CN108760919A - 一种儿童维d钙咀嚼片制剂中维生素d3含量的检测方法 - Google Patents
一种儿童维d钙咀嚼片制剂中维生素d3含量的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108760919A CN108760919A CN201810524463.6A CN201810524463A CN108760919A CN 108760919 A CN108760919 A CN 108760919A CN 201810524463 A CN201810524463 A CN 201810524463A CN 108760919 A CN108760919 A CN 108760919A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- tie
- vitamin
- levels
- biocal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N vitamin D3 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-YRZJJWOYSA-N 0.000 title claims abstract description 31
- 229940021056 vitamin d3 Drugs 0.000 title claims abstract description 31
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 73
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 48
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 239000013642 negative control Substances 0.000 claims abstract description 25
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 22
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 18
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 claims abstract description 17
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 16
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 15
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 45
- WIGIZIANZCJQQY-UHFFFAOYSA-N 4-ethyl-3-methyl-N-[2-[4-[[[(4-methylcyclohexyl)amino]-oxomethyl]sulfamoyl]phenyl]ethyl]-5-oxo-2H-pyrrole-1-carboxamide Chemical compound O=C1C(CC)=C(C)CN1C(=O)NCCC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(=O)NC2CCC(C)CC2)C=C1 WIGIZIANZCJQQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 17
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- 230000009514 concussion Effects 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 claims description 5
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 7
- 238000005220 pharmaceutical analysis Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 15
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 4
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 3
- 235000005282 vitamin D3 Nutrition 0.000 description 3
- 239000011647 vitamin D3 Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000018678 bone mineralization Effects 0.000 description 1
- 230000001055 chewing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 230000005672 electromagnetic field Effects 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004262 preparative liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002834 transmittance Methods 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
- G01N30/52—Physical parameters
- G01N30/54—Temperature
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，涉及药物分析技术领域，包括以下步骤：(1)标准品溶液的制备、(2)标准溶液的梯度稀释、(3)标准曲线的制作、(4)样品溶液的制备：取儿童维D钙咀嚼片，加入液氮研磨成粉末，微波助溶使粉末完全溶解，制得供试品溶液，经过离心机离心，用10ml取样器取出上清加入到500ml棕色圆底烧瓶中，将上清进行旋转蒸发；(5)阴性对照溶液的制备、(6)样品溶液的上样、(7)阴性对照溶液的上样，所述步骤(4)中的溶剂经过微波处理3‑5min。本发明操作简单，分离度高，专属性强、检测结果准确可信，适用于大批次、多批量的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测，具有很好的推广价值。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法。
背景技术
维生素D3是胆钙化醇，又称为胆钙化固醇，是维生素D的一种。维生素D3能够提高肌体对钙、磷的吸收，使血浆钙和血浆磷的水平达到饱和程度，促进生长和骨骼钙化，促进牙齿健全，通过肠壁增加磷的吸收，并通过肾小管增加磷的再吸收，维持血液中柠檬酸盐的正常水平并且能够防止氨基酸通过肾脏损失。
维生素D3的稳定性好，是制备制剂时的首选原料。2015年版《中国药典》中收载的维生素D3含量测定方法采用高效液相色谱法，样品的制备需皂化处理，操作烦琐。维生素D3的含量测定大多采用高效液相色谱法，样品需用二甲基亚砜－水溶液提取，正己烷萃取，操作复杂、耗时长。也有少数采用反相高效液相色谱法测定，在流动相中加入二氯甲烷，对色谱柱的损害较大。儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3的含量低，辅料所占比例高，测定难度较大，现有的技术的检测方法是基于皂化法，对皂化液进行液液萃取，合并分次的萃取液后经旋转蒸发装置浓缩后定容，再使用正相色谱，对浓缩液中的干扰物质进行正相分离除杂，最终上机液进入液相色谱分析。上述方法操作过程复杂，液液萃取容易出现待测物提取不完全，两相液面出现乳化等现象；而正相色谱净化往往需要较专业的半制备液相色谱，以上两点均不利于大批量，多批次检验操作。儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3的含量低，现有的技术采用普通的研磨，溶解提取方式得到的溶液，操作方式虽然简单，但是由于维生素D3的相对含量非常低，直接注入高效液相色谱仪，几乎没有峰值，根本检测不到维生素D3。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种操作简单，分离度高，专属性强、检测结果准确可信，适用于大批次、多批量的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法。
一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，包括以下步骤：
(1)标准品溶液的制备：精密称取维生素D3标准品1-5mg加入到50ml棕色瓶中，然后向50ml棕色瓶中加入正戊醇5-10ml，随后微波助溶使维生素D3标准品完全溶解，制得标准品溶液；
(2)标准溶液的梯度稀释：震荡混匀步骤(1)制得的标准溶液，梯度稀释标准溶液，得到梯度稀释液；
(3)标准曲线的制作：精密量取10-30ul步骤(2)制得的梯度稀释液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，然后根据色谱图制作标准曲线；
(4)样品溶液的制备：取50-100片儿童维D钙咀嚼片加入到无菌研钵中，然后加入液氮研磨成粉末，随后精密称取30-70g粉末加入到500ml棕色瓶A中，再向500ml棕色瓶A中加入溶剂200-400ml，微波助溶使粉末完全溶解，制得供试品溶液，然后将制得的供试品溶液加入到500ml棕色离心管中，经过离心机离心，然后用10ml取样器取出上清加入到500ml棕色圆底烧瓶中，将上清进行旋转蒸发，制得维生素D3浓缩液，精密量取维生素D3浓缩液，加入正戊醇定容到5-10ml，制得样品溶液；
(5)阴性对照溶液的制备：将步骤(4)的离心管中剩余的下层溶液倒入500ml棕色瓶B中，制得阴性对照溶液；
(6)样品溶液的上样：精密量取10-30ul步骤(4)制得的样品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
(7)阴性对照溶液的上样：精密量取10-30ul步骤(5)制得的阴性对照溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
本发明的阴性对照排除其他峰的干扰，若维生素D3提取不完全，阴性对照液注入高效液相色谱仪之后就会产生对应的色谱峰，另外，儿童维D钙咀嚼片中辅料占用很大的比例，成分也较为复杂，阴性对照液注入高效液相色谱仪进行检测，记录色谱图，将得到的色谱图与色谱图进行对比，排除辅料成分对维生素D3含量检测的干扰。
本发明对儿童维D钙咀嚼片采用液氮研磨成粉末，液氮具有快速高效的作用，能够使维生素D3彻底释放，并且因为速度很快，也就避免了维生素D3被外界环境分解，有利于得到纯净的维生素D3。维生素D3是一种胆钙化醇，耐热性好，在空气中极易被氧化，本发明采用微波助溶，微波是频率在300MHz到300GHz的电波，溶剂和溶质在快速变化的高频电磁场(微波)作用下，其极性取向将随着外电场的变化而变化。造成溶剂分子的自旋运动的效应，加速分子运动，加快溶解速度和溶解的效率，并且很好的避免了空气的氧化。
本发明对供试品溶液进行离心机离心分离维生素D3和其他杂质，不互溶的液体在离心机中因密度不同而很快分离，离心机离心分离比重力分离时间要短得多。维生素D3对光不稳定，现有技术采用萃取技术进行分离，其原理是利用重力分离，时间非常长，并且无法做到很好的避光处理，维生素D3难免会部分分解，检测结果不准确可信。
本发明将上清进行旋转蒸发，制得维生素D3浓缩液，浓缩，指使溶剂蒸发而提高溶液的浓度，泛指不需要的部分减少而需要部分的相对含量增高。本发明中儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3的含量非常低(2.5ug/g)，离心分离得到的上清中维生素D3含量是微量的，若直接将得到的上清注入高效液相色谱仪，由于浓度过低，色谱图中几乎无法读取峰面积，与对照品浓度差异过大，所计算的结果不可信。因此本发明选用旋转蒸发技术对上清进行旋转蒸发浓缩，旋转蒸发的原理为在真空条件下，恒温加热，使旋转瓶恒速旋转，物料在瓶壁形成大面积薄膜，高效蒸发，得到高浓度的维生素D3浓缩液。
进一步的，所述步骤(4)中的溶剂包括氯仿溶液和乙醇溶液，所述氯仿溶液和乙醇溶液的体积比为20-40：1-3。
进一步的，所述步骤(4)中的溶剂经过微波处理3-5min。
本发明的溶剂经过微波处理，微波波长约在1m-1mm(相应频率约为300MHz到300GHz)之间的电磁波，微波可以使化学物质发生分子变形和振动，溶剂经过微波处理之后，化学活性增强，更有利于样品的溶解。
进一步的，所述高效液相色谱仪的流动相包括乙腈溶液和甲醇溶液，所述步骤(3)、步骤(6)和步骤(7)中的乙腈溶液和甲醇溶液的体积比为80-100：10-20，所述步骤(3)、步骤(6)和步骤(7)中的高效液相色谱仪的柱温为23-27℃、检测波长为245-275nm、流速为1-2ml/min。
本发明采用高效液相色谱仪检测，根据样品溶液和标准品溶液的峰面积来计算儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量，若以甲醇作为流动相，提高保留时间，峰宽变长，但是峰形不好，峰面积计算结果不准，若以乙腈作为流动相，乙腈粘度较甲醇小，从速率方程角度说，流动相传质阻抗小，有利于柱效提高，峰宽较窄，峰形较好，但是由于峰宽比较窄，峰面积的计算不准，检测结果也就不可信，以上两点均仅针对流动相，本发明将乙腈和甲醇进行合理配比来作为流动相，可以提高峰形的质量和提高保留时间，检测结果准确可信。
进一步的，所述步骤(4)中的离心机离心的转速为3000-5000rpm、离心时间为10-15min、离心温度为23-27℃。
进一步的，所述步骤(4)中的液氮研磨需在避光环境中进行研磨。
进一步的，所述步骤(4)中的旋转蒸发的温度为30-40℃，旋转速度为40-100rpm。
进一步的，所述步骤(1)和步骤(4)中的微波助溶的时间为10-15min。
进一步的，所述步骤(1)和步骤(4)中的正戊醇为色谱纯。
本发明的正戊醇为色谱纯，色谱纯一般是指色谱专用溶剂或者试剂，在低波长处的透光率比较好。色谱纯是指进行色谱分析时使用的标准试剂，在色谱条件下只出现指定化合物的峰，不出现杂质峰。
本发明的有益效果是：本发明操作简单，分离度高，专属性强、检测结果准确可信，适用于大批次、多批量的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测，具有很好的推广价值。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1
一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，包括以下步骤：
(1)标准品溶液的制备：精密称取维生素D3标准品1mg加入到50ml棕色瓶中，然后向50ml棕色瓶中加入正戊醇5ml，随后微波助溶使维生素D3标准品完全溶解，制得标准品溶液；
(2)标准溶液的梯度稀释：震荡混匀步骤(1)制得的标准溶液，梯度稀释标准溶液，得到梯度稀释液；
(3)标准曲线的制作：精密量取10ul步骤(2)制得的梯度稀释液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，然后根据色谱图制作标准曲线；
(4)样品溶液的制备：取50片儿童维D钙咀嚼片加入到无菌研钵中，然后加入液氮研磨成粉末，随后精密称取30g粉末加入到500ml棕色瓶A中，再向500ml棕色瓶A中加入溶剂200ml，微波助溶使粉末完全溶解，制得供试品溶液，然后将制得的供试品溶液加入到500ml棕色离心管中，经过离心机离心，然后用10ml取样器取出上清加入到500ml棕色圆底烧瓶中，将上清进行旋转蒸发，制得维生素D3浓缩液，精密量取维生素D3浓缩液，加入正戊醇定容到5ml，制得样品溶液；
(5)阴性对照溶液的制备：将步骤(4)的离心管中剩余的下层溶液倒入500ml棕色瓶B中，制得阴性对照溶液；
(6)样品溶液的上样：精密量取10ul步骤(4)制得的样品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
(7)阴性对照溶液的上样：精密量取10ul步骤(5)制得的阴性对照溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
所述步骤(4)中的溶剂包括氯仿溶液和乙醇溶液，氯仿溶液和乙醇溶液的体积比为40：1。
所述步骤(4)中的溶剂经过微波处理3min。
所述步骤(3)、步骤(6)和步骤(7)中的高效液相色谱仪的流动相包括乙腈溶液和甲醇溶液，乙腈溶液和甲醇溶液的体积比为100：10，步骤(3)、步骤(6)和步骤(7)中的高效液相色谱仪的柱温为23℃、检测波长为245nm、流速为1ml/min。
所述步骤(4)中的离心机离心的转速为3000rpm、离心时间为10min、离心温度为23℃。
所述步骤(4)中的液氮研磨需在避光环境中进行研磨。
所述步骤(4)中的旋转蒸发的温度为30-40℃，旋转速度为40-100rpm。
所述步骤(1)和步骤(4)中的微波助溶的时间为10-15min。
所述步骤(1)和步骤(4)中的正戊醇为色谱纯。
实施例2
一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，包括以下步骤：
(1)标准品溶液的制备：精密称取维生素D3标准品1-5mg加入到50ml棕色瓶中，然后向50ml棕色瓶中加入正戊醇7.5ml，随后微波助溶使维生素D3标准品完全溶解，制得标准品溶液；
(2)标准溶液的梯度稀释：震荡混匀步骤(1)制得的标准溶液，梯度稀释标准溶液，得到梯度稀释液；
(3)标准曲线的制作：精密量取20ul步骤(2)制得的梯度稀释液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，然后根据色谱图制作标准曲线；
(4)样品溶液的制备：取75片儿童维D钙咀嚼片加入到无菌研钵中，然后加入液氮研磨成粉末，随后精密称取50g粉末加入到500ml棕色瓶A中，再向500ml棕色瓶A中加入溶剂100ml，微波助溶使粉末完全溶解，制得供试品溶液，然后将制得的供试品溶液加入到500ml棕色离心管中，经过离心机离心，然后用10ml取样器取出上清加入到500ml棕色圆底烧瓶中，将上清进行旋转蒸发，制得维生素D3浓缩液，精密量取维生素D3浓缩液，加入正戊醇定容到7.5ml，制得样品溶液；
(5)阴性对照溶液的制备：将步骤(4)的离心管中剩余的下层溶液倒入500ml棕色瓶B中，制得阴性对照溶液；
(6)样品溶液的上样：精密量取20ul步骤(4)制得的样品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
(7)阴性对照溶液的上样：精密量取20ul步骤(5)制得的阴性对照溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
所述步骤(4)中的溶剂包括氯仿溶液和乙醇溶液，氯仿溶液和乙醇溶液的体积比为30：2。
所述步骤(4)中的溶剂经过微波处理4min。
所述步骤(3)、步骤(6)和步骤(7)中的高效液相色谱仪的流动相包括乙腈溶液和甲醇溶液，乙腈溶液和甲醇溶液的体积比为90：15，步骤(3)、步骤(6)和步骤(7)中的高效液相色谱仪的柱温为25℃、检测波长为260nm、流速为1.5ml/min。
所述步骤(4)中的离心机离心的转速为4000rpm、离心时间为13min、离心温度为25℃。
所述步骤(4)中的液氮研磨需在避光环境中进行研磨。
所述步骤(4)中的旋转蒸发的温度为35℃，旋转速度为70rpm。
所述步骤(1)和步骤(4)中的微波助溶的时间为13min。
所述步骤(1)和步骤(4)中的正戊醇为色谱纯。
实施例3
一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，包括以下步骤：
(1)标准品溶液的制备：精密称取维生素D3标准品5mg加入到50ml棕色瓶中，然后向50ml棕色瓶中加入正戊醇10ml，随后微波助溶使维生素D3标准品完全溶解，制得标准品溶液；
(2)标准溶液的梯度稀释：震荡混匀步骤(1)制得的标准溶液，梯度稀释标准溶液，得到梯度稀释液；
(3)标准曲线的制作：精密量取30ul步骤(2)制得的梯度稀释液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，然后根据色谱图制作标准曲线；
(4)样品溶液的制备：取100片儿童维D钙咀嚼片加入到无菌研钵中，然后加入液氮研磨成粉末，随后精密称取70g粉末加入到500ml棕色瓶A中，再向500ml棕色瓶A中加入溶剂400ml，微波助溶使粉末完全溶解，制得供试品溶液，然后将制得的供试品溶液加入到500ml棕色离心管中，经过离心机离心，然后用10ml取样器取出上清加入到500ml棕色圆底烧瓶中，将上清进行旋转蒸发，制得维生素D3浓缩液，精密量取维生素D3浓缩液，加入正戊醇定容到10ml，制得样品溶液；
(5)阴性对照溶液的制备：将步骤(4)的离心管中剩余的下层溶液倒入500ml棕色瓶B中，制得阴性对照溶液；
(6)样品溶液的上样：精密量取30ul步骤(4)制得的样品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
(7)阴性对照溶液的上样：精密量取30ul步骤(5)制得的阴性对照溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
所述步骤(4)中的溶剂包括氯仿溶液和乙醇溶液，氯仿溶液和乙醇溶液的体积比为20：3。
所述步骤(4)中的溶剂经过微波处理3-5min。
所述步骤(3)、步骤(6)和步骤(7)中的高效液相色谱仪的流动相包括乙腈溶液和甲醇溶液，乙腈溶液和甲醇溶液的体积比为80：20，步骤(3)、步骤(6)和步骤(7)中的高效液相色谱仪的柱温为27℃、检测波长为275nm、流速为2ml/min。
所述步骤(4)中的离心机离心的转速为5000rpm、离心时间为15min、离心温度为27℃。
所述步骤(4)中的液氮研磨需在避光环境中进行研磨。
所述步骤(4)中的旋转蒸发的温度为40℃，旋转速度为100rpm。
所述步骤(1)和步骤(4)中的微波助溶的时间为15min。
所述步骤(1)和步骤(4)中的正戊醇为色谱纯。
对比实施例1
本对比实施例1与实施例2相比，省去步骤(4)中的液氮操作，除此外的方法步骤均相同。
对比实施例2
本对比实施例2与实施例2相比，省去步骤(4)中的旋转蒸发操作，除此外的方法步骤均相同。
对比实施例3
本对比实施例3与实施例2相比，省去步骤(4)中的微波处理操作，除此外的方法步骤均相同。
对比实施例4
省去步骤(4)中的液氮操作、步骤(4)中的旋转蒸发操作和步骤(4)中的微波处理操作，除此外的方法步骤均相同。
对照组1
申请号为：201610612293.8公开的一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法。
对照组2
申请号为为：201610543201.5公开的一种维生素D3含量的检测方法。
为了对比本发明效果，选用市面上同一批制得的儿童维D钙咀嚼片制剂(产品中生产的维生素D3的含量为：2.5ug/g)作为实验对象，分别用上述实施例1、实施例2、实施例3、对比实施例1、对比实施例2、对比实施例3、对比实施例4、对照组1、对照组2的方法进行检测，对应检测的对比数据如下表1所示：
表1
| 维生素D3的含量(ug/g) | 准确率(％) | |
| 实施例1 | 2.32 | 92.8 |
| 实施例2 | 2.48 | 99.2 |
| 实施例3 | 2.36 | 94.4 |
| 对比实施例1 | 2.08 | 83.2 |
| 对比实施例2 | 0.89 | 35.6 |
| 对比实施例3 | 1.37 | 54.8 |
| 对比实施例4 | 0.48 | 19.2 |
| 对照组1 | 0.57 | 22.8 |
| 对照组2 | 0.63 | 25.2 |
从上述表格可以看出，在与申请号为201610612293.8公开的一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法和申请号为201610543201.5公开的一种维生素D3含量的检测方法相比，本发明能够有效地保护维生素D3不被破坏，促进维生素D3彻底释放并完全溶解，并且旋转蒸发浓缩溶液，得到维生素D3含量高的浓缩液，解决了现有技术中维生素D3变性分解，高效液相色谱得不到有效的色谱峰，检测结果不准确，并且操作复杂的问题。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (9)
1.一种儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)标准品溶液的制备：精密称取维生素D3标准品1-5mg加入到50ml棕色瓶中，然后向50ml棕色瓶中加入正戊醇5-10ml，随后微波助溶使维生素D3标准品完全溶解，制得标准品溶液；
(2)标准溶液的梯度稀释：取震荡混匀步骤(1)制得的标准溶液，梯度稀释标准溶液，得到梯度稀释液；
(3)标准曲线的制作：精密量取10-30ul步骤(2)制得的梯度稀释液注入高效液相色谱仪，记录色谱图，然后根据色谱图制作标准曲线；
(4)样品溶液的制备：取50-100片儿童维D钙咀嚼片加入到无菌研钵中，然后加入液氮研磨成粉末，随后精密称取30-70g粉末加入到500ml棕色瓶A中，再向500ml棕色瓶A中加入溶剂200-400ml，微波助溶使粉末完全溶解，制得供试品溶液，然后将制得的供试品溶液加入到500ml棕色离心管中，经过离心机离心，然后用10ml取样器取出上清加入到500ml棕色圆底烧瓶中，将上清进行旋转蒸发，制得维生素D3浓缩液，精密量取维生素D3浓缩液，加入正戊醇定容到5-10ml，制得样品溶液；
(5)阴性对照溶液的制备：将步骤(4)的离心管中剩余的下层溶液倒入500ml棕色瓶B中，制得阴性对照溶液；
(6)样品溶液的上样：精密量取10-30ul步骤(4)制得的样品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
(7)阴性对照溶液的上样：精密量取10-30ul步骤(5)制得的阴性对照溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
2.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中的溶剂包括氯仿溶液和乙醇溶液，所述氯仿溶液和乙醇溶液的体积比为20-40：1-3。
3.根据权利要求2所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中的溶剂经过微波处理3-5min。
4.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)、步骤(6)和步骤(7)中的高效液相色谱仪的流动相包括乙腈溶液和甲醇溶液，所述乙腈溶液和甲醇溶液的体积比为80-100：10-20，所述步骤(3)、步骤(6)和步骤(7)中的高效液相色谱仪的柱温为23-27℃、检测波长为245-275nm、流速为1-2ml/min。
5.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中的离心机离心的转速为3000-5000rpm、离心时间为10-15min、离心温度为23-27℃。
6.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中的液氮研磨需在避光环境中进行研磨。
7.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中的旋转蒸发的温度为30-40℃，旋转速度为40-100rpm。
8.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(4)中的微波助溶的时间为10-15min。
9.根据权利要求1所述的儿童维D钙咀嚼片制剂中维生素D3含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(4)中的正戊醇为色谱纯。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810524463.6A CN108760919A (zh) | 2018-05-28 | 2018-05-28 | 一种儿童维d钙咀嚼片制剂中维生素d3含量的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810524463.6A CN108760919A (zh) | 2018-05-28 | 2018-05-28 | 一种儿童维d钙咀嚼片制剂中维生素d3含量的检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108760919A true CN108760919A (zh) | 2018-11-06 |
Family
ID=64002833
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810524463.6A Pending CN108760919A (zh) | 2018-05-28 | 2018-05-28 | 一种儿童维d钙咀嚼片制剂中维生素d3含量的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108760919A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114965726A (zh) * | 2021-11-03 | 2022-08-30 | 葵花药业集团(佳木斯)有限公司 | 一种咀嚼片的指纹图谱检测方法及其指纹图谱 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0161177B2 (zh) * | 1981-06-22 | 1989-12-27 | Meiji Milk Prod Co Ltd | |
| CN102353745A (zh) * | 2011-08-26 | 2012-02-15 | 贵州师范大学 | 一种刺梨的炮制方法及多指标检测方法 |
| US20120048003A1 (en) * | 2010-08-24 | 2012-03-01 | GOLDEN PRODUCTS LLC, Limited Liability Company | Vitamin assay methods |
| CN102435700A (zh) * | 2011-09-22 | 2012-05-02 | 明一（福建）婴幼儿营养品有限公司 | 测定婴幼儿食品和乳品中维生素ade的含量的方法 |
| CN106153796A (zh) * | 2015-04-17 | 2016-11-23 | 西藏卫信康医药股份有限公司 | 注射用12种复合维生素的含量分析检测方法 |
| CN106290619A (zh) * | 2016-07-31 | 2017-01-04 | 合肥远志医药科技开发有限公司 | 一种儿童维d钙咀嚼片制剂中维生素d3含量的检测方法 |
| CN106383186A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-02-08 | 重庆方通动物药业有限公司 | 同时测定14种维生素含量的高效液相色谱分析方法 |
-
2018
- 2018-05-28 CN CN201810524463.6A patent/CN108760919A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0161177B2 (zh) * | 1981-06-22 | 1989-12-27 | Meiji Milk Prod Co Ltd | |
| US20120048003A1 (en) * | 2010-08-24 | 2012-03-01 | GOLDEN PRODUCTS LLC, Limited Liability Company | Vitamin assay methods |
| CN102353745A (zh) * | 2011-08-26 | 2012-02-15 | 贵州师范大学 | 一种刺梨的炮制方法及多指标检测方法 |
| CN102435700A (zh) * | 2011-09-22 | 2012-05-02 | 明一（福建）婴幼儿营养品有限公司 | 测定婴幼儿食品和乳品中维生素ade的含量的方法 |
| CN106153796A (zh) * | 2015-04-17 | 2016-11-23 | 西藏卫信康医药股份有限公司 | 注射用12种复合维生素的含量分析检测方法 |
| CN106290619A (zh) * | 2016-07-31 | 2017-01-04 | 合肥远志医药科技开发有限公司 | 一种儿童维d钙咀嚼片制剂中维生素d3含量的检测方法 |
| CN106383186A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-02-08 | 重庆方通动物药业有限公司 | 同时测定14种维生素含量的高效液相色谱分析方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| OLIVIER HEUDI等: "Simultaneous quantification of Vitamins A, D3 and E in fortified infant formulae by liquid chromatography–mass spectrometry", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 * |
| 张良等: "浅谈高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量", 《医学信息》 * |
| 胡代花等: "UPLC法快速测定婴儿维生素D3滴剂、维生素D3片、维生素AD滴剂及维生素D2片中维生素D3和维生素D2", 《药物分析杂志》 * |
| 赵飞等: "微波萃取-反相高效液相色谱法测定钙片中维生素D3的含量", 《中国食品卫生杂志》 * |
| 邢俊波等: "高效液相色谱法测定碳酸钙D3咀嚼片中维生素D3的含量", 《中国野生植物资源》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114965726A (zh) * | 2021-11-03 | 2022-08-30 | 葵花药业集团(佳木斯)有限公司 | 一种咀嚼片的指纹图谱检测方法及其指纹图谱 |
| CN114965726B (zh) * | 2021-11-03 | 2024-01-30 | 葵花药业集团(佳木斯)有限公司 | 一种咀嚼片的指纹图谱检测方法及其指纹图谱 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101543476B (zh) | 一种柚皮苷固体分散体及其制备方法和应用 | |
| CN102980961A (zh) | 鳗鱼中孔雀石绿、结晶紫及其残留物检测的前处理方法 | |
| CN105651924A (zh) | 血液中激素的检测方法 | |
| CN108760919A (zh) | 一种儿童维d钙咀嚼片制剂中维生素d3含量的检测方法 | |
| CN106706835B (zh) | 一种金莲花泡腾片的质量检测方法 | |
| CN110376291A (zh) | 一种黄连对照提取物及其制备方法和应用 | |
| CN112014480B (zh) | 一种uplc-ms/ms检测降脂宁颗粒中有效成分含量的方法 | |
| CN110013499B (zh) | 灵丹多糖胶囊的制作方法及其总皂苷含量测定方法 | |
| CN115856181B (zh) | 一种亚麻子饮片及其制剂的特征图谱及其构建方法和应用 | |
| CN106995361B (zh) | 一种从莪术油中分离β-榄香烯的方法 | |
| CN114487316B (zh) | 一种复方西羚解毒胶囊多组分在大鼠体内药代动力学的分析方法 | |
| CN103134867A (zh) | 稳定的黄芪超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法 | |
| CN113740198B (zh) | 测定马应龙麝香痔疮膏中黄凡士林含量的方法 | |
| CN109589410A (zh) | 一种姜黄素制剂及其制备方法 | |
| CN111329838B (zh) | 一种紫杉醇脂质体药物组合物及其制备方法 | |
| CN106290607B (zh) | 一种利用uplc-tuv快速检测桑椹花青素及黄酮的方法 | |
| CN105823844B (zh) | 一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法 | |
| CN105842381A (zh) | 芪骨胶囊的检测方法 | |
| CN113759011B (zh) | 一种银柴胡及其制剂特征图谱的建立方法 | |
| CN105520980A (zh) | 含有细辛挥发油的固体分散体及其药物制剂 | |
| CN103316087A (zh) | 肉豆蔻五味有效部位及其制备方法、质量检测方法和应用 | |
| CN107245506A (zh) | 一种高生物利用度化橘红提取物的制备方法和应用 | |
| CN112834681A (zh) | 检测血液中维生素k2(mk-7)含量的方法 | |
| CN103293252B (zh) | 一种中药的膜富集方法 | |
| Shi et al. | Determination of anthraquinone derivatives in Chang-Qing tea by using cloud-point extraction and high-performance liquid chromatography |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 3 / F, North Funuo health building, Yulu Avenue, Lankao County, Kaifeng City, Henan Province Applicant after: Funo health Co.,Ltd. Address before: 3 / F, North Funuo health building, Yulu Avenue, Lankao County, Kaifeng City, Henan Province Applicant before: Funo health (Lankao) Co.,Ltd. Address after: 3 / F, North Funuo health building, Yulu Avenue, Lankao County, Kaifeng City, Henan Province Applicant after: Funo health (Lankao) Co.,Ltd. Address before: Room 2511, Dart International Center, 238 Changgang Middle Road, Haizhu District, Guangzhou City, Guangdong Province Applicant before: GUANGZHOU FUNUO HEALTH TECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| CB02 | Change of applicant information | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181106 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |