CN108778236A - 食品、饮料、化妆品和药物制剂中的寡核苷酸 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包含哺乳动物、禽类、爬行类动物或植物的非人类DNA的寡核苷酸的制剂。该制剂可以是食品、饮料食品、化妆品或药物制剂。一方面，寡核苷酸以DNA‑载体复合物的形式存在。本发明进一步提供了包含根据本发明的制剂的试剂盒，和用于制备本发明制剂的方法。也可以设想将这些制剂用于个人润滑剂或香料混合物中。

Description

食品、饮料、化妆品和药物制剂中的寡核苷酸

技术领域

本发明涉及包含寡核苷酸的制剂，特别涉及食品、化妆品和药物制剂。使用的寡核苷酸来自野生动物和植物，但是通过分子生物学手段获得；因此，本发明将有助于保存这些动物和植物。在本发明的一个方面，寡核苷酸以DNA载体复合物的形式加入。本发明的另一方面涉及生产包含上述寡核苷酸的食品、化妆品和药物制剂的方法。

背景技术

中药中使用的许多组分(已知超过6000种不同的成分)是直接取自天然来源，无论是矿物质、动物、植物还是草药。这些提取物可以治疗疾病，促进长寿，并改善整体健康和幸福感。由于长期以来的医学传统，这些成分的效果已得到充分证明和记录。然而，随着工业化和中药在世界各地的传播，自然资源的大规模使用已使得一些用于获取提取物的物种濒临灭绝。

近年来，生物学家、化学家和其他研究人员致力于破译和注释众多动物和植物物种的基因组。这已导致了许多新的基因序列的发现，其中也有许多在用于中药的动物和植物中发现的基因。借助同源性分析与活性测定和细胞研究结合，可以将功能归因于这些新发现的基因中的一些。

然后，可将这些新的调查和发现与中药的知识相结合，以确定观察到的效应与可随后分离或在体外产生的可能的候选基因之间的关系。这不仅有助于为更大的患者群提供有用的天然成分，而且与此同时，本发明将有助于保护濒临灭绝的野生动物，因为它提供了通过杀死动物以外的方式获得必要成分的可能性。

例如，老虎的各个部位因据称有抗炎作用以及与溃疡、风湿性疼痛和灼伤有关的愈合性质而在制备中药制剂的制备上很受欢迎。老虎的再生器官，特别是阴茎，被规定为催情剂。将提供相似效果的可能的候选基因和基因组区域是东北虎(Panthera tigrisaltaica)(老虎)的生长激素1(GH1)，Y染色体的性别决定区(SRY)以及参与睾酮合成(HSD17B3)最后步骤的基因，它们分别被鉴定为在SEQ ID NO：1、2和3中描述的序列。

犀牛角用于治疗发烧、抽搐和痛风；在一些国家，该角也被用作催情剂。犀牛角的主要成分是角蛋白，其由Buceros rhinoceros silvestris(犀牛)的结构性角蛋白II型(HIY3)编码(Hieronymus TL，Witmer LM，Ridgely RC.(2006)，通过X射线计算机断层扫描和涉及生长和外部形式的组织学来研究白犀牛角的结构(Structure of whiterhinoceros(Ceratotherium simum)horn investigated by X-ray computed tomographyand histology with implications for growth and external form)，J Morphol.267(10)：1172-6.)；参照SEQ ID NO：4。

鲨鱼鳍被认为可以促进性活动、提高能量、降低胆固醇水平并使身体恢复活力。如SEQ ID NO：5所示，已经鉴定了Callorhynchus milii(鲨鱼)的胶原蛋白类型XIIIα1结构蛋白。胶原蛋白是鲨鱼鳍的主要成分(Motta PJ.(1977)鲨鱼皮肤胶原纤维的解剖学和功能形态学(Anatomy and Functional Morphology of Dermal Collagen Fibers in Sharks)，Copeia.3：454-464)。

发现竹提取物可用于治疗癫痫、发热症状和呕吐。此外，竹子因其快速生长，即与如SEQ ID NO：18所示的小生长素RNA8相关的特性而为人所知(Peng Z，Zhang C等(2013)快速生长发芽毛竹的转录组测序和分析(Transcriptome Sequencing and Analysis of theFast Growing Shoots Moso Bamboo)(Phyllostachys edulis)，PLoS ONE.8(11)：e78944。doi：10.1371/journal.pone.0078944。)。

中国文化的另一个方面是12个动物标志。这些生肖中的每一个都与特定的性格特征相关联；各种物种基因组的注释使科学家能够将这些特征与特定的基因联系起来。

例如，老鼠因其野心(ambition)而闻名；这种特征与3β-羟基类固醇脱氢酶有关，该酶对类固醇激素的形成至关重要；参照SEQ ID NO：6(Lachance Y，Luu-The V等(1990)人3β-羟基类固醇脱氢酶/δ5-δ4异构酶基因的鉴定及其在哺乳动物细胞中的表达(Characterization of human 3β-hydroxysteroid dehydrogenase/delta 5-delta 4-isomerase gene and its expression in mammalian cells)。J Biol Chem.265(33)：20469-75)。

在绵羊中，与同感(empathy)相关的催产素受体(OXTR)已被鉴定为序列SEQ IDNO：7(Tost H，Kolachana B等(2010)一种催产素受体基因(OXTR)中共有的对偶基因影响亲代社会性情和人下丘脑边缘结构和功能(A common allele in the oxytocin receptorgene(OXTR)impacts prosocial temperament and human hypothalamic-limbicstructure and function)。Proc Natl Acad Sci美国.107(31)：13936-41.doi：10.1073/pnas.1003296107。)

在猿中，与智力相关的formin结合蛋白I(FNBP1L)已被鉴定为SEQ ID NO：8中所示的序列(Benyamin B，Pourcain B等(2014)儿童期智力是可遗传的、高度多基因的并与FNBP1L相关的(Childhood intelligence is heritable,highly polygenic andassociated with FNBP1L)。Molecular psychiatry，19(2)：253-258。doi：10.1038/mp.2012.184。)。

在猪中，与慷慨(Generosity)相关的催产素已被描述为SEQ ID NO：9的序列(Barraza JA，Zak PJ(2009)针对陌生者的同感激发催产素的释放和后续的慷慨(Empathytoward strangers triggers oxytocin release and subsequent generosity)。AnnnnAcad Sci.1167：182-9。doi：10.1111/j.1749-6632.2009.04504.x)。

公鸡的执行功能(executive functioning)很重要，这与基因WDR72有关；参照SEQID NO：10(LeBlanc M，Kulle B等(2012)全基因组研究鉴定PTPRO和WDR72以及与神经认知功能有关的FOXQ1-SUMO1P1相互作用(Genome-wide study identified PTPRO andWDR72and FOXQ1-SUMO1P1interaction associated with neurocognitive function)，JPsychiatr Res.46(2)：271-8。doi：10.1016/j.jpsychires.2011.11.001)。

龙以智力(intelligence)著称；在其最接近的活体亲属中，巨蜥(Varanuscomodovarensis)的脑可塑性可以追溯至基因BDNF，如SEQ ID NO：11中所见(Binder DK，Scharfman HE.(2004)脑衍生的神经元营养因子(Brain-derived Neurotrophic Factor)，Growth factors(Chur，Switzerland)22(3)：123-131。doi：10.1080/08977190410001723308)。

中国生肖兔具有基于神经调节蛋白1的创造性，如SEQ ID NO：12所示(KériS.(2009)对于精神状态和创造力的基因：神经调节蛋白1基因的促进多态性与取得高智力成绩的人中的创造力有关(Genes for psychosis and creativity:a promoterpolymorphism of the neuregulin 1 gene is related to creativity in people withhigh intellectual achievement)，Psychol Sci.20(9)：1070-3。doi：10.1111/j.1467-9280.2009.02398.x。)

蛇以突袭闻名，这是一种与编码乙酰胆碱酯酶(AChE)的基因有关的特征。AChE促进神经功能和发育，并在蛇中由SEQ ID NO：13编码(Sternfeld M，Ming G等(1998)乙酰胆碱酯酶通过其水解能力、核心蛋白和可调节的C末端的可选择性贡献来增强轴突生长和突触发育(Acetylcholinesterase enhance neurite growth and synapse developmentthrough alternative contribution of its hydrolysis capacity，core protein，andvariable C termini)，J Neurosci.18(4)：1240-9。)。

犬被认为是忠诚的，这是一种与催产素有关的特征(Scheele，D.等(2012)催产素调节男性和女性之间的社会距离(Oxytocin Modulates Social Distance Between Malesand Females)，J.Neurosci，32：16074-16079。)。相应催产素受体的序列显示在SEQ ID NO：14中。

水牛的毅力和专注于一项任务的特征与2-苯乙胺的形成有关，其受多巴胺β-羟化酶控制(Irsfeld M，Spadafore M，PrüβBM.(2013)β-苯乙胺，一种具有大影响力的小分子(β-phenylethylamine,a small molecule with a large impact)，WebmedCentral.4(9)：4409)；参照SEQ ID NO：15。

马以追求新颖和好奇闻名；这与多巴胺受体D4有关(Munafò，MR等(2008)多巴胺受体D4(DRD4)基因和最相关的个性特征的相关性：元分析和新数据(Association of theDopamine D4Receptor(DRD4)Gene and Approach-Related Personality Traits：Meta-Analysis and New Data)，Biological Psychiatry 63：197-206)，这可以在SEQ ID NO：16中看到。

另一种以其卓越品质，具体是视力而闻名的动物是鹰。这里，相关基因是晶体蛋白β，其是晶状体的组成部分并且描述于SEQ ID NO：17中。

尽管上面提到的所有序列都被破译和注释，但它们对人体的影响迄今尚未阐明。事实上，在本发明之前，还没有考虑从人类以外的任何来源向人类引入特定基因序列。因此，本发明的一个目的是提供在分离的哺乳动物、爬行动物、禽类和植物的形式中的动物和植物提取物的活性成分，非人基因序列以施用于人类。通过以体外产生的寡核苷酸的形式提供已知传统制剂的活性成分，绕过了杀害动物，并因此保护了野生动物生命。

此外，使用整个动物或其部分会带来风险，因为它涉及完整的动物或植物基因组的摄取，这可能藏有病毒序列。另外，提取物可能被病原体污染。已经显示这些病毒和病原体参与癌症的发展(Burnett-Hartman AN，Newcomb PA等(2008)感染试剂和结肠直肠癌：幽门螺旋杆菌、牛链球菌、JC病毒和人乳头状瘤病毒综述(Infectious Agents andColorectal Cancer：A Review of Helicobacter pylori，Streptococcus bovis，JCVirus and Human Papillomavirus)，Cancer Epidemiol Biomarkers Prev.17：2970-2979.doi：10.1158/1055-9965.EPI-08-0571)。因此，提供确定的、合成的、无病毒的寡核苷酸确保了高水平的医疗安全，并且可以保护个体免受有害试剂的伤害。

以前，已经描述了含有约100个核苷酸的DNA探针的DNA球体(US 8,835,178B2)。这些探针在科学设置中用作大气释放和生物危害检测的测试试剂；与本发明相反，球体内的DNA不表达，而仅通过PCR来检测。

已创造出其他系统以用于核酸分子的递送和表达(US 7,030,097 B1)。该系统由生物相容性聚合物和核酸分子与助分散剂的混合物形成的聚合结构组成。使用这个系统，DNA可以被传递到生物体中，但其只有在附加聚合物的帮助下才能实现，因此使生产过程复杂化并且另外引入可能引起免疫应答的外来结构。

直到最近，人们认为递送“裸”DNA，即没有任何摄取促进剂的DNA，不会产生有效水平的DNA表达(Villemejane J，Mir LM。(2009)核酸转移的物理方法(Physical methods ofnucleic acid transfer)，Brit J Pharma.157：207-219。)。然而，现在已经表明，完整的基因可以通过消化道被吸收(SpisákS，Solymosi N等(2013)完整的基因可以从食物进入人血液中(Complete Genes May Pass From Food to Human Blood)，POLoS ONE 8(7)：e69805.doi：10.1371/journal.pone.0069805)。此外，已经显示，栖居于人类肠道中的细菌群落可吸收DNA并将这些基因表达为功能性产物(Hehemann，JH等(2010)碳水化合物活性酶从海洋细菌转移至日本人肠道微生物群(Transfer of carbohydrate-active enzymesfrom marine bacteria to Japanese gut microbiota)，Nature 464：908-91.doi：10.1038/nature08937)。

发明内容

因此，本发明的一个目的是在允许这些基因表达的制剂中提供动物来源的各个基因在不仅仅是人类个体中的递送，同时避免使用任何多余的载体聚合物。

该目的通过包含哺乳动物、禽、爬行动物或植物，非人DNA的至少1百万个寡核苷酸的制剂来解决，所述寡核苷酸具有与选自由SEQ ID NO：1至18的一个或多个序列组成的组至少80％同源的序列。

在整个说明书中，术语“寡核苷酸”被认为包含单链或双链寡核苷酸或其混合物。寡核苷酸也可以由RNA组成。每个寡核苷酸可以具有10至2500bp的长度，并且也可以是相同寡核苷酸重复的连环体。

在本说明书中，术语“同源性”和“同源的”意味着被理解为序列同一性。氨基酸序列或核苷酸序列之间的同源性可以使用算法BLAST(Altschul，SF，Gish W等，基本的局部对比搜索工具(Basic local alignment search tool)，(1990)J.Mol.Biol.215：403-410)及其进一步开发版本BLASTN和BLASTX来检测。所有三个程序都应该使用默认参数。

在整个说明书和随后的权利要求书中，除非上下文另有要求，否则词语“包括”以及诸如“包含”和“含有”的变化将被理解为暗示包括所述的整数或步骤或整体组，但不排除任何其他整数或步骤或整数组或步骤。如在本说明书和所附权利要求中所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数指示物。

令人惊讶地发现，就促进相关基因的表达而言，使用100万个寡核苷酸比摄取相关提取物更有效。这很可能是由于相比于存在于传统制备的提取物中的仅少量的相关基因序列，各基因的拷贝数高。

在本发明的范围内，可以设想制剂可以包含1、1.5、2、2.5、3、3.5、4,、4.5、5、6、7、8、9或10百万个寡核苷酸。优选地，本发明的制剂包含1、2或3百万个寡核苷酸；最优选地，本发明的制剂包含1百万个寡核苷酸。

寡核苷酸可以具有与选自由SEQ ID NO：1至18组成的组的一个或多个序列同源的序列，从而在制剂中存在不同类型的寡核苷酸。例如，寡核苷酸的一个或多个序列可以是至少两个，至少三个，至少四个或至少五个不同的序列。在制剂中存在两种或更多种不同类型的寡核苷酸的实施方案中，所述制剂包含100万个各自不同的寡核苷酸的拷贝。设想在包含具有两个或更多个不同序列的寡核苷酸的实施方案中，不同序列来自可能显示类似作用的基因；例如，在一个实施方案中，将具有SEQ ID NO：1、2和3的寡核苷酸或具有SEQ ID NO：1、2、3和4的寡核苷酸组合。在其中组合具有相似作用的基因的实施方案中，与单独获取每种类型的寡核苷酸相比，对个体的总体效应甚至更大。

用于本发明制剂中的寡核苷酸可以与SEQ ID NO：1至18具有80％或更高的同源性。在一个优选的实施方案中，寡核苷酸与SEQ ID NO：1至18具有超过90％的同源性。在最优选的实施方案中，寡核苷酸与SEQ ID NO：1至18具有超过95％的同源性。进一步设想，寡核苷酸可能含有“沉默”突变。“沉默突变”在此定义为由于遗传密码的不明确性，核苷酸序列的改变在表达时不会导致氨基酸序列的改变。由于不同物种之间密码子使用(即所有编码相同氨基酸的同义碱基三联体出现的频率)的差异，可以引入沉默突变。

为了实践本发明，除非另有说明，否则使用在本领域文献中解释的化学、生物化学、细胞生物学和重组DNA技术的常规方法(参见，例如，分子克隆：实验室手册(MolecularCloning：A Laboratory Manual)，第4版，Green和Sambrook编辑，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor 2012)。

本发明的寡核苷酸可以通过本领域通常应用的所有方法获得，例如使用基因组DNA或质粒DNA作为模板的聚合酶链式反应，在细菌或细胞中或在计算机(in silico)合成中的繁殖。当寡核苷酸在重组系统中表达时，本领域技术人员能够设计合适的系统，包括适当的启动子和质粒载体，以及可以表达用于本发明制剂中的寡核苷酸的细胞系或细菌菌株。例如，用于这种程度的质粒构建体可以包含在各个细胞系或细菌菌株中具有高活性的合适启动子，以及其他转录和翻译调节子，以及具有合适限制性位点的合适接头。技术人员也知道培养条件对质粒产量的影响。

如果需要，可以在市售的纯化试剂盒(例如PCRPreps DNA纯化系统，Promega，Madison，WI，美国)的帮助下通过沉淀，或由琼脂糖凝胶电泳来纯化产生的寡核苷酸。本领域技术人员非常清楚如何优化这些方法中的每一种以最大化寡核苷酸产量和纯度。

为了确保制剂内寡核苷酸的长期完整性和稳定性，可以将抑制寡核苷酸降解的其他试剂添加到制剂中。这些包括特定蛋白质、核苷酸、蒽环类和氨基糖苷类抗生素、合成的有机和无机化合物或市售的DNA酶去除剂(DNase Removal Reagents，LifeTechnologies，Carlsbad，CA，美国)形式的DNA酶抑制剂，。

寡核苷酸本身也可以被修饰以增加它们的稳定性。可能的修饰包括硫代磷酸酯(phosphorothiorate)、甲基膦酸酯(methylphosphonate)、磷酰胺酯(phosphoroamidate)、硼烷磷酸酯(boranophosphate)、磷酸乙酸酯(phosphoroacetate)或2'，5'-磷酸二酯(2’,5’-phosphodiester)。酰胺连接的寡核苷酸、吗啉(morpholino)和肽核酸也包括在本发明的范围内。

此外，本发明的制剂还可以包含细胞摄取剂。细胞摄取剂是促进寡核苷酸被摄入到细胞中的分子、配体或部分。细胞摄取剂可以独立于寡核苷酸或与其中一个或多个融合。一组细胞摄取剂包括脂质和阳离子脂质。另一组细胞摄取剂是可识别细胞表面分子的受体结合配体。一般来说，靶向在表面上表达的标记物的所有分子都被认为是细胞摄取剂；特别是可以使用生长因子、细胞因子和抗体。也可以使用合适配体的片段用于本发明的制剂和方法中。

细胞摄取剂可以与寡核苷酸共价或非共价连接。共价键连接可以基于UV交联或化学交联，而非共价连接可以通过利用静电或疏水相互作用来实现。所有这些方法先前已经描述过，并且是本领域技术人员熟知的。

本发明的制剂可以单独给药或与生理学上可接受的载体，例如溶剂、香料或着色剂、防晒剂或其他用于药用或美容用途的成分联合给药。此外，可以向制剂添加诸如水、盐水或其他运载工具的载体。也可以设想，本发明的制剂与市售“能量”饮料如、Monster 、、或Amp混合。

在本发明的另一方面，所述制剂包含DNA载体复合物形式的寡核苷酸，所述复合物包含寡核苷酸和生理学上可接受的稳定剂。这导致寡核苷酸在应用或施用后被保护免于受到核酸酶的活性作用，并因此增加了个体的细胞内可表达的完整寡核苷酸的数量。因为较高百分比的寡核苷酸在较长时间内保持完整，所以使用DNA载体复合物可以降低寡核苷酸的总拷贝数。

本领域技术人员很清楚如何形成这种DNA载体复合物以及如何选择合适的稳定剂材料。物理上可接受的稳定剂包括海藻酸钠或海藻酸钾、透明质酸、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚L-丙交酯、聚D-丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯-乙交酯共聚物、聚酐、聚原酸酯、聚磷腈(polyphosphazene)、蛋白质聚合物、聚酯、硅酮或其组合。

根据应用的模式，DNA载体复合物可以在5-500nm的范围内适当地确定大小。

DNA载体复合物还可以包含细胞摄取剂，其可以共价连接或非共价连接至DNA载体复合物。

在另一个实施方案中，本发明涉及化妆品制剂或局部皮肤学制剂。本发明的化妆品制剂允许局部应用该寡核苷酸，导致其局部表达。这导致在身体的特定区域增加效果，而在其他身体部位没有观察到副作用。

根据本发明的化妆品制剂可以包含防腐剂，例如对羟基苯甲酸的酯，例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯；顺式-1-(3-氯烯丙基)-3,5,7-三氮杂-1-氮鎓金刚烷氯化物(cis-1-(3-chloroallyl)-3,5,7-triaza-1-azoniaadamantane)；乙二胺四乙酸(EDTA)和EDTA的盐；咪唑烷基脲(imidazolidinyl urea)；N-月桂基-β-亚氨基二丙酸钠等或其任何组合。另外，可以将色素和香精添加到本发明的化妆品制剂中。颜色添加剂包括天然和人造染料，例如类胡萝卜素衍生物和氧化铁，而香精可以包括任何非刺激性的天然和人造油和香料。通常，制剂中使用的单个成分应具有适合化妆用途的品质或纯度，并且化妆品制剂将是无刺痛性和无刺激性的。

在又一个实施方案中，本发明涉及食物制剂和饮料食物制剂。本发明的食品和饮料食物制剂能够方便摄取大量相应的寡核苷酸，并且当所需效果不限于特定身体部位时特别有用。它们可以另外包含天然和人造甜味剂，例如糖、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、乳糖醇、异麦芽糖醇、麦芽糖醇和氢化淀粉水解物(HSH)；盐；增味剂；酸化剂；电解质；和乳化剂。它们也可以包含全谷物、坚果、蛋白质来源、种子、干果或其他营养素。

此外，可以设想，本发明的饮料食物制剂包含刺激剂如咖啡因、瓜拉那或牛磺酸以及其它成分，例如来自例如绿茶、人参和银杏的草本提取物以及维生素(如维生素B)和糖。本发明的饮料食品制剂与刺激剂的组合进一步增强了寡核苷酸的作用，特别是当这种作用与雄性效力相关时。

本发明的饮料食品制剂可以与寡核苷酸预混合，或者寡核苷酸可以作为单独的实体包含在该饮料食品制剂中，或者可以以允许饮料食品制剂临时混合的形式提供给消费者。如果寡核苷酸作为单独的实体存在，则它们可以包含在饮料食品制剂内的胶囊、凝胶球(gelous ball)(例如包含木薯粉)或丸剂中。如果寡核苷酸以允许顾客自己临时混合的形式提供，则它们可以例如设置在小袋、茶袋、注射器或分配器内，其与常规饮料容器例如罐头或瓶子一同提供。还设想，所述注射器或分配器直接连接至食物饮料容器。

在一个实施方案中，本发明涉及一种药物制剂。本发明的药物制剂可以另外包含合适的药物赋形剂，例如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、滑石粉、氯化钠、干燥脱脂牛奶、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。

在进一步的实施方案中，本发明涉及制剂，其中寡核苷酸的序列是SEQ ID NO：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18。

在本发明的一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：1的序列。该制剂的应用或施用导致效力增加，刺激性欲并改善性行为，特别是在男性个体中。

在本发明的另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：2的序列。该制剂的应用或施用导致效力增加，刺激性欲并改善性行为，特别是在男性个体中。

在本发明的又一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：3的序列。该制剂的应用或施用导致效力增加，刺激性欲并改善性行为，特别是在男性个体中。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：4的序列。该制剂的应用或施用有助于发热症状和惊厥，并刺激性活动。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：5的序列。这种制剂的应用或施用改善了性欲，提高了能量水平，并有助于恢复身体活力。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：6的序列。该制剂的应用或施用导致类固醇激素表达的增加，导致个体野心增加。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：7的序列。该制剂的应用或施用导致更高水平的催产素受体，其影响社会行为。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：8的序列。该制剂的应用或施用导致formin结合蛋白1-样蛋白的较高表达水平，并因此调节脑发育和活性。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：9的序列。该制剂的应用或施用导致催产素的产生增加，这影响社会联系和相互关系。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：10的序列。该制剂的应用或施用导致WDR72的更高表达水平，其促进神经认知功能。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：11的序列。该制剂的应用或施用导致脑源性中性因子的表达增加，并因此增强脑可塑性。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：12的序列。该制剂的应用或施用导致神经调节蛋白1水平的增加，促进创造性。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：13的序列。该制剂的应用或施用导致AChE的过度表达，这正面影响神经功能和发育。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：14的序列。该制剂的应用或施用导致OXTR的表达，这将增加个体的同感。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：15的序列。该制剂的应用或施用增加了多巴胺β-羟化酶的表达并因此提高了注意力。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：16的序列。该制剂的应用或施用导致多巴胺受体D4的表达增强，使得个体更可能承担风险。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：17的序列。该制剂的应用或施用导致更高水平的β结晶，从而改善视力。

在另一个实施方案中，寡核苷酸具有SEQ ID NO：18的序列。该制剂的应用或施用将促进生长。

此外，设想在一个实施方案中将本发明的制剂用于个人润滑剂中。这些润滑剂可以是水基、油基或硅基的。加入足够量的本发明制剂以使1ml含有至少1百万个寡核苷酸。其中使用本发明制剂的个人润滑剂可含有任何与个人润滑剂相容的成分，如缓冲盐、混浊剂、防结块剂、香料、无机碱、水溶性纤维素衍生的聚合物、多氢醇(polyhydric alcohol)和色素。

包含本发明配方的个人润滑剂可以按照常规方式制备或适合于制造现场的特定需求。常规制备包括通过将所有所需成分溶解在适当纯度的水中以使其混合并根据所需强度添加不同浓度的再水化寡核苷酸，例如每毫升个人润滑剂100万至1000万个寡核苷酸分子。本发明的寡核苷酸制剂可以通过将再水化的寡核苷酸溶液滴入润滑剂溶液中，然后进行混合步骤来添加。

在又一个实施方案中，本发明涉及生产本发明制剂的方法。

为了减少寡核苷酸的脱嘌呤，可以用合适的水性缓冲系统(例如调节至pH8的磷酸二氢钾(E340)或酒石酸钾(E336)缓冲液)重新水合SEQ ID NO：1-18的冻干的寡核苷酸。可以加入所得溶液以产生本发明的制剂。

作为适用于大多数应用的一般制备手段，可以简单地将再水合的寡核苷酸作为溶液加入到某个最终浓度，其取决于所需的分子的量。分子的量测定如下：寡核苷酸通过光谱手段(例如NanoDrop，ThermoFischer，美国)在260nm波长下定量。结果，以纳克/μl表示的量通过以下公式转换：对于双链寡核苷酸为，寡核苷酸浓度(ng/μl)/[0.66×DNA大小(bp)]，以及对于单链寡核苷酸为，寡核苷酸浓度(ng/μl)/[0.33×DNA大小(bp)]。

冻干的寡核苷酸可与干燥或液体调味剂和/或着色剂混合并容纳在容器中。

本发明还涉及用于由最终消费者个体制备本发明制剂的试剂盒。该试剂盒包括具有不同组的冻干寡核苷酸的容器，合适的缓冲系统，测量装置和说明，该说明是关于如何制备不同强度的最终产品，以及将制剂与食物、饮料、药物制剂、化妆品制剂或局部皮肤学制剂混合。

在另一种制剂中，本发明的制剂可以用于香料混合物中。

应该理解的是，本发明不限于在此描述的具体方法、方案和试剂，因为这些可以变化。还应该理解，这里使用的术语仅仅用于描述特定实施例，并不意图限制本发明的范围，本发明的范围仅由所附权利要求限制。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同的含义。

附图说明

下面的附图进一步解释了本发明，然而这些附图并不意图限制本发明的范围。

图1显示了在体外消化的各个阶段期间不同稳定剂对本发明寡核苷酸消化的影响。空白：仅使用缓冲液作为对照。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明。他们不应以任何方式限制权利要求的范围。

实施例1通过DNA测序获得DNA序列

使用市售试剂盒如Quick-DNA^TM通用试剂盒(Zymo Research Europe GmbH，Freiburg，德国)从目标动物或植物的体液或组织中提取DNA。使用Nextera XT DNA样品制备试剂盒(Illumina，San Diego，美国)按照制造商的说明产生用于测序的鸟枪法文库。用Genome Analyzer IIx(Illumina，San Diego，美国)对相应动物或植物的全基因组进行测序。该文库在112bp配对的末端单一索引运行中测序。使用SPAdes组装器(Bankevich A等(2012)SPAdes：一种新的基因组组装算法及其在单细胞测序中的应用(A New GenomeAssembly Algorithm and Its Applications to Single-Cell Sequencing)，J CompBiol.5：455-77，doi：10.1089/cmb.2012.0021)或MIRA(Chevreux B，Wetter T等，使用痕量信号及另外的序列信息进行基因组序列拼接(Genome Sequence Assembly Using TraceSignals and Additional Sequence Information)，in German Conference onBioinformatics，1999,45-56)将所得配对的末端读数在适当配备的GNU/Linux计算集群上进行组装。为了鉴定具有已知功能的人类基因的同源物，采用人蛋白质序列使用tblastn(E.Michael Gertz等，基于组分的统计和翻译的核酸检索：改进BLAST的TBLASTN模块(Composition-Based Statistics and Translated Nucleotide Searches：Improvingthe TBLASTN Module of BLAST)，BMC Biol.2006年12月7日；第1期：41，doi：10.1186/1741-7007-4-41)来检索连续序列(contigs)。

实施例2特定寡核苷酸分子的生产

包含感兴趣的序列(SOI)即SEQ ID NO：1至18的寡核苷酸可以通过几种方法产生：

1.使用热循环仪的聚合酶链式反应

根据先前描述的方法(Saiki RK等，β–球蛋白基因序列的酶扩增和用于镰状细胞性贫血诊断的限制位点分析(Enzymatic Amplification of Beta-Globin GenomicSequences and Restriction Site Analysis for Diagnosis of Sickle Cell Anemia).Science 1985，12月20日，230，no.4732：1350-54，doi：10.1126/science.2999980)。为了扩增每个感兴趣的序列(SOI)，化学合成长度在20和25个碱基之间且总是以鸟嘌呤或胞嘧啶碱基为末端的寡核苷酸引物，并将100pmol的每种引物添加到1μg基因组DNA模板或包含含有SOI的化学合成DNA的质粒(Genscript，美国)。根据制造商(OptiTaq，RoboKlon，德国)的说明书，使用聚合酶链式反应(PCR)在热循环仪(thermocylcer，DNA Engine Tetrad2，Bio-Rad，美国)中进行35个扩增循环。对SOI的每千碱基，在98℃进行变性30秒，在55℃进行引物退火25秒并且在72℃进行引物延伸1分钟。在具有DNA大小标准的1％琼脂糖凝胶(CAS-Nr.9012-36-6)上分析所得产物的分析样品(约2μl)(1kbp DNA-Ladder，Carl-Roth GmbH+Co.KG，德国)。在琼脂糖凝胶(Roti-GelStain，Carl-Roth GmbH+Co.KG，德国)染色后，在透照器(Benchtop UV Transilluminators，UVP，美国)上确认SOI的预期大小的寡核苷酸的存在。如果检测到除SOI之外的非特异性条带，则通过改变退火温度、添加增强子如PCR级DMSO(CAS-Nr.67-68-5)、或通过改变缓冲液组成和所用模板DNA的浓度来重复和优化PCR。在建立仅扩增SOI的高度特异性方案后，通过增加所用的寡核苷酸和脱氧核苷酸的量并在96或384孔PCR板(twin.tec PCR平板，Eppendorf，德国)中并行处理来实现扩大。

1.1产品纯化

所得的PCR产物必须从DNA聚合酶、缓冲液组分和脱氧核苷酸中分离出来。这可以通过使用商业上可获得的纯化试剂盒(例如NucleoSpin Gel和PCR Clean-up，MACHEREY-NAGEL，德国)按照供应商的说明或通过沉淀来实现。为了沉淀，合并PCR反应物，向寡核苷酸混合物中加入乙酸钠(CAS-Nr.127-09-3)(0.3M，pH5.2，终浓度)，然后将2倍体积冰冷的无水乙醇(CAS-Nr.64-17-5)加入1倍体积的寡核苷酸中，随后在-80℃下孵育至少2小时。此沉淀之后以17000×g离心30分钟。除去上清液后，用70％乙醇洗涤寡核苷酸沉淀，以17000×g离心15分钟，空气干燥30分钟并用2.0M NaCl(7647-14-5)和50mM Tris-Cl(CAS-Nr。1185-53-1)重新混悬。用HCl(CAS-Nr.7647-01-0)将pH调节至7.5。

1.2存储

将所得产物与蔗糖(CAS-Nr.57-50-1)混合至终浓度为20mg/μl，并装入褐色水解1级FIOLAX型玻璃瓶(Schott，德国)中，其用丁基橡胶冻干瓶塞(Wheaton，美国)盖住。冷冻干燥如下进行：将小瓶冷冻至-21℃，在-21℃的搁板温度和0.35mbar的室压下开始干燥，并在干燥过程中将温度升高至-10℃。二次干燥在-21℃的搁板温度和0.2mbar的室压下进行。所得产品用防回火盖(West Flip-Off seal，West Pharmaceutical，德国)密封。冻干的DNA可以在黑暗中在25℃/60％相对湿度(6个月)，2-8℃(24个月)、和-20℃(66个月)下储存而没有显著地降解(van der Heijden I，Beijnen JH等(2013)冻干质粒DNA pDERMATT的长期稳定性(Long Term Stability of Lyophilized Plasmid DNA pDERMATT)，Int J Pharm.10；453，no.2：648-50，doi：10.1016/j.ijpharm.2013.06.010)。

2.在微生物细胞中的复制

特定的寡核苷酸序列可以通过将它们整合到可用于转化细菌细胞的复制质粒中而大量生产，所述细菌细胞例如大肠杆菌和枯草芽孢杆菌，其在繁殖和分裂的同时将复制并繁殖携带SOI的质粒。

为了产生经济可行的量的寡核苷酸，必须实现每个细胞的高拷贝数、高细胞密度和有效的下游加工方法。

SOI可以使用带有复制起点(ORI)的标准克隆技术(例如先前描述的SLIC(KumpfmüllerJ，Kabisch J等(2013)一种用于枯草芽孢杆菌的快速基因组修改的优化技术(AnOptimized Technique for Rapid Genome Modifications of Bacillus Subtilis).JMicrobiol Met.3：350-52，doi：10.1016/j.mimet.2013.10.003))与复制质粒结合，该复制起点(ORI)导致细胞中的高拷贝数。这些起点的实例是ColE1和pUC ORI(Prather KJ等(2013)用于疫苗和基因治疗的质粒DNA的工业化规模生产：质粒设计、生产和纯化(Industrial Scale Production of Plasmid DNA for Vaccine and Gene Therapy：Plasmid Design，Production，and Purification).Enz Micro Tech.7：865-83，doi：10.1016/S0141-0229(03)00205-9)，或称为“失控复制”的起点，其在温度转变后失去对复制调控的控制(Uhlin BE和(1978)质粒R1drd-19的失控复制突变体：拷贝数控制的温度依赖性失控(Runaway-Replication Mutant of Plasmid R1drd-19:Temperature-Dependent Loss of Copy Number Control)，Mol General Gen MGG.165，no.2：167-79，doi：10.1007/BF00269904；Remaut E，Tsa H.(1983)具有温度诱导表达和温度调节的失控复制的改进的质粒载体(Improved Plasmid Vectors with aThermoinducible Expression and Temperature-Regulated Runaway Replication).Gene.no.1：103-13)，并且可导致革兰氏阴性细菌大肠杆菌的每个细胞的1000拷贝数。对于革兰氏阳性细菌枯草芽孢杆菌，可以应用RepE ORI(Swinfield TJ等(1990)粪链球菌质粒pAM Beta1基因87的复制区域的物理表征(Physical Characterisation of theReplication Region of the Streptococcus Faecalis Plasmid pAM Beta 1.Gene)，no.1：79-90)。所得的携带SOI的质粒必须转化进合适的宿主。可以遵循指定出版物中的协议，通过电穿孔枯草芽孢杆菌(B.subtilis)(Kabisch J等(2012)枯草芽孢杆菌ATCC6051作为表达宿主的表征和优化(Characterization and Optimization of Bacillus SubtilisATCC 6051as a Expression Host).J Biotechnol.doi：10.1016/j.jbiotec.2012.06.034)和大肠杆菌(Dower WJ，Miller JF等(1988)通过高压电穿孔高效转化大肠杆菌(High Efficiency Transformation of E.coli by High VoltageElectroporation).Nuc Acids Res.16，no.13：6127-45，doi：10.1093/nar/16.13.6127)来实现转化，即质粒DNA转移到细菌细胞中。

携带质粒的细胞在使用C源释放介质如Enpresso(BioSilta Ltd.，Cambridgeshire，英国)的培养摇床中培养或使用生物反应器以补料分批方法培养。已经描述了最常用的大肠杆菌菌株的几种优化方法(Quaak SGL等(2008)用于针对处于临床试验阶段I的黑素瘤的疫苗的pDERMATT的GMP的生产(GMP Production of pDERMATT forVaccination against Melanoma in a Phase I Clinical Trial).Eur J PharmaBiopharma.70，no.2：429-38，doi：10.1016/j.ejpb.2008.05.002。)。简言之，从含有具有SEQ ID NO：1-18的质粒pUC的大肠杆菌DH5α菌株的冷冻甘油储液中，大量接种含有用于保持对携带质粒的细胞的选择压力的合适抗生素的溶原培养基(LB)平板。将这些平板在30℃孵育过夜，使用两次2.5ml预热的EnPressoB培养基将得到的菌苔从平板上洗掉。将得到的悬浮液转移到10升搅拌罐生物反应器(Labfors 5，Infors AG，瑞士)中，并且将细胞以设定的pH6.7和酶控制的葡萄糖限制补料分批(EnPressoB，Biosilta Oy，芬兰)进行培养。在进入过渡相之前，通过前面的实验确定正确的时间点，通过10000×g离心收集细胞，并如实施例2.1所述分离含有SOI的质粒。

2.1产品纯化

为了施用该产品，需要在可扩展和稳健的过程中去除关键杂质，如蛋白质、内毒素、脂多糖、RNA和染色体DNA。

大多数描述的质粒纯化方案由三个步骤组成：细胞裂解，通过沉淀或过滤进行初级纯化和浓缩，然后应用一个或多个精制色谱柱进行二级纯化步骤。

为了分离，使用碱溶解(Bimboim HC和Doly J.(1979)用于筛选重组质粒DNA的快速碱性提取工艺(A Rapid Alkaline Extraction Procedure for ScreeningRecombinant Plasmid DNA).Nuc Acids Res.7，no.6：1513-23,doi：10.1093/nar/7.6.1513)将包含含有SOI的质粒的细胞裂解，然后进行上述沉淀。为了以快速和可升级的方式去除杂质，应用了固定金属亲和色谱(IMAC)。结果表明游离嘌呤碱基(如在RNA和受损DNA中发现的)与带金属的树脂(例如具有Cu(II)的亚氨基二乙酸(iminodoacetic acid))结合，而不保留完整的质粒DNA。为了从质粒主链释放SOI，使用合适的限制性内切核酸酶(RE)切割分离的质粒，例如，使用用于连接SOI和复制质粒主链的RE。然后使用Superose 6(GE Healthcare，美国)尺寸排阻色谱柱将SOI与复制质粒主链和RE分离。

2.2存储

如上所述保存所得的寡核苷酸。

实施例3产品应用

产品可能有不同的应用方式：

1.与饮料混合

这包括在饮料制造商处对冻干的寡核苷酸进行再水合，并将寡核苷酸与饮料混合至每份至少一百万个寡核苷酸分子的浓度。

2.逆球化(Reversed spherification)

将1.5％w/v乳酸钙水合物(CAS编号：41372-22-9)溶解在可食用溶液(例如芒果汁、杏仁香甜酒)中并将各自的寡核苷酸以不同浓度加入到该溶液中。用注射器或JetCutter(geniaLab，Braunschweig，德国)将所得悬浮液滴入0.5％w/v的藻酸钠(CAS编号：9005-38-3)和去离子水的分散体中，并在室温下孵育3分钟。得到的寡核苷酸载体复合物用去离子水洗涤两次并保存在先前使用的可食用溶液中。

3.与化妆品产品混合

将冻干的寡核苷酸与乙二胺四乙酸(EDTA)的盐一起重混悬，所述乙二胺四乙酸(EDTA)是常用于控制粘度的化妆品中的螯合剂。EDTA是众所周知的寡核苷酸稳定剂。该悬浮液以至少1百万分子/ml的浓度与化妆品混合。此外，可加入ω-3-油酸以增加寡核苷酸的皮肤渗透性(Touitou，E，Godin，B等人(2002)油酸，皮肤渗透促进剂，影响朗氏细胞和角质细胞(Oleic acid,a skin penetration enhancer,affects Langerhans cells andcorneocytes).JCon Rel。80：1-7。doi：10.1016/S0168-3659(02)00004-4。)。

实施例4寡核苷酸的体外消化

为了模拟消化和寡核苷酸摄取的效果而无需人体试验并且不损害濒危物种，进行体外胃肠消化实验。这些使用具有SEQ ID NO：1的寡核苷酸遵循如领先联盟(leadingconsortium)所建议的设置(Minekus，M.等(2014)一种适合的食物的标准静态体外消化方法-国际共识(A standard static in vitro digestion method suitable for food-aninternational consensus)，Food Funct，5,1113-1124。doi：10.1039/C3FO60702J)。简而言之，通过模拟它们各自的化学和酶组合物来模拟口腔、胃和肠道。如所建议的，将样品在每个阶段中孵育2分钟，并使用QIAamp DNA Micro试剂盒(Qiagen，德国)立即分离寡核苷酸并在4℃下储存直至定量。

通过实时PCR确定体外消化后寡核苷酸的完整性。使用Applied Biosystems 7500(Thermo Fisher Scientific Inc.)和qScript TM One-Step Green qRT-PCR试剂盒、ROX^TM(QuantaBio Inc.)和寡核苷酸引物(Prim_SEQ1_for[ATGCCCTTGTCCAGTC]，Prim_SEQ1_rev[CTAGAAAGCACAGCTG])对全长基因进行定量，在全长基因的末端退火(53℃)。在通过体外消化测定(40个循环中的23个之后的交叉点(CP))后，使用1百万个以上的寡核苷酸分子导致易于检测的量的SEQ ID NO：1的全长寡核苷酸。为了模拟传统提取物的体外传代，使用一片干牛肉(“牛肉干”，Bos taurus)，并且将相应的生长因子1(GenBank：V00111.1)的寡核苷酸衍生(for[acggctcagg gtccgtgaca]，rev[ctaataaaat gaggaaattg])。将干牛肉样品在21℃在去离子无菌水中冲洗14小时，然后与蛋白酶K(400ng/mL，P2308Sigma-Aldrich，美国)和盐酸胍(5mol/L，CAS号：50-01-1)在1mL容积中于55℃下孵育12小时。将样品离心(15,000g，10分钟)，然后进行苯酚/氯仿提取。在体外消化之前，仅检测到少量的生长因子1基因寡核苷酸(40个循环中的35个的C_P)，且在体外消化后没有超过背景阈值的信号，这明显突出了合成寡核苷酸的优势。

实施例5稳定剂对于寡核苷酸稳定性的影响

如实施例4所述，仅用寡核苷酸，以及与各种稳定剂组合以进行寡核苷酸的体外消化。在实施例4所示条件下，通过实时PCR再次进行各阶段(口腔、胃、肠)的模拟消化传代后的检测。测试了各种稳定剂：Stabi1：海藻酸钾；Stabi2：透明质酸；Stabi3：聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)；Stabi4：聚-L-丙交酯。从图1可以看出，稳定剂在模拟消化道中具有有利作用，因为在所有时间点，检测到的有稳定剂的寡核苷酸的百分比(相对于初始寡核苷酸的量)均高于没有稳定剂的百分比。

序列表

<110> DNA Essence GmbH

<120> 食品、饮料、化妆品和药物制剂中的寡核苷酸

<130> 37324-FES-P-WO

<160> 18

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 543

<212> DNA

<213> Panthera tigris altaica

<400> 1

atgcccttgt ccagtctgtt tgccaacgcc gtgctccggg cccagcacct gcaccagctg 60

gccgccgaca cctacaaaga gtttgagcgg gcgtacatcc cggagggaca gaggtattcc 120

atccagaacg cgcaggctgc cttctgcttc tcggagacca tcccggcccc cacgggcaag 180

gacgaggccc agcagagatc cgtgagtggc caggggcgcc cggccaagga tcaggggcct 240

ccctcgtctg caggagtcag gccctgggca gccttctccc tggggccgag ggtgtgcagg 300

gaggcagact gggcctctcc gtccctcttc ccctttttgc aggagctgga agatggcagc 360

ccccgggccg ggcagatcct gaagcaaacc tacgacaagt ttgacacaaa cttgcgcagt 420

gacgacgcgc tgctcaagaa ctatgggctc ctgtcctgct tcaagaagga cctgcacaag 480

gctgagacgt acctgcgggt catgaagtgt cgccgcttcg tggaaagcag ctgtgctttc 540

tag 543

<210> 2

<211> 705

<212> DNA

<213> Panthera tigris altaica

<400> 2

atgttgagag tattgagcag cgatgagcac cgtgaggcgg tacagcaaca aaatatcctc 60

gctgtggagg gaacctctag cgaactttgc acggagagtc ctacctccaa ttaccggtgc 120

gaaaccagag gaagtggtag agaccgcggt caggaccgcg tcaaacggcc catgaacgca 180

ttcatggtgt ggtctcgtga ccaaaggcgc aaggtggctc tagagaatcc ccaaacgcaa 240

aactcagaga tcagcaagca gctggggtac cagtggaaaa tgcttacaga agccgaaaaa 300

tggccgttct tcgaggaggc acagagacta caggcgctgc accgagagaa atacccgggc 360

tataaatacc gacctcgtcg gaaggccacg ccagaaaaaa gtgacaaatt gctccccgca 420

gagccctcgt ccacactctg tagtcagctg cacgcgggag agaggttgta cgccttcccc 480

tacaaggacg gctgtacgaa ggctgcacac tcacgaatga aggaccagtt atactcctcc 540

tcggaaccca tgagcataac caactcgctg ctggaaccgg gacctcacag gacctccaca 600

accctccaaa acagtcctga agacttggct ctgcagctct ccgcggatgc tcccctttac 660

cgtaacttag agctgggagt ttctgaggct tactttgcat ggtga 705

<210> 3

<211> 909

<212> DNA

<213> Panthera tigris altaica

<400> 3

atgggggtag ctctggagca gttcttcatt tttgtagggc tgctggcgtg cctggcgtac 60

ctggtgaagt gtgtgagatt ctccaaatgt atttttctgc acttctggaa agttttgcca 120

aggtctttct tgaagtcaat gggacaatgg gcagtgatca ctggagcggg agatgggatt 180

gggaaagctt attcatttga gctagcaaga caaggactca atgttgtgct tatcagccgg 240

acactgaaaa aactacaggc cattgctgcg gagattgagt gtaccacagg gagtagcgtg 300

aagattatac aagcagattt taccaaagac aacatctacg agcatattag agaaaaactt 360

gaaggcttag aaattggaat tttagtcaac aatgtcggaa tgcttccaaa ctttctcccg 420

agccacttcc ttgatacacc agatgaaatc cagagtctca tccactgtaa catcacctca 480

gtagtgaaga tgacacagct aattctgaaa cacatggaat caaggaggaa agggctcatc 540

ttgaacgttt ctgccggggt ggccttcttt ccctggccac tctactccac gtattcagct 600

tccaaggctt ttgtgtgtac gttttccaaa gccctgcaag cagaatataa aaggaaagga 660

atcattatcc aggtgctgac cccctatgct gtttcaaccc caatgacaaa gtatctaaac 720

accaacatgg taaccaagac tgctgatgag tttgttaaag aatcactgaa ttatgtcatg 780

attggagacg aaacctgtgg ctgcctcatc catgaaatct tgcggagctt cctgaacctg 840

atcccatcct gggttttgta cagcagcaca ttccagaaga aatacatgga ctacctcaag 900

cacaatacc 909

<210> 4

<211> 1620

<212> DNA

<213> Buceros rhinoceros silvestris

<400> 4

atgtctcgcc agtgcgctgc aaggacccag agcaaaaccg gcttcagtgc tgcttctgcc 60

ttcattccga acgccagcag caccagcttc tgtgtgcgtc ctgcacccca aggcggaagc 120

tgcagtattg cccctgggta tggaaggttt actggaggtt ttggaagcag gagcctctac 180

agttttggtg gatgcaagag gatgtctgta gctggaagag gaggtggctt ctatggacct 240

gcaggttttg gtgctgggat ctcctgtggt ttcggtggtg cagttggtgg tgccttcgaa 300

tttggtggtg gtgtgggtgg ccctggattc cctgctgtcc cagctggggg catccgtgaa 360

gtctcagtca atcagagcct tctgaaacct ctcaacctgg agattgaccc caacatccag 420

agtatccgca aggatgagaa ggatcagatt caaaccctca acaataaatt tgcctccttc 480

atcgacaagg tccgattcct tgagcaacaa aacaaggtcc tggagaccaa gtgggccctt 540

ctacaagaac aggggaacaa aacggtcaga aacgacatcg agcccctctt tgagacctac 600

atcaacaacc tcaggaggca gctgagcagc ttgctgactg acaaggagaa cctggcagga 660

gagctgagca aggtgcaaag ccttgctgag gacttcaaga acaaatacga agaggagatc 720

aacaggcact cagctgttga gaacgagttt gtggtcctga agaaggaggt ggacgctgcc 780

tacatgaata agacggagct gcaagccagg ctggagtccc tcatggagga gatagatttc 840

ctcagagccc tctatgaagc cgagctgtcc cagctgcaga cccagatctc cgacacctcc 900

gtcatcctca ccatggacaa caaccgcagc ctggacatgg acagcatcat tgcggaggtc 960

aaagcacagt acgaggacat cgccaaccgg agccgggcag aggctgagtc ctggtaccag 1020

tccaggtacg aagagctgca ggccacggct ggcaggcacg gggacgacct ccgcaacacc 1080

aagcaggaga tctctgagct caaccgccac gtccagcggc tgaggtctga aatcgacagc 1140

gtgaagaaac agtgtgccag tttgcagacg gccatcgcgg atgccgagca gcgtggggag 1200

ctggctctca aggatgccag ggccaaactg gctgagctgg agacagccct gcagcaggcc 1260

aagacagatc tggcccggca gctccgcgag taccaggagc tcatgaacgt caagctggcc 1320

ctggacatcg agatcgcaac ctacaggaag ctgctggagg gcgaggagtg caggctctct 1380

ggagaaggtg ccaatgcagt gaatatctct gtgaccagaa cctctgtagg aacaggatat 1440

gggagtggaa actgcctcag cttcggaggc agcagtggcg ttggaggtgg ggtctgtgcc 1500

ggaggaacgg gcttcagctc tggaagcgga caaggcacag ccgggtcatg cgtggtgggt 1560

ggaaacagct ccagtgtgaa gtatgtctcc accacctcct ccaccaagag atgctattag 1620

<210> 5

<211> 2175

<212> DNA

<213> Callorhynchus milii

<400> 5

atggaagtgg ctattttaag cagagttgat caactagttg atgagaaact aaaggcacat 60

ttacctaagg tacgactggt ccgcgatgct ccgagcaact gcttgtgtcc tccaggtccc 120

ccaggagaaa aaggaaagca cggtcgaaga ggtattccag gaccatctgg accgccagga 180

agagatggat ttccgggaaa caaaggagca ttgggtctac cagggagaag gggtctaaag 240

ggggaacctg gtgaaaaggg agctccagga gatccaggca tctctattat tggacctcgt 300

ggccctccag gtcaaccagg agctagaggc tttccaggat ttccgggccc gatagggttg 360

gatggcaaaa atggcaagat gggtccaaaa ggtgaaatgg gttcaccagg ttcaagaggt 420

gaaaagggtg aaactggtca aaagggagaa aagggtcatc gtggagaatc tggattgcat 480

tttggtctgc atggtcaaaa gggtgagaag ggctcgcgtg gagattctgg actttcattt 540

acacctcctg gattgtctgt gctgctagca gctgacgagc agtatatcaa acgccatcac 600

cacttcaagg gtgaaccggg acaagctgat aataactgtt ctccagggcc tccaggtcca 660

ccagggccct ccggacccaa aggacctcca gggtattcag gacatccagg ggcaaacgga 720

ttaccaggga aaactggaga agctggaaaa ccaggaagag atggaatgag gggcttaact 780

ggaatgactg gtatgaaggg tgattccgga cttccaggac gtccaggtga aaagggtgat 840

ccaggtgctt ctggaaagtc gggagcaaag ggtgatccgg gaatgccagg gctcccagga 900

agaaagggag agtttggtga gccagggctg cctggtccaa caggccttcc tggacctgta 960

gggccgaagg gagataaagg aaacattgga caaaagggag agataggaag gcctggcgtt 1020

ccaggaaagc ctggagctaa gggcatacca agttcatctg cttctgggtt aaagggagag 1080

ccaggggaga ttggacctcc gggagaaaag ggtgaaccag gtcttcgtgg tcttcgaggg 1140

aggagaggtc ttaggggtga aaatgggatt ccaggtgaag ctggaatgct tggagaaagg 1200

ggtgaaaaag gagatgcagg aatatcaacc aacggaatta aaggggaacc aggttcaact 1260

ggatctcgtg gagctccagg gcaaaagggg gaccctggcc agcctggacc aaggggttcg 1320

acaggtcaga agggtgaagc aggaaaaact gaaattatcg attacaatgg taacatcagc 1380

gaagccctcc agggtccccc aggacttccc ggacagccag gccaaaaggg tgaaataggt 1440

ttgccaggta catcaggact tgatggagaa aagggtcctc gcggtaaacc aggagaggtc 1500

ggattgcccg gtccagaagg cccaacgggc atcgaagggc taaaaggaga gccaggaatt 1560

atgggattcc caggacctaa aggaaacaag ggagaagttg gccaggcagg ttttccgggt 1620

ctggatggac ccacgggtga aaagggagaa agaggggaac ctggattgca aggtccacct 1680

ggcttgccgg gacctgttgg tcttcctgga acacctggag atagaggaga aaagggtgat 1740

ggggttgttg gtccagaagg gccacttggt ccacagggac caccaggccc aattggactc 1800

caggggcttt caggagcaaa gggtgattta ggatcggttg gtcttaaagg tgacagaggt 1860

cctttgggat tgcctggtgt accaggccca gcaggttcac aagggccagc aggaccaaaa 1920

ggagaaaggg gtgataaagg agatgctgga cctccaggac caattggacc acagggaata 1980

actggatcac taggaccaaa aggagaaaaa ggaggccggg gggagaaggg aaagagaggt 2040

tctaaagggc ctaaagggga taagggagac caaggagtgc ctggattaga tgcaccttgc 2100

ccattgggtg aagatggctt acctgtacaa ggctgttgga ataaaggtca gacaccatgg 2160

ctaaatgcca aatag 2175

<210> 6

<211> 1122

<212> DNA

<213> Rattus norvegicus

<400> 6

atgcctggat ggagctgcct ggtgacagga gcaggagggt ttgtgggcca gaggatcatc 60

cggatgttgg tgcaggagaa agaactgcag gaggtcaggg ctctggacaa agtcttcaga 120

ccagaaacca aggaggaatt ctctaagctg cagacaaagg ccaaggtgac aatgttagaa 180

ggagatattc tggatgccca gtacctgagg agagcgtgcc agggcatctc tgttgtcatc 240

cacacggctt ctgtcatgga tttctcacgt gtcctaccca ggcagaccat cctagatgtc 300

aatctgaaag gtacccagaa cctattggag gccggtatcc acgctagtgt gccagccttc 360

atctactgca gcacagttga cgttgcaggg cccaactcct acaagaagac catcctgaat 420

ggccgtgagg aagagcatca tgaaagcaca tggtcaaatc catacccata cagcaaaaag 480

atggccgaga aggcagtgct ggcagccaat gggagcatcc tgaaaaatgg tggcacactg 540

catacttgtg ccttaaggcc catgtacatt tatggggaga gaggtcaatt cctttctaga 600

ataataatta tggccctcaa aaataagggt gttctgaacg ttactggcaa attctccata 660

gtcaatccag tgtatgtagg caatgtggcc tgggcacata ttctggctgc caggggcctt 720

cgagacccca agaagtcaca aaatatccaa ggacagttct actatatctc agatgacacc 780

cctcaccaaa gctatgatga tttaaattgc accctgagca aggaatgggg cctccgcctt 840

gattccagct ggagccttcc tctgcccctg ctctactggc ttgccttcct gctggaaact 900

gtgagcttcc tgctgcgtcc attttacaac tataggccac cctttaactg ccacttggtc 960

acactgtcaa atagcaagtt cactttctcc tacaagaaag ctcagagaga tctgggctat 1020

gagccacttg tcagctggga ggaagccaag cagaaaacct cggagtggat cgggacacta 1080

gtggagcagc acagggagac actggacaca aagtctcagt ga 1122

<210> 7

<211> 1483

<212> DNA

<213> Ovis aries

<400> 7

ggtcatggag ggcgcgtttg cggcaaactg gagcgcggag gcggtcaacg ggagcgcggc 60

gcctccggga accgagggca atcgcactgc cgggccgcca cagcgcaacg aggccctggc 120

gcgggtggag gtggccgtgc tgtccctcat cctgttcctg gcgctgagcg gcaacgcgtg 180

cgtgctgctg gcgctgcgca ccacgcgcca caagcactcg cgcctcttct tcttcatgaa 240

gcacctgagc atagccgacc tggcggtggc ggtgttccag gtgctgccgc agcttctgtg 300

ggacatcacg ttccgtttct acgggcccga cctgctctgc cgcctcgtca agtacctgca 360

ggtggtgggc atgttcgcgt ccacctacct gctgctgctc atgtcgctcg accgctgcct 420

ggccatctgc cagccgctgc gctcgctgcg ccgccgcacc gaccgcctgg cggtactcgc 480

cacctggctc ggctgcctgg tggccagcgc gccgcaggtg cacatcttct cgctgcgcga 540

ggtggccgac ggcgtcttcg actgctgggc cgttttcatt cagccctggg ggcccaaggc 600

ctacatcacg tggatcacgc tcgccgtcta cattgtgccg gtcatcgtgc ttgccgcctg 660

ctacggcctt atcagcttca agatctggca gaacttacgg ctcaagacgg aggcggcggc 720

ggcagaggct tccgcggggg ctgagggcgc ggcggcagac tgcgcggggc gcgcggctct 780

ggcccgcgtc agcaacgtca agctcatctc taaggctaag atccgcacgg tcaagatgac 840

cttcatcgtc gtgctggcct tcatcgtgtg ctggacgcca ttctttttca agcagatgtg 900

gagtgtctgg gatgccgatg cgcccaagga agcctcggct ttcatcatcg ccatgcttct 960

ggccagcctc aacagctgct gcaacccctg gatctacatg ctcttcacgg gccacctctt 1020

ccaagacctt gtgcagcgct tcctctgctg ctcattccgc cgcctgaaag gcagccagct 1080

gggggagacg agcgtcacga aaaagatcca ttcgtacacc tttgtcctga gtcggcacag 1140

ctccagccag agaagctgct cgcagccatc cacggtgtga ctgatcggcc aggggccctc 1200

cttggcttcg actgtgcgac agcagacagt ctggctcttg gtggctgtgt acatgtgtgt 1260

acaaggtacc ttccagtttg taccccctgc accttgggca gctgagttgg gtgggaagca 1320

acccacggga agatggtagg gtgactcaac catcaagcca agccccagat cttctgtggg 1380

ccccatgggt actcctgccc tgaccccact gctgccttcc tttaacagta agtcccctac 1440

ataagaatga gttctgttct gagaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 1483

<210> 8

<211> 1818

<212> DNA

<213> Ape

<400> 8

atgagctggg gcacggagct gtgggatcag ttcgacagct tagacaagca tacacaatgg 60

ggaattgact tcttggaaag atatgccaaa tttgttaaag agaggataga aattgaacag 120

aactatgcga aacaattgag aaatctggtt aagaagtact gccccaaacg ttcatccaaa 180

gatgaagagc cacggtttac ctcgtgtgta gcctttttta atatccttaa tgagttaaat 240

gactatgcag gacagcgaga agttgtagca gaagaaatgg cgcacagagt gtatggtgaa 300

ttaatgagat atgctcatga tctgaaaact gaaagaaaaa tgcatctgca agaaggacga 360

aaagctcaac aatatcttga catgtgctgg aaacagatgg ataatagtaa aaagaagttt 420

gaaagagaat gtagagaggc agaaaaggca caacagagtt atgaaagatt ggataatgat 480

actaatgcaa ccaaggcaga tgttgaaaag gccaaacagc agttgaatct gcgtacgcat 540

atggccgatg aaaataaaaa tgaatatgct gcacaattac aaaactttaa tggagaacaa 600

cataaacatt tttatgtagt gattcctcag atttacaagc aactacaaga aatggacgaa 660

cgaaggacta ttaaactcag tgagtgttac agaggatttg ctgactcaga acgcaaagtt 720

attcctatca tttcaaaatg tttggaagga atgattcttg cagcaaaatc agttgatgaa 780

agaagagact ctcaaatggt ggtagactcc ttcaaatctg gttttgaacc tccaggagac 840

tttccatttg aagattacag tcaacatata tatagaacca tttctgatgg gactatcagt 900

gcatccaaac aggagagtgg gaagatggat gccaaaacca cagtaggaaa ggccaagggc 960

aaattgtggc tctttggaaa gaagccaaag ccacagtccc cacccttaac ccctactagt 1020

ttattcacat ccagtactcc taatgggtcc cagtttctca cattctccat tgagcccgtg 1080

cattattgta tgaatgaaat aaaaacaggg aagcccagaa ttccttcttt cagaagcctc 1140

aaaagagggt ggtcggtgaa gatgggccca gcactagaag atttcagtca tctgccacca 1200

gaacagagac gtaaaaaact acagcagcgc attgatgaac ttaacagaga actacagaaa 1260

gaatcagacc aaaaagatgc actcaacaaa atgaaagatg tatatgagaa gaatccacaa 1320

atgggggatc cagggagttt gcagcctaaa ttagcagaga ccatgaataa cattgaccgc 1380

ctacgaatgg aaatccataa gaatgaggct tggctctctg aagtcgaagg caaaacaggt 1440

gggagaggag acagaagaca tagcagtgac ataaatcatc ttgtaacaca gggacgagaa 1500

agtcctgagg gaagttacac tgatgatgca aaccaggaag tccgtgggcc accccagcag 1560

catggtcacc acaatgagtt tgatgatgaa tttgaggatg atgatccctt gcctgctatt 1620

ggacactgca aagctatcta cccttttgat ggacataatg aaggtactct agcaatgaaa 1680

gaaggtgaag ttctctacat tatagaggag gacaaaggtg acggatggac aagagctcgg 1740

agacagaacg gtgaagaagg ctacgttccc acgtcataca tagatgtaac tctagagaaa 1800

aacagtaaag gttcctga 1818

<210> 9

<211> 378

<212> DNA

<213> Sus scrofa

<400> 9

atggccggac ccagccttgc ctgctgcctg ctcggcctcc tggcgctgac ctccgcctgc 60

tacatccaga actgccccct gggcggcaag agggccgtgc tggacctcga cgtgcgcaag 120

tgcctcccct gcggccccgg gggcaaaggc cgctgcttcg ggcccagcat ctgctgcggg 180

gatgagctgg gctgcttcgt gggcacagcc gaggcgctgc gctgccagga ggagaactac 240

ctgccgtcgc cctgccagtc cggtcagaaa ccttgcggga gcgagggccg ctgcgccgcc 300

gccggcatct gctgcaaccc tgacggctgc cgcttcgacc ccgcctgcga ccccgaagcc 360

accttttccc agcgctga 378

<210> 10

<211> 3123

<212> DNA

<213> Gallus gallus

<400> 10

atgagggtat caataccagc tgtggcagtg tgggggagaa ttgctccctc tcacagcatc 60

actgccatta tgattacaga tgaccagcag actattgtta caggaagtca agaggggcaa 120

atatgtctct gggatctttc atcagaatta aagatttcat ctaaagaaat tctctttggc 180

catactgctt ctgtaacttg tttggcaaaa gcaagagagt ttgagaaaca gccatatgta 240

gtaagtgcta ctgaaaatgg ggagatgtgt gtttggaatg tcactagtgg actgtgcatt 300

gagaacacaa agcttcctta taggcataca gcaatctatt attaccattg ctcgttccga 360

atgacgggtg aaggctggct tctgtgtttt ggagaatatc aggatgttct tattattgat 420

gctaagactt tgggtgttct gcacactttg tcttctcagt cttctgattg gataaattgt 480

atgtgtattg ttcactctgc aagaattcaa gaagactcat tggttgctgt gtctgtaact 540

ggagttctta aagcatggga cctatcttca tctttgacca gcatacagga gaggcaaaat 600

gtgtgtgaaa aggaatcaaa gtctctgggc tgtacaaact gccgagcagt acggttttgc 660

acttacacag aaagactcct tctggttgtg tcttccatat gctggcaggt ctatgattat 720

tgtgatttct ccttgctgtg tactgagttc tgtaagagtg gtcagtgctt tgctggtgga 780

gaagtactag cagcttacag gcttatcatc tggacagaag atggttacag ttacatctac 840

cagctgctaa acagtggact ttccaaaagc atatatcctg cagatgggaa ggtgctgaaa 900

gaaactgttt atcctcattt actctgcttt actgatgtga aggaaaataa gagtttccct 960

tttgtcatgg ggtttatgaa tgaaaggaag gagcctttct ataagattct tttttctggt 1020

gaagcttcag gaagaatcac tctgtggcat gttcctgatg ttcctgcatc aacatttgat 1080

ggttcgccac aagaaatccc aatttcaaca acatggacac ttcaggataa ttttaataaa 1140

gcccattcaa tggcagaggg cattatagat catctttgtg attctaaaga tggaattgaa 1200

aatgcagttg tgacttcttc cgtgtacata cccagtctgg ataagctcgt gtgtggatgt 1260

gaaaatgggg aaattttcat aacgccaggt ctagaaactg caagagcaag acttctagaa 1320

aatgtgtctt tgaaaggtaa tctacctcat aaagttttga atggtcatag tagcagagtt 1380

acatgtttac tttatccaca tggtaattca gtaaggtttg atcccagctg gctgttatca 1440

gggggccagg attctactgt gatctgttgg gatatattta ctggaaaaat cttgcaccga 1500

tttagtctgc aatctgggcc agtgacagag ctattgagat ctccagaaaa ctgcaaattg 1560

cagtatcata gcgtagtgtg ctgcgtgtgc agtgatcact cagtagcagt tctacacctt 1620

cagaagaaag tttgtctctt acatgccaga aagcatctgt ttcctgtgaa gaagataaaa 1680

tttgacccca tggaaggtct gctaattatt gggtgtgaag atgattcggt ttatgtttgg 1740

gaaattgaaa caggcacact ggaacgacat gaaacaggtg aaatagcaaa agcaatcctt 1800

tcttccattg gagattcaga atacttagtg gtggattctc tacatcctgt atctcaggag 1860

tcaaaaagaa ataaaaatgt tcaatacaaa tcctccagct cttataagcg tggtatgatc 1920

tcttacaatc ttactcagac agaaaaatct tcagataagg taatggataa cagccttatt 1980

cagcaaccct ttactgtttt accagttaag ccaaaatgga acgatgcaaa ctttcatgtt 2040

ctcttatttg atctggaaaa acttgtggat cttctgctgt cgtatcaacc ctgtggatta 2100

aagtcatcaa actcattcca caactatgac actctagaaa gagccaaaag tactactgag 2160

aaaagagcgc tgacattaaa aagaaataaa actgctgggt tcacattgtc agtggatgga 2220

caagtagata ctgtttatgc aaaccaagtc aatagagatt ctaacacaat taggcctttg 2280

gaagaaagtg gtggcataaa aaggcagaaa aaaatgaaga gttcaagaaa gactaaaatg 2340

cagccatcag gaaacattga tgtgaacatc accacagata cagctaaact gcttttgtca 2400

tgtctcttac cctggggtgt agataaagaa atagatgatc tttgtgttgg gcaattagat 2460

atcttaaggc tgcagtgtcc ggttgctttt ggacttgtgt caaatgaacg ccacctctca 2520

ctgatgttgc cgggatggaa atgtactgat ggtggtgtgc tagaagagca cactttaagc 2580

aacttgtttt caaaaagagt gcttgattta tcaaacaagt atcttgctgc aactgaagga 2640

cgtactggtg agagagatgg aacagtggat aatgtttatg gaacaaaggg tgcagaaata 2700

atttttttct tattaagcag aatagtttta atcaacagag tttttaacat gccttcagca 2760

gatacgagtc aaattgaaag cctacagcaa ccagaatctg ttcacaacaa gtggcaaaat 2820

atggaagctg ccatatcttc atttcccagt ttttatggag agttaccacg caataaaagt 2880

agacgacatt cttctgattt tgggaatgct tcactgctga aactcatttg ctgttggagt 2940

gaccaatcta taaagattat tgaggcaatg caagcagtgc tgttggcaga agttcagagg 3000

actatgacaa ccttgagaaa gacagcagtc tgcagggagc cattggctac agtagagaat 3060

ggaaatggta gctgtgactt atattgtctt ggacagttgg gaagccagac caatctgcca 3120

ttt 3123

<210> 11

<211> 669

<212> DNA

<213> Varanus comodovarensis

<400> 11

agttgcatga aagctgcccc aatgaaagaa gttagcctca gaggacaagg cagcttggct 60

tatccaggtc tccggacaca gggaaatctg gagagcatgg gcgggcccaa tgatgccacg 120

cgagggttga catctttggc agacactttt gagcatgtca ttgaggagct tctggacgag 180

caggaggtca tccagcccag caaggaaaac aaggatgctg acatgtactc gtctcgggtt 240

atgctaagca gccaagtgcc tttggagcct ccactgctct ttctgcttga ggagtacaaa 300

aactacttgg atgctgcaaa catgtccatg agggtccggc gccactctga ccccgctcgc 360

cgtggggagc tgagcgtgtg tgacagtatc agcgagtggg taacagcggc ggacaaaaag 420

actgcagtgg acatgtcagg ggcaacggtg acagtcctgg aaaaagtccc agtacccaaa 480

ggtcaactga agcaatattt ttacgagacc aaatgcaact cgaagggtta tacgaaagag 540

ggctgcaggg gcatagacaa gaggtactgg aactcccagt gccgaactac ccagtcttat 600

gtgagagctc tcaccatgga taataaaaag agagttggat ggcgctttat aagaatagac 660

acttcctgt 669

<210> 12

<211> 1938

<212> DNA

<213> Oryctolagus cuniculus

<400> 12

atgtccgagc gcaaagaagg cagaggcaag gggaaaggca agaaaaagga cagaggctct 60

ggcaagaagc ccgcgcccgc cgacggcggc ccgagcccag ctttgcctcc ccgactgaaa 120

gagatgaaaa gccaggagtc agctgcaggc tccaagctgg tgcttcgctg tgagaccagt 180

tcagagtact cctctctcag gttcaagtgg ttcaagaatg ggaatgaatt aaaccgaaaa 240

aacaagccac aaaacatcaa gattcaaaaa aagccaggga aatcagaact tcgcatcaac 300

aaagcatcac tggctgattc tggagaatat atgtgcaaag tgatcagcaa attaggaaac 360

gacagtgcct ctgccaacat caccattgtg gaatccaatg agatcatcac tggcatgcca 420

gcctcaacag aaagagcata tgtatcttca gagtctccca ttagaatatc agtatcaaca 480

gaaggagcaa atacttcttc atccacatcg acgtccacca ccgggacaag tcaccttgtc 540

aagtgtgccg agaaggagaa aactttctgt gtgaatgggg gcgagtgctt catggtgaaa 600

gacctttcaa atccttcacg atacctgtgc aagtgcccaa atgagtttac tggtgatcgc 660

tgccaaaact acgtaatggc cagcttctac aagcatcttg ggattgaatt tatggaagca 720

gaagagctct accagaagag ggtgctgacc ataactggca tctgcatcgc cctgctggtg 780

gtcggcatca tgtgtgtggt ggcctactgc aaaaccaaga aacagcggaa aaagcttcat 840

gaccggcttc ggcagagtct tcggtcagaa cggaacaaca tggtgaacat agcaaacggg 900

cctcaccacc ccaacccacc cccagagaac gtgcagctgg tgaatcaata tgtgtctaaa 960

aatgtcatct ccagtgagca cattgttgag agagaagcag agacatcttt ttccaccagt 1020

cactatacct cgacagctca tcattccacc actgtcaccc agactcctag tcacagctgg 1080

agcaatggac acactgagag catcatttcg gaaagccact ctgtaatcat gatgtcatca 1140

gtagaaaaca gtaggcacag cagcccaaca gggggcccaa gaggacgtct taatggcttg 1200

ggaggccctc gagagtgtaa cagcttcctc aggcatgcca gagaaacccc tgactcctac 1260

cgagactctc ctcatagcga aaggtatgtg tcagccatga ccaccccggc tcgtatgtca 1320

cctgtagatt tccacacgcc aagctccccc aaatcgcccc cttcggaaat gtctccgcct 1380

gtgtccagca tgacggtgtc catgccctcc atggcagtca gccccttcgt ggaagaagag 1440

agacccctgc ttcttgtgac tccaccaagg ctccgggaga agaagtatga ccaccatcct 1500

cagcaattca actccttcca ccacaacccc gcgcatgaga gtaacagcct tccccccagc 1560

cccttgagga tagtggagga tgaggagtac gaaacgaccc aggagtatga gccagctcag 1620

gagcctgtta agaaactcgc taatagccgg cgagccaaaa gaaccaagcc caatggccac 1680

attgccaaca ggtcggagat ggacagcaac acaagctctg agaacagtga ctcagagagt 1740

gaaacagagg atgaaagagt aggtgaagat acgcctttcc tgggcataca gaaccccctg 1800

gccgccagtc ttgaggcagt acctgccttc cgcctggctg acagcaggac taacccagca 1860

ggccgcttct caacgcagga agaaatccag gccaggctgt ctagtgtaat tgctaaccaa 1920

gaccctattg ctgtataa 1938

<210> 13

<211> 1746

<212> DNA

<213> Snake

<400> 13

atgccctcct gccagcctgg caagatgcct gcgccgtggc cttggtggct ccagctcctc 60

ctttgcatcc cgtcctgtgt agcggttttg cccggccggg caggcgagct gaaagtgtcc 120

acccagactg gctcggtgcg tggcctgagc ctgccggttc tcgacggcca cgtctcggcc 180

ttcctaggca tcccctttgc ggagcctccc ctgggcagga tgcgcttcct gcgccctgag 240

cccgtcaagc cctggcagca cgtcctggac gccacttcct acaagcccgc ctgctaccag 300

atggtggaca ccagctaccc aggcttccag ggcacggaga tgtggaaccc caaccggggc 360

atgagcgagg actgcctcta cctcaacatc tgggtgccct ccccgcgccc caaggatgcc 420

cccgtcctgg tctggatcta cggagggggc ttctacagcg gcgctgcctc cctggacgtc 480

tatgacggcc gcttcctgac ctacacgcag aacgtcatcc tggtctccct cagctaccgt 540

gtgggggcct tcggcttttt gggcctcccg ggaagtccag aggccccggg aaacatgggg 600

ctgctggacc agcgcttggc cctgcagtgg atccagaaca acatccatcc ttttgggggc 660

aatccgaggg cggtcaccgt ctttggggag agtgccgggg ccgcttcggt gggcatgcac 720

ctgctttcca cccagagccg caccctcttc cagcgggcca ttctgcagag cggcggcccc 780

aacgcaccgt gggccaccgt cacgcctgcc gaaagccggg gccgggcggc ccttctggga 840

aagcagctgg gctgccactt caacaacgac tccgagctgg tcagttgctt gcgctcgaaa 900

aacccccagg agttgattga cgaggagtgg tccgtcctgc cctacaagag cattttccgc 960

ttccccttcg tcccggtcat tgacggggac ttctttccag atacccccga ggccatgctg 1020

agctcgggca acttcaagga gacccaggtg ttgctgggcg tggtgaagga cgagggctcc 1080

tacttcctga tctacgggct gcctggcttc agcaaggaca acgagagcct catcagccgg 1140

gccgacttcc tggaaggggt gcggatgagc gtgccccacg ccaacgacat cgccactgat 1200

gccgtggtgc tgcaatacac tgactggcag gaccaggaca acagggagaa gaaccgggag 1260

gccctggacg acatcgtggg agaccacaac gtcatctgcc cggtcgtgca gttcgccaac 1320

gactacgcca agcgcaacag caaggtgtac gcctacctgt ttgaccaccg ggcctccaac 1380

ctcctctggc ccccctggat gggggtcccc catggctacg agatcgagtt tgtctttgga 1440

ttgccgctca acgacagcct gaactacacg ccccaagaga aggagctgag ccgcagaatg 1500

atgcgctact gggccaactt cgcccggaca gggaacccca ccgaccctgc cgataagagc 1560

ggggcctggc ccacctacac cgcctcccag ccgcagtatg tccagctcaa cacccagccg 1620

ctggccaccc aacccagcct gcgggcccag atctgcgcct tctggaacca cttcctcccc 1680

aaactgctga acgccacagt cgatcccccg cgcgccgatc gcagacgccg ttccgcccgg 1740

gcctaa 1746

<210> 14

<211> 1155

<212> DNA

<213> Canis canis

<400> 14

atggagcgcg cgctggcggc caactggagc gcggaggcgg gcaacggcag cgaggcggcc 60

ccggcggcgc agggcaaccg cacggccggg cccccgcagc gcaacgaggc cctggcgcgc 120

gtggaggtgg ccgtgctgtg cctcatcctc ttcctggcgc tgagcggcaa cgcgtgcgtg 180

ctcctggcgc tgcgcaccac gcgccacaag cactcgcgcc tcttcttctt catgaagcac 240

ctgagcatag ccgacctggt ggtggcggtg ttccaggtgc tgccgcagct gctgtgggac 300

atcaccttcc gcttctacgg gcccgacctg ctgtgccgcc tggtcaagta cctgcaggtg 360

gtgggcatgt tcgcctccac ctacctgctg ctgctcatgt ccctggaccg ctgcctggcc 420

atctgccagc cgctgagggc gctgcgccgc cgcgcggacc gcctggccgt gctcgccacg 480

tggctgggct gcctggtggc cagcgcgccg caggtgcaca tcttctcgct gcgcgaggtg 540

gccgacggcg tcttcgactg ctgggccgtc ttcatccagc cctgggggcc caaggcctac 600

gtcacgtgga tcacgctctc cgtctacatc gtgcccgtca tcgtgctcgc cgcctgctac 660

ggcctcatca gcttcaaaat ttggcagaac ctgcgactca agacggcggc ggcggcggcc 720

gcggaggggc gggagggcgc ggggcgcgcg gccctggctc gggtcagcag cgtcaagctc 780

atctccaagg ccaagatccg caccgtgaag atgaccttca taatcgtgct ggccttcatc 840

gtgtgctgga cgccgttctt cttcgtgcag atgtggagcg tctgggacgc cgatgcgccc 900

aaggaagcct cggctttcat catagccatg ctcctggcca gcctcaacag ctgctgtaac 960

ccttggatct acatgctctt cacgggccac ctcttccatg aacttgtaca gcgcttcctc 1020

tgctgctcct ccagctacct gaaggggaac cgtccagggg agaccagcgt cagcaaaaag 1080

agcaactcat ccacctttgt cctgagccac cacagctcca gccagaggag ctcctcgcag 1140

ccatccacag tgtga 1155

<210> 15

<211> 1833

<212> DNA

<213> Bubalus bubalis

<400> 15

atgcaggtcc ccagccccag cgtgcgcgag gcggcctcca tgtacggcac cgcggtggcc 60

gtcttcctgg tcatcctcgt ggctgcgctg cagggctcgg cccccgccga gagccccttc 120

cccttccaca tccccctgga ccccgagggg accctggagc tgtcctggaa cgtcagctac 180

gcgcaggaga ccgtctactt ccagctcctg gtgcgggagc tcaaggctgg tgtcctgttc 240

gggatgtcgg accgagggga gctggagaat gctgatctgg tggtgctctg gactgacagg 300

gacggcgcct acttcgggga tgcctggagt gaccagaagg ggcaggtcca cctggactcc 360

cagcaggatt accagcttct gcgggcacag aggactccag aaggcctgta cctgctcttc 420

aagaggcctt ttggcacctg tgaccccaac gactacctca tcgaggacgg caccgtccac 480

ctggtgtacg gactcctgga ggagccgctc cggtcgctgg aggccatcaa catgtccggc 540

ttgcgcacgg ggctgcagag ggtgcagctg ctgaagccca gcatcctgca gccggccctg 600

cccacagaca cacgcaccat ggagatccgc gcccctgacg tcctcatccc tggccagcag 660

accacgtact ggtgctacgt gaccgagctc ccagacggct tcccccggca ccacatcgtc 720

atgtacgagc ccatcgtcac cgagggcaac gaggcgctgg tgcaccacat ggaggtcttc 780

cagtgcgccg ccgagttcga gaccatcccc cacttcagcg ggccctgcga ctccaagatg 840

aagccgcagc ggctcaactt ctgccgacac gtgctggccg cctgggccct gggcgccaag 900

gccttttact acccagagga agcgggcctg gccttcgggg ggcccggctc ctccagattt 960

ctccgcctgg aagttcacta ccacaacccg ctggtgataa caggccggcg cgactcctcg 1020

ggcatccgcc tgtactacac ggccgcgctg cggcgcttcg acgcgggcat catggagctg 1080

ggcctggcgt acacgcctgt gatggccatc cccccgcagg agacggcctt cgtcctcacc 1140

ggctactgca cagacaagtg cacccagctg gccctgcccg cctcggggat tcacatcttc 1200

gcctctcagc tccacacgca cctgacgggc cggaaggtgg tcacggtgct ggccagggac 1260

ggccgggaga cagagattgt gaacagggac aaccattaca gcccgcactt ccaggagatc 1320

cgcatgttga agaaggtcgt gtctgtccac ccgggagaca tgctcatcac ctcttgcacg 1380

tacaacacgg aagacaggag gctggccacc gtggggggct tcgggatcct ggaggagatg 1440

tgcgtcaact acgtgcacta ctacccccag acgcagctgg agctctgcaa gagcgccgtg 1500

gaccctggct tcctgcagaa gtacttccac cttgtgaaca ggttcaacag tgaggaagtc 1560

tgcacctgcc cccaggcgtc tgtccccgag cagtttgcct ccgtgccctg gaactccttc 1620

aaccgcgagg tgctcaaggc cctgtacggc ttcgcgccca tctccatgca ctgcaacaag 1680

tcctcggccg tccgcttcca gggcgagtgg aatcggcagc ccctgcctga gatcgtgtcc 1740

aggttggaag agcccacccc tcactgcccg gccagccagg ctcagagccc cgctggcccc 1800

accgtgctca acatcggtgg gggcaaaggt tga 1833

<210> 16

<211> 1352

<212> DNA

<213> Equus caballus

<400> 16

cgccgcggac gcggacgggc tgctggcggg gcgcgggccg ggtgcgggcg gcggtgcggg 60

gacccctggg gcggcggcgg cgttggcggg gggcgtgctg ctcatcggcg cagtgctcgc 120

ggggaactcg ctcgtgtgcg tgagcgtggc ggccgagcgc tccctgcaga cgcccaccaa 180

ctactttatc gtgagcctgg cggccgccga ccccctactc gccctgctcg tgctgcctct 240

cttcgtctac tccgaggtcc agggcggcgt gtggctgctg agccccggcc tctgcgacgc 300

gctcatggcc atggacgtca tgctgtgcac cgcctccatc ttcaacctgt gcgccatcag 360

cgtggacagg ttcgtggccg tggccgtgcc cttgagctac aaccgccaga gccggggcgg 420

ccgtcagctg ctgctcatcg gcgccacgtg gctgctgtcg gcggcggtgg ccgcgcccgt 480

gctgtgcggc ctcaacgacg ctcacggccg cgaccccgcc gtgtgccgcc tggaggaccg 540

cgactacgtg gtctactcat ccgtgtgctc cttcttcctg ccctgcccgc tcatgctgct 600

gctctactgg gccaccttcc ggggcctgcg gcgctgggag gccgcccgcc gcgccaagct 660

gcacggccgt gccccgcacc ggaccagcgg cccgggccct ccggcccccg acgccaccgc 720

gctccggggc ccgctgcccc ccgacgccat cccgccccct gggccacagc ccccagacac 780

aacccagctc cccagggcca tcacgtctcc caacgccatc ccgttctccg acgccaatgc 840

gcacccggac gcaacccagc tccccagtgt caccccggcc tccgacgcca ccccgccccc 900

cgacgccacc gcaccccctg acgccacccc gccccctgac gccatcctgt accccgacgc 960

cactgcaccc cctgacgcca ccctgccccc cgacgccatc ctgtccccgg atgccatccc 1020

gtcccccgat gccatcccgt gccccgatgc cgtcgcaccc ctccacgcca tcccggccga 1080

gcccccgctg caggcccgca ggaggaggcg cgccaagatc accggccggg agcgcaaggc 1140

catgggggtc ctgcctgtgg tggtcggggt cttcctgctg tgctggtcgc ccttcttcgt 1200

cgtgcacatc acgcgggcac tgtgtcccac ctgcgcggtg tccccgcggc tggtcagcgc 1260

agtcacctgg ctgggctacg tcaacagcgc cctcaacccc gtcatctaca ccgtcttcaa 1320

cgccgagttc cgcaacgtct tccgcaaggc cc 1352

<210> 17

<211> 522

<212> DNA

<213> Eagle

<400> 17

atggatatca ccattcataa ccccctgatc cgcagacccc tgttatcttg gttggcacca 60

agtcgtatct ttgaccagat ttttggagag cacctgcagg agtcagagct gctccctgct 120

tcccccagcc tcagtccctt cctgatgaga tcccccattc ttcggatgcc cagttggcta 180

gagacaggac tctctgagat gcgactggag aaggacaaat tttctgtaaa tcttgatgtg 240

aagcatttct cccctgagga gctaaaagtg aaggtgcttg gggacatgat agaaattcat 300

gggaaacacg aggagcgcca ggatgagcat ggctttattg ccagggagtt caacaggaaa 360

tacagaattc cagatgatgt ggaccctctg accataacct catcgctctc tctggatggt 420

gtcctgactg tgagtgcacc aaggaaacaa agtgatgtcc ccgagcgctc tattcctatc 480

acccgtgaag agaagcctgc cattgcagga gcccaaagga ag 522

<210> 18

<211> 390

<212> DNA

<213> Bamboo

<400> 18

atggcgaaga agattgtgca agcggccaac ttgaagcaga tcctcaggag gtgctcgagc 60

ctggggagga ggcagcagga cttggtgccc aagggccact tcccggtcta cgtcggcgag 120

agccggtgcc ggttcgtcgt gccgatcgcc tgcctggagc acccggagtt cctggtgctg 180

ctgcggaagg ccgaggagga gttcgggttc gagcacgacg ccgccatcac gctgccctgc 240

aatgaggccg tcttcgaggc tgtcctcgcc tccttgacgg gtccaagctc ttccttcttc 300

cctgatctta gagaccggct ctatagacga ggagaatcga cgtttgaaga tcctggtatt 360

gcgctctatc cagatatccc aagtgattag 390

权利要求书(按照条约第19条的修改)

1.一种用于对人施用的用于非免疫学用途的包含至少1百万个哺乳动物、禽类、爬行类动物或植物的非人类DNA寡核苷酸的制剂，所述寡核苷酸具有与选自由SEQ ID NO：1至18的一个或多个序列组成的组至少80％同源的序列。

2.根据权利要求1所述的制剂，其中所述寡核苷酸以包含寡核苷酸和合适的生理学上可接受的稳定剂的DNA-载体复合物的形式存在。

3.根据权利要求1或2所述的制剂，其中所述制剂是化妆品制剂或局部皮肤学制剂。

4.根据权利要求1或2所述的制剂，其中所述制剂是食品制剂。

5.根据权利要求4所述的制剂，其中所述制剂是饮料食品制剂。

6.根据权利要求1或2所述的制剂，其中所述制剂是药物制剂。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：1组成的组。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：2组成的组。

9.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：3组成的组。

10.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：4组成的组。

11.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：5组成的组。

12.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：6组成的组。

13.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：7组成的组。

14.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：8组成的组。

15.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：9组成的组。

16.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：10组成的组。

17.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：11组成的组。

18.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：12组成的组。

19.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：13组成的组。

20.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：14组成的组。

21.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：15组成的组。

22.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：16组成的组。

23.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：17组成的组。

24.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：18组成的组。

25.生产根据权利要求1-24中任一项所述的制剂的方法，包括以下步骤：

(i)提供冻干形式的寡核苷酸，所述寡核苷酸选自由SEQ ID NO：1至18组成的组；

(ii)再水合冻干形式的所述寡核苷酸。

26.根据权利要求25所述的方法，还包括将所述制剂与化妆品或食品混合的步骤。

27.权利要求1至24中任一项所述的制剂在个人润滑剂中的用途。

28.权利要求1至24中任一项所述的制剂在香料混合物中的用途。

29.一种试剂盒，其包含权利要求1至24中任一项所述的制剂。

30.一种用于对人施用的包含至少1百万个哺乳动物、禽类、爬行类动物或植物的非人多肽分子的制剂，所述多肽由与选自SEQ ID NO：1至18的一个或多个序列组成的组至少80％同源的序列编码。

Claims (30)

1.一种用于对人施用的包含至少1百万个哺乳动物、禽类、爬行类动物或植物的非人类DNA寡核苷酸的制剂，所述寡核苷酸具有与选自由SEQ ID NO：1至18的一个或多个序列组成的组至少80％同源的序列。

2.根据权利要求1所述的制剂，其中所述寡核苷酸以包含寡核苷酸和合适的生理学上可接受的稳定剂的DNA-载体复合物的形式存在。

3.根据权利要求1或2所述的制剂，其中所述制剂是化妆品制剂或局部皮肤学制剂。

4.根据权利要求1或2所述的制剂，其中所述制剂是食品制剂。

5.根据权利要求4所述的制剂，其中所述制剂是饮料食品制剂。

6.根据权利要求1或2所述的制剂，其中所述制剂是药物制剂。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：1组成的组。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：2组成的组。

9.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：3组成的组。

10.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：4组成的组。

11.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：5组成的组。

12.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：6组成的组。

13.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：7组成的组。

14.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：8组成的组。

15.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：9组成的组。

16.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：10组成的组。

17.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：11组成的组。

18.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：12组成的组。

19.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：13组成的组。

20.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：14组成的组。

21.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：15组成的组。

22.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：16组成的组。

23.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：17组成的组。

24.根据权利要求1至6中任一项所述的制剂，其中所述寡核苷酸的序列选自由SEQ IDNO：18组成的组。

25.生产根据权利要求1-24中任一项所述的制剂的方法，包括以下步骤：

(i)提供冻干形式的寡核苷酸，所述寡核苷酸选自由SEQ ID NO：1至18组成的组；

(ii)再水合冻干形式的所述寡核苷酸。

26.根据权利要求25所述的方法，还包括将所述制剂与化妆品或食品混合的步骤。

27.权利要求1至24中任一项所述的制剂在个人润滑剂中的用途。

28.权利要求1至24中任一项所述的制剂在香料混合物中的用途。

29.一种试剂盒，其包含权利要求1至24中任一项所述的制剂。

30.一种用于对人施用的包含至少1百万个哺乳动物、禽类、爬行类动物或植物的非人多肽分子的制剂，所述多肽由与选自由SEQ ID NO：1至18的一个或多个序列组成的组至少80％同源的序列编码。