CN108815350B - 一种龙血竭温敏凝胶的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,包括以下步骤:(1)取龙血竭,加入乙醇溶解,得龙血竭醇溶液;将HP‑β‑CD水溶液加入所述龙血竭醇溶液中,干燥,得龙血竭HP‑β‑CD包合物;(2)向所述龙血竭HP‑β‑CD包合物中加入凝胶基质,混匀,制得龙血竭包合物温敏凝胶。本发明的优点是:采用的包合方法简单可行,有较好的稳定性和重复性,可以用于龙血竭羟丙基‑β‑环糊精包合物的制备,并且此方法制备的包合物可使龙血竭的溶解性得以改善。
Description
技术领域
本发明属于医药领域,特别涉及一种龙血竭温敏凝胶的制备方法。
背景技术
龙血竭为百合科植物剑叶龙血树Dracaena cochinchinensis(Lour.)S.C.Chen的含脂木材提取得到的树脂,性甘、温、咸、平,归心、肝经,其主要含有黄酮类化合物、紫檀芪、白藜芦醇以及甾醇类和皂苷类化合物等成分,具有活血散淤、定痛止血、敛疮生肌和补血益气等功效,现代药理学研究表明其具有镇痛、抗炎、抗菌、抗肿瘤和增加机体免疫力等作用。
宫颈柱状上皮异位,曾又称宫颈糜烂,是慢性宫颈炎最常见的病理改变。主要症状是:白带异常、外阴瘙痒、下腹和腰骶部疼痛、尿频和排尿困难,不仅给病人带来痛苦,也会影响患者的生育能力。如果没有接受有效的治疗,可能发展为宫颈癌。因此找到一种治疗宫颈糜烂更有效果的方法具有非常重要的意义。
龙血竭能用于治疗宫颈糜烂,但适宜阴道给药的龙血竭温度敏感型原位凝胶剂尚待开发。目前市售的龙血竭产品主要是经过粉碎直接灌装的胶囊剂。由于龙血竭水溶性极差,生物利用度低,严重影响了其疗效。由此,改善龙血竭的溶解性,增加药物溶出度,提高药物生物利用度,具有重要研究价值。
发明内容
针对上述问题,本发明的目的是提供一种使用方便,效果显著的龙血竭温敏凝胶的制备方法。
为实现上述目的,本发明所采用的技术方案是:
一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,包括以下步骤:
(1)取龙血竭,加入乙醇溶解,得龙血竭醇溶液;将HP-β-CD水溶液加入所述龙血竭醇溶液中,干燥,得龙血竭HP-β-CD包合物;
(2)向所述龙血竭HP-β-CD包合物中加入凝胶基质,混匀,制得龙血竭包合物温敏凝胶。
作为优选,所述步骤(2)中还包括向所述龙血竭包合物温敏凝胶加入缓冲液调配的工序。
作为优选,所述步骤(1)中乙醇选自体积百分比浓度为95%的乙醇溶液;包合过程本身是一种物理过程,在进行包合时药物分子首先溶解在溶剂中,然后再与HP-β-CD形成包合物。在包合过程中,疏水力是促进包合的主要推动力,所以包合一般在水中或稀醇中进行。由于龙血竭易溶于乙醇和甲醇,但考虑到对人体的危害情况,故选择乙醇做溶剂。本实验制备的包合物是固体粉末,较液体形态稳定性好。
所述龙血竭与HP-β-CD主客分子质量比为1:6~12;所述HP-β-CD水溶液加入的方式采用在30℃~60℃的条件下边搅拌边逐滴加入的方式来进行;所述HP-β-CD水溶液加入工序完成后,在30℃~60℃的恒温条件下搅拌1~4小时。
作为优选,所述龙血竭与HP-β-CD主客分子质量比为1:8;所述HP-β-CD水溶液加入的方式采用在40℃~50℃的条件下边搅拌边逐滴加入的方式来进行;所述HP-β-CD水溶液加入工序完成后,在40℃~50℃的恒温条件下搅拌2~3小时。
本发明中,在包合时,分别采用以下方法进行研究,如下:
1.研磨法
取4g HP-β-CD于研钵中,加入少量水研匀,另取龙血竭粉末1g,加入适量95%乙醇使其充分溶解,向研钵中逐滴加入龙血竭乙醇溶液,充分研磨成糊状,干燥,得粉末。
2.超声波法
取4g HP-β-CD于锥形瓶中,加入适量蒸馏水使其溶解,超声的同时,精密称取龙血竭粉末用少量乙醇溶解后缓慢加入到HP-β-CD水溶液中,继续超声4h,干燥,得红色粉末。
3.中和法
取4g HP-β-CD于烧杯中,加入适量水,磁力搅拌使其溶解,另取龙血竭粉末1g溶于适量乙醇中,将其缓慢加入到烧杯中,加热,60℃下滴加稀NaOH溶液至pH为10,继续保温搅拌1h,冷却至室温,缓慢滴加稀酸至中性,继续搅拌数小时,干燥,研细,得红色粉末。
4.饱和水溶液法
称取HP-β-CD于适量水中使之成为饱和HP-β-CD溶液,另精密称取适量龙血竭粉末,加入少量95%乙醇使之溶解,再将其缓慢加至HP-β-CD饱和溶液中,继续在40℃下加热搅拌3h,溶液蒸干,研细,得红色粉末。
5.水溶液搅拌法
精密称取8g HP-β-CD溶于40mL蒸馏水中,加热至50℃,再精密称取1g龙血竭粉末溶于适量95%乙醇中,向HP-β-CD水溶液中缓慢滴加龙血竭乙醇溶液,滴完后开始计时,中速搅拌3h,抽滤,滤液蒸干研细,得粉末。
分别称取上述方法制备的包合物1g,加入适量水中使其充分溶解,依次命名为包合物1、2、3、4、5,通过观察上述包合物的溶解性可知,包合物5可完全溶解,而包合物1-4不能充分溶解,所以本发明优选选择水溶液搅拌法制备龙血竭羟丙基-β-环糊精。
为进一步研究包合物制备工艺单因素的影响,还做出了以下试验:
包合温度对包合的影响
先精密称取龙血竭粉末,加入95%乙醇使其充分溶解,再精密称取HP-β-CD粉末至100mL烧杯中,加入40mL蒸馏水使其充分溶解,龙血竭与HP-β-CD主客分子质量比为1:8,分别在30℃、40℃、50℃、60℃不同温度下,边搅拌边向HP-β-CD水溶液中逐滴加入龙血竭醇溶液,恒温搅拌3h,抽滤,滤液水浴蒸干,所得粉末即为龙血竭HP-β-CD包合物。
表1包合温度对包合的影响
包合温度(℃) | 30 | 40 | 50 | 60 |
包合率(%) | 57.02 | 61.40 | 66.70 | 66.86 |
收率(%) | 74.44 | 76.67 | 73.33 | 64.44 |
综合评分 | 60.50 | 64.45 | 68.03 | 66.38 |
其中,包合率、包合物收率和综合评分的计算公式如下:
包合率=包合物中龙血素AB的量/投入龙血竭中龙血素AB的量×100%
包合物收率=包合物质量/(投入的HP-β-CD质量+投入龙血竭质量)×100%
综合评分=包合率×0.8+包合物收率×0.2
由表1可知,随着温度的升高,包合率有所上升,但50℃到60℃变化并不明显,综合评分随着包合温度的升高而升高,但当温度超过50℃时,综合评分减小,40℃和60℃的综合评分均小于50℃,所以实验中选择50℃为包合的最佳温度。
包合时间对包合的影响
先精密称取龙血竭粉末,加入适量95%乙醇使其充分溶解,再精密称取HP-β-CD粉末至100mL烧杯中,加入40mL蒸馏水使其充分溶解,主客分子质量比为1:8,边搅拌边滴加龙血竭醇溶液,50℃下恒温搅拌时间分别为1h、2h、3h、4h,抽滤,滤液水浴蒸干,即得龙血竭HP-β-CD包合物。按2.1.1.1项下色谱条件进行含量测定。结果见表2。
表2包合时间对包合的影响
包合时间(h) | 1 | 2 | 3 | 4 |
包合率(%) | 67.63 | 67.36 | 70.20 | 69.51 |
收率(%) | 75.59 | 74.23 | 72.28 | 70.98 |
综合评分 | 69.22 | 68.73 | 70.62 | 69.80 |
由表2可知,随着包合时间的增大,包合率和综合评分变化并不显著,收率有所降低,考虑到2h和4h的综合评分均低于3h的综合评分,所以实验选择3h为最佳包合时间。
包合速度对包合的影响
先精密称取龙血竭粉末,加入95%乙醇使其充分溶解,再精密称取HP-β-CD粉末至100mL烧杯中,加入40mL蒸馏水使其充分溶解,主客分子质量比为1:8,50℃下分别用不同速度(大、中、小)搅拌3h,边搅拌边滴加龙血竭乙醇溶液,滴加完毕开始计时,抽滤,滤液水浴蒸干即得龙血竭HP-β-CD包合物。按2.1.1.1项下色谱条件进行含量测定。结果见表3。
表3包合速度对包合的影响
包合速度 | 大 | 中 | 小 |
包合率(%) | 67.60 | 69.73 | 67.53 |
收率(%) | 70.24 | 73.90 | 71.80 |
综合评分 | 68.13 | 70.56 | 68.38 |
由表3可知,随着搅拌速度的改变,对包合没有太大影响,不过从表中可以看出,包合速度为中速时,其包合率、收率和综合评分均高于其余两者,所以实验中选择的包合速度为中速。
主客分子质量比对包合的影响
先精密称取龙血竭粉末,加入95%乙醇使其充分溶解,再精密称取HP-β-CD粉末至100mL烧杯中,加入40mL蒸馏水,使其充分溶解,50℃下用中速搅拌3h,主客分子质量比分别为1:6、1:8、1:10、1:12,边搅拌边滴加龙血竭乙醇溶液,抽滤,滤液蒸干,即得包合物。按2.1.1.1项下色谱条件进行含量测定。结果见表4。
表4主客分子质量比对包合的影响
由表4可知,主客分子质量比为1:12的综合评分明显低于前三者,虽然主客分子质量比为1:10的收率高于质量比为1:6和1:8的收率,但是其综合评分却低于质量比为1:8,所以主客分子最佳质量比为1:8。
影响包合率的因素有很多,比如包合时间、包合温度、包合速度、主客分子质量比等因素。通过单因素考察试验选择包合时间、包合温度、主客分子质量比作为正交试验因素,每个因素选择三个水平:包合时间2h、3h、4h(A);包合温度40℃、50℃、60℃(B)及主客分子质量比1:6、1:8、1:10(C),以包合率和包合物收率的综合评分为评价指标,权重系数分别为0.8、0.2,进行3因素3水平L9(34)正交试验设计,选择最佳制备工艺。因素水平表见表5、正交试验安排与结果见表6、方差分析结果见表7。
表5因素水平表
水平 | A/h | B/℃ | C/(g/g) |
1 | 2 | 40 | 1:6 |
2 | 3 | 50 | 1:8 |
3 | 4 | 60 | 1:10 |
表6正交试验安排与结果
表7方差分析结果
方差来源 | 偏方平方和 | 自由度 | F | P |
A | 15.652 | 2 | 1.929 | 19.000 |
B | 1.840 | 2 | 0.227 | 19.000 |
C | 258.831 | 2 | 35.231 | 19.000 |
误差 | 8.11 | 2 |
通过直观分析,影响包合率的主次因素为C>A>B,最佳工艺条件为A2B3C3。但是A、B两因素中的三个水平很接近,遵照操作方便原则,因素选择A1、B1,C因素中二、三水平比较接近,所以选择C2。最后确定包合物的制备工艺条件为A1B1C2,即包合时间2h,包合温度40℃,龙血竭与HP-β-CD质量之比为1:8(g/g)。
包合工艺验证
根据上述正交试验优选的最佳制备工艺条件为A1B1C2,即包合时间2h,包合温度40℃,龙血竭与HP-β-CD质量之比为1:8(g/g),平行制备三批包合物,并测定其包合率和包合物收率的综合评分。结果见表8。
表8包合工艺验证结果
由表8可知,综合评分均高于正交试验中各试验结果,三批包合物的RSD值为1.94%,说明该制备工艺重现性好,合理可行。
包合物评价
紫外光谱扫描(UV)
将适量龙血素AB对照品、龙血竭、龙血竭与羟丙基-β-环糊精物理混合物、羟丙基-β-环糊精以及包合物分别溶于甲醇中,在室温下于200-800nm范围进行紫外扫描,结果如图1。
图1中,1-包合物,2-HP-β-CD,3-物理混合物,4-龙血竭。
由紫外扫描图谱可知,包合物在285nm左右有一个吸收峰,HP-β-CD、物理混合物、龙血竭在285nm处没有吸收峰,故表明龙血竭与HP-β-CD形成了新的物相。
差示扫描量热法(DSC)
精密称取龙血竭粉末、羟丙基-β-环糊精、龙血竭羟丙基-β-环糊精的简单混合物、包合物四个样品各5mg进行差示扫描热分析:氧化铝为参比物,量程±100μV,升温范围30-350℃,升温速率为10℃/min,得DSC图谱,结果如图2。
图2中,1-HP-β-CD,2-包合物,3-物理混合物,4-龙血竭。
由DSC图谱可知,龙血竭与物理混合物二者都出现吸热峰,而HP-β-CD以及包合物没有出现吸热峰,证明龙血竭与HP-β-CD形成了包合物。
薄层色谱法(TLC)
取龙血素AB标准品的甲醇溶液作为样品1;龙血竭甲醇溶液为样品2;龙血竭-HP-β-CD的简单混合物甲醇溶液为样品3;龙血竭HP-β-CD包合物的甲醇溶液为样品4;HP-β-CD的甲醇溶液为样品5。吸取上述5种溶液各6μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60-90℃):乙酸乙酯(60:40)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇液,105℃加热至斑点清晰,结果如图3。
由图3中可知,包合物在对照品龙血素AB的色谱上隐约有相似的斑点,HP-β-CD无斑点。
溶解性
取10mL水,分别精密称取龙血竭粉末和包合物粉末,使之成为饱和溶液,结果见表9。
表9包合物的溶解性结果
龙血竭包合物的溶解度明显高于龙血竭,表明羟丙基-β-环糊精对龙血竭的水溶性有显著提高。
本发明在使用紫外光谱扫描时,用不同的溶剂有不同的结果,当使用甲醇做溶剂时,包合物与龙血竭药材及物理混合物具有相似的吸收峰,但当用水作为溶剂时,在285nm处无相似的吸收峰。采用薄层色谱法对龙血竭包合物进行评价时,由图3可知,包合物在对照片色谱中有相似的点,但浓度很低,说明有部分龙血竭没有被包合。
温敏型龙血竭原位凝胶使用的基质为水溶性基质,但龙血竭在水中几乎不溶,在凝胶中不易分散,不利于凝胶成型。本发明制备的龙血竭羟丙基-β-环糊精包合物极大地改善了龙血竭的水溶性,为后续凝胶的制备提供了基础。经研究发现,制备龙血竭羟丙基-β-环糊精包合物的最佳包合方法是水溶液搅拌法,通过单因素试验和正交试验得出龙血竭的最佳包合工艺是包合时间2h,包合温度40℃,龙血竭与HP-β-CD质量比1:8,经3批包合工艺验证,包合率均为84%以上,因此优化的制备工艺较好。
作为优选,所述步骤(1)中龙血竭HP-β-CD包合物中龙血素A和龙血素B含量的HPLC测定,采用乙腈-0.5%冰醋酸=26:74作为流动相。
本发明通过HPLC测定包合物中龙血素A、龙血素B的含量,使用乙腈-0.5%冰醋酸=26:74作为流动相,该方法简便易行,专属性强,具有较好的重复性和稳定性,可用于包合物中龙血素A、龙血素B的含量测定。在进行色谱条件筛选的过程中发现在采用现有的流动相比例进行实验时,龙血素A、B不能很好的分离,所以通过增加水相比来延长出峰时间,使龙血素A、B达到较好分离,但是同样导致出峰时间推迟太多,同时也进行了梯度洗脱的考察,龙血素A、B也未能得到很好分离,所以最终选择了使用乙腈-0.5%冰醋酸=26:74作为流动相。
其中,现有的检测方法可采用以下方法中的一种来进行:为云南省食品药品监督管理局.云南省中药饮片标准:2005年版第一册[S].昆明:云南美术出版社,2005.
或,李云,萧伟,秦建平,郭瑛,祝倩倩.HPLC同时测定龙血竭及其提取物中5个有效成分的含量[J].中国中药杂志,2012,(07):929-933.
为验证本发明检测方法的科学合理,特作出以下试验:
HPLC测定龙血素A、B的含量
色谱条件
色谱柱为DIKAMC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.5%冰醋酸(26:74);检测波长:275nm;进样量:10μL;流速:1mL/min;柱温:35℃;理论塔板数以龙血素A计算不低于6000。
对照品溶液的制备
分别取龙血素A、B对照品适量,精密称定,加甲醇溶解制成分别含龙血素A 86.4μg/mL,龙血素B 41.2μg/mL的混合溶液。
供试品溶液的制备
取龙血竭粉末约0.1g,精密称定,用甲醇使溶解并定容至25mL,摇匀,用0.22μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得供试品溶液。
包合物供试品溶液的制备
取包合物粉末约0.5g,精密称定,置于10mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,超声20min,放冷,摇匀,用甲醇补至刻度,0.22μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得包合物供试品溶液。
HP-β-CD溶液的制备
取HP-β-CD 0.1g,精密称定,加甲醇使溶解并定容至25mL,摇匀,用0.22μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得HP-β-CD溶液。
专属性考察
按上述方法分别制备对照品溶液、供试品溶液、龙血竭包合物溶液及HP-β-CD溶液,分别精密吸取10μL上述溶液于色谱仪中,结果如图4-7所示。
线性关系
分别取龙血素A、龙血素B对照品适量,精密称定,加甲醇溶解制成分别含龙血素A86.4μg/mL龙血素B 41.2μg/mL的混合溶液。分别精密吸取1μL、2μL、5μL、10μL、15μL、20μL、25μL不同体积上述对照品溶液,注入高效液相色谱仪,测定龙血素A、龙血素B色谱峰积分面积,结果见表10。以龙血素A、龙血素B的进样量为横坐标,其峰面积为纵坐标,绘制标准曲线(见图8)。结果龙血素A对照品的回归方程为Y=3735.9X-6.0527(R2=0.9999),表明在0.0864μg~2.16μg范围内,龙血素A峰面积与进样量有良好的线性关系;龙血素B对照品的回归方程为Y=3131.7X-22.62(R2=0.9999),表明在0.0412μg~1.03μg范围内,龙血素B峰面积与进样量有良好的线性关系。
表10龙血素A、龙血素B线性考察结果
稳定性试验
取龙血素A、B对照品,包合物供试品适量依法制备对照品溶液和包合物供试品溶液,于第0h、4h、8h、12h、16h,分别吸取10μL注入液相色谱仪,测定峰面积,结果见表11。
表11稳定性实验结果
结果表明:在对照品溶液和包合物供试品溶液中龙血素A、B在16h内的RSD值均<2%,说明在16h内龙血素A、B的甲醇溶液是稳定的。
重复性试验
取同一批次包合物粉末6份,各0.5g,精密称定,按2.1.1.4项下包合物供试品制备方法制备样品,进行龙血素A、B的含量测定,结果见表12。
表12重复性试结果
由重复性试验结果可以看出,龙血素A的RSD值为1.24%,龙血素B的RSD值为1.15%,两者均小于2%,所以该方法的重复性良好。
准确度试验
取同一已知含量的龙血竭HP-β-CD包合物(含龙血素A 0.5282mg/g,龙血素B0.5959mg/g)9份,每份0.5g,精密称定,精密加入对照品溶液(含龙血素A 86.4μg/mL,龙血素B 41.2μg/mL)适量(5mL、10mL、15mL三个不同水平,每个水平三份),甲醇定容到25mL,用高效液相色谱仪测定龙血素A和龙血素B的含量,计算回收率。龙血素A结果见表13,龙血素B结果见表14。按下式1计算加样回收率。
加样回收率(%)=(实际测得量-样品含量)/对照品加入量×100%
表13龙血素A加样回收率实验结果
表14龙血素B加样回收率实验结果
结果表明:龙血素A、B的平均加样回收率分别为99.26%和100.11%,RSD小于2%,表明本含量测定方法稳定可靠。
作为优选,所述步骤(2)中凝胶基质由以下重量份数的组分制成:0.8~1.2份P407、0.1~0.4份P188和0.005~0.02份HPMC;
或所述步骤(2)中凝胶基质由三嵌段共聚物PPP和水制成,所述三嵌段共聚物PPP与水的质量比为1:3~8。
为优选出本发明凝胶基质的配方,特做出以下试验:
不同凝胶基质处方预实验如下:
处方一:18%P407、5%P188、0.2%HPMC[20]
①.取0.9036g P407、0.2506g P188和0.0109g HPMC于烧杯中,加水5ml,搅拌均匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,制得空白温敏凝胶。转移至试管,测得胶凝温度为36.5℃,胶凝时间为80s。
②.取0.9038g P407、0.2543g P188和0.0104g HPMC于烧杯中,加水5ml,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,加入1.5034g包合物,搅拌均匀,制得龙血竭包合物温敏凝胶。转移至试管测得胶凝温度为32.0℃,胶凝时间为85s。
处方二:P 407的用量为20%,P407∶P188=10∶1再添加2%丙二醇,混合均匀,冷藏24h,即得[22]。
①.取5.0182g P407、0.5078g P188于烧杯中,加水5ml,搅拌均匀,再加入0.5011g丙二醇,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,制得空白凝胶,转移至试管胶凝温度为24.5℃,胶凝时间60s。
②.取5.0600g P407、0.5023g P188于烧杯中,加水5ml,搅拌均匀,再加入0.5074g丙二醇,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,加入1.0231g包合物,搅拌均匀,制得龙血竭包合物温敏凝胶。转移至试管胶凝温度为24.5℃,胶凝时间为65s。
处方三:P407:P188:甘油:壳聚糖=16.3:5.7:5:0.6[23],
①.取4.0300g P407、1.4256gP188于烧杯中,加水5ml,搅拌均匀,再加入1.2423g甘油和0.1596g壳聚糖,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解。制得空白凝胶,观察发现底部有沉淀,测得胶凝温度为35℃,胶凝时间为90s。
②.取4.0084gP407、1.42936g P188于烧杯中,加水5ml,搅拌均匀,再加入1.4464g甘油和0.1643g壳聚糖,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,加入1.5034g包合物,搅拌均匀,观察发现底部有少量白色不溶物,加热至40℃仍未发生胶凝。
处方四:P407浓度为19%、P188浓度为4%、卡波姆浓度为0.3%、TMC(N-三甲基壳聚糖)浓度为5.5%[24]。
①.取4.7673g P407、1.0137g P188于烧杯中,加水5ml,搅拌均匀,再加入0.0785g卡波姆和1.3653g壳聚糖,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,观察发现该处方条件所得凝胶一直呈半固体胶凝状,未形成流动液体。
②.取4.7716gP407、1.00306g P188于烧杯中,加水5ml,搅拌均匀,再加入0.0785g卡波姆、1.3653g壳聚糖,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,加入1.5034g包合物,搅拌均匀,该凝胶一直为半固体状态,未形成流动液体。
处方五:20%P407,18%P188,0.1%海藻酸钠,1.5%PEG4000[25]。
①.取0.9914g P407、0.8951g P188于烧杯中,加水5ml,搅拌均匀,再加入.0574g海藻酸钠、0.0752g PEG4000,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解。制得空白凝胶,底部有絮状不溶物,加热至38.0℃未凝胶,继续加热至48.3℃胶凝,胶凝时间为88s。
②.取1.0052g P407、0.9063g P188于烧杯中,加水5ml,搅拌均匀,再加入0.0502g海藻酸钠、0.0743g PEG4000,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,加入0.3012g包合物,搅拌均匀,制得龙血竭包合物温敏凝胶。观察发现底部有絮状不溶物,加热至38.0℃未凝胶,继续加热至48.6℃胶凝,胶凝时间为94s。
处方六:P407∶P188∶甘油∶尼泊金乙酯=18∶2.96∶0.2∶0.2[16]。
①.取4.0085g P407、0.7402gP188于烧杯中,加水5ml,搅拌均匀,再加入0.0523g甘油,0.05142g尼泊金乙酯,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,测定加热至48.0℃未凝胶。
②.取4.0135g P407、0.7432gP18于烧杯中,加水5ml,搅拌均匀,再加入80.0508g甘油,0.05047g尼泊金乙酯,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,加入0.3002g包合物,搅拌均匀,加热至48.0℃未凝胶。
处方七:12%P407、5%P188、2%甘油、5%聚山梨酯80[26]。
①.取3.0034gP407、1.2507gP188于烧杯中,加水5ml,搅拌均匀,再加入0.0052g甘油和0.0121g聚山梨酯80,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解。得空白凝胶,测得胶凝温度为31.0℃,胶凝时间为98s。
②.取1.2014gP407、0.5102gP188于烧杯中,加水5ml,搅拌均匀,再加入0.0056g甘油,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,加入0.2998g包合物和0.0123g聚山梨酯80,搅拌均匀,制得龙血竭包合物温敏凝胶。测得胶凝温度为31.0℃,胶凝时间为102s。
处方八:泊洛沙姆P407:P188=150g:200g,无水乙醇250ml,加水至1000g[27]。
①.取1.4948gP407、2.0093gP188,于烧杯中,加入无水乙醇2.5ml,加水至总重为10g,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解。加热至42℃未胶凝。
②.取0.4948gP407、0.6693gP188,于烧杯中,加入无水乙醇2.5ml,加水至总重为10g,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,加入0.3032g包合物,搅拌均匀,加热至42℃未胶凝。
处方九:三嵌段共聚物PPP:水(1:5)
①.取0.2264gPPP加入1ml水中搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,得空白凝胶。测定胶凝温度为35.8℃,胶凝时间为70s。
②.取0.1976gPPP加入1ml水中搅拌均匀,搅匀,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,加入0.0567g包合物,搅拌均匀,制得龙血竭包合物温敏凝胶,测定胶凝温度为30.9℃,胶凝时间为75s。
小结:处方一制备所得温敏凝胶澄清、胶凝可逆性好、胶凝温度接近33-36℃,可调节空间大,并且胶凝时间适宜;处方二胶凝温度过低,该处方不宜制备温敏凝胶;处方三中加入包合物后无法胶凝,不宜制备包合物温敏凝胶;处方四所制备凝胶在4℃溶胀后即为半固体状态,不能作为龙血竭阴道用温敏凝胶基质处方;处方五胶凝温度高,超过体温,不宜用于阴道用温敏凝胶制备;处方六加入包合物后无法胶凝,不宜制备包合物温敏凝胶;处方七与处方一主要组成相同,胶凝温度和胶凝时间相近,并与处方一保留进行进一步研究;处方八不能胶凝,不宜制备温敏凝胶;处方九胶凝温度、胶凝时间尚可,保留进行进一步调节。综上所述,根据处方胶凝情况选择处方一、处方七和处方九进行进一步的研究。但处方一与处方七主要组成相同,甘油可作为后续加入保湿剂,合并研究,并进行处方一和处方九重复性验证,结果所筛处一和处方九重现性良好,适合做进一步研究。
作为优选,所述缓冲液选择pH4.0的磷酸盐-磷酸缓冲液、pH4.0的枸橼酸盐-枸橼酸缓冲液或pH4.0的醋酸盐-醋酸缓冲液中的一种。
缓冲液体系的选择及其对胶凝温度的影响
正常生理环境下,女性阴道pH值多在3.8~4.5之间。希望本制剂的pH值在此范围内。按处方一和处方九制备的凝胶各3份,用pH计测定其pH值,测得处方一平均pH值为4.8,处方九平均pH值为6.6。需用缓冲溶液对凝胶pH值进行调节。
缓冲液体系的选择:pH4.0的磷酸盐-磷酸缓冲液;pH4.0的枸橼酸盐-枸橼酸缓冲液和pH4.0的醋酸盐-醋酸缓冲液。
缓冲液溶液的配制:
a.磷酸-磷酸钠缓冲液的配制:取磷酸二氢钠1.2481g(先配制0.2mol/L的磷酸二氢钠溶液),加水至40ml,溶解。取氢氧化钠固体1.0020g,加适量水,溶解,将其逐滴加入磷酸二氢钠溶液中,调节pH值至4.0。
b.枸橼酸盐-枸橼酸缓冲液的配制:取枸橼酸1.0503g,加水至50ml,溶解,逐滴加入a中所配氢氧化钠溶液,调节pH值至4.0。
c.醋酸-醋酸钠缓冲液的配制[30]:取乙酸钠0.9053g,加冰乙酸0.49ml,加适量水,调节pH值至4.0。
缓冲液对处方一的影响
按上述处方一下泊洛沙姆系统比例各配置3份龙血竭温敏凝胶,分别加入三种缓冲盐溶液,测定胶凝温度和胶凝时间。结果如下:
醋酸-醋酸钠缓冲液,测定于32.0℃胶凝,胶凝时间为86s;磷酸盐缓冲液,加热至58℃未胶凝;柠檬酸缓冲液:加热至48℃未胶凝。
缓冲液对处方九的影响
按上述处方九配置3份龙血竭温敏凝胶,分别加入三种缓冲盐溶液,测定胶凝温度和胶凝时间。结果如下:
醋酸-醋酸钠缓冲液,测定于30℃胶凝,但室温放置不能恢复流动;磷酸盐缓冲液,加热至23℃发生胶凝,室温放置不能恢复液态;柠檬酸缓冲液:有沉淀析出,加热至46℃未胶凝。
由此可知三种缓冲液体系中醋酸-醋酸钠缓冲液对处方一凝胶的胶凝情况影响较小,经重复验证,结果相同,可用来调节温敏凝胶pH值,使其达到阴道用温敏凝胶理想pH值。另外两种缓冲液中凝胶不能胶凝。对于处方九三种缓冲液体系均对其有影响,加入缓冲液后凝胶遭无法恢复流动性。故排除处方九,留下处方一继续研究。
作为优选,所述步骤(2)中龙血竭HP-β-CD包合物占整个所述龙血竭包合物温敏凝胶质量的10%~42%。
采用处方一,固定P407为25%,P188为4%,HPMC为0.2%,分别配制5ml含包合物为6%(与2.2.3项下0.6%HPMC组相同)、10%、14%、18%、22%的龙血竭包合物温敏凝胶各3份,测定其胶凝温度与胶凝时间,取平均值。考察HPMC浓度对胶凝温度和胶凝时间的影响,结果见表15.
表15包合物用量考察
包合物百分比(%) | 胶凝温度(℃) | 胶凝时间(s) |
10% | 40.0 | 77 |
14% | 41.2 | 108 |
18% | 42.0 | 121 |
22% | 44.8 | 105 |
26% | 49.5 | 115 |
30% | 53.0 | 97 |
34% | 59.3 | 88 |
38% | 59.5 | 99 |
42% | 64.2 | 107 |
39% | 60.2 | 102 |
40% | 61.2 | 92 |
41% | 63.2 | 98 |
由表15知,随着包合物含量的增加,胶凝温度逐渐上升,在可凝胶范围内保证流动性的前提下选择胶凝温度适宜的最大包合物用量。进一步配制5ml含26%、30%、34%、38%、42%龙血竭包合物的温敏凝胶进行考察,方法同上,并将结果同绘于表15。实验中发现当包合物用量达到42%时,制剂能凝胶,但粘度增大,流动相明显较差。进一步调整包合物用量,配制5ml含39%、40%、41%龙血竭包合物的温敏凝胶进行考察,方法同上,并将结果同绘于表15。发现当包合物用量为40%时,制剂粘度适宜,流动相较好,因此选择40%包合物为最大载药量。
在载药量尽量大,保证流动性的基础上,对处方中各基质比例再调整。筛选得到的25%P407,4%P188,0.2%HPMC,因P-407加入比例较大,易于调整,故选择调整P407比例。固定包合物比例为40%,P188为4%,HPMC为0.2%,对基质比例进行调整。
作为优选,一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,包括以下步骤:按照重量份数,称取P407、P188和HPMC,加水溶解,混匀,在4℃的条件下放置24小时溶胀,制成凝胶基质,然后将龙血竭HP-β-CD包合物加入到凝胶基质中,再加入防腐剂、保湿剂,混匀,然后在105℃的条件下杀菌30分钟,放置恢复为液态,再放置100~200小时,即得。
为验证本发明的制备方法的科学合理,对基质溶胀时间考察
固定P407为25%,P188为4%,HPMC为0.2%,于4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,包合物为33%,0.05%尼泊金乙酯和5%甘油,105℃杀菌30min。方法同2.2.7。在配置凝胶时取处方量P407,P188,HPMC加水溶解,分别溶胀8h,12h,16h,20h,24h,28h,32h后,加入包合物、尼泊金乙酯和甘油,105℃杀菌30min。测定胶凝温度和胶凝时间,结果见表16。
表16溶胀时间考察
溶胀时间(h) | 胶凝温度(℃) | 胶凝时间(s) |
8h | 27.1 | 72 |
12h | 29.2 | 84 |
16h | 30.2 | 89 |
20h | 31.5 | 95 |
20h | 32.0 | 99 |
24h | 34.8 | 102 |
28h | 34.8 | 101 |
32h | 34.9 | 102 |
由表16知P407.P188,HPMC在4℃冰箱中放置24h使溶胀,搅拌使溶解,再加入包合物,尼泊金乙酯和甘油,胶凝温度达到理想要求,继续溶胀胶凝温度变化较小,说明24h时基质已充分溶胀。选定溶胀时间为24h。
表17小试工艺验证
由小试工艺验证结果知,按上述工艺条件所得6份凝胶的胶凝温度平均为34.78℃,胶凝时间平均102.83s,接近理想值,选定为最佳工艺。
凝胶剂作为一种新型制剂,具有局部作用快,药物易吸收,透气性好,具有很好的生物相容性,可长时间作用于患处,可发挥缓控释作用的特点。温敏型龙血竭原位凝胶使用的基质为水溶性基质,但龙血竭在水中几乎不溶,在凝胶中不易分散,将导致其成型、释放度、稳定性等均存在问题。
温敏凝胶(hermosensitive gels)是指以溶液状态给药后,利用高分子材料对外界温度的响应在用药部位立即发生相转变,由液态转化为非化学交联半固体凝胶的制剂。温敏凝胶广泛用于缓释、控释及脉冲释放等新型给药系统,其相变主要通过凝胶基质的种类与比例调整而实现。凝胶基质通过螺旋、胶束聚集等方式使聚合物发生可逆交联而成胶,对于制剂的相变温度、释放时间等关键参数起着至关重要的作用。温度敏感型原位凝胶(thermosensitive in situgel)是目前研究较为广泛的敏感型原位凝胶之一,其为一类对温度变化敏感的高分子聚合物,聚合物会随着温度变化发生相变而形成凝胶,即环境温度低于临界相变温度时呈现液态,高于临界相变温度时呈现半固体凝胶状态,其优点在于以原位凝胶为载体携带药物可直接患部给药,提高药物生物利用度,组织亲和力较强,给药后可亲和给药部位并迅速发生相变形成半固体凝胶状,高度亲水性的三维网格结构可将药物束缚其中,延长药物在用药部位的滞留时间,具有良好的缓释作用。另外温度敏感型原位凝胶组织相容性较好,对机体刺激性小,使用方便有效,适用范围广,局部作用药物、全身作用药物、大分子药物、亲水性药物和疏水性药物等多数药物均可以原位凝胶为载体。
阴道用温敏凝胶(vaginal thermosensitive in si-tu gel,VTISG)异于普通凝胶,在贮存温度下呈液态,置入阴道后,响应温度变化发生相变,转化成非化学交联的半固体凝胶,相变后的水凝胶黏着于多褶皱的阴道组织相当牢固,不仅克服传统阴道制剂覆盖率低和延展性差的缺点,且能增加药物的分散均匀性,降低渗漏率,其制备工艺简单,使用方便,独特的液固转化特性,延长了药物的局部滞留时间,增加了药物的生物利用度。阴道用中药水性凝胶剂是近几年来局部外用制剂研发的热点,具有延长滞留时间,易涂布,能渗入黏膜皱褶,无异物感,无刺激性,能提高患者的顺应性,易清洗等优点,临床上广泛应用于宫颈炎的治疗,其发展迅速,是一种具有广阔发展前景的阴道给药制剂。就研究现状看来,制备出包合率、收率均良好的包合物后与适宜的温敏凝胶基质制备出龙血竭HP-β-CD包合物温敏凝胶,将能极大改善龙血竭在治疗宫颈炎时剂型不合适造成的不方便,且能提高其生物利用度。
本发明具有以下有益效果:
采用的包合方法简单可行,有较好的稳定性和重复性,可以用于龙血竭羟丙基-β-环糊精包合物的制备,并且此方法制备的包合物可使龙血竭的溶解性得以改善。
附图说明
图1为紫外光谱扫描龙血竭、龙血竭与羟丙基-β-环糊精物理混合物、羟丙基-β-环糊精以及包合物的图谱;
图2为龙血竭粉末、羟丙基-β-环糊精、龙血竭羟丙基-β-环糊精的简单混合物、包合物四个样品进行差示扫描热分析的图谱;
图3为5个样品的薄层色谱图;
图4为龙血素AB对照品的HPLC图谱;
图5为龙血竭药材的HPLC图谱;
图6为龙血竭包合物的HPLC图谱;
图7为羟丙基-β-环糊精的HPLC图谱;
图8为龙血素A、B线性关系图。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是,对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明,但并不构成对本发明的限定。此外,下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1
一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,包括以下步骤:
(1)取龙血竭,加入体积百分比浓度为95%的乙醇溶液溶解,得龙血竭醇溶液;将HP-β-CD水溶液加入所述龙血竭醇溶液中,干燥,得龙血竭HP-β-CD包合物;龙血竭与HP-β-CD主客分子质量比为1:8;所述HP-β-CD水溶液加入的方式采用在45℃的条件下边搅拌边逐滴加入的方式来进行;所述HP-β-CD水溶液加入工序完成后,在45℃的恒温条件下搅拌2.5小时。
(2)向所述龙血竭HP-β-CD包合物中加入凝胶基质,混匀,制得龙血竭包合物温敏凝胶,加入缓冲液调配,即得。
其中,龙血竭HP-β-CD包合物占整个所述龙血竭包合物温敏凝胶质量的10%~42%。凝胶基质由以下重量份数的组分制成:1份P407、0.2份P188和0.01份HPMC;所述缓冲液选择pH4.0的磷酸盐-磷酸缓冲液,该pH4.0的磷酸盐-磷酸缓冲液的配制方法包括以下步骤:取磷酸二氢钠1.2481g,加水至40ml,溶解,得磷酸二氢钠溶液,然后取氢氧化钠固体1.0020g,加适量水,溶解,将其逐滴加入所述磷酸二氢钠溶液中,调节pH值至4.0。
实施例2
一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,包括以下步骤:
(1)取龙血竭,加入体积百分比浓度为95%的乙醇溶液溶解,得龙血竭醇溶液;将HP-β-CD水溶液加入所述龙血竭醇溶液中,干燥,得龙血竭HP-β-CD包合物;所述龙血竭与HP-β-CD主客分子质量比为1:12;所述HP-β-CD水溶液加入的方式采用在60℃的条件下边搅拌边逐滴加入的方式来进行;所述HP-β-CD水溶液加入工序完成后,在30℃~60℃的恒温条件下搅拌4小时。
(2)向所述龙血竭HP-β-CD包合物中加入凝胶基质,混匀,制得龙血竭包合物温敏凝胶,加入缓冲液调配,即得;
其中,龙血竭HP-β-CD包合物占整个所述龙血竭包合物温敏凝胶质量的10%~42%。所述凝胶基质由以下重量份数的组分制成:1.2份P407、0.4份P188和0.02份HPMC;所述缓冲液选择pH4.0的枸橼酸盐-枸橼酸缓冲液,该pH4.0的枸橼酸盐-枸橼酸缓冲液的配制方法包括以下步骤:取枸橼酸1.0503g,加水至50ml,溶解,逐滴加入氢氧化钠溶液,调节pH值至4.0。
实施例3
一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,包括以下步骤:
(1)取龙血竭,加入体积百分比浓度为95%的乙醇溶液溶解,得龙血竭醇溶液;将HP-β-CD水溶液加入所述龙血竭醇溶液中,干燥,得龙血竭HP-β-CD包合物;所述龙血竭与HP-β-CD主客分子质量比为1:6;所述HP-β-CD水溶液加入的方式采用在30℃的条件下边搅拌边逐滴加入的方式来进行;所述HP-β-CD水溶液加入工序完成后,在30℃的恒温条件下搅拌1小时。
(2)向所述龙血竭HP-β-CD包合物中加入凝胶基质,混匀,制得龙血竭包合物温敏凝胶,加入缓冲液调配,即得;
其中,龙血竭HP-β-CD包合物占整个所述龙血竭包合物温敏凝胶质量的25%。所述凝胶基质由以下重量份数的组分制成:0.8份P407、0.1份P188和0.005份HPMC;所述缓冲液选择pH4.0的醋酸盐-醋酸缓冲液,该pH4.0的醋酸盐-醋酸缓冲液的配制方法包括以下步骤:取乙酸钠0.9053g,加冰乙酸0.49ml,加适量水,调节pH值至4.0。
实施例4
一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,包括以下步骤:
(1)取龙血竭,加入体积百分比浓度为95%的乙醇溶液溶解,得龙血竭醇溶液;将HP-β-CD水溶液加入所述龙血竭醇溶液中,干燥,得龙血竭HP-β-CD包合物;龙血竭与HP-β-CD主客分子质量比为1:8;所述HP-β-CD水溶液加入的方式采用在50℃的条件下边搅拌边逐滴加入的方式来进行;所述HP-β-CD水溶液加入工序完成后,在40℃的恒温条件下搅拌2小时。
(2)按照重量份数,称取1.2份P407、0.1份P188和0.005份HPMC,加水溶解,混匀,在4℃的条件下放置24小时溶胀,得凝胶基质;向所述凝胶基质中加入龙血竭HP-β-CD包合物,再加入防腐剂、保湿剂,混匀,然后在105℃的条件下杀菌30分钟,放置恢复为液态,再放置200小时,即得。
其中,龙血竭HP-β-CD包合物占整个所述龙血竭包合物温敏凝胶质量的10%。
实施例5
一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,包括以下步骤:
(1)取龙血竭,加入体积百分比浓度为95%的乙醇溶液溶解,得龙血竭醇溶液;将HP-β-CD水溶液加入所述龙血竭醇溶液中,干燥,得龙血竭HP-β-CD包合物;龙血竭与HP-β-CD主客分子质量比为1:8;所述HP-β-CD水溶液加入的方式采用在50℃的条件下边搅拌边逐滴加入的方式来进行;所述HP-β-CD水溶液加入工序完成后,在50℃的恒温条件下搅拌2小时。
(2)按照重量份数,称取1.2份P407、0.1份P188和0.02份HPMC,加水溶解,混匀,在4℃的条件下放置24小时溶胀,得凝胶基质;向所述凝胶基质中加入龙血竭HP-β-CD包合物,再加入防腐剂、保湿剂,混匀,然后在105℃的条件下杀菌30分钟,放置恢复为液态,再放置150小时,加入缓冲液配制,即得。
其中,龙血竭HP-β-CD包合物占整个所述龙血竭包合物温敏凝胶质量的42%。缓冲液选择pH4.0的磷酸盐-磷酸缓冲液,该pH4.0的磷酸盐-磷酸缓冲液的配制方法包括以下步骤:取磷酸二氢钠1.2481g,加水至40ml,溶解,得磷酸二氢钠溶液,然后取氢氧化钠固体1.0020g,加适量水,溶解,将其逐滴加入所述磷酸二氢钠溶液中,调节pH值至4.0。
实施例6
一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,包括以下步骤:
(1)取龙血竭,加入体积百分比浓度为95%的乙醇溶液溶解,得龙血竭醇溶液;将HP-β-CD水溶液加入所述龙血竭醇溶液中,干燥,得龙血竭HP-β-CD包合物;所述龙血竭与HP-β-CD主客分子质量比为1:10;所述HP-β-CD水溶液加入的方式采用在50℃的条件下边搅拌边逐滴加入的方式来进行;所述HP-β-CD水溶液加入工序完成后,在40℃的恒温条件下搅拌2小时。
(2)向所述龙血竭HP-β-CD包合物中加入凝胶基质,混匀,制得龙血竭包合物温敏凝胶,加入缓冲液调配,即得。
其中,龙血竭HP-β-CD包合物占整个所述龙血竭包合物温敏凝胶质量的15%。凝胶基质由三嵌段共聚物PPP和水制成,所述三嵌段共聚物PPP与水的质量比为1:5。缓冲液选择pH4.0的磷酸盐-磷酸缓冲液,该pH4.0的磷酸盐-磷酸缓冲液的配制方法包括以下步骤:取磷酸二氢钠1.2481g,加水至40ml,溶解,得磷酸二氢钠溶液,然后取氢氧化钠固体1.0020g,加适量水,溶解,将其逐滴加入所述磷酸二氢钠溶液中,调节pH值至4.0。
实施例7
上述实施例1-6所得龙血竭HP-β-CD包合物中龙血素A和龙血素B含量的HPLC测定,采用乙腈-0.5%冰醋酸=26:74作为流动相。
小结与讨论
1.泊洛沙姆溶液的制备方法主要有高温法和低温法。高温法通过加热使泊洛沙姆溶解,低温法则是将泊洛沙姆分散于溶剂中,在4℃冷藏至其溶解后移至室温。和高温法比较,低温法更利于泊洛沙姆分子的充分溶胀,同时可在低温条件下与处方中其他成分混合,能够避免高温对药物稳定性产生影响。因此,本发明申请采用低温法制备凝胶。
2.温敏凝胶基质种类主要有:天然及改性聚合物;聚N-异丙基烯酰胺类聚合物;聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物;v交联PLGA嵌段共聚物等几大类,其中属于聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物类的泊洛沙姆系统较为常见,泊洛沙姆是由聚氧乙烯(PEO)和聚氧丙烯(PPO)组成的PEO-PPO-PEO型三嵌段共聚物,其研究较为深入,本发明申请主要选择泊洛沙姆系统为研究对象。温度从4℃上升到37℃时,P407会从低粘度的溶液变成半固体的凝胶态,是作为控释缓释药物良好的载体。HPMC与泊洛沙姆混合组成的温敏凝胶,其温敏性能良好,缓释作用明显。P407温敏型原位凝胶对于难溶性药物具有很强的溶解性,系统载药量充足,给药后在给药部位形成半固体的凝胶药物储库,可有效防止药物受到环境的影响。因此,因此本发明选择泊洛沙姆407作为龙血竭HP-β-CD包合物控释系统的载体具有优越性。
3.目前,用于治疗宫颈柱状上皮异位的给药剂型很多,但阴道直接给药的剂型大多数存在给药后有异物感,与阴道接触面小,滞留时间短等问题。而基于泊洛沙姆系统所制成的温敏型凝胶剂能很好地与阴道接触,对黏膜的刺激性小,无异物感,且在体内滞留时间较长,能延长给药时间。另外HPMC既可以降低温敏凝胶的胶凝温度又可以增加黏性,有利于延长药物在阴道内的滞留时间,提高药物吸收量,而高浓度的P407则在室温下就能形成凝胶,因此以胶凝温度及时间对P407、P188和HPMC的用量进行处方优化,优选P407的用量为32%,P188的用量为4%,并以0.2%HPMC作为黏度调整剂。所制得的龙血竭HP-β-CD包合物温敏凝胶在室温下(25℃)呈液体状态,在(34.0±1.0)℃呈胶凝状态,胶凝时间为100~105s,pH值约为4.5,符合阴道用温敏凝胶的基本要求。
4.本龙血竭HP-β-CD包合物温敏凝胶使用的基质为水溶性基质,但由于龙血竭在水中几乎不溶,在凝胶中不易分散,不利于凝胶成型。因此本发明先将龙血竭粉末制备成龙血竭HP-β-CD包合物,再由包合物制备得龙血竭HP-β-CD包合物温敏凝胶。先使龙血竭溶于乙醇,再与HP-β-CD材料包合,解决了龙血竭在水中的溶解性问题;由包合物制备温敏凝胶,主要改善龙血竭在治疗宫颈炎时剂型不合适,使用不方便的问题,提高其生物利用度,为后续动物药理药效实验提供了基础。
5.本发明所采用的温敏凝胶制备方法简单可行,所得凝胶胶凝温度稳定,胶凝时间适宜,制备的龙血竭HP-β-CD包合物温敏凝胶在低温下为流动液体,胶凝温度下转变为半固体状态,凝胶液均匀细腻,为深红棕色。龙血素A含量约为28μg/mL,龙血素B约为32μg/mL,含量测定、方法学考察结果符合要求,有较好的稳定性和重复性。但高温与低温实验,加速试验以及体外释放考察仍需进一步研究。
以上对本发明的实施方式作了详细说明,但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言,在不脱离本发明原理和精神的情况下,对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型,仍落入本发明的保护范围内。
Claims (7)
1.一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)取龙血竭,加入乙醇溶解,得龙血竭醇溶液;将HP-β-CD水溶液加入所述龙血竭醇溶液中,干燥,得龙血竭HP-β-CD包合物;
(2)向所述龙血竭HP-β-CD包合物中加入凝胶基质,混匀,制得龙血竭包合物温敏凝胶;
所述步骤(1)中乙醇选自体积百分比浓度为95%的乙醇溶液;所述龙血竭与HP-β-CD主客分子质量比为1:6~12;所述HP-β-CD水溶液加入的方式采用在30℃~60℃的条件下边搅拌边逐滴加入的方式来进行;所述HP-β-CD水溶液加入工序完成后,在30℃~60℃的恒温条件下搅拌1~4小时;
所述步骤(2)中还包括向所述龙血竭包合物温敏凝胶中加入缓冲液调配的工序;
所述步骤(2)中凝胶基质由以下重量份数的组分制成:0.8~1.2份P407、0.1~0.4份P188和0.005~0.02份HPMC;
或所述步骤(2)中凝胶基质由三嵌段共聚物PPP和水制成,所述三嵌段共聚物PPP与水的质量比为1:3~8;所述三嵌段共聚物PPP由1.2份P407、0.1份P188和0.005~0.02份HPMC组成。
2.根据权利要求1所述的一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,其特征在于:所述龙血竭与HP-β-CD主客分子质量比为1:8;所述HP-β-CD水溶液加入的方式采用在40℃~50℃的条件下边搅拌边逐滴加入的方式来进行;所述HP-β-CD水溶液加入工序完成后,在40℃~50℃的恒温条件下搅拌2~3小时。
3.根据权利要求1所述的一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中龙血竭HP-β-CD包合物中龙血素A和龙血素B含量的HPLC测定,采用乙腈-0.5%冰醋酸=26:74作为流动相。
4.根据权利要求1所述的一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,其特征在于:所述缓冲液选择pH4.0的磷酸盐-磷酸缓冲液、pH4.0的枸橼酸盐-枸橼酸缓冲液或pH4.0的醋酸盐-醋酸缓冲液中的一种。
5.根据权利要求4所述的一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,其特征在于:所述pH4.0的磷酸盐-磷酸缓冲液的配制方法包括以下步骤:取磷酸二氢钠1.2481g,加水至40ml,溶解,得磷酸二氢钠溶液,然后取氢氧化钠固体1.0020g,加适量水,溶解,将其逐滴加入所述磷酸二氢钠溶液中,调节pH值至4.0;
所述pH4.0的枸橼酸盐-枸橼酸缓冲液的配制方法包括以下步骤:取枸橼酸1.0503g,加水至50ml,溶解,逐滴加入氢氧化钠溶液,调节pH值至4.0;
所述pH4.0的醋酸盐-醋酸缓冲液的配制方法包括以下步骤:取乙酸钠0.9053g,加冰乙酸0.49ml,加适量水,调节pH值至4.0。
6.根据权利要求1所述的一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中龙血竭HP-β-CD包合物占整个所述龙血竭包合物温敏凝胶质量的10%~42%。
7.根据权利要求1所述的一种龙血竭温敏凝胶的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:按照重量份数,称取P407、P188和HPMC,加水溶解,混匀,在4℃的条件下放置24小时溶胀,加入龙血竭HP-β-CD包合物,再加入防腐剂、保湿剂,混匀,然后在105℃的条件下杀菌30分钟,放置恢复为液态,再放置100~200小时,即得。
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