CN108813090A - 家禽血浆蛋白的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种家禽血浆蛋白的制备方法，包括如下步骤：步骤一、取家禽血液，经处理得到血浆液；步骤二、对血浆液进行超声处理，超声功率为100～300W，超声时间为10～30min；步骤三、将经超声处理后的血浆液的pH调节至8.5～9.5，然后于超滤压力0.3～0.6MPa下进行超滤，截留分子量为5000～10000Da的血浆液，超滤循环时间为10～30min；步骤四、将步骤三中得到的血浆液进行干燥，得到家禽血浆蛋白粉。本发明方法制备的家禽血浆蛋白的溶解度由之前的50～56％提高至85～88％。本发明方法制备的血浆蛋白具有较好的抗氧化活性。

Description

家禽血浆蛋白的制备方法
技术领域
本发明属于血浆蛋白加工技术领域，涉及家禽血浆蛋白的制备方法。
背景技术
动物血液是畜禽屠宰加工业的副产物，其蛋白质含量丰富，含有多种营养物质及生物活性成分，素有“液体肉”的美誉。我国作为肉类生产的世界第一大国，禽畜血液资源十分丰富，年产量约为400×104t，但我国的畜禽血液资源浪费却十分严重。特别是我国家禽屠宰企业，约90％的企业基本未对其进行有效利用，血液的直接排放不仅造成宝贵的蛋白质资源浪费，还带来严重的环境污染。
血浆蛋白粉是利用屠宰后动物的血液，经过抗凝处理，离心分离得到血浆，再经喷雾干燥得到的产品。它占全血的55％～60％。血浆中含有90％～92％的水、6.5％～8.5％的蛋白质和2％的小分子物质。血浆蛋白是多种蛋白质的总称，主要成分为白蛋白、球蛋白和纤维蛋白，其中白蛋白在3类蛋白质中分子量最小，但在血浆中的含量最大，约占50％。球蛋白由α-，β-和γ-三部分组成，约占血浆蛋白含量的45％。充分利用动物血液资源，开发血浆蛋白粉产品，既能解决环境污染问题，又能充分利用蛋白资源，具有一定的意义。但由于血浆蛋白分子结构紧密、高度折叠，致使血浆蛋白结构柔顺性差，整体溶解性相应降低，进而由于不良的溶解环境影响了乳化性、起泡性等功能性质的发挥，极大地限制了血浆蛋白的产业化推广及应用范围。目前为止，有关血浆蛋白的多数研究仍集中在直接利用上，对其提高肉制品功能特性等方面缺乏深入研究。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种家禽血浆蛋白的制备方法。
为此，本发明提供的技术方案为：
一种家禽血浆蛋白的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、取家禽血液，经处理得到血浆液；
步骤二、对血浆液进行超声处理，超声功率为100～300W，超声时间为10～30min；
步骤三、将经超声处理后的血浆液的pH调节至8.5～9.5，然后于超滤压力0.3～0.6MPa下进行超滤，截留分子量为5000～10000Da的血浆液，超滤循环时间为10～30min；
步骤四、将步骤三中得到的血浆液进行干燥，得到家禽血浆蛋白粉。
优选的是，所述的家禽血浆蛋白的制备方法中，所述步骤一中，取所述家禽血液之后，首先加入复合抗凝剂至其与家禽血液中的质量体积比浓度为0.6％～1.0g/mL，混匀，然后于温度4～6℃静置，再于2000～3000g离心10～20min，取上层清液得到所述血浆液。
优选的是，所述的家禽血浆蛋白的制备方法中，所述步骤四中，所述干燥包括如下方法：首先将超滤后截留的血浆液于温度-30～-40℃预冻，然后于冷阱温度为-40～-50℃下冷冻干燥48～72h，得到所述家禽血浆蛋白粉。
优选的是，所述的家禽血浆蛋白的制备方法中，所述复合抗凝剂包含质量比依次为1:1:1～2:2:1的柠檬酸钠、枸橼酸钠和肝素。
优选的是，所述的家禽血浆蛋白的制备方法中，所述步骤三中，所述超滤包括6～8个循环，第一个循环持续时间不低于5分钟，第一个循环中的压力保持在0.6Mpa，相邻的两个循环之间，首先将超滤压力降低到0.3Mpa，之后再进入下一个超滤循环中。
优选的是，所述的家禽血浆蛋白的制备方法中，在所述步骤一和步骤二之间，还包括如下步骤：
步骤A、向步骤一中得到的血浆液中加入纳米壳聚糖，于10～30rpm摇床条件下保持10～20min，其中，所述纳米壳聚糖与所述血浆液的质量体积比为1：20～30，所述纳米壳聚糖活性炭的粒径为3～9nm；之后进入步骤二；
在所述步骤二之后和步骤三之前还包括如下步骤：
步骤B、将经超声处理后的血浆液和纳米壳聚糖的混合物经管式分离机分离除去纳米壳聚糖，之后将分离后的血浆液置于紫外灯光线下照射10～15min。优选的是，所述的家禽血浆蛋白的制备方法中，在所述步骤二和步骤三之间，还包括如下步骤：
步骤C、将经过超滤处理的血浆液进行纳滤处理，所述纳滤处理采用孔径2nm的纳滤膜，纳滤压力为0.5Mpa～0.7Mpa；
步骤D、向经纳滤处理后的血浆液中添加还原糖，所述还原糖与所述血浆液的质量体积比为0.1～0.9g/mL，混匀后，30～40℃静置5～10min，之后进入步骤四。
优选的是，所述的家禽血浆蛋白的制备方法中，所述还原糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖和麦芽糖中的任意一种或几种。
优选的是，所述的家禽血浆蛋白的制备方法中，所述步骤三中，使用NaOH/NaHCO3调节血浆液的pH至8.5～9.5。
优选的是，所述的家禽血浆蛋白的制备方法中，所述步骤一中，采用真空采血刀采集健康家禽血液得到所述家禽血液
本发明至少包括以下有益效果：
本发明对血浆液进行超声处理，能够有效破坏血浆蛋白分子的高度折叠和紧密地结构，改变血浆蛋白结构柔顺性，使其整体溶解性能提高，具有良好地乳化性和起泡性，增加了血浆蛋白粉的推广使用，扩大了其保护范围。通过超滤处理保留血浆蛋白中所需要分子量的血浆蛋白，除去小分子杂质。此外，本发明中的复合抗凝剂可有效快速地结合血液中的凝血因子，防止血液凝固。通过超滤截留所需要分子量的血浆蛋白，多次循环超滤，以提高截留效率。本发明中向血浆液中加入纳米壳聚糖，于10～30rpm摇床条件下保持10～20min；纳米壳聚糖与血浆液混合，且在晃动条件下，能够有效破坏血浆液的蛋白紧密性，使其结构打开，同时，由于纳米壳聚糖颗粒细小，且晃动条件柔和，因此，不会改变血浆蛋白的构象。之后进入步骤二。超声处理下，纳米壳聚糖的存在能够增强超声的空化效应、机械效应，形成协同作用，促进蛋白紧密结构地打开，提高血浆蛋白的溶解性。将经超声处理后的血浆液和纳米壳聚糖的混合物经管式分离机分离除去纳米壳聚糖，之后将分离后的血浆液置于紫外灯光线下照射，以进行灭菌处理。纳滤处理以对血浆蛋白进一步除杂。向经纳滤处理后的血浆液中添加还原糖，以对血浆蛋白进行还原保护，防止其氧化。对血浆蛋白进行低温冷冻干燥，不影响血浆蛋白粉的品质，以免温度过高，引起蛋白变形，或者构象变化，影响蛋白功能。
本发明使得制作的血浆蛋白的纯度较高、安全性好。并且，本发明的方法对温度和压力等无额外要求，适于推广使用。
经计算发现，本发明方法制备的家禽血浆蛋白的溶解度由之前的50～56％提高至85～88％。常规血浆蛋白和该方法制备的血浆蛋白对DPPH和ABTS自由基清除率的EC50值分别为11.15mg/mL、6.47mg/mL和7.16mg/mL、3.79mg/mL，结果表明，本发明方法制备的血浆蛋白具有较好的抗氧化活性。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
本发明提供一种家禽血浆蛋白的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、取家禽血液，经处理得到血浆液；
步骤二、对血浆液进行超声处理，超声功率为100～300W，超声时间为10～30min；
步骤三、将经超声处理后的血浆液的pH调节至8.5～9.5，然后于超滤压力0.3～0.6MPa下进行超滤，截留分子量为5000～10000Da的血浆液，超滤循环时间为10～30min；
步骤四、将步骤三中得到的血浆液进行干燥，得到家禽血浆蛋白粉。
本发明对血浆液进行超声处理，能够有效破坏血浆蛋白分子的高度折叠和紧密地结构，改变血浆蛋白结构柔顺性，使其整体溶解性能提高，具有良好地乳化性和起泡性，增加了血浆蛋白粉的推广使用，扩大了其保护范围。通过超滤处理保留血浆蛋白中所需要分子量的血浆蛋白，除去小分子杂质，使得制作的血浆蛋白的纯度较高、安全性好。并且，本发明的方法对温度和压力等无额外要求，适于推广使用。
经计算发现，本发明方法制备的家禽血浆蛋白的溶解度由之前的50～56％提高至85～88％。常规血浆蛋白和该方法制备的血浆蛋白对DPPH和ABTS自由基清除率的EC50值分别为11.15mg/mL、6.47mg/mL和7.16mg/mL、3.79mg/mL，结果表明，本发明方法制备的血浆蛋白具有较好的抗氧化活性。
在上述方案中，作为优选，所述步骤一中，取所述家禽血液之后，首先加入复合抗凝剂至其与家禽血液中的质量体积比浓度为0.6％～1.0g/mL，混匀，除掉或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，然后于温度4～6℃静置，再于2000～3000g离心10～20min，取上层清液得到所述血浆液。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤四中，所述干燥包括如下方法：首先将超滤后截留的血浆液于温度-30～-40℃预冻，然后于冷阱温度为-40～-50℃下冷冻干燥48～72h，得到所述家禽血浆蛋白粉。经低温冷冻干燥，不影响血浆蛋白粉的品质，以免温度过高，引起蛋白变形，或者构象变化，影响蛋白功能。
在上述方案中，作为优选，所述复合抗凝剂包含质量比依次为1:1:1～2:2:1的柠檬酸钠、枸橼酸钠和肝素。该比例混合的复合抗凝剂可有效快速地结合血液中的凝血因子，防止血液凝固。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤三中，所述超滤包括6～8个循环，第一个循环持续时间不低于5分钟，第一个循环中的压力保持在0.6Mpa，相邻的两个循环之间，首先将超滤压力降低到0.3Mpa，之后再进入下一个超滤循环中。通过超滤截留所需要分子量的血浆蛋白，多次循环超滤，以提高截留效率。
在上述任一个方案中，作为优选，在所述步骤一和步骤二之间，还包括如下步骤：
步骤A、向步骤一中得到的血浆液中加入纳米壳聚糖，于10～30rpm摇床条件下保持10～20min，其中，所述纳米壳聚糖与所述血浆液的质量体积比为1：20～30，所述纳米壳聚糖活性炭的粒径为3～9nm；纳米壳聚糖与血浆液混合，且在晃动条件下，能够有效破坏血浆液的蛋白紧密性，使其结构打开，同时，由于纳米壳聚糖颗粒细小，且晃动条件柔和，因此，不会改变血浆蛋白的构象。之后进入步骤二。超声处理下，纳米壳聚糖的存在能够增强超声的空化效应、机械效应，形成协同作用，促进蛋白紧密结构地打开，提高血浆蛋白的溶解性。
在所述步骤二之后和步骤三之前还包括如下步骤：
步骤B、将经超声处理后的血浆液和纳米壳聚糖的混合物经管式分离机分离除去纳米壳聚糖，之后将分离后的血浆液置于紫外灯光线下照射10～15min。分离除去纳米壳聚糖，之后对血浆液进行紫外照射，以进行灭菌处理。
在上述方案中，作为优选，在所述步骤三和步骤四之间，还包括如下步骤：
步骤C、将经过超滤处理的血浆液进行纳滤处理，所述纳滤处理采用孔径2nm的纳滤膜，纳滤压力为0.5Mpa～0.7Mpa；以对血浆蛋白进一步除杂。
步骤D、向经纳滤处理后的血浆液中添加还原糖，所述还原糖与所述血浆液的质量体积比为0.1～0.9g/mL，混匀后，30～40℃静置5～10min，之后进入步骤四。以对血浆蛋白进行还原保护，防止其氧化。
在上述方案中，作为优选，所述还原糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖和麦芽糖中的任意一种或几种。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤三中，使用NaOH/NaHCO3调节血浆液的pH至8.5～9.5。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤一中，采用真空采血刀采集健康家禽血液得到所述家禽血液。
为使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案，现提供如下的实施例1至6进行说明：
实施例1
一种家禽血浆蛋白的制备方法，包括如下步骤：
(1)采血：采用真空采血刀采集新鲜健康家禽血液，加入复合抗凝剂，复合抗凝剂包括质量比为1.5:1.5:1的柠檬酸钠、枸橼酸钠、肝素，使复合抗凝剂在血液中的终浓度为0.8g/mL，混匀，冷藏条件贮存。
(2)静置分离：血液在5℃静置，在2500g离心15min得上层血浆液。
(3)将上层血浆液混合液进行超声处理，所述的超声功率为200W，超声时间为20min；
(4)用NaOH/NaHCO3调节血浆液pH为9.0，0.45MPa超滤至结束，除盐，截留分子量为7500Da的血浆液，超滤循环时间为20min。
(5)干燥：将处理后的血浆液-35℃预冻，冷阱温度为-45℃冷冻干燥60h，得家禽血浆蛋白粉。
实施例2
一种家禽血浆蛋白的制备方法，包括如下步骤：
(1)采血：采用真空采血刀采集新鲜健康家禽血液，加入复合抗凝剂，复合抗凝剂包括质量比为1:1:1的柠檬酸钠、枸橼酸钠、肝素，使复合抗凝剂在血液中的终浓度为0.6g/mL，混匀，冷藏条件贮存。
(2)静置分离：血液在4℃静置，在2000g离心10min得上层血浆液。
(3)将上层血浆液混合液进行超声处理，所述的超声功率为100W，超声时间为10min；
(4)用NaOH/NaHCO3调节血浆液pH为8.5，0.3MPa超滤至结束，除盐，截留分子量为5000Da的血浆液，超滤循环时间为10min。
(5)干燥：将处理后的血浆液-30℃预冻，冷阱温度为-40℃冷冻干燥48h，得家禽血浆蛋白粉。
实施例3
一种家禽血浆蛋白的制备方法，包括如下步骤：
(1)采血：采用真空采血刀采集新鲜健康家禽血液，加入复合抗凝剂，复合抗凝剂包括质量比为2:2:1的柠檬酸钠、枸橼酸钠、肝素，使复合抗凝剂在血液中的终浓度为1.0g/mL，混匀，冷藏条件贮存。
(2)静置分离：血液在6℃静置，在3000g离心20min得上层血浆液。
(3)将上层血浆液混合液进行超声处理，所述的超声功率为300W，超声时间为30min；
(4)用NaOH/NaHCO3调节血浆液pH为9.5，0.6MPa超滤至结束，除盐，截留分子量为10000Da的血浆液，超滤循环时间为30min。
(5)干燥：将处理后的血浆液-40℃预冻，冷阱温度为-50℃冷冻干燥72h，得家禽血浆蛋白粉。
实施例4
一种家禽血浆蛋白的制备方法，包括如下步骤：
(1)采血：采用真空采血刀采集新鲜健康家禽血液，加入复合抗凝剂，复合抗凝剂包括质量比为1:1:1的柠檬酸钠、枸橼酸钠、肝素，使复合抗凝剂在血液中的终浓度为0.7g/mL，混匀，冷藏条件贮存。
(2)静置分离：血液在4℃静置，在2800g离心18min得上层血浆液。
(3)向血浆液中加入纳米壳聚糖，于20rpm摇床条件下保持15min，其中，所述纳米壳聚糖与所述血浆液的质量体积比为1：25，所述纳米壳聚糖活性炭的粒径为6nm，之后进入步骤二；
(4)将上层血浆液混合液进行超声处理，所述的超声功率为200W，超声时间为20min；
(5)将经超声处理后的血浆液和纳米壳聚糖的混合物经管式分离机分离除去纳米壳聚糖，之后将分离后的血浆液置于紫外灯光线下照射13min。
(6)用NaOH/NaHCO3调节血浆液pH为8.9，0.3～0.6MPa超滤至结束，除盐，截留分子量为5000～10000Da的血浆液，超滤循环时间为10～30min。所述超滤包括6个循环，第一个循环持续时间不低于5分钟，第一个循环中的压力保持在0.6Mpa，相邻的两个循环之间，首先将超滤压力降低到0.3Mpa，之后再进入下一个超滤循环中。
(7)将经过超滤处理的血浆液进行纳滤处理，所述纳滤处理采用孔径2nm的纳滤膜，纳滤压力为0.6Mpa；
(8)向经纳滤处理后的血浆液中添加还原糖，所述还原糖与所述血浆液的质量体积比为0.5g/mL，混匀后，35℃静置7.5min。所述还原糖为麦芽糖。
(9)干燥：将处理后的血浆液-36℃预冻，冷阱温度为-40℃冷冻干燥72h，得家禽血浆蛋白粉。
实施例5
一种家禽血浆蛋白的制备方法，包括如下步骤：
(1)采血：采用真空采血刀采集新鲜健康家禽血液，加入复合抗凝剂，复合抗凝剂包括质量比为1:2:1的柠檬酸钠、枸橼酸钠、肝素，使复合抗凝剂在血液中的终浓度为0.8g/mL，混匀，冷藏条件贮存。
(2)静置分离：血液在4℃静置，在2500g离心18min得上层血浆液。
(3)向血浆液中加入纳米壳聚糖，于30rpm摇床条件下保持10min，其中，所述纳米壳聚糖与所述血浆液的质量体积比为1：30，所述纳米壳聚糖活性炭的粒径为9nm，之后进入步骤二；
(4)将上层血浆液混合液进行超声处理，所述的超声功率为300W，超声时间为10min；
(5)将经超声处理后的血浆液和纳米壳聚糖的混合物经管式分离机分离除去纳米壳聚糖，之后将分离后的血浆液置于紫外灯光线下照射10min。
(6)用NaOH/NaHCO3调节血浆液pH为9，0.3～0.6MPa超滤至结束，除盐，截留分子量为5000～10000Da的血浆液，超滤循环时间为30min。所述超滤包括8个循环，第一个循环持续时间不低于5分钟，第一个循环中的压力保持在0.6Mpa，相邻的两个循环之间，首先将超滤压力降低到0.3Mpa，之后再进入下一个超滤循环中。
(7)将经过超滤处理的血浆液进行纳滤处理，所述纳滤处理采用孔径2nm的纳滤膜，纳滤压力为0.5Mpa。
(8)向经纳滤处理后的血浆液中添加还原糖，所述还原糖与所述血浆液的质量体积比为0.1g/mL，混匀后，30℃静置5min。所述还原糖包括葡萄糖、果糖。
(9)干燥：将处理后的血浆液-35℃预冻，冷阱温度为-45℃冷冻干燥72h，得家禽血浆蛋白粉。
实施例6
一种家禽血浆蛋白的制备方法，包括如下步骤：
(1)采血：采用真空采血刀采集新鲜健康家禽血液，加入复合抗凝剂，复合抗凝剂包括质量比为2:1:1的柠檬酸钠、枸橼酸钠、肝素，使复合抗凝剂在血液中的终浓度为0.9g/mL，混匀，冷藏条件贮存。
(2)静置分离：血液在4℃静置，在2900g离心15min得上层血浆液。
(3)向血浆液中加入纳米壳聚糖，于10rpm摇床条件下保持30min，其中，所述纳米壳聚糖与所述血浆液的质量体积比为1：10，所述纳米壳聚糖活性炭的粒径为3nm，之后进入步骤二；
(4)将上层血浆液混合液进行超声处理，所述的超声功率为100W，超声时间为30min；
(5)将经超声处理后的血浆液和纳米壳聚糖的混合物经管式分离机分离除去纳米壳聚糖，之后将分离后的血浆液置于紫外灯光线下照射15min。
(6)用NaOH/NaHCO3调节血浆液pH为9，0.3～0.6MPa超滤至结束，除盐，截留分子量为5000～10000Da的血浆液，超滤循环时间为20min。所述超滤包括7个循环，第一个循环持续时间不低于5分钟，第一个循环中的压力保持在0.6Mpa，相邻的两个循环之间，首先将超滤压力降低到0.3Mpa，之后再进入下一个超滤循环中。
(7)将经过超滤处理的血浆液进行纳滤处理，所述纳滤处理采用孔径2nm的纳滤膜，纳滤压力为0.7Mpa。
(8)向经纳滤处理后的血浆液中添加还原糖，所述还原糖与所述血浆液的质量体积比为0.9g/mL，混匀后，40℃静置10min。所述还原糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖和麦芽糖。
(9)干燥：将处理后的血浆液-40℃预冻，冷阱温度为-50℃冷冻干燥66h，得家禽血浆蛋白粉。
效果验证：
1.血浆蛋白溶解度测定
采用Bradford法。称取上述血浆蛋白冻干粉7mg，分散于10mL蒸馏水中，室温条件下搅拌30min后10 000r/min离心10min取上清液，测定上清液蛋白质含量，以牛血清白蛋白为标准蛋白制作标准曲线。所有数据均为3次测定的平均值。并按式(1)计算溶解度。
式中：m0为上清液中血浆蛋白的总质量/mg；m1为冻干样品中血浆蛋白的总质量/mg。
常规方法中测定的m0：3.5mg-3.92mg；依照本发明的方法制备得到的m0：5.95mg-6.16mg。冻干样品中血浆蛋白的总质量为7.0mg。
经计算发现，该方法制备的家禽血浆蛋白的溶解度由之前的50～56％提高至85～88％。
2.抗氧化测定
1)DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基清除率的测定
血浆蛋白冻干粉用去离子水溶解后配成浓度为1～6mg/mL。用95％乙醇现配0.1mmol/L的DPPH，等量1mL的血浆蛋白溶液加入1mL的乙醇，再加入1mL的DPPH溶液于比色皿中。振动混匀后在37℃水浴中避光反应0.5h。于波长517nm处测吸光度A1。乙醇作为空白测定吸光度A2。VC作阳性对照。DPPH自由基清除率计算如式(2)所示：
式中：A1为实验组吸光度；A2为空白组吸光度。
常规方法和依照本发明的方法，测定得到的蛋白吸光度的数据如下表1所示，
DPPH的空白的吸光值：0.349±0.0226
表1样品吸光度与蛋白浓度
2)ABTS(2'-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)自由基清除率的测定
(ABTS+·清除率的测定参考Re等的方法。ABTS+·用去离子水配成7mM，与浓度2.45mM过硫酸钾溶液混合(5mL的ABTS+·和88μL的过硫酸钾溶液)，混合物于室温下避光放置12～16h。ABTS+·溶液用乙醇稀释(1mL的ABTS+·溶液+70mL的乙醇)，使其在734nm处的吸光度为0.75±0.02。100μL ABTS+·溶液加入50μL不同浓度的多肽溶液，70min后在734nm下测定吸光度(AS)。去离子水用作空白对照(AB)。VC为阳性对照。所有的溶液当天配制，实验平行测试3次。ABTS+·清除率公式如下：
式中：AB—空白的吸光值；AS—样品的吸光值
常规方法提取蛋白的吸光度和依照本发明的方法提取得到的蛋白吸光度，如下表2所示。
ABTS的空白的吸光值：0.557±0.0397
表2样品吸光度
蛋白浓度(mg/mL) 常规提取蛋白吸光度 本发明提取蛋白吸光度
1.00 0.523±0.0467 0.473±0.0279
2.00 0.512±0.0434 0.385±0.0258
4.00 0.439±0.0358 0.229±0.0167
8.00 0.357±0.0248 0.146±0.126
16.00 0.214±0.0126 0.089±0.002
结果如下：常规血浆蛋白和该方法制备的血浆蛋白对DPPH和ABTS自由基清除率的EC50值分别为11.15mg/mL、6.47mg/mL和7.16mg/mL、3.79mg/mL，结果表明，该方法制备的血浆蛋白具有较好的抗氧化活性。
这里说明的模块数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的家禽血浆蛋白的制备方法的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
如上所述，根据本发明，由于采用纳米壳聚糖助力、超声处理、超滤和纳滤等技术，因此制备得到的家禽血浆蛋白具有高溶解性和高抗氧化活性等特性。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。

Claims (10)

1.一种家禽血浆蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、取家禽血液，经处理得到血浆液；
步骤二、对血浆液进行超声处理，超声功率为100～300W，超声时间为10～30min；
步骤三、将经超声处理后的血浆液的pH调节至8.5～9.5，然后于超滤压力0.3～0.6MPa下进行超滤，截留分子量为5000～10000Da的血浆液，超滤循环时间为10～30min；
步骤四、将步骤三中得到的血浆液进行干燥，得到家禽血浆蛋白粉。
2.如权利要求1所述的家禽血浆蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，取所述家禽血液之后，首先加入复合抗凝剂至其与家禽血液中的质量体积比浓度为0.6％～1.0g/mL，混匀，然后于温度4～6℃静置，再于2000～3000g离心10～20min，取上层清液得到所述血浆液。
3.如权利要求1所述的家禽血浆蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，所述干燥包括如下方法：首先将超滤后截留的血浆液于温度-30～-40℃预冻，然后于冷阱温度为-40～-50℃下冷冻干燥48～72h，得到所述家禽血浆蛋白粉。
4.如权利要求2所述的家禽血浆蛋白的制备方法，其特征在于，所述复合抗凝剂包含质量比依次为1:1:1～2:2:1的柠檬酸钠、枸橼酸钠和肝素。
5.如权利要求1所述的家禽血浆蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤三中，所述超滤包括6～8个循环，第一个循环持续时间不低于5分钟，第一个循环中的压力保持在0.6Mpa，相邻的两个循环之间，首先将超滤压力降低到0.3Mpa，之后再进入下一个超滤循环中。
6.如权利要求1至5任一项所述的家禽血浆蛋白的制备方法，其特征在于，在所述步骤一和步骤二之间，还包括如下步骤：
步骤A、向步骤一中得到的血浆液中加入纳米壳聚糖，于10～30rpm摇床条件下保持10～20min，其中，所述纳米壳聚糖与所述血浆液的质量体积比为1：20～30，所述纳米壳聚糖活性炭的粒径为3～9nm，之后进入步骤二；
在所述步骤二之后和步骤三之前还包括如下步骤：
步骤B、将经超声处理后的血浆液和纳米壳聚糖的混合物经管式分离机分离除去纳米壳聚糖，之后将分离后的血浆液置于紫外灯光线下照射10～15min。
7.如权利要求6所述的家禽血浆蛋白的制备方法，其特征在于，在所述步骤三和步骤四之间，还包括如下步骤：
步骤C、将经过超滤处理的血浆液进行纳滤处理，所述纳滤处理采用孔径2nm的纳滤膜，纳滤压力为0.5Mpa～0.7Mpa；
步骤D、向经纳滤处理后的血浆液中添加还原糖，所述还原糖与所述血浆液的质量体积比为0.1～0.9g/mL，混匀后，30～40℃静置5～10min，之后进入步骤四。
8.如权利要求7所述的家禽血浆蛋白的制备方法，其特征在于，所述还原糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖和麦芽糖中的任意一种或几种。
9.如权利要求1所述的家禽血浆蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤三中，使用NaOH/NaHCO3调节血浆液的pH至8.5～9.5。
10.如权利要求1所述的家禽血浆蛋白的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，采用真空采血刀采集健康家禽血液得到所述家禽血液。
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