CN108845148A - 半滑舌鳎来源的外泌体夹心elisa检测方法及试剂盒 - Google Patents

半滑舌鳎来源的外泌体夹心elisa检测方法及试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN108845148A
CN108845148A CN201810728322.6A CN201810728322A CN108845148A CN 108845148 A CN108845148 A CN 108845148A CN 201810728322 A CN201810728322 A CN 201810728322A CN 108845148 A CN108845148 A CN 108845148A
Authority
CN
China
Prior art keywords
excretion body
antibody
cynoglossus semilaevis
source
value
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810728322.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108845148B (zh
Inventor
张博
赵娜
高燕
贾磊
刘克奉
鲍宝龙
车金远
高磊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
TIANJIN BOHAI AQUATIC PRODUCT RESEARCH INSTITUTE
Original Assignee
TIANJIN BOHAI AQUATIC PRODUCT RESEARCH INSTITUTE
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by TIANJIN BOHAI AQUATIC PRODUCT RESEARCH INSTITUTE filed Critical TIANJIN BOHAI AQUATIC PRODUCT RESEARCH INSTITUTE
Priority to CN201810728322.6A priority Critical patent/CN108845148B/zh
Publication of CN108845148A publication Critical patent/CN108845148A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108845148B publication Critical patent/CN108845148B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens

Abstract

一种半滑舌鳎来源的外泌体夹心ELISA检测方法及试剂盒，本发明属于鱼类生物技术领域，特别是海水鱼精液外泌体标志物应用领域。本发明利用抗CD63抗体作为捕获抗体、抗HSP90抗体作为检测抗体(酶标记抗体)，开发了针对半滑舌鳎精液来源的外泌体检测的双抗体夹心ELISA方法，并提供了一种可供鉴定及定量的试剂盒，用以鉴定半滑舌鳎精液中外泌体的标志蛋白，对于鱼类的其他体液来源的样本外泌体，以及其他标志蛋白鉴定具有重要的借鉴意义。本发明的方法特异性强，效率高且操作简单方便，且无需大型仪器设备及昂贵的化学试剂，具有推广价值。

Description

半滑舌鳎来源的外泌体夹心ELISA检测方法及试剂盒
技术领域
本发明属于鱼类生物技术领域，特别是半滑舌鳎来源的外泌体的ELISA方法鉴定应用领域。
背景技术
外泌体直径为30-120nm，是细胞外泌囊泡中体积较小的一种，广泛存在于动物体液内，包含不同的生物分子，如脂质，蛋白质和核酸。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。外泌体具有广泛的应用研究价值，在肿瘤研究、病理学分析、生物标志物应用中都具有广泛的应用。
外泌体的鉴定有较多的方法，常用的有透射电镜形态学鉴定、流式细胞仪鉴定、粒径分布鉴定以及基于外泌体标志蛋白的western blot的鉴定。透射电子显微镜分辨率可达0.1～0.2nm，可将被观察物体放大至数百万倍，适合进行外泌体双层囊膜超微结构观测；但透射电镜观察无法体现样本中所有外泌体颗粒的粒径分布情况及整体浓度；流式细胞仪可测定的粒径大小为150nm以上，并不适合检测游离的外泌体颗粒。纳米颗粒追踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)技术，可以快速、精准地分析外泌体粒径分布浓度，为外泌体存在提供有力证据。基于外泌体标志蛋白的western blot方法是比较传统的技术方法，可以定性的判断标志蛋白的存在。
ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay，sandwichtechnique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。
发明内容
本发明的目的是针对半滑舌鳎精液外泌体鉴定的问题，提出一种半滑舌鳎精液来源的外泌体夹心ELISA检测的方法，检测结果特异性强，能够实现对外泌体的定量检测，且操作简便、快捷。同时提供了一种鉴定、检测半滑舌鳎精液来源的外泌体的ELISA试剂盒，在水生动物中尚属首次，同时也为其他物种外泌体鉴定方法提供借鉴。
本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：
一种半滑舌鳎来源的外泌体夹心ELISA方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：
(1)样品收集：半滑舌鳎收集精液样本，收集精液后分别混样，进行精浆外泌体分离；
(2)对外泌体进行蛋白定量后，分装保存于-80℃备用；
(3)包被：按照100μL/孔将抗CD63的抗体1加入酶标板孔中，孵育一定时间后移除悬液；
(4)封闭：按照300μL/孔将封闭液加入酶标板孔中，孵育一定时间后移除封闭液并拍干；
(5)检测：向每孔中加入100μL外泌体悬液，再加入50μL辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体，混匀后孵育一定时间，移除并拍干，随后洗涤三次，拍干，再加入100μL/孔底物进行显色反应；孵育过程中的反应为捕获抗体、抗原与标记抗体一步法反应，捕获抗体为抗CD63抗体，检测抗体为辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体。
(6)终止：按照100μL/孔加入酸性终止液，终止反应；
(7)读数：采用双波长法(450nm/630nm)以酶标仪进行读数，得到OD值；
(8)判定结果：P/N值≥2.1则判定为阳性；对OD值及浓度作图，得到标准曲线。
进一步，所述步骤(3)的包被：先将抗CD63的鼠源单克隆抗体以碳酸盐缓冲液稀释，然后再包被于96孔酶标板上；
进一步，所述步骤(3)中包被缓冲液为0.05M碳酸盐缓冲液pH＝9.6。
进一步，所述步骤(5)的孵育反应温度为35-37℃，反应时间为1-2小时。
进一步，所述构建标准曲线的步骤具体包括：将外泌体倍比稀释为不同的浓度作为抗原进行检测，并根据其对应的OD值构建标准曲线。
本发明还提供根据半滑舌鳎来源的外泌体夹心ELISA方法构建的试剂盒，包括包被有抗CD63抗体的固相酶标板，及辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体、浓度已知的外泌体标准品、样品稀释液、洗涤液、显色液及终止液。
进一步，所述洗涤液为含有0.05％Tween-20的0.01M磷酸盐缓冲液，pH＝7.2-7.4。
进一步，所述显色液为单组份四甲基联苯胺(TMB)。
进一步，所述终止液为1M HCl。
所述试剂盒的使用方法：
1)在酶标板的孔中加入外泌体标准品100μL/孔及辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体50μL/孔，小心混匀，37℃孵育1-2小时，小心移除液体；
2)按300μL/孔加入洗涤液，洗涤3-5次后拍干酶标板；
3)以单组份TMB作为底物进行显色反应，100μL/孔，反应时间为10-30分钟，反应温度为35-37℃，使用终止液终止反应；
4)以酶标仪在450nm处进行读数，以630nm为参考波长；
5)判定结果：实验组OD值/阴性对照组OD值≥2.1，即P/N≥2.1视为阳性；
6)对OD值及外泌体标准品的浓度作图，得到标准曲线，之后据此对其他样本进行测试；外泌体标准品设置为6个梯度，根据检测后得到的OD值建立标准曲线(不通过原点)。
本发明与现有技术相比的有益效果：
本发明创新性地运用夹心ELISA方法对半滑舌鳎精液外泌体进行鉴定及定量，在水生动物中尚属首次。本鉴定方法具有特异性强、简便易行的优点，无需昂贵仪器与复杂操作，且鉴定结果可靠。可用于半滑舌鳎精液以及其他体液中外泌体的鉴定及检测，可实现多个样本同时检测。
附图说明
图1是外泌体电镜图片。
图2是外泌体夹心ELISA检测技术原理。
图3是外泌体检测标准曲线示例。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明做进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
实施例1
一种半滑舌鳎精液来源的外泌体夹心ELISA方法，包括以下步骤：
1、精液样本的收集
收集半滑舌鳎性成熟雄鱼精液0.5mL于离心管中。
2、外泌体的提取
(1)精液样本取0.5mL转移至1.5mLEP管，放置于4℃，1200g离心15分钟去除精子细胞，4℃，15000g离心20分钟去除小细胞杂质和碎片，用PBS稀释1倍后，使用0.45μm滤膜进行预过滤，过滤液再经0.22μm滤膜过滤；
(2)过滤后的样品用Total Exosome Isolation Kit试剂盒提取外泌体；
(3)收集溶解样为外泌体悬液，分装，-80℃保存备用；
3、外泌体的鉴定：日立H600IV型透射电镜观察(见图1)。
4、对所得外泌体保存备用。
5、进行ELISA检测(原理见图2)。
(1)将抗CD63的鼠源单克隆抗体以碳酸盐缓冲液稀释，所述碳酸盐缓冲液为0.05M，pH＝9.6，包被于96孔酶标板上，100μL/孔，4℃静置孵育过夜后，小心移除上清液；
(2)按300μL/孔加入含质量百分比1％BSA的封闭液，4℃静置过夜或37℃孵育1-2小时，小心移除封闭液；
(3)将待测外泌体悬液样本1、样本2分别加入到包被有抗CD63抗体的酶标板板孔中，100μL/孔，加入辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体50μL/孔，混匀后37℃孵育1小时，小心移除液体；同时设置阳性对照孔(此前经过鉴定的精液来源的外泌体)、阴性对照孔及空白对照孔。
(4)按300μL/孔加入洗涤液，洗涤3-5次后拍干酶标板，所述洗涤液为含有0.05％Tween-20的0.01M磷酸盐缓冲液，pH＝7.2-7.4；
(5)以单组份TMB作为底物进行显色反应，100μL/孔，反应时间为10-30分钟，反应温度为35-37℃，见孔内液体呈现明显蓝色，用酸终止；
(6)以酶标仪在450nm处进行读数，以630nm为参考波长；
(7)判定结果，(实验组OD值)/(阴性对照组OD值)≥2.1，即P/N≥2.1视为阳性；
(8)对OD值及外泌体标准品的蛋白浓度作图，得到标准曲线，外泌体标准品按10倍稀释法稀释为原液、1:10、1：100、1:1000、1:10，000及1:100，000 6个梯度，根据检测后得到的OD值建立标准曲线(如图3表1所示)。
(9)根据标准曲线得到待测外泌体悬液样本1、样本2的P/N值，判定结果。外泌体样本1、样本2检测结果均为阳性(P/N值≥2.1)。
表1外泌体检测结果
实施例2
一种半滑舌鳎血液来源的外泌体夹心ELISA法鉴定，包括以下步骤：
1、血液样本的收集
收集半滑舌鳎性成熟雄鱼血液0.5mL于离心管中，离心得到血清。
2、外泌体的提取
血清样本用Total Exosome Isolation Kit试剂盒提取外泌体，得到外泌体悬液。
3、外泌体的鉴定：日立H600IV型透射电镜观察。
4、将所得外泌体保存备用。
5、进行ELISA检测(原理见图2)，
(1)将抗CD63的鼠源单克隆抗体以碳酸盐缓冲液稀释，所述碳酸盐缓冲液为0.05M，pH＝9.6，包被于96孔酶标板上，100μL/孔，4℃静置孵育过夜后，小心移除上清液；
(2)按300μL/孔加入含质量百分比1％BSA的封闭液，4℃静置过夜或37℃孵育1-2小时，小心移除封闭液；
(3)将待测血清来源的外泌体悬液样本加入到包被有抗CD63抗体的酶标板板孔中，100μL/孔，加入辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体50μL/孔，混匀后37℃孵育1小时，小心移除液体；同时设置阳性对照孔(此前经过鉴定的精液来源的外泌体)、阴性对照孔及空白对照孔。
(4)按300μL/孔加入洗涤液，洗涤3-5次后拍干酶标板，所述洗涤液为含有0.05％Tween-20的0.01M磷酸盐缓冲液，pH＝7.2-7.4；
(5)以单组份TMB作为底物进行显色反应，100μL/孔，反应时间为10-30分钟，反应温度为35-37℃，见孔内液体呈现明显蓝色，用酸终止；
(6)以酶标仪在450nm处进行读数，以630nm为参考波长；
(7)判定结果，(实验组OD值)/(阴性对照组OD值)≥2.1，即P/N≥2.1视为阳性；
(8)对OD值及外泌体标准品的蛋白浓度作图，得到标准曲线，外泌体标准品按10倍稀释法稀释为原液、1:10、1：100、1:1000、1:10，000及1:100，000 6个梯度，根据检测后得到的OD值建立标准曲线。
(9)根据标准曲线得到待测血清来源的外泌体悬液样本的P/N值，判定结果。如表2所示，外泌体样本检测结果为阳性(P/N值≥2.1)。
表2外泌体检测结果
实施例3
一种半滑舌鳎精液来源的外泌体夹心ELISA法鉴定试剂盒，所述试剂盒包括它包括包被有抗CD63的鼠源单克隆抗体的酶标板，外泌体标准品、辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体1:2000-1:8000，样品稀释液、洗涤液、终止液和显色液；所述洗涤液为含有0.05％Tween-20的0.01M磷酸盐缓冲液，pH＝7.2-7.4；所述显色液为单组份TMB，所述终止液为1MHCl。
所述试剂盒的制备方法：
1、包被有抗CD63的鼠源单克隆抗体的酶标板的制作方法为：(1)将抗CD63的鼠源单克隆抗体以碳酸盐缓冲液(0.05M，pH＝9.6)稀释为一定浓度(1-5μg/mL)，包被于96孔酶标板上，100μL/孔，4℃静置孵育过夜后，小心移除上清液；
(2)按100-300μL/孔加入含1％BSA的封闭液，4℃静置过夜或37℃孵育1-2小时，小心移除液体；
(3)将封闭好的酶标板于室温下充分抽湿干燥6-12小时，并真空封装，保存于2-8℃；
2、配制梯度稀释的外泌体标准品、辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体(1:2000-1:8000)、样品稀释液、洗涤液、终止液、显色液等，分别分装保存于2-8℃。
应用所述试剂盒测定半滑舌鳎精液来源外泌体的相对含量
1、精液样本的收集
分别收集半滑舌鳎性成熟雄鱼(ZZ)及伪雄鱼(ZW)精液各0.5mL于离心管中。
2、外泌体的提取
精液样本分别用Total Exosome Isolation Kit试剂盒提取外泌体，得到外泌体悬液两份。
3、外泌体的鉴定：日立H600IV型透射电镜观察。
4、对所得外泌体保存备用。
5、进行ELISA检测。
将试剂盒从冷藏取出，平衡至室温。
加入外泌体6个梯度标准品至包被有抗CD63抗体的酶标板板孔中，100μL/孔，加入辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体50μL/孔，设置2复孔。
将待测外泌体悬液样本(ZZ)、样本(ZW)分别加入到包被有抗CD63抗体的酶标板板孔中，100μL/孔，加入辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体50μL/孔，设置2复孔。
同时设置阳性对照孔(此前经过鉴定的精液来源的外泌体)、阴性对照孔及空白对照孔，各设置2复孔，加样如表4所示。
混匀后37℃孵育1小时，小心移除液体后洗涤三次，拍干。
加入显色液100μL/孔，37℃反应20min，见孔内液体呈现明显蓝色，取出终止，100μL/孔。
以酶标仪进行读数(450nm/630nm)，并计算P/N值，构建标准曲线，判定结果。
6、检测结果：如表3所示，外泌体样本(ZZ)、样本(ZW)检测结果均为阳性(P/N值≥2.1)。根据标准曲线(见图3)计算，样本(ZZ)的浓度约为2.67μg/ml，样本(ZW)的浓度约为1.32μg/ml。
表3外泌体检测结果(OD值)
表4外泌体检测加样
进一步的，对于本领域的技术人员，对本发明针对的构思及技术要点进行变形，相应的改变应属于本发明所请求的权利要求。

Claims (10)

1.一种半滑舌鳎来源的外泌体夹心ELISA检测方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：
(1)样品收集：半滑舌鳎收集精液样本，收集精液后分别混样，进行精浆外泌体分离；
(2)对外泌体提取后进行蛋白定量，然后分装保存于-80℃备用；
(3)包被：按照100μL/孔将抗CD63的抗体1加入酶标板孔中，孵育一定时间后移除悬液；
(4)封闭：按照300μL/孔将封闭液加入酶标板孔中，孵育一定时间后移除封闭液并拍干；
(5)检测：向每孔中加入100μL外泌体悬液，再加入50μL辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体，混匀后孵育一定时间，移除并拍干，随后洗涤三次，拍干，再加入100μL/孔底物进行显色反应；
(6)终止：按照100μL/孔加入酸性终止液，终止反应；
(7)读数：采用双波长法以酶标仪进行读数，得到OD值；
(8)判定结果：P/N值≥2.1则判定为阳性；对OD值及浓度作图，得到标准曲线。
2.根据权利要求1所述的一种半滑舌鳎来源的外泌体夹心ELISA检测方法，其特征在于所述步骤(3)的包被：先将抗CD63的鼠源单克隆抗体以碳酸盐缓冲液稀释，然后再包被于96孔酶标板上。
3.根据权利要求1所述的一种半滑舌鳎来源的外泌体夹心ELISA检测方法，其特征在于所述步骤(3)中包被缓冲液为0.05M碳酸盐缓冲液pH＝9.6。
4.根据权利要求1所述的一种半滑舌鳎来源的外泌体夹心ELISA检测方法，其特征在于所述步骤(5)的孵育反应温度为35-37℃，反应时间为1-2小时。
5.根据权利要求1所述的一种半滑舌鳎来源的外泌体夹心ELISA检测方法，其特征在于所述构建标准曲线的步骤具体包括：将外泌体倍比稀释为不同的浓度作为抗原进行检测，并根据其对应的OD值构建标准曲线。
6.根据权利要求1-5任何一项所述方法构建的鉴定半滑舌鳎精液来源外泌体的夹心ELISA法试剂盒，包括包被有抗CD63抗体的固相酶标板，及辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体、浓度已知的外泌体标准品、样品稀释液、洗涤液、显色液及终止液。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于所述洗涤液为含有体积比0.05％Tween-20的0.01M磷酸盐缓冲液，pH＝7.2-7.4。
8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于所述显色液为单组份四甲基联苯胺。
9.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于所述终止液为1M HCl。
10.权利要求6所述试剂盒的使用方法：，其特征在于所述方法步骤如下：
1)在酶标板的孔中加入外泌体标准品100μL/孔及辣根过氧化物酶标记的抗HSP90抗体50μL/孔，小心混匀，37℃孵育1-2小时，小心移除液体；
2)按300μL/孔加入洗涤液，洗涤3-5次后拍干酶标板；
3)以单组份TMB作为底物进行显色反应，100μL/孔，反应时间为10-30分钟，反应温度为35-37℃，使用终止液终止反应；
4)以酶标仪在450nm处进行读数，以630nm为参考波长；
5)判定结果：实验组OD值/阴性对照组OD值≥2.1，即P/N≥2.1视为阳性；
6)对OD值及外泌体标准品的浓度作图，得到标准曲线，之后据此对其他样本进行测试；外泌体标准品设置为6个梯度，根据检测后得到的OD值建立不通过原点的标准曲线。
CN201810728322.6A 2018-07-05 2018-07-05 半滑舌鳎来源的外泌体夹心elisa检测方法及试剂盒 Expired - Fee Related CN108845148B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810728322.6A CN108845148B (zh) 2018-07-05 2018-07-05 半滑舌鳎来源的外泌体夹心elisa检测方法及试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810728322.6A CN108845148B (zh) 2018-07-05 2018-07-05 半滑舌鳎来源的外泌体夹心elisa检测方法及试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108845148A true CN108845148A (zh) 2018-11-20
CN108845148B CN108845148B (zh) 2021-02-05

Family

ID=64201615

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810728322.6A Expired - Fee Related CN108845148B (zh) 2018-07-05 2018-07-05 半滑舌鳎来源的外泌体夹心elisa检测方法及试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108845148B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111551732A (zh) * 2020-05-29 2020-08-18 武汉大学 定量检测体液中肿瘤来源细胞外囊泡pd-l1含量的方法、elisa试剂盒及使用方法
CN111948402A (zh) * 2020-07-14 2020-11-17 中山大学附属第一医院 一种检测EVs上携带的Der p 1的试剂盒及检测方法
CN115047186A (zh) * 2022-06-15 2022-09-13 暨南大学 一种新型的外泌体检测方法
CN115902204A (zh) * 2022-09-23 2023-04-04 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） 一种外泌体形式半乳糖凝集素9的检测方法与试剂盒

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101302561A (zh) * 2008-06-19 2008-11-12 中国水产科学研究院黄海水产研究所 半滑舌鳎遗传性别及ww超雌鱼鉴定方法
US20150044695A1 (en) * 2008-01-25 2015-02-12 Hansabiomed Ou Method and a Kit To Detect Malignant Tumors and Provide a Prognosis
CN106841613A (zh) * 2017-01-18 2017-06-13 上海良润生物医药科技有限公司 一种检测外泌体的方法及体系

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150044695A1 (en) * 2008-01-25 2015-02-12 Hansabiomed Ou Method and a Kit To Detect Malignant Tumors and Provide a Prognosis
CN101302561A (zh) * 2008-06-19 2008-11-12 中国水产科学研究院黄海水产研究所 半滑舌鳎遗传性别及ww超雌鱼鉴定方法
CN106841613A (zh) * 2017-01-18 2017-06-13 上海良润生物医药科技有限公司 一种检测外泌体的方法及体系

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MYRIAM OLIVEIRA-RODRÍGUEZ等: "Development of a rapid lateral flow immunoassay test for detection of exosomes previously enriched from cell culture medium and body fluids", 《JOURNAL OF EXTRACELLULAR VESICLES》 *
ZHANPENG SUN等: "Identification of exosomes and its signature miRNAs of male and female Cynoglossus semilaevis", 《SCIENTIFIC REPORTS》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111551732A (zh) * 2020-05-29 2020-08-18 武汉大学 定量检测体液中肿瘤来源细胞外囊泡pd-l1含量的方法、elisa试剂盒及使用方法
CN111948402A (zh) * 2020-07-14 2020-11-17 中山大学附属第一医院 一种检测EVs上携带的Der p 1的试剂盒及检测方法
CN115047186A (zh) * 2022-06-15 2022-09-13 暨南大学 一种新型的外泌体检测方法
CN115047186B (zh) * 2022-06-15 2023-02-14 暨南大学 一种外泌体检测方法
CN115902204A (zh) * 2022-09-23 2023-04-04 北京大学第三医院（北京大学第三临床医学院） 一种外泌体形式半乳糖凝集素9的检测方法与试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
CN108845148B (zh) 2021-02-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108845148A (zh) 半滑舌鳎来源的外泌体夹心elisa检测方法及试剂盒
DK160108C (da) Fremgangsmåde og udstyr til direkte eller indirekte påvisning af reaktion mellem et specifikt bindingsmiddel og den tilsvarende acceptorsubstans
US4847199A (en) Agglutination immunoassay and kit for determination of a multivalent immune species using a buffered salt wash solution
US5891651A (en) Methods of recovering colorectal epithelial cells or fragments thereof from stool
US5256532A (en) Methods, reagents and test kits for determination of subpopulations of biological entities
US7358099B2 (en) Process for (A) separating biological/ligands from dilute solutions and (B) conducting an immunochromatographic assay thereof employing superparamagnetic particles throughout
CN108872614B (zh) 用于从维生素d结合蛋白解离维生素d的溶液、相关的检测方法及用途
EP3602055B1 (en) Methods and kits for exosome isolation and quantification
WO1997037226A9 (en) Methods of recovering colorectal epithelial cells or fragments thereof from stool
CN107817232A (zh) 用于进行过敏症和自身免疫性疾病的诊断测定的自动化免疫分析系统
CN109521202A (zh) 一种基于数字免疫分析技术的低丰度蛋白质绝对定量方法
CA1340973C (en) Immunometric assay kit and method applicable to whole cells
CN111273017A (zh) 一种快速检测新型冠状病毒的荧光免疫层析试剂盒
CN109655608A (zh) 一种用于骨肉瘤诊断的外泌体蛋白及其即时检测方法
JP7444386B2 (ja) ヒト尿からのマイクロベシクルの分離方法及び分析方法
CN108872608A (zh) 一种用于检测犬瘟热病毒抗体的时间分辨荧光免疫试剂盒
CN105181964A (zh) 水貂阿留申病毒抗体胶体金检测试纸条及其制备方法
US6461825B1 (en) Immunometric assay kit and method applicable to whole cells
CN110988325A (zh) 封闭剂及包含该封闭剂的试剂盒
CN108872609A (zh) 一种用于检测犬细小病毒抗体的时间分辨荧光免疫试剂盒
CN112485452B (zh) 金属团簇作为人工抗体定量蛋白丰度的方法
CN116148463A (zh) 一种磁珠-抗体-膜糖蛋白复合物、应用及试剂盒
CN109061178A (zh) 一种鉴定半滑舌鳎精液来源外泌体的elisa方法
CN114280296A (zh) 一种新型冠状病毒（2019-nCOV）IgG/IgM抗体检测试剂盒及其制备方法
CN112980006A (zh) 蛋白交联纳米亲和微球及制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20210205

Termination date: 20210705

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee