其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，耐化疗药癌症耐HER2+抗体(比如曲妥珠单抗或培妥珠单抗)、蒽环类药物(比如多柔比星)，或酪氨酸-激酶抑制剂(比如拉帕替尼)。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有耐化疗药癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，耐化疗药癌症耐HER2+抗体(比如曲妥珠单抗或培妥珠单抗)、蒽环类药物(比如多柔比星)、或酪氨酸-激酶抑制剂(比如拉帕替尼)。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1，约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有耐化疗药癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段的载体多肽；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体；和其中化疗药(比如多柔比星)插入双链寡核苷酸中。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，耐化疗药癌症耐HER2+抗体(比如曲妥珠单抗或培妥珠单抗)、蒽环类药物(比如多柔比星)、或酪氨酸-激酶抑制剂(比如拉帕替尼)。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了治疗患有耐化疗药癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用包括纳米颗粒的纳米颗粒组合物，纳米颗粒包括载体多肽和双链DNA寡核苷酸，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1；其中载体多肽为HerPBK10，和其中多柔比星插入双链寡核苷酸中。在一些实施方式中，癌症为HER3+癌症。在一些实施方式中，癌症为乳腺癌(比如三阴性乳腺癌)、神经胶质瘤、卵巢癌或前列腺癌，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，耐化疗药癌症耐HER2+抗体(比如曲妥珠单抗或培妥珠单抗)、蒽环类药物(比如多柔比星)、或酪氨酸-激酶抑制剂(比如拉帕替尼)。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死耐化疗药癌细胞的方法，其包括使耐化疗药癌细胞接触多个纳米颗粒，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，耐化疗药癌症耐HER2+抗体(比如曲妥珠单抗或培妥珠单抗)、蒽环类药物(比如多柔比星)、或酪氨酸-激酶抑制剂(比如拉帕替尼)。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，组合物中纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
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在一些实施方式中，提供了杀死耐化疗药癌细胞的方法，其包括使耐化疗药癌细胞接触多个纳米颗粒，纳米颗粒包括载体多肽，所述载体多肽包含靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；与结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸(比如DNA)；和与双链寡核苷酸结合的化疗药(比如蒽环类药物，例如多柔比星)；其中渗透细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)五邻体基底多肽或其变体；其中结合寡核苷酸的区段包括(和，在一些实施方式中为)十赖氨酸；并且其中靶向细胞的区段包括(和，在一些实施方式中为)调蛋白或其变体；和其中化疗药(比如多柔比星)插入双链寡核苷酸中。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，耐化疗药癌症耐HER2+抗体(比如曲妥珠单抗或培妥珠单抗)、蒽环类药物(比如多柔比星)、或酪氨酸-激酶抑制剂(比如拉帕替尼)。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
在一些实施方式中，提供了杀死耐化疗药癌细胞的方法，其包括使耐化疗药癌细胞接触多个纳米颗粒，纳米颗粒包括载体多肽和双链DNA寡核苷酸，载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；其中纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1；其中载体多肽为HerPBK10，和其中多柔比星插入双链寡核苷酸中。在一些实施方式中，癌细胞为HER3+癌细胞。在一些实施方式中，癌细胞为乳腺癌细胞(比如三阴性乳腺癌细胞)、神经胶质癌细胞、卵巢癌细胞或前列腺癌细胞，其中任何一种可为HER3+。在一些实施方式中，耐化疗药癌症耐HER2+抗体(比如曲妥珠单抗或培妥珠单抗)、蒽环类药物(比如多柔比星)、或酪氨酸-激酶抑制剂(比如拉帕替尼)。在一些实施方式中，纳米颗粒组合物中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如4:1至小于约6:1，或约4:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒中载体多肽与双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1(比如约4:1至小于约6:1、约5:1或约4:1)。在一些实施方式中，双链寡核苷酸的长度在约20个碱基和约50个碱基之间。在一些实施方式中，小分子药物与双链寡核苷酸的摩尔比在约1:1至约60:1之间(比如约10:1或约40:1)。在一些实施方式中，纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
药物组合物
在一些实施方式中，本文描述的组合物被配制为药物组合物，所述药物组合物包括本文所述的多个纳米颗粒和药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方式中，药物组合物为固体，比如粉末。例如可通过冷冻干燥溶液中的纳米颗粒而形成粉末。例如通过将粉末与水性液体(例如，水或缓冲液)混合可使粉末复溶(reconstitute)。在一些实施方式中，药物组合物为液体，例如悬浮在水溶液(比如生理盐水或林格溶液)中的纳米颗粒。在一些实施方式中，药物组合物包括药学上可接受的赋形剂，例如填充剂、粘合剂、包衣剂、防腐剂、润滑剂、调味剂、甜味剂、着色剂、溶剂、缓冲剂、螯合剂或稳定剂。
药学上可接受的填充剂的例子包括纤维素、碳酸氢钙、碳酸钙、微晶纤维素、蔗糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇、山梨糖醇、麦芽糖醇、预糊化淀粉、玉米淀粉或马铃薯淀粉。药学上可接受的粘合剂的例子包括聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、乳糖、木糖醇、山梨糖醇、麦芽糖醇、明胶、蔗糖、聚乙二醇、甲基纤维素、或纤维素。药学上可接受的包衣剂的例子包括羟丙基甲基纤维素(HPMC)、紫胶、玉米蛋白质玉米醇溶蛋白、或明胶。药学上可接受的崩解剂的例子包括聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、或羧甲基淀粉钠。药学上可接受的润滑剂的例子包括聚乙二醇、硬脂酸镁、或硬脂酸。药学上可接受的防腐剂的例子包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸、或山梨酸。药学上可接受的甜味剂的例子包括蔗糖、糖精、阿巴斯甜糖、或山梨糖醇。药学上可接受的缓冲剂的例子包括碳酸盐、柠檬酸盐、葡萄糖酸盐、乙酸盐、磷酸盐或酒石酸盐。
制造品和试剂盒
也提供了在适当的包装中包括本文所述的组合物的制造品。用于本文描述的组合物的适当的包装是本领域已知的，并且包括例如小瓶(比如密封小瓶)、罐(vessel)、安瓿、瓶子、广口瓶(jar)、柔性包装(例如，密封聚酯薄膜(Mylar)或塑料袋)等。这些制造品可进一步被灭菌和/或密封。
本发明也提供了包括本文所述的组合物(或制造品)的试剂盒并且可进一步包括关于使用组合物的方法，比如本文所述的用途的说明书。本文所述的试剂盒可进一步包括从商业和使用者角度期望的其他材料，包括其他缓冲物、稀释物、过滤器、针、注射器和包装插入物，以及用于实施本文所述的任何方法的说明书。
实施例
包括本文提供的实施例仅仅为了示意性目的并且不旨在限制本发明的范围。
实施例1:纳米颗粒组装
使用下述方法组装包括载体多肽、双链DNA寡核苷酸和多柔比星的纳米颗粒(称为“HerDox”颗粒)。
通过在沸腾水中温育等摩尔比的各个寡核苷酸5分钟，使单链、互补的DNA寡核苷酸(Eurofins Operon；序列如下LLAA-5:5’-CGCCTGAGCAACGCGGCGGGCATCCGCAAG-3’(SEQ IDNO:5)和LLAA-3:3’-GCGGACTCGTTGCGCCGCCCGTAGGCGTTC-5’)(SEQ ID NO:6))而退火。接着，将寡核苷酸在室温下冷却30分钟。
接着，以1:40DNA:Dox的摩尔比，将双链、退火的DNA寡核苷酸与盐酸多柔比星在室温下温育30分钟。
接着，以4:1的HerPBK10:DNA-多柔比星的摩尔比(因此HerPBK10:DNA:多柔比星的摩尔比为4:1:40)，将结合多柔比星的双链DNA寡核苷酸与载体多肽(“HerPBK10”)在HEPES缓冲生理盐水(HBS)中温育，所述载体多肽包括靶向Her细胞的区段、渗透PB细胞的区段和结合十赖氨酸(“K10”)寡核苷酸的区段。载体多肽和结合多柔比星的双链DNA寡核苷酸的混合物在冰上振荡2小时，从而形成HerDox颗粒。
接着，将所得到的纳米颗粒进行超速离心。具体而言，将12ml的无菌HBS添加至已经在无菌、10％甘油中预温育24小时的截留分子量50kD的离心过滤器(Amicon Ultra-15)中。将HerDox混合物添加至离心过滤器的冷的HBS中。接着，将过滤器管在Beckman J6-HC离心机中以2500RPM(5000xg)旋转10-20分钟，直到终体积在200μL和500μL之间。接着，将浓缩的HerDox转移至1.7mL microfuge管中。
如关于HerDox纳米颗粒所描述，通过温育HerPBK10与双链DNA寡核苷酸(没有多柔比星)，但是不以多柔比星温育双链寡核苷酸，而制备空纳米颗粒。可使用摩尔比为2:1、3:1、4:1、5:1和6:1的HerPBK10:DNA，和/或摩尔比为约1:10或约1:40的dsDNA:多柔比星，制备类似的混合物。
用于下述实施例的治疗剂量反映了HerDox中的多柔比星浓度，其通过外推针对Dox吸光度校准曲线的测量吸光度(A480)(SpectraMax MA；Molecular Devices，CA，USA)而测定。基于相对于HerDox的HerPBK10含量将对于空纳米颗粒(HerPBK10-DNA)的治疗浓度归一化。
实施例2:纳米颗粒尺寸
以2:1、3:1、4:1、5:1或6:1的摩尔比，将HerPBK10载体多肽与插入多柔比星的双链DNA组合(dsDNA:多柔比星的摩尔比为1:10)。接着，使混合物进行动态光散射(DLS)，以确定所得到的纳米颗粒的直径。也通过DLS测量HerPBK10(没有寡核苷酸或多柔比星)和插入多柔比星的双链DNA(没有HerPBK10)的溶液。结果呈现在图2中。如图2中可见，当以4:1、5:1和6:1(HerPBK10:dsDNA)的摩尔比组合时，形成约35nm的纳米颗粒。
实施例3:纳米颗粒的CryoEM
多柔比星与双链DNA组合，随后将混合物与HerPBK10载体多肽以4:1:10、4:1:40或6:1:10(HerPBK10:dsDNA:多柔比星)的摩尔比组合。接着，使用cryoEM将混合物成像，并且呈现在图3中。如图3中显示，所有的三种混合物产生类似尺寸和形态的纳米颗粒。
实施例4:纳米颗粒杀死癌细胞和耐化疗药癌细胞的用途
将没有多柔比星的纳米颗粒(HerPBK10:dsDNA的摩尔比为4:1，在该实施例中称为“空曙核蛋白体”)、HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为4:1:40的纳米颗粒(在该实施例中称为Eos-001(4:1:40))或HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为6:1:10的纳米颗粒(在该实施例中称为Eos-001(6:1:10))与LipoDox的杀死各种类型的癌细胞的能力进行比较。
将各种剂量的纳米颗粒与MDA-MB-435(人癌症)细胞、BT474(人乳腺癌)细胞、BT474-R(耐曲妥珠单抗人乳腺癌)细胞、JIMT1(来自天然耐曲妥珠单抗的患者的人乳腺癌细胞)、U251(人神经胶质瘤)细胞、A2780ADR(耐多柔比星人卵巢癌)细胞、4T1(三阴性小鼠乳腺癌)细胞、SKOV3(人卵巢癌)细胞、LNCaP-GFP(人前列腺癌)细胞、RANKL(人骨转移性前列腺癌细胞)或BT-549(三阴性人乳腺癌)细胞温育。
细胞
SKBR3细胞和MDA-MB-435细胞获自ATCC。BT-474细胞和JIMT1细胞获自Cedars-Sinai医学中心。将JIMT1之外的所有细胞于5％CO2、37℃保持在完全培养基DMEM(Dulbecco的改良的伊格尔的培养基)中，10％热失活胎牛血清和100U/mL青霉素/100μg/mL链霉素。将JIMT1细胞于5％CO2保持在RPMI(Roswell Park Memorial Institute Media)中，10％的热失活胎牛血清、100U/mL青霉素/100μg/ml链霉素和1mM丙酮酸钠。
细胞表面ELISA试验
使用ELISA试验确定各种细胞系的表面上存在的HER1、HER2、HER3或HER4的相对量。将细胞每孔以8,000或10,000个细胞铺在黑壁、透明底部的96孔板中并且使得在37℃和5％CO2生长48小时。用PBS+(1X磷酸盐缓冲液(PBS)以及1％MgCl2和1％CaCl2)冲洗细胞一次，振荡下，用4％低聚甲醛(PFA)的PBS固定12分钟，然后在轻轻搅拌下，用3％牛血清白蛋白(BSA)的PBS封闭3小时。去除封闭液并且将指示的一级抗体(HER1抗体、HER2抗体、HER3抗体或HER4抗体)以1:500稀释添加至平板，用3％BSA的PBS稀释并且在4℃温育过夜，同时振荡。用PBS冲洗平板3次，在冲洗之间，轻轻搅拌温育5分钟。以1:1000稀释，添加适当的二级抗体，用3％BSA的PBS稀释并且将平板在室温轻轻搅拌、温育1小时。用PBS将细胞冲洗3次，冲洗之间轻轻搅拌温育5分钟，然后用diH2O冲洗一次。从孔中去除所有的液体并且将100μL的四甲基联苯胺(TMB)底物(eBioscience)添加至每个孔中并且使平板在暗处轻轻搅拌显影～30分钟。一旦形成足够的蓝色，使用酶标仪测量650nm的吸光度将反应量化。接着，将100uL的1N HCl添加至平板的每个孔中，以停止反应，再次在450nm读取平板。去除TMB/HCl溶液并且用1X PBS冲洗平板两次。将50uL的0.1％结晶紫的100％乙醇添加至每个孔中。在暗处将平板轻轻振荡温育30分钟。用PBS彻底冲洗平板，并且然后将100uL的95％乙醇添加至每个孔中，以从任何细胞释放结晶紫。接着，在590nm对平板读数。结晶紫近似每孔的细胞数并且确保每个试验的归一化以及平板之间的比较。
细胞活力试验
使用细胞活力试验测量在暴露于描述的组合物之后的相对细胞存活。以每孔15,000、10,000或8,000个细胞铺在黑壁、透明底部的96孔板中。48小时后，吸去培养基并且更换为总体积为40μL的完全培养基和指示浓度的空曙核蛋白体、Eos-001(4:1:40)、Eos-001(6:1:10)或LipoDoxat。在37℃和5％CO2，将平板振荡4小时，然后将60μL的完全培养基添加至每个孔中，以使得总体积为100μL，并且在37℃和5％CO2，在不振荡的情况下，继续温育44小时。温育结束时，经MTS试验(Promega)根据制造商的说明书测定相对细胞活力。具体而言，从孔中去除培养基并且将100μL的新鲜完全培养基添加至每个孔中。将20μl的制备MTS试剂添加至每个孔中。接着，在37℃和5％CO2将平板在振荡下温育，且在1、2和3小时，使用分光光度计在490nm对平板进行读数。以下述比率显示结果：处理组中存活的细胞的数量除以未处理组中存活的细胞的数量。因此，1.0的细胞存活指示处理的细胞和未处理的细胞相同程度的存活，而0.2比率意味着与未处理的细胞组比较，处理的细胞中仅20％存活。
结果
结果显示在图中。在全部图中，“空曙核蛋白体(4:1)”指以HerPBK10:dsDNA的摩尔比为4:1包括HerPBK10载体多肽和双链DNA寡核苷酸的纳米颗粒，但是没有多柔比星；“空曙核蛋白体(6:1)”指以HerPBK10:dsDNA的摩尔比为6:1包括HerPBK10载体多肽和双链DNA寡核苷酸的纳米颗粒，但是没有多柔比星；“Eos-001(4:1:40)”指以HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为4:1:40包括HerPBK10载体多肽、双链DNA寡核苷酸和多柔比星的纳米颗粒；“Eos-001(6:1:10)”指以HerPBK10:dsDNA:多柔比星的摩尔比为6:1:10包括HerPBK10载体多肽、双链DNA寡核苷酸和多柔比星的纳米颗粒；以及“LipoDox”指商业上可得的脂质体多柔比星。每个图的子图为每种细胞类型的表面上存在的HER1、HER2、HER3或HER4的相对量。
参考图4，显示LipoDox和空曙核蛋白体(4:1)对于MDA-MB-435细胞的存活没有明显的影响。相反，Eos-001(6:1:10)颗粒在高于1μM多柔比星的浓度显示出MDA-MB-435细胞存活的显著下降。Eos-001(4:1:40)颗粒在高于1μM多柔比星的浓度显示出MDA MB-435细胞存活甚至更显著的下降，在约10μM多柔比星的浓度小于20％的细胞存活。插入图比较了各种HER受体的细胞表面水平，其示出HER3是最普遍的受体。
参考图5A，显示空曙核蛋白体(4:1)对于BT474人乳腺癌细胞的存活没有明显的影响。LipoDox、Eos-001(6:1:10)和Eos-001(4:1:40)各自降低了BT474细胞的存活，但是Eos-001(4:1:40)最为显著地降低BT474细胞的存活。参考图5B，显示空曙核蛋白体(4:1)或空曙核蛋白体(6:1)对于BT474-R耐曲妥珠单抗人乳腺癌细胞的存活都没有明显的影响。在施用约1μM多柔比星之后，LipoDox确实部分降低了细胞存活。但是，以大致相同浓度施用Eos-001(4:1:40)或Eos-001(6:1:10)导致相对细胞存活甚至更大的下降。
参考图6，显示尽管药物浓度增加约10倍，但LipoDox对JIMT1细胞效力停滞在约40％存活。然而，Eos-001(4:1:40)和Eos-001(6:1:10)以更低的浓度降低了JIMT1细胞的存活，同时实现小于10％的存活率。插入图比较了各种HER受体的细胞表面水平。
参考图7，显示与Eos-001(4:1:40)或Eos-001(6:1:10)相比，LipoDox以显著更高的多柔比星浓度降低了U251人神经胶质瘤细胞的存活。Eos-001(4:1:40)或Eos-001(6:1:10)在约10μM多柔比星的浓度，都导致小于约20％的存活。相反，在相同的浓度下，施用LipoDox导致约40％的细胞存活。插入图比较了各种HER受体的细胞表面水平，其示出HER3是最普遍的受体。
参考图8，显示Eos-001(4:1:40)比LipoDox对于降低A2780-ADR耐多柔比星人卵巢癌细胞的细胞存活具有显著更大的影响。
参考图9，显示Eos-001(4:1:40)比LipoDox对于降低4T1三阴性小鼠乳腺癌细胞的细胞存活具有显著更大的影响。
参考图10，显示Eos-001(4:1:40)比LipoDox对于降低SKOV3人卵巢癌细胞的细胞存活具有显著更大的影响。
参考图11A，显示Eos-001(4:1:40)比LipoDox对于降低LNCaP-GFP人前列腺癌细胞的细胞存活具有显著更大的影响。参考FIG11B，显示Eos-001(4:1:40)比LipoDox对于降低RANKL人骨转移性前列腺癌细胞的细胞存活具有显著更大的影响。图11C显示LNCaP-GFP和RANKL细胞中HER1、HER2、HER3和HER4的相对表达。
图12A显示Eos-001(4:1:40)比LipoDox对于降低BT549人三阴性乳腺癌细胞的存活具有显著更大的影响。图12B显示BT549细胞中HER1、HER 2、HER3和HER4的相对表达。
实施例5:对于杀死耐化疗药癌细胞，比较纳米颗粒与抗HER2抗体处理
将BT474(人乳腺癌)细胞、BT474-TR(耐曲妥珠单抗人乳腺癌)细胞、SKBR3(人乳腺癌)细胞和SKBR3-TR(耐曲妥珠单抗乳腺癌)细胞与各种浓度的Eos-001、曲妥珠单抗、或曲妥珠单抗和培妥珠单抗的组合一起温育。以μM多柔比星报告Eos-001的浓度，并且以μM抗体报告曲妥珠单抗或培妥珠单抗的浓度。将每孔的细胞铺在黑壁、透明底部的96孔板中。48小时之后，吸去培养基并且更换为总体积40μL的完全培养基和指示浓度的Eos-001、曲妥珠单抗(Tz)、或曲妥珠单抗和培妥珠单抗的组合(Tz+Pz)、或未处理的对照。在37℃和5％CO2将平板振荡4小时，然后将60μL的完全培养基添加至每个孔中，以使总体积达100μL，并且在不振荡的情况下，在37℃和5％CO2继续温育44小时。在温育结束时，经MTS试验(Promega)根据制造商的说明书测定相对细胞活力。具体而言，从孔中去除培养基并且将100μL的新鲜完全培养基添加至每个孔中。将20μl的制备MTS试剂添加至每个孔中。接着，在37℃和5％CO2将平板振荡温育，并且在1、2和3小时，使用分光光度计在490nm对平板进行读数。以下述比率显示结果：处理组中存活的细胞的数量除以未处理的组中存活的细胞的数量。
结果显示在图13中。曲妥珠单抗处理和曲妥珠单抗和培妥珠单抗的组合处理有效杀死BT474细胞，但是不杀死BT474-TR细胞。Eos-001有效杀死BT474细胞和BT474-TR细胞，表明Eos-001纳米颗粒有效杀死耐曲妥珠单抗以及耐曲妥珠单抗和培妥珠单抗的组合的细胞。曲妥珠单抗以及曲妥珠单抗和培妥珠单抗的组合都不能有效杀死SKBR3细胞或SKBR3-TR细胞。但是，Eos-001纳米颗粒有效杀死SKBR3细胞系和SKBR3-TR细胞系。
实施例6:BT474-TR细胞对曲妥珠单抗、培妥珠单抗和Eos-001纳米颗粒的敏感性
将BT474-TR细胞的曲妥珠单抗或培妥珠单抗处理与Eos-001处理、Eos-001和培妥珠单抗的组合处理、或培妥珠单抗预处理4小时之后Eos-001的处理进行比较。将每孔的细胞铺在黑壁、透明底部的96孔板中。48小时之后，吸去培养基并且更换为总体积40μL的完全培养基和指示浓度的曲妥珠单抗(Tz)、培妥珠单抗(Pz)、Eos-001、或Eos-001和培妥珠单抗的组合。在37℃和5％CO2将平板振荡4小时，然后将60μL的完全培养基添加至每个孔中，以使总体积达100μL，并且在不振荡的情况下，在37℃和5％CO2继续温育44小时。在暴露于Eos-001之前用培妥珠单抗预处理的样品中，将细胞暴露于指示量的总体积40μL的培妥珠单抗4小时并且在37℃和5％CO2将细胞振荡4小时，然后添加60μL的完全培养基和指示量的Eos-001，以使得总体积达100μL。在温育结束时，经MTS试验(Promega)根据制造商的说明书测定相对细胞活力。具体而言，从孔中去除培养基并且将100μL的新鲜完全培养基添加至每个孔中。将20μl的制备MTS试剂添加至每个孔中。接着，在37℃和5％CO2将平板振荡温育，并且使用分光光度计在490nm进行读数。这些结果显示在图14中并且指示Eos-001比曲妥珠单抗或培妥珠单抗更有效。将培妥珠单抗与Eos-001组合不产生Eos-001作用的竞争性抑制，这暗示尽管通过与HER3结合介导的Eos-001抗癌作用并不依赖于被培妥珠单抗破坏的HER2-HER3相互作用。
实施例7:Eos-001纳米颗粒靶向耐曲妥珠单抗细胞中上调的HER3
耐曲妥珠单抗BT-474-TR细胞和耐曲妥珠单抗SKBR3-TR细胞相对于非耐性亲本细胞系具有增加的表面HER3(见图15A)。为了验证Eos-001纳米颗粒靶向的HER3毒性的贡献，HER3肽用作竞争性抑制剂。将HER3肽与结合调蛋白靶向结构域的Eos-001颗粒预温育。在存在Eos-001纳米颗粒且具有或没有HER3阻断肽的情况下温育BT-474细胞、BT-474-TR细胞、SKBR3细胞或SKBR3-TR细胞。对于具有HER3阻断肽的Eos-001处理的样品，纳米颗粒和HER3阻断肽在冷的PBS中以HER3:HerPBK10的等摩尔比组合一小时。Eos-001纳米颗粒或HER3阻断肽处理的Eos-001纳米颗粒用于以0.125μM(BT474或BT474-TR细胞)或1μM(BSKBR3或SKBR3-TR细胞)的终浓度处理细胞。48小时之后测量细胞存活，并且与用模拟生理盐水处理的细胞比较。这些结果显示在图16B中(N＝3，*表示与模拟比较，p<0.05)。如图15B中显示，Eos-001纳米颗粒单独杀死所有的四种细胞类型。令人吃惊地，相比BT-474细胞，Eos-001更有效杀死BT-474-TR细胞。HER3肽的存在限制了Eos-001杀死所有细胞类型的效力，表明Eos-001颗粒靶向HER3。
实施例8:用曲妥珠单抗预温育增强了Eos-001纳米颗粒的活性
HER2抑制之后少至4小时中，HER3的转录和翻译增加。相对于非耐性细胞，Eos-001纳米颗粒对于耐曲妥珠单抗细胞增强的效力，暗示曲妥珠单抗可用作Eos-001纳米颗粒的辅助，诱导Her3增加以增加Eos-001对耐性细胞的靶向。为了对此进行验证，在Eos-001处理之前，用曲妥珠单抗预处理非耐曲妥珠单抗的SKBR3、BT-474和MDA-MB-435细胞，以及耐曲妥珠单抗的SKBR3-TR和BT-447-TR细胞4小时或24小时。在所有的细胞系中，相比曲妥珠单抗，Eos-001呈现出改善的细胞杀死，但是在非耐性细胞系中，用曲妥珠单抗预处理4小时或12小时导致增加的Eos-001效力。结果显示在图16中。在非耐曲妥珠单抗的SKBR3细胞中，在最高给药浓度下，单独Eos-001导致适度的细胞死亡，而用曲妥珠单抗预温育4小时或24小时导致效力增加50％。类似地，相对于曲妥珠单抗，通过Eos-001纳米颗粒，非耐曲妥珠单抗的BT-474细胞展现细胞死亡的适度增加，相比曲妥珠单抗处理，用曲妥珠单抗预处理4小时之后几乎增加50％，或用曲妥珠单抗预处理24小时之后增加75％。对于MDA-MB-435细胞，观察到类似的结果。在耐曲妥珠单抗细胞系(SKBR3-TR和BT474-TR)中，曲妥珠单抗预处理使得Eos-001的效力适度增加。然而，耐曲妥珠单抗的SKBR3-TR和BT474-TR细胞系在没有曲妥珠单抗预处理的情况下被Eos-001有效杀死。这些结果表明HER2抑制剂或HER2抗体，比如曲妥珠单抗，可用作Eos-001处理有用的辅助，尤其在非耐曲妥珠单抗细胞系中。
实施例9:比较纳米颗粒与拉帕替尼处理杀死耐化疗药癌细胞
将BT474(人乳腺癌)细胞、BT474-TR(耐曲妥珠单抗人乳腺癌)细胞、SKBR3(人乳腺癌)细胞、SKBR3-TR(耐曲妥珠单抗乳腺癌)细胞和JIMT-1(耐曲妥珠单抗、耐培妥珠单抗人乳腺癌)细胞用各种浓度的Eos-001或拉帕替尼温育。以μM多柔比星报告Eos-001的浓度，并且以μM拉帕替尼报告拉帕替尼的浓度。将每孔细胞铺在黑壁、透明底部的96孔板中。48小时之后，吸去培养基并且更换为总体积40μL的完全培养基和指示浓度的Eos-001、拉帕替尼或未处理的对照。在37℃和5％CO2将平板振荡4小时，然后将60μL的完全培养基添加至每个孔中，以使得总体积达100μL，并且在不振荡的情况下，在37℃和5％CO2继续温育44小时。在温育结束时，经MTS试验(Promega)根据制造商的说明书测定相对细胞活力。具体而言，从孔中去除培养基并且将100μL的新鲜完全培养基添加至每个孔中。将20μl的制备MTS试剂添加至每个孔中。接着，在37℃和5％CO2将平板振荡温育，并且在1、2和3小时，在分光光度计上在490nm对平板读数。以下述比率显示结果：处理组中存活的细胞的数量除以未处理的组中存活的细胞的数量。
结果显示在图17中。Eos-001(虚线，开环)和拉帕替尼(实线)类似地有效处理BT-474细胞和SKBR3细胞。尽管拉帕替尼略微有效杀死耐曲妥珠单抗细胞系BT-474-TR和SKBR3-TR，但是Eos-001显著更有效地杀死BT-474-TR和SKBR3-TR细胞系。相比非耐性细胞系，Eos-001更有效杀死耐曲妥珠单抗细胞系。此外，尽管拉帕替尼不能杀死耐曲妥珠单抗JIMT-1细胞系，但是Eos-001有效杀死这些细胞。
序列表
<110> 席德-西奈医疗中心
L·K·麦蒂娜-卡韦
<120> 药物-递送纳米颗粒和耐药癌症的治疗
<130> 761542000740
<140> 未分配
<141> 与此同时发生地
<150> US 62/342,829
<151> 2016-05-27
<160> 6
<170> FastSEQ for Windows版本 4.0
<210> 1
<211> 571
<212> PRT
<213> 人腺病毒 5
<400> 1
Met Arg Arg Ala Ala Met Tyr Glu Glu Gly Pro Pro Pro Ser Tyr Glu
1 5 10 15
Ser Val Val Ser Ala Ala Pro Val Ala Ala Ala Leu Gly Ser Pro Phe
20 25 30
Asp Ala Pro Leu Asp Pro Pro Phe Val Pro Pro Arg Tyr Leu Arg Pro
35 40 45
Thr Gly Gly Arg Asn Ser Ile Arg Tyr Ser Glu Leu Ala Pro Leu Phe
50 55 60
Asp Thr Thr Arg Val Tyr Leu Val Asp Asn Lys Ser Thr Asp Val Ala
65 70 75 80
Ser Leu Asn Tyr Gln Asn Asp His Ser Asn Phe Leu Thr Thr Val Ile
85 90 95
Gln Asn Asn Asp Tyr Ser Pro Gly Glu Ala Ser Thr Gln Thr Ile Asn
100 105 110
Leu Asp Asp Arg Ser His Trp Gly Gly Asp Leu Lys Thr Ile Leu His
115 120 125
Thr Asn Met Pro Asn Val Asn Glu Phe Met Phe Thr Asn Lys Phe Lys
130 135 140
Ala Arg Val Met Val Ser Arg Leu Pro Thr Lys Asp Asn Gln Val Glu
145 150 155 160
Leu Lys Tyr Glu Trp Val Glu Phe Thr Leu Pro Glu Gly Asn Tyr Ser
165 170 175
Glu Thr Met Thr Ile Asp Leu Met Asn Asn Ala Ile Val Glu His Tyr
180 185 190
Leu Lys Val Gly Arg Gln Asn Gly Val Leu Glu Ser Asp Ile Gly Val
195 200 205
Lys Phe Asp Thr Arg Asn Phe Arg Leu Gly Phe Asp Pro Val Thr Gly
210 215 220
Leu Val Met Pro Gly Val Tyr Thr Asn Glu Ala Phe His Pro Asp Ile
225 230 235 240
Ile Leu Leu Pro Gly Cys Gly Val Asp Phe Thr His Ser Arg Leu Ser
245 250 255
Asn Leu Leu Gly Ile Arg Lys Arg Gln Pro Phe Gln Glu Gly Phe Arg
260 265 270
Ile Thr Tyr Asp Asp Leu Glu Gly Gly Asn Ile Pro Ala Leu Leu Asp
275 280 285
Val Asp Ala Tyr Gln Ala Ser Leu Lys Asp Asp Thr Glu Gln Gly Gly
290 295 300
Gly Gly Ala Gly Gly Ser Asn Ser Ser Gly Ser Gly Ala Glu Glu Asn
305 310 315 320
Ser Asn Ala Ala Ala Ala Ala Met Gln Pro Val Glu Asp Met Asn Asp
325 330 335
His Ala Ile Arg Gly Asp Thr Phe Ala Thr Arg Ala Glu Glu Lys Arg
340 345 350
Ala Glu Ala Glu Ala Ala Ala Glu Ala Ala Ala Pro Ala Ala Gln Pro
355 360 365
Glu Val Glu Lys Pro Gln Lys Lys Pro Val Ile Lys Pro Leu Thr Glu
370 375 380
Asp Ser Lys Lys Arg Ser Tyr Asn Leu Ile Ser Asn Asp Ser Thr Phe
385 390 395 400
Thr Gln Tyr Arg Ser Trp Tyr Leu Ala Tyr Asn Tyr Gly Asp Pro Gln
405 410 415
Thr Gly Ile Arg Ser Trp Thr Leu Leu Cys Thr Pro Asp Val Thr Cys
420 425 430
Gly Ser Glu Gln Val Tyr Trp Ser Leu Pro Asp Met Met Gln Asp Pro
435 440 445
Val Thr Phe Arg Ser Thr Arg Gln Ile Ser Asn Phe Pro Val Val Gly
450 455 460
Ala Glu Leu Leu Pro Val His Ser Lys Ser Phe Tyr Asn Asp Gln Ala
465 470 475 480
Val Tyr Ser Gln Leu Ile Arg Gln Phe Thr Ser Leu Thr His Val Phe
485 490 495
Asn Arg Phe Pro Glu Asn Gln Ile Leu Ala Arg Pro Pro Ala Pro Thr
500 505 510
Ile Thr Thr Val Ser Glu Asn Val Pro Ala Leu Thr Asp His Gly Thr
515 520 525
Leu Pro Leu Arg Asn Ser Ile Gly Gly Val Gln Arg Val Thr Ile Thr
530 535 540
Asp Ala Arg Arg Arg Thr Cys Pro Tyr Val Tyr Lys Ala Leu Gly Ile
545 550 555 560
Val Ser Pro Arg Val Leu Ser Ser Arg Thr Phe
565 570
<210> 2
<211> 207
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 2
Glu Leu Leu Pro Pro Gln Leu Lys Glu Met Lys Ser Gln Glu Ser Ala
1 5 10 15
Ala Gly Ser Lys Leu Val Leu Arg Cys Glu Thr Ser Ser Glu Tyr Ser
20 25 30
Ser Leu Arg Phe Lys Trp Phe Lys Asn Gly Asn Glu Leu Asn Arg Lys
35 40 45
Asn Lys Pro Gln Asn Ile Lys Ile Gln Lys Lys Pro Gly Lys Ser Glu
50 55 60
Leu Arg Ile Asn Lys Ala Ser Leu Ala Asp Ser Gly Glu Tyr Met Cys
65 70 75 80
Lys Val Ile Ser Lys Leu Gly Asn Asp Ser Ala Ser Ala Asn Ile Ala
85 90 95
Ile Val Glu Ser Asn Glu Ile Ile Thr Gly Met Pro Ala Ser Thr Glu
100 105 110
Gly Ala Tyr Val Ser Ser Glu Ser Pro Ile Arg Ile Ser Val Ser Thr
115 120 125
Glu Gly Ala Asn Thr Ser Ser Ser Thr Ser Thr Ser Thr Thr Gly Thr
130 135 140
Ser His Leu Val Lys Cys Ala Glu Lys Glu Lys Thr Phe Cys Val Asn
145 150 155 160
Gly Gly Glu Cys Phe Met Val Lys Asp Leu Ser Asn Pro Ser Arg Tyr
165 170 175
Leu Cys Lys Cys Gln Pro Gly Phe Thr Gly Ala Arg Cys Thr Glu Asn
180 185 190
Val Pro Met Lys Val Gln Asn Gln Glu Lys Ala Glu Glu Leu Tyr
195 200 205
<210> 3
<211> 796
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 3
Glu Leu Leu Pro Pro Gln Leu Lys Glu Met Lys Ser Gln Glu Ser Ala
1 5 10 15
Ala Gly Ser Lys Leu Val Leu Arg Cys Glu Thr Ser Ser Glu Tyr Ser
20 25 30
Ser Leu Arg Phe Lys Trp Phe Lys Asn Gly Asn Glu Leu Asn Arg Lys
35 40 45
Asn Lys Pro Gln Asn Ile Lys Ile Gln Lys Lys Pro Gly Lys Ser Glu
50 55 60
Leu Arg Ile Asn Lys Ala Ser Leu Ala Asp Ser Gly Glu Tyr Met Cys
65 70 75 80
Lys Val Ile Ser Lys Leu Gly Asn Asp Ser Ala Ser Ala Asn Ile Ala
85 90 95
Ile Val Glu Ser Asn Glu Ile Ile Thr Gly Met Pro Ala Ser Thr Glu
100 105 110
Gly Ala Tyr Val Ser Ser Glu Ser Pro Ile Arg Ile Ser Val Ser Thr
115 120 125
Glu Gly Ala Asn Thr Ser Ser Ser Thr Ser Thr Ser Thr Thr Gly Thr
130 135 140
Ser His Leu Val Lys Cys Ala Glu Lys Glu Lys Thr Phe Cys Val Asn
145 150 155 160
Gly Gly Glu Cys Phe Met Val Lys Asp Leu Ser Asn Pro Ser Arg Tyr
165 170 175
Leu Cys Lys Cys Gln Pro Gly Phe Thr Gly Ala Arg Cys Thr Glu Asn
180 185 190
Val Pro Met Lys Val Gln Asn Gln Glu Lys Ala Glu Glu Leu Tyr Gly
195 200 205
Gly Ser Gly Gly Ser Arg Ser Met Arg Arg Ala Ala Met Tyr Glu Glu
210 215 220
Gly Pro Pro Pro Ser Tyr Glu Ser Val Val Ser Ala Ala Pro Val Ala
225 230 235 240
Ala Ala Leu Gly Ser Pro Phe Asp Ala Pro Leu Asp Pro Pro Phe Val
245 250 255
Pro Pro Arg Tyr Leu Arg Pro Thr Gly Gly Arg Asn Ser Ile Arg Tyr
260 265 270
Ser Glu Leu Ala Pro Leu Phe Asp Thr Thr Arg Val Tyr Leu Val Asp
275 280 285
Asn Lys Ser Thr Asp Val Ala Ser Leu Asn Tyr Gln Asn Asp His Ser
290 295 300
Asn Phe Leu Thr Thr Val Ile Gln Asn Asn Asp Tyr Ser Pro Gly Glu
305 310 315 320
Ala Ser Thr Gln Thr Ile Asn Leu Asp Asp Arg Ser His Trp Gly Gly
325 330 335
Asp Leu Lys Thr Ile Leu His Thr Asn Met Pro Asn Val Asn Glu Phe
340 345 350
Met Phe Thr Asn Lys Phe Lys Ala Arg Val Met Val Ser Arg Leu Pro
355 360 365
Thr Lys Asp Asn Gln Val Glu Leu Lys Tyr Glu Trp Val Glu Phe Thr
370 375 380
Leu Pro Glu Gly Asn Tyr Ser Glu Thr Met Thr Ile Asp Leu Met Asn
385 390 395 400
Asn Ala Ile Val Glu His Tyr Leu Lys Val Gly Arg Gln Asn Gly Val
405 410 415
Leu Glu Ser Asp Ile Gly Val Lys Phe Asp Thr Arg Asn Phe Arg Leu
420 425 430
Gly Phe Asp Pro Val Thr Gly Leu Val Met Pro Gly Val Tyr Thr Asn
435 440 445
Glu Ala Phe His Pro Asp Ile Ile Leu Leu Pro Gly Cys Gly Val Asp
450 455 460
Phe Thr His Ser Arg Leu Ser Asn Leu Leu Gly Ile Arg Lys Arg Gln
465 470 475 480
Pro Phe Gln Glu Gly Phe Arg Ile Thr Tyr Asp Asp Leu Glu Gly Gly
485 490 495
Asn Ile Pro Ala Leu Leu Asp Val Asp Ala Tyr Gln Ala Ser Leu Lys
500 505 510
Asp Asp Thr Glu Gln Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Ser Asn Ser Ser
515 520 525
Gly Ser Gly Ala Glu Glu Asn Ser Asn Ala Ala Ala Ala Ala Met Gln
530 535 540
Pro Val Glu Asp Met Asn Asp His Ala Ile Arg Gly Asp Thr Phe Ala
545 550 555 560
Thr Arg Ala Glu Glu Lys Arg Ala Glu Ala Glu Ala Ala Ala Glu Ala
565 570 575
Ala Ala Pro Ala Ala Gln Pro Glu Val Glu Lys Pro Gln Lys Lys Pro
580 585 590
Val Ile Lys Pro Leu Thr Glu Asp Ser Lys Lys Arg Ser Tyr Asn Leu
595 600 605
Ile Ser Asn Asp Ser Thr Phe Thr Gln Tyr Arg Ser Trp Tyr Leu Ala
610 615 620
Tyr Asn Tyr Gly Asp Pro Gln Thr Gly Ile Arg Ser Trp Thr Leu Leu
625 630 635 640
Cys Thr Pro Asp Val Thr Cys Gly Ser Glu Gln Val Tyr Trp Ser Leu
645 650 655
Pro Asp Met Met Gln Asp Pro Val Thr Phe Arg Ser Thr Arg Gln Ile
660 665 670
Ser Asn Phe Pro Val Val Gly Ala Glu Leu Leu Pro Val His Ser Lys
675 680 685
Ser Phe Tyr Asn Asp Gln Ala Val Tyr Ser Gln Leu Ile Arg Gln Phe
690 695 700
Thr Ser Leu Thr His Val Phe Asn Arg Phe Pro Glu Asn Gln Ile Leu
705 710 715 720
Ala Arg Pro Pro Ala Pro Thr Ile Thr Thr Val Ser Glu Asn Val Pro
725 730 735
Ala Leu Thr Asp His Gly Thr Leu Pro Leu Arg Asn Ser Ile Gly Gly
740 745 750
Val Gln Arg Val Thr Ile Thr Asp Ala Arg Arg Arg Thr Cys Pro Tyr
755 760 765
Val Tyr Lys Ala Leu Gly Ile Val Ser Pro Arg Val Leu Ser Ser Arg
770 775 780
Thr Phe Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys
785 790 795
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 4
Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys
1 5 10
<210> 5
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 5
cgcctgagca acgcggcggg catccgcaag 30
<210> 6
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 6
gcggactcgt tgcgccgccc gtaggcgttc 30

Claims (71)

1.一种包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括载体多肽和双链寡核苷酸，其中所述载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；并且
其中所述纳米颗粒组合物中所述载体多肽与所述双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述纳米颗粒组合物中所述载体多肽与所述双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1至小于约6:1。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述组合物中所述纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中所述纳米颗粒中所述载体多肽与所述双链寡核苷酸的摩尔比小于约6:1。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述纳米颗粒中所述载体多肽与所述双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1至小于约6:1。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的组合物，其中所述双链寡核苷酸为DNA。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的组合物，其中所述双链寡核苷酸为RNA。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的组合物，其中所述双链寡核苷酸的长度为约10个碱基对至约100个碱基对。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中所述双链寡核苷酸与小分子药物结合。
10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述小分子药物插入所述双链寡核苷酸中。
11.根据权利要求9或10所述的组合物，其中所述纳米颗粒组合物中所述双链寡核苷酸与所述小分子药物的摩尔比为约1:1至约1:60。
12.根据权利要求9-11中任一项所述的组合物，其中所述小分子药物为化疗剂。
13.根据权利要求9-12中任一项所述的组合物，其中所述小分子药物为蒽环类药物或紫杉烷。
14.根据权利要求9-13中任一项所述的组合物，其中所述小分子药物为多柔比星。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的组合物，其中所述靶向细胞的区段结合癌细胞。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的组合物，其中所述靶向细胞的区段结合在细胞的表面上表达的HER3。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的组合物，其中所述靶向细胞的区段包括调蛋白序列或其变体。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的组合物，其中所述渗透细胞的区段包括五邻体基底多肽或其变体。
19.根据权利要求18所述的组合物，其中所述五邻体基底区段包括突变体五邻体基底多肽。
20.根据权利要求18或19所述的组合物，其中所述五邻体基底区段包括截短的五邻体基底多肽。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的组合物，其中所述结合寡核苷酸的区段为带正电的。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的组合物，其中所述结合寡核苷酸的区段包括聚赖氨酸。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的组合物，其中所述结合寡核苷酸的区段包括十赖氨酸。
24.一种试剂盒，其包括根据权利要求1-23中任一项所述的组合物和使用说明书。
25.一种治疗受试者中癌症的方法，其包括向受试者施用根据权利要求12-24中任一项所述的组合物。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述癌症为HER3+癌症。
27.根据权利要求25或26所述的方法，其中所述癌症为耐药癌症。
28.根据权利要求25-27中任一项所述的方法，其中所述癌症为乳腺癌、神经胶质癌、卵巢癌或前列腺癌。
29.根据权利要求25-28中任一项所述的方法，其中所述癌症为三阴性乳腺癌。
30.根据权利要求25-29中任一项所述的方法，其中所述癌症为转移性的。
31.根据权利要求25-30中任一项所述的方法，其中所述癌症耐HER2+抗体化疗剂、拉帕替尼、紫杉烷或蒽环类药物。
32.根据权利要求25-31中任一项所述的方法，其中所述癌症耐多柔比星或脂质体多柔比星。
33.根据权利要求25-31中任一项所述的方法，其中所述癌症耐曲妥珠单抗或培妥珠单抗。
34.根据权利要求25-31中任一项所述的方法，其中所述癌症耐拉帕替尼。
35.一种杀死耐化疗药癌细胞的方法，包括使所述耐化疗药癌细胞接触多个纳米颗粒，所述纳米颗粒包括：
载体多肽，所述载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；
与所述结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸；和
与所述双链寡核苷酸结合的化疗药。
36.一种治疗患有耐化疗药癌症的受试者的方法，包括向所述受试者施用包括纳米颗粒的组合物，所述纳米颗粒包括：
载体多肽，所述载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段；
与所述结合寡核苷酸的区段结合的双链寡核苷酸；和
与所述双链寡核苷酸结合的化疗药。
37.根据权利要求35或36所述的方法，其中所述化疗药插入双链寡核苷酸中。
38.根据权利要求35-37中任一项所述的方法，其中所述耐化疗药癌症为HER3+癌症。
39.根据权利要求35-38中任一项所述的方法，其中所述耐化疗药癌症为乳腺癌、神经胶质癌、卵巢癌或前列腺癌。
40.根据权利要求35-39中任一项所述的方法，其中所述耐化疗药癌症为三阴性乳腺癌。
41.根据权利要求35-40中任一项所述的方法，其中所述耐化疗药癌症为转移性的。
42.根据权利要求35-41中任一项所述的方法，其中所述耐化疗药癌症耐HER2+抗体化疗剂、拉帕替尼、紫杉烷或蒽环类药物。
43.根据权利要求35-42中任一项所述的方法，其中所述耐化疗药癌症耐多柔比星或脂质体多柔比星。
44.根据权利要求35-42中任一项所述的方法，其中所述耐化疗药癌细胞耐曲妥珠单抗或培妥珠单抗。
45.根据权利要求35-42中任一项所述的方法，其中所述耐化疗药癌细胞耐拉帕替尼。
46.根据权利要求35-45中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒的平均尺寸不大于约50nm。
47.根据权利要求35-46中任一项所述的方法，其中所述双链寡核苷酸为DNA。
48.根据权利要求35-46中任一项所述的方法，其中所述双链寡核苷酸为RNA。
49.一种制备纳米颗粒组合物的方法，包括：
将载体多肽和双链寡核苷酸以小于约6:1的摩尔比组合，从而形成多个纳米颗粒；
其中所述载体多肽包括靶向细胞的区段、渗透细胞的区段和结合寡核苷酸的区段。
50.根据权利要求49所述的方法，其中所述载体多肽与所述双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1至小于约6:1。
51.根据权利要求49或50所述的方法，其中所述载体多肽与所述双链寡核苷酸的摩尔比为约4:1。
52.根据权利要求49-51中任一项所述的方法，进一步包括在将所述双链寡核苷酸和所述载体多肽组合之前，将所述双链寡核苷酸和小分子药物组合。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述双链寡核苷酸和所述小分子药物以约1:1至约1:60的摩尔比组合。
54.根据权利要求52或53中任一项所述的方法，其中所述双链寡核苷酸和所述小分子药物以约1:10或约1:40的摩尔比组合。
55.根据权利要求52-54中任一项所述的方法，进一步包括在将所述双链寡核苷酸和所述载体多肽组合之前，将未结合的小分子药物与所述双链寡核苷酸分开。
56.根据权利要求49-55中任一项所述的方法，进一步包括将未结合的载体多肽或未结合的双链寡核苷酸与所述多个纳米颗粒分开。
57.根据权利要求49-56中任一项所述的方法，进一步包括使所述纳米颗粒组合物浓缩。
58.根据权利要求49-57中任一项所述的方法，其中所述双链寡核苷酸为DNA。
59.根据权利要求49-58中任一项所述的方法，其中所述双链寡核苷酸为RNA。
60.根据权利要求49-59中任一项所述的方法，其中所述双链寡核苷酸的长度为约10个碱基对至约100个碱基对。
61.根据权利要求49-60中任一项所述的方法，其中所述小分子药物为化疗剂。
62.根据权利要求49-61中任一项所述的方法，其中所述小分子药物为蒽环类药物或紫杉烷。
63.根据权利要求49-62中任一项所述的方法，其中所述小分子药物为多柔比星。
64.根据权利要求49-63中任一项所述的方法，其中所述靶向细胞的区段包括调蛋白序列或其变体。
65.根据权利要求49-64中任一项所述的方法，其中所述渗透细胞的区段包括五邻体基底多肽或其变体。
66.根据权利要求49-65中任一项所述的方法，其中所述五邻体基底区段包括突变体五邻体基底。
67.根据权利要求49-66中任一项所述的方法，其中所述五邻体基底区段包括截短的五邻体基底。
68.根据权利要求49-67中任一项所述的方法，其中所述结合寡核苷酸的区段为带正电的。
69.根据权利要求49-68中任一项所述的方法，其中所述结合寡核苷酸的区段包括聚赖氨酸。
70.根据权利要求49-69中任一项所述的方法，其中所述结合寡核苷酸的区段包括十赖氨酸。
71.纳米颗粒组合物，其通过根据权利要求49-70中任一项所述的方法制备。
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